Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

ونعترف جبهارد شيرتلير ورفائيل أبيلا وميلن كريس لدعم استخدام محاقن لزوجة عالية في هذه المبادرة. يعترف نيوتزي ريتشارد وفريقه للمناقشات بشأن حل الوقت علم البلورات وتسليم نموذج باستخدام محاقن لزوجة عالية. للدعم المالي، نحن نعترف "مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية" للمنح 31003A_141235، 31003A_159558 (إلى ج. س.) و PZ00P3_174169 (إلى ب. ن.). هذا المشروع قد تلقي تمويلاً من الاتحاد الأوروبي في أفق 2020 البحث والابتكار البرنامج منحة ماري-سكلودوفسكا-كوري 701646 أي اتفاق.

1-البروتين إعداد عينة كريستال
<ol><li>حوالي 30 دقيقة قبل أن تكون العينة بالحقن، على أساس حمولة 50 ميليلتر من مونولين كريستال لادن LCP في حقنه 100 ميليلتر.</li>
	<li>للحقن في الضغط الجوي: تحميل 10 ميليلتر من البارافين السائل في الجزء الخلفي من حقنه ثانية. عقد المحاقن عمودياً، طرد فقاعات الهواء من المحاقن...

الأسلوب سفاكس TR مع حاقن البثق لزج ثبت أن تقنية قابلة للتطبيق للدراسات ديناميات الهيكلية باكتيريورهودوبسين9،10 وفوتوسيستيم الثاني13 ويبدو الآن مستعدا لدراسة البروتينات قيادة أخرى صور العمليات البيولوجية مثل النقل أيون يحركها الضوء أو الإدراك ?...

Femtosecond المسلسل علم البلورات (SFX) هو أسلوب الأحياء هيكلية التي يستغل الخواص الفريدة لليزر الإلكترون الحر بالأشعة السينية (إكسفيل) لتحديد درجة حرارة الغرفة هياكل الآلاف من بلورات الحجم ميكرومتر بينما الأمر معظم أضرار الإشعاع "الحيود قبل تدمير" المبدأ1،2،3.
في ملحق الوقت وتصميما من سفاكس (TR-سفاكس)، تستخدم نبضات femtosecond من إكسفيل لدراسة التغيرات الهيكلية في البروتينات4،5. يتم تنشيط بروتين اهتمام ليزر ضوئية (أو مشغل النشاط آخر) قبل إصابته برصاص إكسفيل في إعداد تحقيق مضخة. بدقة السيطرة على التأخير بين نبضات المضخة والتحقيق، يمكن التقاط البروتين المستهدفة في مختلف الدول. أفلام الجزيئية للتغييرات الهيكلية على مدى إحدى عشرة من حيث الحجم في وقت تثبت قوة مصادر إكسفيل جديدة لدراسة ديناميات عدة البروتين الأهداف6،،من78،9، 10،11،،من1213. أساسا، ينضم الأسلوب التقنيات الهيكلية دينامية الطيفية وثابت واحد، تقديم لمحة في ديناميات البروتين في القرب من القرار الذري.
قد تحتوي على أنظمة بسيطة ل TR-سفاكس مشغل ذاتية للتنشيط مع عنصر الصور الحساسة مثل الشبكية في9،باكتيريورهودوبسين (bR)10، صباغات في فوتوسيستيم الثاني12،13، 6،فوتواكتيفي البروتين أصفر (PYP)7 عكسية فوتوسويتشابل بروتين فلوري11، أو أول أكسيد الكربون فوتوليزابل في الميوجلوبين8. الاعتماد على مزيج اختلافات مثيرة من هذه التقنية لا تزال في التنمية وضخ مخططات14،15 دراسة التفاعلات الانزيمية أو مجال الكهربائي تستخدم للحث على إجراء تغييرات هيكلية16. نظراً لأن مصادر إكسفيل كانت متاحة فقط لبضع سنوات واستقراء النجاحات السابقة في المستقبل، الأسلوب يبين المحتملة مغير لعبة حقيقية فيما يتعلق بفهمنا لكيفية وظيفة البروتينات.
لأنه يتم تدمير عينات بيولوجية تعرض مرة واحدة لقوة عالية نبض إكسفيل، ونهج جديدة للبروتين البلوري كانت ضرورية. من بين هذه الإجراءات، يلزم أن القدرة على زراعة كميات كبيرة من ميكروكريستالس الموحدة المتقدمة17،،من1819. لتمكين جمع البيانات في إكسفيل، هذه البلورات يجب أن يكون تسليم وتجاهل وتجديد ثم لكل نبض إكسفيل. تسليم العينة نظراً لأن إكسفيلس النار البقول قابلة للاستخدام في 10-120 هرتز، يجب أن تكون سريعة ومستقرة وموثوق بها، مع الحفاظ أيضا البلورات سليمة والحد من الاستهلاك. من بين الحلول الأكثر نجاحا هو حاقن النتوء الصغير لزوجة عالية، التي يسلم continiously الجري العمود من درجة حرارة الغرفة كريستال لادن lipidic مكعب المرحلة (LCP) عبر نبضات الأشعة السينية شعاع20. بلورات المنحى عشوائياً، المضمنة في الدفق نظام الإجراءات الجزائية، التي يتم اعتراضها من قبل مبعثر نبضات إكسفيل الأشعة السينية على جهاز كشف حيث يتم تسجيل نمط حيود. LCP كان خياراً طبيعيا لوسيلة تسليم عينة كما يتم استخدامه كوسيلة نمو كثيرا ما لغشاء بروتين بلورات17،21،22،23، لزوجة عالية أخرى وسائل الإعلام الناقل 24،25،،من2627،،من2829،30 و31 من البروتينات القابلة للذوبان كما استخدمت في محقن. سفاكس مع حاقن لزوجة عالية قد نجحت خلال تصميم هيكل غشاء بروتينات13،32 بما في ذلك33،ز مستقبلات البروتين-إلى جانب (جبكرس)34، 35،،من3637، مع نوعية البيانات الكافية لإنشاء38،مراحل39 الأصلية بينما يجري كل الوقت وعينه تتسم بالكفاءة. حاليا، هذه الحقن تستخدم أكثر بشكل روتيني لقياس درجة حرارة الغرفة في السنكروتروني مصادر28،30،،من4041 وكذلك خلال الأكثر من الناحية الفنية وتطالب تجارب سفاكس TR في إكسفيلس9،10،،من1342.
المقارنة TR-سفاكس التجارب قد نفذت باستخدام أنواع حاقن أخرى مثل الطور السائل ركز التسليم في تدفق فوهة6،،من712، ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب كميات البروتين لا تتوفر للعديد أهداف مثيرة للاهتمام من الناحية البيولوجية. لتحديد هياكل ثابتة باستخدام البثق لزج متوسط استهلاك 0.072 ميلغرام بروتين لأنماط الحيود المفهرسة 10,000 مقارنة بملغ 9.35 ل jet السائل أبلغ فوهات (أي حوالي 130 مرات أكثر من عينة 20من الكفاءة). ثبت حاقن لزوجة عالية يكون جهاز تسليم نماذج قابلة للتطبيق ل TR-سفاكس بينما فقط التضحية ببعض من هذه الكفاءة عينة43. وكان في نوغلي et al. (2018)10، على سبيل المثال، نموذج استهلاك حوالي 1.5 ملغ في أنماط المفهرسة 10,000، الذي يقارن إيجابيا لتجارب TR-سفاكس مماثلة باستخدام PYP حيث كان استهلاك متوسط عينة أعلى بكثير مع 74 ملغ بروتين كل 000 10 6من أنماط المفهرسة. وهكذا يكون لزوجة عالية عن طريق الحقن مزايا واضحة عندما يتم الحد من كمية البروتين المتاحة أو عندما تزرع البلورات مباشرة في نظام الإجراءات الجزائية.
ل TR-سفاكس لزوجة عالية باستخدام الحقن لإنتاج البيانات الأكثر موثوقية عدة مسائل تقنية تحتاج إلى معالجتها: سرعة تدفق يحتاج إلى البقاء فوق قيمة الحد أدنى الحرج؛ ينبغي الاحتفاظ بضرب المعدل المستوى لا تجعل من جمع البيانات بطيئة (مثلاً، أكبر من 5 في المائة)؛ وقد عينة لتسليمها دون انقطاع المفرط. ومن الناحية المثالية، الفعل استيفاء هذه الشروط قبل وقت طويل من تجربة TR-سفاكس مجدولة لاستخدام الوقت المتاح إكسفيل أكبر قدر ممكن من الكفاءة. بريسيبالي، قد تسمح تباطؤ في تيار LCP السبر البلورات التي تم تنشيطها مع نبض الليزر الضوئية واحد أو أكثر والنتيجة في الدول النشطة مختلطة، أو سبر ضخ المواد عند أومبومبيد المواد المتوقع في الحزمة. فائدة إضافية لحقن قبل الاختبار هو أن التوقف أثناء جمع البيانات في إكسفيل تصغير وقت إنزالها إلى استبدال فوهات مسدودة، تغيير خارج العينات غير القذف، ويتم تقليل مهام الصيانة الأخرى.
نقدم هنا، وسيلة لتحسين تقديم عينة لجمع البيانات سفاكس TR مع حاقن النتوء الصغير لزوجة عالية. للبساطة، الأساليب المذكورة لا تعتمد على إمكانية الوصول إلى مصدر الأشعة سينية، على الرغم من أن العمل في بيمليني السنكروتروني29 تقديم معلومات إضافية عن معدلات ضرب المتوقعة وكريستال الحيود. لدينا البروتوكولات وضعت لتحسين تجارب لالتقاط isomerization الشبكية في مضخة البروتون باكتيريورهودوبسين10 وتنفذ على مرحلتين بدءاً بإعداد عينات كريستال لقذف متبوعاً بالرصد قذف استخدام إعداد كاميرا عالية السرعة. في المرحلة الأولى، يختلط LCP كريستال لادن LCP إضافية، انتقال انخفاض درجة حرارة الدهون، أو غيرها من المواد المضافة لضمان الخليط النهائي مناسبة لتوصيلها إلى البيئة عينة دون إعاقة أو إبطاء. مقرنة حقنه ثلاثية جديدة وضعت لتحسين خلط التجانس الأداء وعينه. وتتألف المرحلة الثانية اختبار قذف سجلتها كاميرا عالية السرعة لقياس استقرار سرعة قذف مباشرة. وبعد تحليل بيانات الفيديو، يمكن تعديلات على بروتوكول إعداد نموذج لتحسين النتائج التجريبية. هذه الإجراءات يمكن تكييفها لتحضير البروتينات الأخرى لجمع البيانات TR-سفاكس، مع الحد الأدنى من تعديلات، وسوف تسهم في الاستخدام الفعال لمحدودية إكسفيل بيمتيمي. مع مرافق إكسفيل جديدة بدأت للتو على العملية44،45 ونقل أساليب جمع البيانات التسلسلية حاقن المستندة إلى سينتشروترونس28،،من3040،41 ، السنوات القليلة القادمة ستواصل بالتأكيد تقديم رؤى جديدة مثيرة في ديناميات الهيكلية لنطاق أوسع من أي وقت مضى لأهداف البروتين.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

اللزوجة عالية النتوء الصغير عن طريق الحقن قد قلل جداً من استهلاك عينة في تجارب بلورية femtosecond التسلسلي (SFX) في أشعة ليزر الإلكترون الحر (إكسفيلس). كذلك أقامت سلسلة من التجارب باستخدام باكتيريورهودوبسين مضخة البروتون يحركها الضوء هذه الحقن كخيار مفضل لتسليم بلورات لحل الوقت femtosecond المسلسل علم البلورات (TR-سفاكس) حل التغييرات الهيكلية البروتينات بعد فوتواكتيفيشن. للحصول على لقطات هيكلية متعددة ذات جودة عالية، من الضروري جمع كميات كبيرة من البيانات، والتأكد من إزالة الألغام بلورات بين كل نبضة ليزر مضخة. هنا، نحن تصف بالتفصيل كيف يمكننا الأمثل النتوء ميكروكريستالس باكتيريورهودوبسين لتجاربنا TR-سفاكس الأخيرة مصدر الضوء متماسك في الجراحة (لكلس). ويهدف الأسلوب الأمثل البثق لتدفق مستقر ومتواصل مع الحفاظ على كثافة عالية من بلورات لزيادة المعدل في البيانات التي يمكن جمعها في سفاكس-TR التجربة. يمكننا تحقيق هذا الهدف بإعداد المرحلة مكعب lipidic مع توزيع بلورات استخدام المحاقن الثلاثية رواية اقتران الجهاز متبوعاً بضبط تكوين نموذج استناداً إلى قياسات الاستقرار البثق المتخذة مع عالي السرعة بصورة متجانسة إعداد الكاميرا. المنهجية التي يمكن تكييفها لتحسين تدفق الأخرى ميكروكريستالس. الإعداد ستكون متاحة لمستخدمي المرفق الجديد "السويسري ليزر الإلكترون الحر".

مواد انطلاق مثالية للإجراءات المذكورة هنا (الشكل 3) بكثافات عالية من ميكروكريستالس التي أدرجت في الناقل اللزوجة المتوسطة محقن. ويدعو هذا الإجراء حوالي 50 ميليلتر من الناقل آدن كريستال لكل إعداد. يمكن زراعتها مباشرة في نظام الإجراءات الجزائية كهذه مع<sup class=...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

نجاح تجربة علم البلورات femtosecond المسلسل وقت حلها مرهون بتسليم عينة تتسم بالكفاءة. هنا، نحن تصف البروتوكولات الأمثل النتوء ميكروكريستالس باكتيريورهودوبسين من حاقن النتوء الصغير لزوجة عالية. المنهجية تعتمد على تجانس العينة مع مقرنة الثلاثية رواية والتصور مع كاميرا عالية السرعة.

تحسين قذف لزوجة عالية من ميكروكريستالس لحل وقت المسلسل Femtosecond البلورات في أشعة الليزر

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

تم تصميم هذا البروتوكول لضمان أن المشاكل التي تواجهها بشكل متكرر أثناء التجارب البلورية التسلسلية التي تم حلها زمنيًا لن تؤدي إلى المساس بجودة البيانات. إحدى المزايا الرئيسية لهذه الطريقة هي قدرتها على التكيف مع أنظمة الكريستال الفردية. يتيح لنا اختبار البثق عالي السرعة للكاميرا أيضًا قياس استقرار البثق بشكل مباشر.أولاً، قم بتحميل 50 ميكرولترات من البلورات monoolein القائمة LCP في حقنة 100 ميكرولتر حوالي 30 دقيقة قبل الحقن. للحقن في بيئة فراغ، تحميل خمسة ميكرولترات من MAG 7.9 وخمسة ميكرولترات من البارافين السائل في الجزء الخلفي من حقنة ثانية. عقد الحقنة عموديا، طرد فقاعات الهواء من الحقنة.قم بتوصيل الحقنة مع MAG 7.9 والبارافين إلى مُقننة حقنة قياسية. وتطهير الهواء من مقرن عن طريق الضغط بلطف على المكبس حتى حجم صغير من الخليط مرئيا في غيض من إبرة قنينة. توصيل حقنة عينة إلى مربط حقنة أخذ السيارة لا لإدخال أي هواء في العينة.مزيج في الدهون والبارافين عن طريق تمرير العينة من خلال زوجين عدة مرات. المقبل، تحميل 20 ميكرولترات من LCP مُزَمَّل مسبقاً في حقنة أخرى 100 ميكرولتر. إزالة حقنة فارغة من قنينة وربط LCP مُزاجَد إلى حقنة الكريستال التي تحتوي على استخدام مُقننة حقنة قياسية.ثم، تمرير العينة من خلال 100 مرة من خلال مُقرّر التوصيل. لجلب العينة في مرحلة مكعب، إضافة ثلاثة ميكرولترات من مونوولين ومزيج 50 مرة. كرر هذا الإجراء فقط حتى يتم تشكيل مرحلة شفافة لتجنب فائض من المونيولين.كاختبار أولي لصلابة العينة والبثق، فصل الحقنة فارغة من مقنن الحقنة، وعقد الحقنة عموديا، والضغط على كمية صغيرة من العينات من خلال قنينة. إذا كانت العينة مقذوف تشكل اسطوانة تستقيم، ثم العينة جاهزة لاختبار البثق. ضبط الحجم الإجمالي للعينة إلى 100 ميكرولترات بإضافة أكثر مُسبقاً LCP.إربطي حقنة العينة و حقنتين فارغتين بمقننة الحقنة الثلاثية اخلط 50 مرة على الأقل عن طريق تمرير نصف العينة إلى الحقنة الثانية ثم الضغط على كل من نصفي العينة في الحقنة الثالثة في وقت واحد. ضع الحقنة التي تحتوي على عينة مختلطة تحت مجهر ستيريو للتحقق من توزيع متجانس للبلورات.تطهير مضخة HPLC وجميع خطوط المياه لضمان معدلات التدفق دقيقة. ثم، تطهير المرحلة الهيدروليكية من حاقن. بعد ذلك، قم بتشغيل الكاميرا وتوصيلها بالبرامج التي تم توفيرها.مع تشغيل فيديو مباشر للحصول على ملاحظات مرئية، ضع طرف الفوهة في وسط الإطار واجلبه إلى التركيز مع المرحلة ذات المحاور الثلاثة. تعيين معدل الإطار على الكاميرا إلى 1،000 لقطة في الثانية. ثم، تعيين الدقة إلى 512 في 512 بكسل.مع الوقت التعرض الآن تعيين من قبل معدل الإطار، وضبط مستوى الإضاءة حتى فوهة مرئية. ضع طرف الفوهة بحيث يكون مركزًا إلى اليسار إلى اليمين ويقع في الثلث العلوي من الإطار. إعداد الكاميرا في وضع الفاصل الزمني.تعيين الفاصل الزمني إلى 30 ثانية و repeats إلى 40 مرة. تعيين وضع المشغل إلى عشوائي. وأدخل عدد الإطارات للتسجيل إلى 1000.الآن، تحميل الخزان مع 20 ميكرولترات من عينة الاختبار وإرفاق فوهة شعرية. إرفاق الخزان المملوء بالمحقن. ثم، قم بتوصيل خط الغاز إلى الميناء على فوهة وبدء تدفق الغاز.بعد ذلك، في وقت واحد بدء تشغيل المضخة وتسجيل الكاميرا. مراقبة البثق حتى ضغط المضخة منحدرات حادة بالقرب من وقت الانتهاء المتوقع. ثم، ووقف تسجيل، إيقاف المضخة، وتنفيس ضغط النظام عن طريق فتح صمام الإغاثة.بعد ذلك، افتح ملف الفيديو باستخدام برنامج التحليل وقم بمعايرة أدوات القياس. العثور على إطار في الفيديو حيث هناك ميزة قابلة للتتبع مرئية في البثق. تسجيل رقم الإطار.بعد ذلك، تقدم الفيديو إلى إطار حيث تكون نفس الميزة مرئية ولكن انتقلت من موضعه في الخطوة السابقة. تسجيل رقم الإطار. باستخدام أداة قياس الخط المستقيم، قم بقياس المسافة من نقطة البداية والنهاية للميزة عن طريق تحليل القياس.كرر الخطوات السابقة عدة مرات لكل مقطع من الفيديو. وأخيراً، رسم سلسلة البيانات. المادة المثالية لبدء الإجراء الموصوف هنا هي كثافات عالية من microcrystals دمجها في وسيلة الناقل لزجة لحقن.واستخدمت بلورات البروتين لجمع بيانات TRSFX على البروتون ضخ البكتيريا rhodopsin، والتي كشفت عن التغيرات السريعة جدا التي تحدث بعد امتصاص الفوتون. بعد إعداد العينة باستخدام قنينة ثلاثية، يظهر الفحص البصري للمواد في الحقنة تجانس العينة. ويمكن للصور المجهر تأكيد كثافة البلورات.العينة هي في مرحلة مكعب عندما المتوسطة تسليم واضحة ولزجة. الخلائط العكرة هي مؤشر على أن العينة في مرحلة الإسفنج أو اللامييار، ولكنها ليست حاسمة حيث أن كثافة الكريستال العالية قد تحجب وضوح LCP. ويمكن إجراء اختبار الضغط المنخفض لتحديد المرحلة الاسفنجية عن طريق سحب المكبس حقنة بعيدا عن العينة.أثناء الاختبار النفاث، يجب أن ينضح العينة عموداً متواصلاً طويلاً من LCP يتحرك بسرعة ثابتة تقريباً. تشير العينات التي يتم تشغيلها في وضع نازف إلى أن اللزوجة منخفضة جداً. وينبغي أن تظهر البيانات المستقاة من العينات التي تشكل عموداً أن البثق يبقى أعلى من الحد الأدنى من السرعة التي تمليها المعلمات التجريبية.بعد التحسين باستخدام هذا البروتوكول وقت حل يمكن جمع البيانات البلورية التسلسلي في منشأة خبير. وهذا سوف تكشف عن التغيرات التشكلية في البروتين بأكمله لأنها تؤدي وظيفتها.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

إعداد خلايا منتسب للتصوير الإسفار الأشعة السينية من قبل التثبيت الكيميائية

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

حيود الأشعة السينية مسحوق في علوم الحفظ: نحو روتيني البنية البلورية تحديد التآكل المنتجات على كائنات التراث الفن

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

طريقة البثق الرواسب الأساسية في الملليمتر قرار باستخدام المعايرة، الخيوط قضيب

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

ارتفاع الضغط واحد كريستال حيود في مقصف ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

التحديد الكمي للبيانات Fluorescence الأشعة السينية باستخدام خرائط

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

حل وقت الحصاد "التوصيف الثلاثي فوتوفيسيكال المركبات العضوية" في خالية من الأكسجين "البيئة باستخدام" الوثيقة iCCD الكاميرا

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

وضع بروتوكول تجريبي ل Femtosecond نير للأشعة فوق البنفسجية-شوف تجارب ضخ-التحقيق مع ليزر الإلكترون الحر

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

رقائق موائع جزيئية لنثر الخفيفة الديناميكية في الموقع حيود الأشعة السينية كريستال و في الموقع لعلم البلورات المسلسل

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

امتصاص المعادن الأساسية في البكتيريا سلبية الغرام: الأشعة السينية الأسفار، النظائر المشعة، والخلية تجزئة

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

الكشف عن عنصري المراعية لمادة الكيمياء في البطاريات عن طريق التحليل الطيفي امتصاص الأشعة السينية اللينة، وتبعثر الأشعة السينية غير مرن رنانة

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...