Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Wij erkennen Gebhard Schertler, Rafael Abela en Chris Milne ter ondersteuning van het gebruik van hoge viscositeit injectoren op de PSI. Richard Neutze en zijn team zijn erkend voor discussies over time-resolved kristallografie en monster levering met behulp van hoge viscositeit injectoren. Voor financiële steun, we erkennen de Zwitserse National Science Foundation voor subsidies 31003A_141235, 31003A_159558 (naar J.S.) en PZ00P3_174169 (tot P.N.). Dit project heeft financiering ontvangen van de Europese Unie Horizon 2020 onderzoek en innovatie programma onder de Marie Sklodowska-Curie subsidie overeenkomst No 701646.

1. eiwitten Crystal monstervoorbereiding
<ol><li>Ongeveer 30 minuten voordat de steekproef is om te worden geïnjecteerd, belasting 50 µL van crystal-beladen monoolein op basis van LCP in een 100 µL spuit.</li>
	<li>Voor injectie bij atmosferische druk: Load 10 µL van vloeibare paraffine in de achterkant van een tweede injectiespuit. Houd de injectiespuit verticaal en verdrijven de luchtbellen uit de spuit.<ol>
<li>Voor injectie in vacuüm milieu: belasting 5 µL van MAG 7,9 en 5 µL van vloeibare paraffine in de ac...

De TR-SFX-methode met de viskeuze extrusie injector heeft bewezen te zijn van een levensvatbare techniek voor structurele dynamica studies van bacteriorhodopsin9,10 en Fotosysteem II13 en nu lijkt klaar om te studeren eiwitten rijden andere Foto biologische processen zoals ion licht-gedreven vervoer of zintuiglijke waarneming5,50. De hierboven beschreven protocollen werden ontworpe...

Seriële femtoseconde kristallografie (SFX) is een structurele biologie-techniek die gebruik maakt van de unieke eigenschappen van X-ray vrije elektron lasers (XFEL) om te bepalen van de kamertemperatuur structuren uit duizenden kristallen micrometer en middelgrote terwijl outrunning allermeest de schade door straling door de "diffractie vóór vernietiging" beginsel1,2,3.
In een tijd-resolved uitbreiding van SFX (TR-SFX), worden de pulsen van de femtoseconde van de XFEL gebruikt voor het bestuderen van structurele veranderingen in de eiwitten4,5. De proteïne van belang wordt geactiveerd met een optische laser (of een andere activiteit-trigger) vlak voor neergeschoten door de XFEL in een pomp-sonde setup. Door het juist beheersen van de vertraging tussen de pomp en sonde pulsen, kan de doel-eiwit worden vastgelegd in verschillende Staten. Moleculaire films van structurele veranderingen over elf ordes van grootte in tijd tonen de kracht van de nieuwe XFEL-bronnen te bestuderen van de dynamiek van verschillende eiwitten doelen6,7,8,9, 10,11,12,13. Hoofdzakelijk, voegt de methode het dynamische spectroscopische en statische structurele technieken tot een, waardoor een glimp in eiwit dynamiek in de buurt van atomaire resolutie.
Eenvoudige systemen voor TR-SFX kunnen bevatten een endogene trekker van activering met een lichtgevoelig component zoals retinal in109,bacteriorhodopsin (bR), de chromophores in Fotosysteem II12,13, photoactive gele eiwit (PYP)6,7 omkeerbaar photoswitchable TL proteïne11, of een photolyzable koolmonoxide in myoglobine8. Spannende varianten van de techniek nog in ontwikkeling zijn afhankelijk van de mix en injecteren regelingen14,15 te studeren enzymatische reacties of een elektrisch veld gebruikt voor het opwekken van structurele veranderingen16. Gezien het feit dat XFEL bronnen alleen beschikbaar voor een paar jaar zijn en extrapoleren verleden successen in de toekomst, de methode potentieel als een echte game-wisselaar met betrekking tot ons begrip van hoe toont eiwitten functie.
Omdat biologische monsters worden vernietigd door een eenmalige blootstelling aan een hoogvermogen XFEL pulse, waren nieuwe benaderingen van eiwit kristallografie noodzakelijk. Onder deze procedures moest de mogelijkheid om te groeien van grote hoeveelheden van uniforme microcrystals ontwikkelde17,18,19. Opdat het verzamelen van de gegevens op een XFEL, moeten deze kristallen worden geleverd, verwijderd en vervolgens vernieuwd voor elke XFEL pulse. Gezien het feit dat XFELs brand bruikbare pulsen bij 10-120 Hz, moet monster levering snel, stabiel en betrouwbaar is, terwijl ook de kristallen intact en beperkend consumptie. Onder de meest succesvolle oplossingen is een hoge viscositeit micro-extrusie injector, die levert een voortdurend streaming kolom van kamertemperatuur crystal-beladen lipidic kubieke fase (LCP) over de gepulste X-ray lichtbundel20. Willekeurig georiënteerde kristallen, ingebed in de LCP-stroom, die worden onderschept door de XFEL pulsen scatter x-stralen op een detector waar een patroon van diffractie is opgenomen. LCP was een natuurlijke keuze voor een monster levering medium zoals het vaak als een groeimedium voor membraan eiwit kristallen17,21,22,23, nog andere informatiedragers hoge viscositeit gebruikt wordt 24,25,26,27,28,29,30 en31 van de oplosbare eiwitten zijn ook gebruikt in de injector. SFX met de hoge viscositeit injector is geslaagd tijdens de structuurbepaling van membraan eiwitten13,32 met inbegrip van G eiwit-gekoppelde receptoren (GPCRs)33,34, 35,,36,,37, met voldoende voor inheemse phasing38,39 terwijl zowel tijd als monster efficiënt de kwaliteit van de gegevens. Momenteel, deze injectoren zijn meer routinematig wordt gebruikt voor metingen van de kamertemperatuur op synchrotron bronnen28,30,40,41 , zowel als bij de meer technisch veeleisende TR-SFX experimenten op XFELs9,10,13,42.
Vergelijkbare TR-SFX experimenten zijn uitgevoerd met behulp van andere types van de injector zoals vloeibare fase levering in een stroom mondstuk6,7,12 gericht, echter deze methode vereist proteïne bedragen niet beschikbaar voor velen biologisch interessante doelen. Voor de bepaling van de statische structuren met behulp van een gemiddeld verbruik van 0.072 mg eiwit per 10.000 geïndexeerde diffractie patronen in vergelijking met 9.35 mg voor de vloeibare jet viskeuze extrusie hebben sproeiers gemeld (dat wil zeggen, ongeveer 130 keer meer monster efficiënt)20. De hoge viscositeit injector is gebleken te zijn van een levensvatbare monster levering apparaat voor TR-SFX terwijl slechts enkele van deze steekproef efficiëntie43te offeren. In Nogly et al. (2018)10, bijvoorbeeld monster verbruik was ongeveer 1,5 mg per 10.000 geïndexeerde patronen, die gunstig in vergelijking met soortgelijke TR-SFX experimenten met behulp van de PYP waar gemiddeld monster verbruik veel hoger bij 74 mg eiwit per 10.000 was geïndexeerde patronen6. Hoge viscositeit injectoren hebben dus duidelijke voordelen wanneer is het beperken van de hoeveelheid eiwit beschikbaar of kristallen worden geteeld rechtstreeks in LCP.
Voor TR-SFX met hoge viscositeit injectoren naar de meest betrouwbare gegevens opleveren diverse technische problemen moeten worden aangepakt: de snelheid van de stroming moet blijven boven een minimale kritische waarde; de hit-tarief moet worden gehandhaafd op een niveau dat niet weer langzaam het verzamelen van de gegevens (bijvoorbeeld meer dan 5%); en monster moet worden geleverd zonder overmatige storingen. Ideaal, deze voorwaarden is al voldaan lang voordat een geplande TR-SFX experiment zo efficiënt mogelijk gebruik van de beschikbare tijd van de XFEL. Pricipally, een vertraging in de LCP-stroom kan toestaan indringende kristallen die waren geactiveerd met meer dan één optische laser puls en resultaat in gemengde actief Staten, of indringende verpompte materiaal wanneer umpumped materiaal in de bundel wordt verwacht. Een bijkomend voordeel van injectie pre-test is dat downtime tijdens het verzamelen van de gegevens op een XFEL wordt geminimaliseerd als tijd gedegradeerd tot vervanging van verstopte spuitstukken, wijzigen uit niet-diepte monsters, en andere onderhoudstaken is verlaagd.
Hier presenteren we een methode voor het optimaliseren van monster levering voor het verzamelen van de gegevens van de TR-SFX met een hoge viscositeit micro-extrusie injector. Voor de eenvoud vertrouw de beschreven methoden niet op toegang tot een bron van X-ray, hoewel werk aan een synchrotron beamline29 zou nadere informatie over verwachte hit tarieven en kristal diffractie. Onze protocollen werden ontwikkeld om experimenten te vangen retinale isomerisatie in de protonpomp bacteriorhodopsin10 te optimaliseren en worden uitgevoerd in twee fasen, te beginnen met de voorbereiding van crystal monsters voor extrusie gevolgd door controle van de extrusie met behulp van een high-speed camera setup. In de eerste fase, wordt de crystal-beladen LCP gemengd met extra LCP, lage overgang temperatuur lipiden of andere additieven om ervoor te zorgen dat het uiteindelijke mengsel is geschikt voor bezorging binnen de voorbeeldomgeving zonder verstopping of vertragen. Een nieuwe drieweg spuit koppelstuk werd ontwikkeld ter verbetering van mengen prestaties en monster homogeniteit. De tweede fase bestaat uit een test van de extrusie opgenomen door een high-speed camera naar de extrusie snelheid stabiliteit rechtstreeks te meten. Na de analyse van de videogegevens, aanpassingen kunnen worden aangebracht bij het protocol van de voorbereiding van monster experimentele resultaten te verbeteren. Deze procedures ter voorbereiding van de andere eiwitten voor TR-SFX gegevensverzameling, met minimale wijzigingen, kunnen worden aangepast en zal bijdragen tot het efficiënte gebruik van de beperkte XFEL beamtime. Met nieuwe voorzieningen van de XFEL net beginnen hun werking44,45 en de overdracht van seriële gegevens injector gebaseerde vergaringsmethoden aan synchrotrons28,30,40,41 , de komende jaren zal zeker blijven spannende nieuwe inzicht verwerven in de structurele dynamica van een ooit-grotere verscheidenheid van eiwit doelen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

Dikvloeibaar micro-extrusie injectoren gedaald dramatisch monster consumptie in seriële femtoseconde kristallografische experimenten (SFX) op X-ray vrije elektron lasers (XFELs). Een reeks van experimenten met behulp van de licht-gedreven proton pomp bacteriorhodopsin hebben verder deze injectoren opgericht als een voorkeursoptie te leveren crystals voor seriële femtoseconde time-resolved kristallografie (TR-SFX) voor het oplossen van de structurele veranderingen van eiwitten na photoactivation. Voor het verkrijgen van meerdere structurele momentopnamen van hoge kwaliteit, is het noodzakelijk te verzamelen van grote hoeveelheden gegevens en Goedkeuringvande kristallen tussen elke pomp laser impuls zorgen. Hier beschrijven we in detail hoe we de extrusie van de bacteriorhodopsin microcrystals geoptimaliseerd voor onze recente TR-SFX experimenten op de Linac Coherent licht bron (LCLS). Het doel van de methode is voor het optimaliseren van 3D-effect voor een stabiele en continue stroom terwijl het handhaven van een hoge dichtheid van kristallen het percentage te verhogen op welke gegevens kunnen worden verzameld in een TR-SFX experimenteren. We bereiken dit doel door het opstellen van lipidic kubieke fase met een homogene verdeling van kristallen met behulp van een roman drieweg spuit koppelinrichting gevolgd door aanpassing van de samenstelling van de steekproef op basis van metingen van de stabiliteit van de extrusie genomen met een high-speed de set-up van de camera. De methode kan worden aangepast aan het optimaliseren van de stroom van andere microcrystals. De setup zal beschikbaar zijn voor gebruikers van de nieuwe faciliteit van de Zwitserse vrije elektron Laser.

De ideale grondstof voor de hier beschreven procedures (Figuur 3) zijn hoge dichtheid van microcrystals opgenomen in viskeuze vervoerder medium voor de injector. De procedure roept voor ongeveer 50 µL van crystal beladen drager voor elk preparaat. Deze kunnen rechtstreeks in de LCP als met de bR9,10 hier gebruikt als voorbeeld (Figuur 4), of opgesteld op basis van krista...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

Het succes van een time-resolved seriële femtoseconde kristallografie experiment is afhankelijk van efficiënte monster levering. We beschrijven hier protocollen voor het optimaliseren van de extrusie van de bacteriorhodopsin microcrystals van een hoge viscositeit micro-extrusie injector. De methodologie steunt op monster homogenisering met een roman drieweg koppelstuk en visualisatie met een high-speed camera.

Verbetering van de extrusie van de hoge viscositeit van Microcrystals voor Time-resolved seriële femtoseconde kristallografie aan X-ray Lasers

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

Dit protocol is ontworpen om ervoor te zorgen dat problemen die vaak worden ondervonden tijdens tijdopgenomen seriële kristallografische experimenten de kwaliteit van de gegevens niet in gevaar brengen. Een groot voordeel van deze methode is het aanpassingsvermogen aan individuele kristalsystemen. De high speed camera extrusie test stelt ons ook in staat om direct extrusie stabiliteit te meten.Laad eerst 50 microliter kristallecoololeine op basis van LCP in een 100 microliterspuit ongeveer 30 minuten voor de injectie. Voor injectie in een vacuümomgeving, laad vijf microliters van MAG 7.9 en vijf microliter van vloeibare paraffine in de rug van een tweede spuit. Houd de spuit verticaal vast, verdring de luchtbellen uit de spuit.Sluit de spuit aan met MAG 7.9 en paraffine op een standaard spuitkoppeling. En zuiver de lucht van de koppeling door zachtjes op de zuiger te drukken totdat een klein volume van het mengsel zichtbaar is aan het uiteinde van de koppelingsnaald. Sluit de monsterspuit aan op de spuitkoppeling die de auto neemt om geen lucht in het monster te introduceren.Meng de lipide en paraffine door het monster meerdere keren door de koppeling te laten gaan. Laad vervolgens 20 microliter voorgemengde LCP in nog eens 100 microliterspuit. Haal de lege spuit uit de koppeling en bevestig de voorgemengde LCP aan het kristal met spuit met behulp van een standaard spuitkoppeling.Geef het monster vervolgens 100 keer door de koppeling. Om het monster in de kubieke fase te brengen, voeg drie microliter monoolein toe en meng 50 keer. Herhaal deze procedure totdat een transparante fase is gevormd om een overmaat aan monoolein te voorkomen.Als een voorlopige test voor monster stijfheid en extrudabiliteit, los de lege spuit van de spuit koppeling, en het houden van de spuit verticaal, knijp een kleine hoeveelheid sampler door de koppeling. Als het geëxtrudeerde monster een rechtopstaande cilinder vormt, is het monster klaar voor extrusietests. Pas het totale volume van het monster aan op 100 microliters door meer voorgemengde LCP toe te voegen.Bevestig de monsterspuit en twee lege spuiten aan de driewegspuitenkoppeling. Meng ten minste 50 keer door de helft van het monster in de tweede spuit te laten passeren en druk vervolgens tegelijkertijd op beide helften van het monster in de derde spuit. Plaats de spuit met het gemengde monster onder een stereomicroscoop om een homogene verdeling van kristallen te verifiëren.Zuiver een HPLC-pomp en alle waterleidingen om ervoor te zorgen dat de stroomsnelheden nauwkeurig zijn. Zuiver vervolgens de hydraulische fase van de injector. Schakel vervolgens de camera in en sluit de camera aan op de meegeleverde software.Met een live video die wordt uitgevoerd voor visuele feedback, plaatst u de nozzle-tip in het midden van het frame en brengt u deze in beeld met de drieassige fase. Stel de framesnelheid op de camera in op 1.000 frames per seconde. Stel vervolgens de resolutie in op 512 bij 512 pixels.Als de belichtingstijd nu is ingesteld door de framesnelheid, past u het verlichtingsniveau aan totdat het mondstuk zichtbaar is. Plaats de nozzle-tip zo dat deze gecentreerd naar links naar rechts en zich in het bovenste derde deel van het frame bevindt. Stel de camera in timelapse-modus in.Stel het interval in op 30 seconden en de herhalingen op 40 keer. Stel de triggermodus in op willekeurig. En voer het aantal frames in om op te nemen tot 1.000.Laad nu het reservoir met 20 microliter van het testmonster en bevestig de capillaire mondstuk. Bevestig het gevulde reservoir aan de injector. Bevestig vervolgens de gasleiding aan de haven op het mondstuk en start de gasstroom.Start hierna tegelijkertijd de pomp en de camera-opname. Controleer de extrusie totdat de pompdruk scherp opvoert in de buurt van de verwachte eindtijd. Stop vervolgens met opnemen, schakel de pomp uit en ontlucht de systeemdruk door de hulpklep te openen.Open hierna het videobestand met de analysesoftware en kalibreer de meettools. Zoek een frame in de video waar er een traceerbare functie zichtbaar is in de extrusie. Neem het framenummer op.Vervolgens u de video verplaatsen naar een frame waarin dezelfde functie zichtbaar is, maar in de vorige stap van zijn positie is verwijderd. Neem het framenummer op. Met behulp van het meetinstrument rechte lijn meet je de afstand tot het begin- en eindpunt van de functie via een analysemeting.Herhaal de vorige stappen een paar keer voor elk segment van de video. Tot slot, plot de data-serie. Het ideale uitgangsmateriaal voor de hier beschreven procedure is hoge dichtheden van microkristallen opgenomen in een viskeuze drager medium voor de injector.Eiwitkristallen werden gebruikt om TRSFX-gegevens te verzamelen over de protonpomped bacteriën rhodopsine, die de ultrasnelle veranderingen die optreden na fotonabsorptie onthuld. Na monstervoorbereiding met behulp van een driewegkoppeling, toont visuele inspectie van het materiaal in de spuit monsterhomogeniteit. Microscoopbeelden kunnen de dichtheid van de kristallen bevestigen.Het monster bevindt zich in de kubieke fase wanneer het leveringsmedium helder en stroperig is. Troebelmengsels zijn een aanwijzing dat het monster zich in een spons- of lamellenfase bevindt, maar niet overtuigend is omdat een hoge kristaldichtheid de helderheid van de LCP kan verdoezelen. Een lagedruktest om de sponsfase te identificeren kan worden uitgevoerd door de spuitzuiger uit de buurt van het monster te trekken.Tijdens de straaltest moet het monster een lange continue kolom van LCP extruderen die met een bijna constante snelheid beweegt. Monsters die in een druipmodus worden uitgevoerd, geven aan dat de viscositeit te laag is. Gegevens uit monsters die een kolom vormen, moeten aantonen dat de extrusie boven een minimumsnelheid blijft die wordt bepaald door de experimentele parameters.Na optimalisatie met behulp van dit protocol kunnen seriële kristallografische gegevens worden verzameld in een expertfaciliteit. Dit zal onthullen de conformatie veranderingen in het hele eiwit als het zijn functie vervult.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

Het voorbereiden hechtende cellen voor X-stralen fluorescentie beeldvorming door Chemical Fixatie

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

X-ray poederdiffractie in Conservation Science: Towards Routine kristalstructuurbepaling van Corrosie Producten over Heritage Kunstobjecten

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

Sediment Core extrusie Method bij Millimeter resolutie met behulp van een gekalibreerde, schroefdraad-rod

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

High Pressure Single Crystal diffractie bij PX ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

Kwantificeren van Röntgen fluorescentie gegevens met behulp van MAPS

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Time-resolved fotofysische karakterisering van Triplet-oogst organische verbindingen in een zuurstofvrije omgeving met behulp van een iCCD Camera

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

Een experimenteel Protocol voor femtoseconde NIR/UV - XUV pomp-Probe experimenten met gratis-elektron Lasers

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips voor In Situ Crystal röntgendiffractie en In Situ Dynamische lichtverstrooiing voor seriële kristallografie

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

Essentieel metalen opname bij gram-negatieve bacteriën: Röntgen fluorescentie, radio-isotopen, en cel fractionering

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

Elemental-gevoelige detectie van de chemie in batterijen door zachte X-ray Absorptie spectroscopie en Resonant inelastisch X-ray Scattering

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...