Name: two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion
Uploaded: 2019-03-01T13:30:00
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Este trabalho foi financiado pelo Ministério da ciência e tecnologia, Taiwan (mais 106-2320-B-038-024, 105-2221-E-038-007-MY3 mais e mais 104-2320-B-424-001) e Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01). Este manuscrito foi editado por Wallace edição académica.

O cuidado animal institucional e comissões de utilização da Academia Sinica e Universidade de medicina de Taipei aprovaram este protocolo para o uso de animais experimentais.
1. modelo MCAO/reperfusão
<ol><li>Fornece os ratos com livre acesso à água e comida até a cirurgia.</li>
	<li>Autoclave a cirúrgica ferramentas e limpar a mesa de cirurgia e equipamentos utilizando etanol a 70%. Use uma máscara cirúrgica e luvas estéreis. Use um esterilizador de grânulo seco para esterilizar...

<ol>
	<li>Woodruff, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology,+treatment,+and+animal+and+cellular+models+of+human+ischemic+stroke.">Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke.</a> Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).</li><li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+acute+stroke.">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+Middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).</li><li>Lee, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+15+blockade+protects+the+brain+from+cerebral+ischemia-reperfusion+injury.">Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li><li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice:+evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery.">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li><li>Wellons, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+strain-related+susceptibility+in+two+murine+recovery+models+of+global+cerebral+ischemia.">A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia.</a> Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).</li><li>Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distal+hypoxic+stroke:+a+new+mouse+model+of+stroke+with+high+throughput,+low+variability+and+a+quantifiable+functional+deficit.">Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).</li><li>Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+permanent+focal+ischemia:+Distal+middle+cerebral+artery+occlusion.">A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).</li><li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+Permanent+Distal+Middle+Cerebral+with+Common+Carotid+Artery+Occlusion+in+Aged+Rats+to+Study+Cortical+Ischemia+with+Sustained+Disability.">Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability.</a> Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolongation+and+enhancement+of+postischemic+c-fos+expression+after+fasting.">Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting.</a> Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).</li><li>Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+ischemic+tolerance+following+brief+focal+ischemia+in+rat+brain.">Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).</li><li>Tachibana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Reperfusion+After+Brain+Ischemia+Has+Beneficial+Effects+Beyond+Rescuing+Neurons.">Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons.</a> Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).</li><li>Gan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+neurons+recruit+natural+killer+cells+that+accelerate+brain+infarction.">Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+interleukin-15+exacerbates+ischemic+brain+injury+via+propagation+of+cellular+immunity.">Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).</li><li>Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+architecture+underlying+variation+in+extent+and+remodeling+of+the+collateral+circulation.">Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation.</a> Circulation Research. 107 (4), (2010).</li></ol>

O modelo de rato MCAO/reperfusão é um modelo animal, comumente empregado para imitar a isquemia transitória em seres humanos. Este modelo animal pode ser aplicado para as cepas de camundongos transgênicos e nocaute para investigar a fisiopatologia do acidente vascular cerebral. Várias etapas do protocolo são especialmente críticas. (1) o microdrill deve ser usado com cuidado quando criando um buraco no crânio, com ação inadequada facilmente causando sangramento do MCA. (2) o MCA não deve ser danificado, e sang...

O modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral é uma das abordagens experimentais mais amplamente utilizadas para investigar a fisiopatologia da induzida por isquemia cerebral lesão1. Porque isquémia-reperfusão cerebral ativa o sistema imunológico periférico, células imunitárias periféricas infiltrarem no cérebro isquêmico e causam dano neuronal2. Assim, um modelo de mouse confiável e reprodutível que imita a isquémia-reperfusão cerebral é necessário para compreender a fisiopatologia do acidente vascular cerebral.
C57Bl/6J (B6) ratos são a estirpe mais comumente usada em experimentos de curso porque eles facilmente podem ser manipulados geneticamente. Estão disponíveis dois modelos comuns de MCAO/reperfusão que imitam a condição de isquémia-reperfusão cerebral. O primeiro é o modelo do filamento intraluminal de MCAO proximal, onde um filamento de silício-revestido é empregado para por via intravascular, obstruir o fluxo de sangue na MCA; o filamento de oclusão posteriormente é removido para restaurar o fluxo de sangue3. Uma duração curta de oclusão resulta em uma lesão da região subcortical, Considerando que uma maior duração da oclusão provoca infartos nas áreas corticais e subcorticais. O segundo modelo é o modelo de ligadura de MCAO distal, que envolve a ligadura extravascular do MCA e CCA para reduzir o fluxo de sangue através da MCA, após o qual o fluxo sanguíneo é restaurado através da remoção da sutura e aneurisma clip4. Neste modelo, um infarto é causado nas áreas corticais e a taxa de mortalidade é baixa. Porque a ligadura do modelo MCAO/reperfusão requer craniectomia para expor o site do MCA distal, o site pode ser facilmente confirmado, e analisar se o fluxo de sangue na MCA distal é rompido durante o procedimento é simples.
B6 ratos apresentam consideráveis variações na anatomia de seu círculo de Willis; Isto pode afetar o volume de infarto cerebral de isquémia-reperfusão5,6,7a seguir. Atualmente, este problema pode ser superado através da ligadura do distal MCA8. Neste estudo, podemos estabelecer um método para obstruindo o fluxo sanguíneo do MCA e permitindo a reperfusão após um período pré-determinado de isquemia. Dois vasos de oclusão do modelo de isquémia-reperfusão cerebral induz isquemia transitória do território MCA através da ligadura do MCA bem distal e certo CCA, com fluxo de sangue restaurado após um determinado período de isquemia. Este modelo MCAO/reperfusão induz um infarto de tamanho estável, uma massa de células do sistema imunológico cérebro infiltrando no cérebro isquêmico e um déficit comportamental após isquémia-reperfusão cerebral4.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bone rongeur</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>Friedman</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazolin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>1097603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloral hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-745</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td>Petpro</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germinator dry bead sterilizer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Diener</td>
			<td></td>
			<td>9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>11 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microdrill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>FOREEDOM K.1070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-scissors-Vannas</td>
			<td>HEISS</td>
			<td>H-4240</td>
			<td>blade 7mm, 8 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain matrix</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-invasive blood pressure system</td>
			<td>Muromachi</td>
			<td>MK-2000ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors STR</td>
			<td>Karl Klappenecker</td>
			<td></td>
			<td>14 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Monitoring System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Ever-Ready</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stoelting Rodent Warmers</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53810</td>
			<td>Heating pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture clip</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>IDEALTEK</td>
			<td></td>
			<td>No.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond</td>
			<td>3M</td>
			<td>15672</td>
			<td>Surgical glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-0 suture</td>
			<td>UNIK</td>
			<td>NT0410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion

Neste estudo, um modelo de mouse de oclusão de artéria cerebral média (MCA) é empregado para estudar a isquémia-reperfusão cerebral. Um modelo do rato reprodutível e confiável é útil para investigar a fisiopatologia da isquémia-reperfusão cerebral e determinar potenciais estratégias terapêuticas para pacientes com acidente vascular cerebral. Variações na anatomia do círculo de Willis de C57BL/6 ratos afeta seu volume de infarto após lesão cerebral induzida a isquemia. Estudos têm indicado que oclusão distal do MCA (MCAO) pode superar esse problema e resultar em um tamanho de infarto estável. Neste estudo, podemos estabelecer um modelo de mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão cerebral através da interrupção do fluxo sanguíneo para o MCA certo. Nós distalmente ligate a MCA direita e artéria carótida comum direita (CCA) e restaurar o fluxo sanguíneo após um determinado período de isquemia. Esta lesão de isquemia-reperfusão induz um infarto de tamanho estável e um déficit comportamental. Células imunitárias periféricas infiltrar o cérebro isquêmico no prazo de 24 h infiltração. Além disso, a perda neuronal na área cortical é menor por um longo período de reperfusão. Portanto, este modelo de dois vasos oclusão é apropriado para investigar a resposta imune e recuperação neuronal durante o período de reperfusão após isquemia cerebral.

Este procedimento MCAO/reperfusão produziu um enfarte cortical nas imediações do MCA certo e causou um déficit comportamental. Diferentes graus de isquemia induzida por infarto volume (figura 1AB) e perda neuronal (Figura 1D) foram criados no córtex cerebral da área MCA certo através de um aumento na duração da ligadura. Esta lesão MCAO/reperfusão diminuiu a atividade locomotora do ani...

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Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Este modelo de rato de oclusão de dois vasos de isquemia-reperfusão cerebral pode investigar a fisiopatologia do derrame. Este modelo induzirá um volume de infarto estável de uma maior parte das células imunes infiltradas no cérebro isquêmico e o déficit comportamental após isquemia cerebral-reperfusão. Nesse modelo, um infarto é causado nas áreas corticais e a taxa de mortalidade é baixa.Como o modelo de reperfusão de ligadura MCAO requer craniotomia para expor o tamanho da MCA distal, o tamanho pode ser facilmente confirmado, e o exame se o fluxo sanguíneo no MCAO distal é interrompido durante o procedimento é simples. Forneça aos ratos acesso gratuito à água e à comida até a cirurgia. Autoclave as ferramentas cirúrgicas, e use 70% de etanol para higienizar a mesa de cirurgia e equipamentos.Depois de anestesiar um mouse de oito a 12 semanas de idade, certifique-se de que ele não tenha um reflexo de pedal quando testado usando uma pitada firme do dedo do pé. Use pomada veterinária para evitar o ressecamento dos olhos enquanto o rato estiver sob anestesia. Para monitorar a pressão arterial, primeiro remova o cabelo e, em seguida, use um sistema de pressão arterial não invasivo e um sistema de monitoramento fisiológico para monitorar a temperatura retal e gases sanguíneos arteriais.Injete o rato subcutâneamente com um antibiótico profilático. Em seguida, coloque o mouse na posição supina na almofada de aquecimento. Para expor a pele, use cortadores elétricos para raspar a pele na região do pescoço ventral e na região entre o olho direito e a orelha direita.Limpe a pele do corpo do animal com creme de depilação e desinfete o local cirúrgico com 70% de etanol. Em seguida, corte uma incisão de uma polegada de comprimento no pescoço usando uma tesoura de íris. Com fórceps de íris, dissequei cuidadosamente a artéria carótida comum livre dos nervos vagos sem causar lesões físicas, e use suturas de seda 5-0 para isolar a artéria.Em seguida, use uma tesoura de íris para fazer uma incisão de 0,3 centímetros no couro cabeludo no ponto médio entre o olho direito e a orelha direita. Usando micro tesoura, corte o músculo temporalis para expor o osso zigomático e esquamosal. Coloque o mouse sob um microscópio de dissecação estéreo e use uma micro broca para criar um orifício de dois mililitros diretamente sobre a artéria cerebral média distal do lado direito.Use uma sutura 10-0 para ligar o tronco do MCA distal do lado direito, e use um clipe de aneurisma não traumático para ocluir a CCA do lado direito. Após a duração desejada da isquemia, remova o clipe de sutura e aneurisma para restaurar o fluxo sanguíneo para o MCA e CCA. Use um clipe de sutura para selar a incisão da pele na cabeça e selar as incisões da pele cervical com cola cirúrgica.Injete buprenorfina subcutânea para aliviar a dor. Mantenha a temperatura corporal do animal em 36,5 graus mais ou menos 0,5 graus Celsius na almofada de aquecimento, e não deixe desacompanhado ou devolva-o à companhia de outros animais até que ele seja totalmente recuperado da anestesia. Por fim, coloque o mouse na gaiola autoclave para que ele possa acessar livremente água e comida depois de totalmente recuperado.Use uma tesoura de íris para fazer uma incisão na pele da cabeça do rato anestesiado e decapitado para expor o crânio. Em seguida, use a tesoura de operação para cortar o anterior do osso frontal, e com a tesoura de íris, corte o crânio ao longo da sutura sagital. Com um rongeur ósseo, empurre de lado o osso frontal e parietal, e exponha o cérebro.Remova o cérebro e coloque-o em uma matriz cerebral de camundongos. Use lâminas de barbear para obter fatias coronais de dois mililitros e coloque-as em tubos de 50 mililitros preenchidos com cinco mililitros de 2%TTC. Ao usar a matriz cerebral do camundongo para obter fatias coronais, o tamanho do corte deve ser o mesmo em cérebros diferentes.O tamanho do corte afeta o tamanho das fatias cerebrais, que também afetam o cálculo do tamanho do infarto. Manche as fatias cerebrais com 2%TTC e 1X PBS por 10 minutos a 37 graus Celsius, e depois enxágue duas vezes com 10% de formalina. Conserte as fatias cerebrais em 10% de formalina à temperatura ambiente por 24 horas.Depois de secar as fatias cerebrais no papel de tecido para absorver o excesso de formalina, organize-as em um slide plástico limpo, orientando-as de rostral a caudal, e cubra-as com outra lâmina de plástico limpa. Escaneie o slide usando um scanner. Vire o slide e escaneie o lado inverso.Use o software ImageJ para calcular a área de infarto de cada seção, primeiro abrindo o arquivo de imagem e configurando a escala para a imagem. Em seguida, use a seleção à mão livre para selecionar a área de infarto e use as regiões de interesse do gerente do ROI para medir a área de interesse. Por fim, somam as áreas infartas para cada seção e multiplicam o resultado pela espessura da seção para estimar o volume total de infarto e, em seguida, completam a análise estatística, conforme descrito no manuscrito.O aumento da duração da isquemia durante este procedimento de reperfusão de MCAO produziu diferentes graus de volume infarto induzido por isquemia e perda neuronal no córtex cerebral da área mca direita. Além disso, a isquemia diminuiu a atividade locomotor do animal em 48 horas após a reperfusão de MCAO. Após a isquemia cerebral-reperfusão, uma série de células imunes periféricas se infiltraram no hemisfério ipsilateral do cérebro isquêmico.Além disso, quando este modelo de oclusão de dois vasos foi comparado com o modelo MCAO, seus volumes de infarto não foram significativamente diferentes. A micro broca deve ser cuidadosamente usada ao criar um buraco no crânio. Com ação inadequada, fácil causar sangramento do MCA.O MCA não deve ser danificado, e o sangramento deve ser evitado antes e depois do procedimento de ligadura. A oclusão do MCA e o estado de reperfusão podem ser verificados pelo Laser Doppler. Este método pode confirmar a condição do fluxo sanguíneo da MCA.

Research

JoVE Journal

Medicine

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