Name: two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00
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이 작품은 사역의 과학 및 기술, 대만 (가장 106-2320-B-038-024, 대부분 105-2221-E-038-007-MY3, 그리고 가장 104-2320-B-424-001) 및 타이페이 의학 대학 병원 (107TMUH-SP-01)에 의해 지원 되었다. 이 원고는 월 러 스 학술 편집 편집 했습니다.

제도 동물 보호와 사용 위원회 학계 Sinica와 타이베이 의과대학의 실험 동물의 사용을 위해이 프로토콜을 승인 했다.
1. MCAO/reperfusion 모델
<ol><li>수술까지 쥐 물과 차에 대 한 무료 액세스를 제공 합니다.</li>
	<li>압력솥에 수술 도구와 수술 및 장비 70% 에탄올을 사용 하 여 청소. 수술 용 마스크와 멸 균 장갑을 착용 하십시오. 비드 건조 살 균 기를 사용 하 여 여러 마우스 수술 ...

<ol>
	<li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology,+treatment,+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke.">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).</li><li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+acute+stroke.">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).</li><li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury.">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li><li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice:+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery.">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li><li>Wellons, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia.">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li><li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+hypoxic+stroke:+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput,+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit.">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li><li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia:+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion.">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li><li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability.">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting.">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li><li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain.">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li><li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons.">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li><li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction.">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity.">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li><li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation.">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li></ol>

MCAO/reperfusion 마우스 모델은 일반적으로 인간의 일시적인 허 혈을 모방 하기 위해 고용 하는 동물 모델. 이 동물 모델 조사 선의 이상 유전자 변형 및 녹아웃 쥐 계통에 적용할 수 있습니다. 프로토콜의 여러 단계는 특히 중요 합니다. (1) microdrill 쉽게 MCA에서 출혈을 일으키는 부적절 한 행동으로, 두개골에 구멍을 만들 때 신중 하 게 사용 되어야 한다. (2) MCA 손상 되지 해야한다, 그리고 전과 결 찰 ?...

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 마우스 모델 허 혈 유발 뇌 부상1이상 조사를 위한 가장 널리 사용 되 실험 방법 중 하나입니다. 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 주변 면역 체계를 활성화 하기 때문에 주변 면역 세포가 허 혈 성 뇌에 침투 하 고 원인 신경 손상2. 따라서, 안정적이 고 재현 가능한 마우스 모델을 모방한 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 이해 선의 이상 필요 합니다.
C57BL/6J (B6) 마우스는 선 실험에서 가장 일반적으로 사용 되 긴장 때문에 그들은 쉽게 유전자 조작 될 수 있습니다. 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 상태를 모방 MCAO/reperfusion의 두 가지 일반적인 모델 사용할 수 있습니다. 첫 번째는 실리콘 코팅 필 라 멘 트 intravascularly MCA;에 혈액 흐름을 막다 하 고용은 인접 MCAO의 intraluminal 필 라 멘 트 모델 occluding 필 라 멘 트를 복원 혈액 흐름3이후에 제거 됩니다. 더 이상 폐색 기간 외피와 subcortical 지역에서 경색 원인 반면 짧은 폐색 기간 바꾸어 지역의 병 변에서 발생 합니다. 두 번째 모델은 extravascular 결 찰 후 혈액 흐름 봉합 및 동맥 류 클립4의 제거를 통해 복원 MCA 통해 혈액의 흐름을 줄이기 위해 MCA CCA의 포함 한다 원심 MCAO의 결 찰 모델. 이 모델에는 경색은 대뇌 피 질의 영역에서 발생 하 고 사망률은 낮다. MCAO/reperfusion 모델의 결 찰 원심 MCA의 사이트를 노출 하는 craniectomy를 해야 하므로 사이트를 쉽게 확인 될 수 있다, 그리고 원심 MCA에 혈액의 흐름 절차 동안 중단 여부를 검토 하는 것은 간단 합니다.
B6 쥐 윌리스;의 원형의 해부학에 있는 상당한 변이 전시 이 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion5,,67다음 경색 볼륨에 영향을 수 있습니다. 현재,이 문제는 원심 MCA8의 결 찰을 통해 극복할 수 있습니다. 이 연구에서 우리는 MCA 혈액 흐름을 경색 및 허 혈의 미리 결정된 한 기간 후 reperfusion를 활성화 하는 방법을 설정 합니다. 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 모델의 2 배 폐색 혈액의 흐름 허 혈의 일정 기간 후 복원으로 바로 원심 MCA와 오른쪽 CCA의 결 찰을 통해 MCA 영토의 일시적인 허 혈을 유도 합니다. 이 MCAO/reperfusion 모델 대뇌 허 혈-reperfusion4후 안정적인 크기, 허 혈 성 두뇌와 행동 적자에 뇌에 침투 하는 면역 세포의 대부분의 경색을 유도합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bone rongeur</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>Friedman</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1097603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Petpro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator dry bead sterilizer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdrill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>FOREEDOM K.1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-scissors-Vannas</td>
			<td>HEISS</td>
			<td>H-4240</td>
			<td>blade 7mm, 8 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain matrix</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-invasive blood pressure system</td>
			<td>Muromachi</td>
			<td>MK-2000ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Monitoring System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Ever-Ready</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stoelting Rodent Warmers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53810</td>
			<td>Heating pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture clip</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>IDEALTEK</td>
			<td></td>
			<td>No.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>15672</td>
			<td>Surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 suture</td>
			<td>UNIK</td>
			<td>NT0410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion

이 연구에서 중간 대뇌 동맥 (MCA) 폐색 마우스 모델 연구 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 채택 된다. 재현 가능 하 고 안정적인 마우스 모델은 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 이상 조사 하 고 뇌졸중 환자에 대 한 잠재적인 치료 전략을 결정 하는 데 유용 합니다. 윌리스의 C57BL/6 마우스의 해부학에 있는 변이 대뇌 허 혈 유발 부상 후 그들의 경색 볼륨을 영향을 줍니다. 연구 그 원심 MCA 폐색 (MCAO) 수 있습니다이 문제를 극복 하 고 안정적인 경색 크기에 결과 표시 했습니다. 이 연구에서 우리는 오른쪽 MCA에 혈액 흐름의 중단을 통해 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델을 설정합니다. 우리는 distally 오른쪽 MCA와 바로 일반적인 경 동맥 (CCA) 선 하 고 국 소 빈 혈의 일정 기간 후 혈액 흐름을 복원. 이 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 안정적인 크기와 행동 적자의 경색을 유도합니다. 주변 면역 세포는 24 h 침투 기간 내 허 혈 성 뇌를 침투. 또한, 대뇌 피 질의 영역에서 신경 손실 더 reperfusion 동안 작습니다. 따라서,이 두 혈관 폐색 모델은 면역 반응 및 신경 복구 후 대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion 기간 동안 조사 적합 합니다.

MCAO/reperfusion 이렇게 오른쪽 MCA 주변 피 질 경색 생산과 행동 적자 발생. 허 혈 유발 경색 볼륨 (그림 1AB) 및 (그림 1 cD) 신경 손실의 다른도 결 찰 기간 증가 통해 오른쪽 MCA 영역의 대뇌 피 질에서 창조 되었다. 이 MCAO/reperfusion 상해 MCAO/reperfusion (그림 2) 후 48 h에 동물의 운동 활동을 ...

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Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 마우스 모델 선의 이상 조사를 설립 하다. 우리는 distally 오른쪽 중간 대뇌 동맥과 바로 일반적인 경 동맥 선 하 고 국 소 빈 혈의 10 또는 40 분 후 혈액 흐름을 복원.

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

대뇌 허혈 재관류의 이 2용기 폐색 마우스 모형은 치기의 병생리학을 조사할 수 있습니다. 이 모델은 허혈성 뇌의 면역 세포와 대뇌 허혈 -재퍼주입 후 행동 적자에 침투하는 뇌의 대량의 안정적인 경부 볼륨을 유도할 것입니다. 이 모델에서는, 피질 영역에서 경색이 발생하고 사망률이 낮습니다.결찰 MCAO 재퍼퓨전 모델은 황실 MCA의 크기를 노출하기 위해 두개골 절제술이 필요하기 때문에 크기를 쉽게 확인할 수 있으며, 시술 중에 단위 MCAO의 혈류가 중단되는지 여부를 검사하는 것은 간단하다. 수술 전까지 생쥐에게 물과 음식에 무료로 접근할 수 있도록 하십시오. 수술 도구를 자동 클렌브하고 70 %의 에탄올을 사용하여 수술 테이블과 장비를 소독하십시오.8-12주 된 마우스를 마취한 후, 단단한 발가락 핀치를 사용하여 테스트할 때 페달 반사가 없는지 확인하십시오. 마우스가 마취 하에 있는 동안 눈 건조를 방지하기 위하여 수의사 연고를 사용하십시오. 혈압을 모니터링하려면 먼저 모발을 제거한 다음 비침습적 혈압 시스템과 생리적 모니터링 시스템을 사용하여 직장 온도와 동맥 혈액 가스를 모니터링합니다.예방 항생제로 마우스를 피하로 주입하십시오. 다음으로, 가열 패드에 마우스를 supine 위치에 놓습니다. 피부를 노출하려면 전기 클리퍼를 사용하여 복부 목 부위와 오른쪽 눈과 오른쪽 귀 사이의 부위의 털을 면도합니다.에필라팅 크림으로 동물의 몸에서 털을 제거하고 수술 부위를 70%에탄올로 소독합니다. 그런 다음 홍채 가위를 사용하여 목에 1 센티미터 길이의 중간 선 절개를 자른다. 홍채 집게로, 조심스럽게 물리적 인 부상을 일으키지 않고 미주 신경에서 무료로 일반적인 경동맥을 해부하고, 동맥을 분리하는 5-0 실크 봉합사를 사용합니다.다음으로, 홍채 가위를 사용하여 오른쪽 눈과 오른쪽 귀 사이의 중간점에서 두피에 0.3 센티미터 절개를 합니다. 마이크로 가위를 사용하여, zygomatic과 squamosal 뼈를 노출하는 측두근 근육을 잘라. 마우스를 스테레오 해부 현미경 아래에 놓고 마이크로 드릴을 사용하여 오른쪽 해반 중간 뇌 동맥 바로 위에 2 밀리리터 구멍을 만듭니다.10-0 봉합사를 사용하여 오른쪽 단위 MCA의 트렁크를 리게이트하고 비외상성 동맥류 클립을 사용하여 오른쪽 CCA를 가리키게 합니다. 허혈의 원하는 기간 후, MCA와 CCA에 혈액 흐름을 복원하는 봉합및 동맥류 클립을 제거합니다. 봉합사 클립을 사용하여 머리에 피부 절개를 밀봉하고 자궁 경부 피부 절개를 수술 접착제로 밀봉하십시오.통증 완화를 위해 buprenorphine피칸을 피하로 주입하십시오. 동물의 체온을 가열 패드에 섭씨 36.5도 또는 영하 0.5도로 유지하고 마취에서 완전히 회복될 때까지 방치하거나 다른 동물의 회사로 돌려보내지 마십시오. 마지막으로 마우스를 오토클레이브 케이지에 배치하여 완전히 복구된 후 물과 음식에 자유롭게 접근할 수 있습니다.홍채 가위를 사용하여 마취되고 참수 된 마우스의 머리 피부에 절개를하여 두개골을 노출하십시오. 그런 다음 작동 가위를 사용하여 정면 뼈의 전방을 자르고 홍채 가위를 사용하여 두개골을 처진 봉합사를 따라 잘라냅니다. 뼈 가롱어로 정면과 정수리 뼈를 옆으로 밀어 내고 뇌를 노출하십시오.뇌를 제거하고 마우스 뇌 매트릭스에 배치합니다. 면도날을 사용하여 2밀리리터 코로날 슬라이스를 구하고 5밀리리터 튜브에 2%TTC의 5밀리리터를 넣습니다. 마우스 뇌 매트릭스를 사용하여 관상 슬라이스를 얻을 때 절단 크기는 다른 뇌에서 동일해야합니다.절단 크기는 뇌 조각의 크기에 영향을 미치며, 이는 또한 경색 크기의 계산에 영향을 미칩니다. 뇌슬라이스를 2%TTC와 1X PBS로 섭씨 37도에서 10분 동안 염색한 다음 10%의 포르말린으로 두 번 헹구습니다. 24 시간 동안 실온에서 10 %의 포르말린에 뇌 슬라이스를 수정합니다.티슈 페이퍼에 있는 뇌 슬라이스를 건조하여 과도한 포르말린을 흡수하고, 깨끗한 플라스틱 슬라이드에 배치하고, 로스트랄에서 코달로 방향을 지정하고, 또 다른 깨끗한 플라스틱 슬라이드로 덮습니다. 스캐너를 사용하여 슬라이드를 스캔합니다. 슬라이드를 뒤집어 서 반대쪽을 스캔합니다.ImageJ 소프트웨어를 사용하여 이미지 파일을 먼저 열고 이미지의 배율을 설정하여 각 섹션의 경색 영역을 계산합니다. 그런 다음 프리핸드 선택을 사용하여 경색 영역을 선택하고 관심 있는 ROI 관리자 영역을 사용하여 관심 영역을 측정합니다. 마지막으로, 각 섹션의 광원 영역을 합산하고, 단면 두께에 따라 결과를 곱하여 총 경색 볼륨을 추정한 다음 원고에 설명된 대로 완전한 통계 분석을 합니다.이 MCAO 재관류 시술 절차 동안 허혈 지속 시간 증가는 오른쪽 MCA 영역의 대뇌 피질에서 허혈 유발 된 경피성 경피량 및 뉴런 손실의 다른 학위를 생산. 또한, 허혈은 MCAO 재퍼퓨전 후 48시간 후에 동물의 운동 활성을 감소시다. 대뇌 허혈 -reperfusion 후, 말초 면역 세포의 대부분은 허혈성 뇌의 ipsilateral 반구에 침투.또한 이 2용기 폐색 모델이 MCAO 모델과 비교했을 때, 이들의 경피량은 크게 다르지 않았다. 마이크로 드릴은 두개골에 구멍을 만들 때 신중하게 사용해야합니다. 부적절한 행동으로 MCA에서 출혈을 쉽게 유발할 수 있습니다.MCA는 손상되어서는 안되며 결찰 절차 전후에 출혈을 피해야 합니다. MCA 폐색 및 재관류 상태는 레이저 도플러에 의해 확인할 수 있습니다. 이 방법은 MCA의 혈류 상태를 확인할 수 있다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

연구

의학

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic 심장 마비와 심폐 소생술의 : 국소 빈혈 - Reperfusion 상해의 마우스 모델

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

에서 간세포 이식 체외에서 시뮬레이션 국소 빈혈 / Reperfusion 모델

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

마우스의 급성 신장 손상 및 사후 상해 섬유증의 허혈 - 재관류 모델

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

척수 허혈 - 재관류의 생쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색에 의해 재생산 할 하반신 마비

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

창자 허혈 - 재관류 손상의 쥐 모델

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

안압 상승을 통해 망막 허혈 - 재관류 손상의 마우스 모델

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

재건 미세 수술에서 허혈 재관류 손상의 연구를위한 전 임상 쥐 모델

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

쥐 간 이식 모형에 있는 혈역학적인 변경을 시뮬레이션하여 기관 허혈-재관류 상해

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...