Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Vi anerkender Gebhard Schertler, Rafael Abela og Chris Milne for at støtte brugen af høj viskositet injektorer på PSI. Richard Neutze og hans team er anerkendt for drøftelser om tidsopløst krystallografi og prøve levering med høj viskositet injektorer. For finansiel støtte, vi anerkender den schweiziske National Science Foundation for tilskud 31003A_141235, 31003A_159558 (til J.S.) og PZ00P3_174169 (til PN). Dette projekt har modtaget støtte fra EUs Horisont 2020 forskning og innovation program under Marie-Sklodowska-Curie tilskud aftale nej 701646.

1. protein Crystal prøveforberedelse
<ol><li>Ca 30 min før prøven er sprøjtes, baseret belastning 50 µL af krystal-laden monoolein LCP i en 100 µL sprøjte.</li>
	<li>Til injektion ved atmosfærisk tryk: belastning 10 µL af flydende paraffin ind i bagsiden af en anden sprøjte. Hold sprøjten lodret, udvise luftbobler fra sprøjten.<ol>
<li>Til indsprøjtning i vakuum miljø: belastning 5 µL af MAG 7,9 og 5 µL af flydende paraffin ind i bagsiden af en anden sprøjte. Hold sprøjten lodret, udvise luftbobler fr...

TR-SFX metode med tyktflydende ekstrudering Injektoren har vist sig for at være en levedygtig teknik for strukturdynamik undersøgelser af bakterierhodopsin9,10 og photosystem II13 og nu tilsyneladende parat til at studere proteiner køre andre Foto biologiske processer såsom lys-drevet ion transport eller sansning5,50. Protokollerne beskrevet ovenfor blev designet til at maksime...

Seriel femtosekund krystallografi (SFX) er en strukturel biologi teknik, der udnytter de unikke egenskaber af X-ray fri-elektron lasere (XFEL) til at bestemme stuetemperatur strukturer fra tusindvis af mikrometer mellemstore krystaller mens outrunning de fleste af strålingsskader ved "diffraktion før destruktion" princippet1,2,3.
I en tid-løst udvidelse af SFX (TR-SFX) bruges femtosekund impulser fra XFEL til at undersøge strukturelle ændringer i proteiner4,5. Protein af interesse er aktiveret med en optisk laser (eller en anden aktivitet udløser) lige før bliver skudt ved XFEL i en pumpe-sonde setup. Ved præcist at kontrollere forsinkelse mellem pumpen og sonde pulser, kan target proteinet blive fanget i forskellige stater. Molekylær film af strukturelle ændringer over elleve størrelsesordener i tid demonstrere magt af de nye XFEL kilder at studere dynamikken i flere protein mål6,7,8,9, 10,11,12,13. Hovedsagelig, sammenkæder metoden de dynamiske spektroskopiske og statisk strukturfondene teknikker til en, giver et indblik i protein dynamikker på nær atomic opløsning.
Simple systemer for TR-SFX kan indeholde en endogen udløser aktivering med et lysfølsomt element som retinal i bakterierhodopsin (bR)9,10, lysopfangende i photosystem II12,13, photoactive gule protein (PYP)6,7 reversibelt photoswitchable fluorescerende protein11, eller en photolyzable af kulilte i myoglobin8. Spændende varianter af teknik stadig i udvikling afhængige mix og injicere ordninger14,15 for at studere enzymatiske reaktioner eller et elektrisk felt anvendes til at fremkalde strukturændringer16. At XFEL kilder har kun været tilgængelig for et par år og ekstrapolering af tidligere succeser i fremtiden, metoden viser potentiale som en rigtig spil-changer for vores forståelse af, hvordan proteiner funktion.
Fordi biologiske prøver er ødelagt af en enkelt eksponering for en høj effekt XFEL puls, var nye tilgange til Proteinkrystallografi nødvendige. Blandt disse procedurer, evnen til at vokse store mængder af ensartede microcrystals skulle være udviklede17,18,19. For at aktivere indsamling af data på en XFEL, skal disse krystaller afgives, kasseret, og derefter fornyes for hver XFEL puls. I betragtning af at XFELs brand brugbar pulser på 10-120 Hz, skal prøven levering hurtig, stabil og pålidelig, samtidig også holde krystaller intakt og begrænse forbruget. Blandt de mest vellykkede løsninger er en høj viskositet mikro-ekstrudering injektor, som leverer en kontinuerlig streaming kolonne i stuetemperatur krystal-laden lipidic cubic fase (LCP) på tværs af den pulserende X-ray stråle20. Tilfældigt orienterede krystaller, integreret i LCP-stream, der er opfanget af XFEL pulser scatter røntgenbilleder på en detektor, hvor et diffraktionsmønster registreres. LCP var et naturligt valg for en prøve levering medium som det ofte bruges som en vækstmedium for membran protein krystaller17,21,22,23, endnu andre høj viskositet databaerere 24,25,26,27,28,29,30 og opløselige proteiner31 har også været brugt i injektoren. SFX med høj viskositet Injektoren har været vellykket under struktur bestemmelsen af membran proteiner13,32 herunder G protein koblede receptorer (GPCRs)33,34, 35,36,37, med datakvaliteten tilstrækkeligt for indfødte phasing38,39 samtidig være både tid og prøve effektiv. I øjeblikket, disse injektorer bliver brugt mere rutinemæssigt til stuetemperatur målinger på synkrotron kilder28,30,40,41 og under mere teknisk krævende TR-SFX eksperimenter på XFELs9,10,13,42.
Sammenlignelige TR-SFX eksperimenter er foretaget ved hjælp af andre injektor typer som flydende fase levering i et flow fokuseret dyse6,7,12, men denne metode kræver protein beløb ikke er tilgængelige for mange biologisk interessant mål. Til bestemmelse af statiske strukturer ved hjælp af tyktflydende ekstrudering et gennemsnitligt forbrug af 0.072 mg protein pr. 10.000 indekserede diffraktion mønstre i forhold til 9,35 mg til de flydende jet er dyser blevet rapporteret (dvs. ca. 130 gange mere prøve effektiv)20. Høj viskositet Injektoren har vist sig at være en levedygtig prøven levering enhed for TR-SFX mens kun ofrer nogle af denne prøve effektivitet43. I Nogly et al. (2018)10, for eksempel prøve forbrug var ca. 1,5 mg pr. 10.000 indekserede mønstre, som sammenligner positivt til lignende TR-SFX eksperimenter ved hjælp af PYP hvor gennemsnitlige prøve forbrug var meget højere med 74 mg protein pr. 10.000 indekserede mønstre6. Høj viskositet injektorer således klare fordele når mængden af protein tilgængelige begrænser eller når krystaller dyrkes direkte i LCP.
For TR-SFX ved hjælp af høj viskositet injektorer til at give de mest pålidelige data flere tekniske spørgsmål skal løses: flow hastighed skal forblive over en mindste kritiske værdi; hit-rate bør holdes på et niveau, der ikke gør dataindsamling langsom (fx mere end 5%); og prøven skal leveres uden overdreven forstyrrelser. Ideelt, disse betingelser opfyldes allerede længe før en planlagt TR-SFX eksperiment at bruge tilgængelige XFEL tid så effektivt som muligt. Pricipally, en opbremsning i LCP stream kan tillade sondering krystaller, der blev aktiveret med mere end én optisk laser puls og resultatet i blandet aktive stater, eller sondering pumpede materiale, når umpumped materiale forventes i bjælken. En yderligere fordel ved injektion pre-prøvning er at nedetid under dataindsamling på en XFEL er minimeret som tid forvist til udskiftning tilstoppede dyser, skiftende ud ikke-ekstrudering prøver, og andre opgaver til vedligeholdelse er reduceret.
Vi præsenterer her, en metode til at optimere prøven levering for TR-SFX indsamling med en høj viskositet mikro-ekstrudering injektor. For enkelhed stole de beskrevne metoder ikke på adgang til en X-ray kilde, selv om arbejdet på en synkrotron beamline29 ville give yderligere oplysninger om forventede hit satser og crystal diffraktion. Vores protokoller blev udviklet til at optimere eksperimenter for at optage retinal isomerisation i proton-pumpe bakterierhodopsin10 og er gennemført i to faser, begyndende med krystal prøver at forberede ekstrudering efterfulgt af overvågning ekstrudering Brug af et high-speed kamera setup. I fase et, er krystal-laden LCP blandet med yderligere LCP, lav overgangen temperatur lipider eller andre tilsætningsstoffer sikre den endelige blanding er velegnet til levering i prøve miljøet uden tilstopning eller aftagende. En ny tre-vejs sprøjte kobling blev udviklet for at forbedre blanding ydeevne og prøve homogenitet. Den anden fase består af en ekstrudering test registreres af en high-speed kamera direkte måle ekstrudering hastighed stabilitet. Efter analyse af den video data, kan justeringer foretages stikprøve forberedelse protokollen forbedre eksperimentelle resultater. Disse procedurer kan tilpasses for at forberede andre proteiner til TR-SFX indsamling, med minimale ændringer, og vil bidrage til en effektiv udnyttelse af begrænset XFEL beamtime. Med ny XFEL faciliteter lige begyndt deres operation44,45 og overførsel af injektor-baseret serie dataindsamlingsmetoder til synchrotrons28,30,40,41 , de næste par år vil sikkert fortsætte med at give spændende ny indsigt i den strukturelle dynamik i en stadig bredere vifte af protein mål.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

Høj viskositet mikro-ekstrudering injektorer har dramatisk reduceret prøve forbrug i serie femtosekund krystallografiske eksperimenter (SFX) på X-ray fri-elektron lasere (XFELs). En serie af eksperimenter ved hjælp af lys-drevet proton pumpe bakterierhodopsin har yderligere etableret disse injektorer som en foretrukne indstilling til at levere krystaller til tidsopløst seriel femtosekund krystallografi (TR-SFX) til at løse strukturelle ændringer af proteiner efter photoactivation. For at få flere strukturelle snapshots af høj kvalitet, er det vigtigt at indsamle store mængder data og sikre clearance af krystaller mellem hver pumpe laser puls. Her, beskriver vi i detaljer hvordan vi optimeret ekstrudering af bakterierhodopsin microcrystals for vores seneste TR-SFX eksperimenter på Linac sammenhængende lys kilde (LCLS). Formålet med metoden er at optimere ekstrudering for en stabil og kontinuerlig flow samtidig opretholde en høj tæthed af krystaller til at øge hastigheden på hvilke data kan indsamles på en TR-SFX eksperimentere. Vi opnår dette mål ved at forberede lipidic cubic fase med en homogen fordeling af krystaller ved hjælp af en roman tre-vejs sprøjte tilkoblingsanordning fulgt ved at justere sample sammensætning baseret på målinger af ekstrudering stabilitet taget med en højhastigheds kamera setup. Metoden, der kan tilpasses til at optimere strømmen af andre microcrystals. Setup vil være tilgængelige for brugere af den nye schweiziske fri elektron Laser facilitet.

Den ideelle råvare til de procedurer, der er beskrevet her (figur 3) er høje tætheder af microcrystals indarbejdet i tyktflydende databaerere til injektoren. Proceduren kræver omkring 50 µL af krystal belæsset transportør for hvert præparat. Disse kan være dyrket direkte i LCP som med bR9,10 anvendes her som eksempel (figur 4), eller tilberedt med krystaller voks...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

Succesen med en tidsopløst seriel femtosekund krystallografi eksperiment er afhængig af effektiv prøven levering. Her beskriver vi protokoller for at optimere ekstrudering af bakterierhodopsin microcrystals fra en høj viskositet mikro-ekstrudering injektor. Metoden bygger på prøve homogenisering med en ny tre-vejs kobling og visualisering med en høj hastighed kamera.

Forbedre høj viskositet ekstrudering af Microcrystals for tidsopløst seriel femtosekund krystallografi på X-ray lasere

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

Denne protokol er udviklet til at sikre, at problemer, der ofte opstår under tids løste serielle krystallografiske eksperimenter, ikke kompromitterer datakvaliteten. En stor fordel ved denne metode er dens tilpasningsevne til individuelle krystalsystemer. Den høje hastighed kamera ekstrudering test giver os også mulighed for direkte at måle ekstrudering stabilitet.Læg først 50 mikroliter krystalladen monoolein baseret LCP i en 100 mikrolitersprøjte ca. 30 minutter før injektionen. Til injektion i et vakuummiljø skal der indlæses fem mikroliter MAG 7.9 og fem mikroliter flydende paraffin i bagsiden af en anden sprøjte. Hold sprøjten lodret, udvis luftboblerne fra sprøjten.Tilslut sprøjten med MAG 7.9 og paraffin til en standard sprøjtekok. Og rense luften fra koblingen ved forsigtigt at trykke på stemplet, indtil en lille mængde af blandingen er synlig på spidsen af koblingsnålen. Tilslut prøvesprøjten til sprøjteparren, der tager bilen, så der ikke kommer luft ind i prøven.Bland i lipid og paraffin ved at passere prøven gennem koblingen flere gange. Dernæst indlæses 20 mikroliter forblandet LCP i en anden 100 mikrolitersprøjte. Fjern den tomme sprøjte fra koblingen, og fastgør den forblandede LCP til krystallen med sprøjten med en standardsprøjtekok.Derefter passerer prøven gennem koblingen 100 gange. For at bringe prøven ind i den kubiske fase, tilsættes tre mikroliter monoolein og bland 50 gange. Gentag denne procedure, indtil en gennemsigtig fase er dannet for at undgå et overskud af monoolein.Som en indledende test for prøvestivhed og ekstrudbarhed løsnes den tomme sprøjte fra sprøjtekoblet, og sprøjten holdes lodret, skal du presse en lille mængde prøveprøve gennem koblingen. Hvis den ekstruderede prøve danner en opretstående cylinder, er prøven klar til ekstruderingstest. Juster prøvens samlede volumen til 100 mikroliter ved at tilføje mere forblandet LCP.Fastgør prøvesprøjten og to tomme sprøjter til trevejssprøjteparret. Der blandes mindst 50 gange ved at sende halvdelen af prøven i den anden sprøjte og derefter trykke begge halvdele af prøven ind i den tredje sprøjte samtidigt. Sprøjten, der indeholder den blandede prøve, anbringes under et stereomikroskop for at kontrollere en homogen fordeling af krystaller.Fjern en HPLC-pumpe og alle vandledninger for at sikre, at strømningshastighederne er nøjagtige. Derefter renses injektorens hydrauliske fase. Tænd derefter for kameraet, og tilslut kameraet til den medfølgende software.Med en live video, der kører for visuel feedback, skal du placere dysespidsen i midten af rammen og bringe den i fokus med den treaksede fase. Indstil billedhastigheden på kameraet til 1.000 billeder pr. sekund. Derefter skal du indstille opløsningen til 512 gange 512 pixel.Når eksponeringstiden nu er indstillet af billedhastigheden, skal du justere belysningsniveauet, indtil dysen er synlig. Flyt dysespidsen, så den er centreret mod venstre mod højre og er placeret i den øverste tredjedel af rammen. Konfigurer kameraet i tidsforskændetilstand.Indstil intervallet til 30 sekunder og gentagelserne til 40 gange. Indstil udløsertilstanden til tilfældig. Og indtast antallet af rammer, der skal optages til 1.000.Nu indlæse reservoiret med 20 mikroliter af prøven og fastgør kapillær dysen. Fastgør den fyldte beholder til injektoren. Derefter fastgøres gasledningen til porten på dysen og start gasstrømmen.Derefter skal pumpen og kameraoptagelsen startes samtidigt. Ekstruderingen overvåges, indtil pumpetrykket ramper kraftigt op i nærheden af det forventede sluttidstid. Derefter skal du stoppe optagelsen, slukke for pumpen, og udluft systemtrykket ved at åbne aflastningsventilen.Derefter skal du åbne videofilen med analysesoftwaren og kalibrere måleværktøjerne. Find en ramme i videoen, hvor der er en sporbar funktion synlig i ekstruderingen. Post rammenummeret.Derefter skal du gå videre til en ramme, hvor den samme funktion er synlig, men er flyttet fra sin placering i det forrige trin. Post rammenummeret. Brug måleværktøjet til lige linje til at måle afstanden fra funktionens start- og slutpunkt via analysemål.Gentag de foregående trin et par gange for hvert segment af videoen. Endelig afbilde dataserien. Det ideelle udgangsmateriale til den procedure, der er beskrevet her, er høje tætheder af mikrokrystaller indarbejdet i en tyktflydende luftfartsselskab medium for injektoren.Protein krystaller blev brugt til at indsamle TRSFX data om proton pumpede bakterier rhodopsin, som afslørede de ultra hurtige ændringer, der opstår efter foton absorption. Efter prøvepræparering ved hjælp af en trevejsudligning viser visuel inspektion af materialet i sprøjten prøvehomogenitet. Og mikroskop billeder kan bekræfte tætheden af krystaller.Prøven er i den kubiske fase, når leveringsmediet er klart og tyktflydende. Uklare blandinger er en indikation af, at prøven er i en svamp eller lamelfase, men er ikke afgørende, da høj krystaltæthed kan tilsløre LCP'ens klarhed. En lavtrykstest til identifikation af svampefasen kan udføres ved at trække sprøjtestempelet væk fra prøven.Under jettesten skal prøven ekstrudere en lang kontinuerlig kolonne med LCP, der bevæger sig med en næsten konstant hastighed. Prøver, der kører i dryptilstand, angiver, at viskositeten er for lav. Data fra prøver, der danner en kolonne, skal vise, at ekstruderingen forbliver over en minimumshastighed, der er dikteret af forsøgsparametrene.Efter optimering ved hjælp af denne protokol tid-løse serielle krystallografiske data kan indsamles på en ekspert facilitet. Dette vil afsløre de konformationelle ændringer i hele protein, som det udfører sin funktion.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

Forberedelse vedhæftende celler for X-ray fluorescens Imaging af Chemical Fiksering

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

X-ray af pulver i Conservation Science: Mod Rutinemæssig Krystalstrukturbestemmelse af korrosionsprodukter på Heritage Art Objects

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

Sediment Core Ekstrudering metoden ved Millimeter Resolution hjælp af en kalibreret, gevind-stang

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

High Pressure Single Crystal Diffraktion på PX ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

Kvantificere X-Ray fluorescens Data ved hjælp af kort

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Tidsopløst Photophysical karakterisering af Triplet-høst organiske forbindelser på en ilt-frit miljø ved hjælp af en iCCD kamera

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

En eksperimentel protokol for femtosekund NIR/UV - XUV pumpe-sonde eksperimenter med fri-elektron lasere

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Mikrofluid Chips for In Situ Crystal røntgen diffraktion og In Situ dynamisk lysspredning for serielle krystallografi

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

Væsentlige Metal udbredelse i Gram-negative bakterier: X-ray fluorescens, radioisotoper, og celle fraktionering

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

Elemental-følsomme påvisning af kemi i batterier gennem bløde X-ray Absorption spektroskopi og Resonant uelastisk X-ray spredning

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...