Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Vi erkjenner Gebhard Schertler, Rafael Abela og Chris Milne for å støtte bruk av høy viskositet sprøytebrukere på PSI. Richard Neutze og hans team er anerkjent for diskusjoner om tid-løst krystallografi og prøve levering med høy viskositet sprøytebrukere. For finansiell støtte, vi erkjenner Swiss National Science Foundation for stipend 31003A_141235, 31003A_159558 (til js) og PZ00P3_174169 (til P.N.). Dette prosjektet har mottatt finansiering fra EUs horisonten 2020 forskning og innovasjon programmet under Marie-Sklodowska-Curie stipendet avtalen ingen 701646.

1. protein Crystal eksempel forberedelse
<ol><li>Ca 30 min før prøven er som skal injiseres, basert laste 50 µL av krystall-laden monoolein LCP i 100 µL sprøyte.</li>
	<li>For injeksjon med lufttrykk: Last 10 µL av flytende parafin på baksiden av en andre sprøyte. Holder sprøyten vertikalt, utvise luftbobler i sprøyta.<ol>
<li>For injeksjon i vakuum miljø: Load 5 µL av MAG 7.9 og 5 µL av flytende parafin på baksiden av en andre sprøyte. Holder sprøyten vertikalt, utvise luftbobler i sprøyta.</li>
	</ol...

TR-SFX metoden med tyktflytende ekstrudering injektoren har vist seg for å være en levedyktig teknikk for strukturelle dynamics studier av bacteriorhodopsin9,10 og photosystem II13 og nå synes klar til å studere proteiner kjører andre Foto biologiske prosesser som lys-drevet ion transport eller sensorisk persepsjon5,50. Protokollene beskrevet ovenfor ble utformet for å maksim...

Føljetong femtosecond krystallografi (SFX) er en strukturell biologi teknikk som utnytter de unike egenskapene til X-ray gratis elektron lasere (XFEL) til å fastslå romtemperatur strukturer fra tusenvis av mikrometer store krystaller mens outrunning de fleste av stråling skader ved "Diffraksjon før ødeleggelsen" prinsippet1,2,3.
I en tid-løst forlengelse av SFX (TR-SFX) brukes femtosecond pulser fra XFEL å studere strukturelle endringer i proteiner4,5. Protein rundt aktiveres med en optisk laser (eller en annen aktivitet utløser) like før blir skutt av XFEL i en pumpe-sonden oppsett. Ved å kontrollere nøyaktig forsinkelsen mellom pumpe og sonde pulser, kan målet protein fanges i forskjellige stater. Molekylær filmer av strukturelle endringer over elleve størrelsesordener tid viser kraften i de nye XFEL kildene å studere dynamikken i flere protein mål6,7,8,9, 10,11,12,13. Prinsipielt blir metoden dynamisk spektroskopiske og statisk strukturelle teknikker til én, gir et glimt inn protein dynamics på nær Atom løsning.
Enkle systemer for TR-SFX kan inneholde en endogen utløser av aktivisering med et foto-sensitive komponent som retinal i bacteriorhodopsin (bR)9,10, chromophores i photosystem II12,13, fotoaktive gul protein (PYP)6,7 reversibel photoswitchable fluorescerende protein11, eller en photolyzable karbonmonoksid i myoglobin8. Spennende varianter av teknikken fortsatt i utvikling avhengige blanding og injisere ordninger14,15 for å studere enzymatiske reaksjoner eller et elektrisk felt brukt til å indusere strukturendringer16. Gitt at XFEL kilder har bare vært tilgjengelig i noen år og ekstrapolere tidligere suksesser i fremtiden, metoden viser potensial som en ekte spill-veksler med hensyn til vår forståelse av hvordan proteiner-funksjonen.
Fordi biologiske prøver er ødelagt av en enkelt eksponering til en høy effekt XFEL puls, var nye tilnærminger til protein krystallografi nødvendig. Blant disse prosedyrene, muligheten til å vokse store mengder uniform microcrystals måtte være utviklet17,18,19. For å aktivere datainnsamling på en XFEL, må disse krystallene leveres, forkastet, og deretter fornyes for hver XFEL puls. Gitt at XFELs brann brukbare pulser på 10-120 Hz, må prøve levering være rask, stabile og pålitelig, samtidig holde krystallene intakt og begrensende. Blant de mest vellykkede løsningene er en høy viskositet mikro-ekstrudering injektor, som leverer en fabrikkindustrien stadig streaming kolonnen romtemperatur krystall-laden lipidic kubikk fase (LCP) over den pulserende røntgenbilde stråle20. Tilfeldig orientert krystaller, innebygd i LCP strømmen, som er fanget opp av XFEL pulser scatter røntgen på en detektor der et Diffraksjon mønster er lagret. LCP var et naturlig valg for et eksempel levering medium som den brukes ofte som vekst medium for membran protein krystaller17,21,22,23, ennå andre høy viskositet carrier medier 24,25,26,27,28,29,30 og løselig proteiner31 har også vært brukt i injektoren. SFX med høy viskositet injektoren har vært vellykket i strukturen fastsettelse av membran proteiner13,32 inkludert G protein-kombinert reseptorer (GPCRs)33,34, 35,36,37, med kvalitet tilstrekkelig for native innfasing38,39 samtidig både tid og prøve effektiv. Foreløpig disse sprøytebrukere blir brukt mer rutinemessig for rom temperaturmålinger på synchrotron kilder28,30,40,41 og mer teknisk krevende TR-SFX eksperimenter på XFELs9,10,13,42.
Sammenlignbare TR-SFX eksperimenter har blitt utført ved hjelp av andre injektor typer som flytende fase levering i en fokusert munnstykke6,7,12, men denne metoden krever protein beløp ikke tilgjengelig for mange biologisk interessant mål. For bestemmelse av statiske strukturer bruker tyktflytende ekstrudering en gjennomsnittlig forbruk av 0.072 mg protein per 10 000 indekserte Diffraksjon mønstre i forhold til 9.35 mg for flytende jet er dyser rapportert (dvs. ca 130 ganger mer utvalg effektiv)20. Høy viskositet injektoren har vist seg å være en levedyktig eksempel levering enhet for TR-SFX mens bare å ofre noen av denne prøven effektivitet43. I Nogly et al. (2018)10, for eksempel eksempel forbruk var ca 1.5 mg per 10 000 indekserte mønstre, som sammenligner gunstig til lignende TR-SFX eksperimenter med PYP hvor gjennomsnittlig eksempel forbruk var mye høyere med 74 mg protein per 10 000 indekserte mønstre6. Høy viskositet sprøytebrukere har dermed klare fordeler når mengden av protein tilgjengelig begrenser eller krystaller dyrkes i LCP.
For TR-SFX med høy viskositet sprøytebrukere å gi den mest pålitelige data flere tekniske problemer må tas: siden strømmen fart må være over en minimumsverdi for kritiske; hit-prisen bør opprettholdes på et nivå som ikke gjengir datainnsamling langsom (f.eks større enn 5%); og utvalget har leveres uten overdreven avbrudd. Ideelt disse betingelsene oppfylles allerede lenge før en planlagt TR-SFX eksperiment bruke tilgjengelig XFEL gang så effektivt som mulig. Pricipally, en nedgang i LCP strømmen kan sondering krystaller som er aktivert med flere optiske laser puls og resultere i blandet aktive stater eller sondering pumpet materiale når umpumped materiale forventes i strålen. En ekstra fordel av injeksjon pre-tester er at nedetid under datainnsamlingen på en XFEL er minimert som henvist å erstatte dysene, endring ut ikke-ekstrudering prøvene, og andre vedlikeholdsoppgaver reduseres.
Her presenterer vi en metode for å optimalisere eksempel levering for TR-SFX datainnsamling med en høy viskositet mikro-ekstrudering injektor. For enkelhet stole metodene beskrevet ikke på tilgang til en X-ray kilde, selv om arbeid på en synchrotron beamline29 vil gi ytterligere informasjon om forventet hit priser og krystall Diffraksjon. Våre protokoller ble utviklet for å optimalisere eksperimenter for å fange retinal isomerization i proton pumpe bacteriorhodopsin10 og er gjennomført i to faser med krystall prøvene forberedte ekstrudering etterfulgt av overvåking byggesystemer ved hjelp av et høyhastighets kamera oppsett. I fase en blandes krystall-laden LCP med ekstra LCP, lav overgang temperatur lipider eller andre tilsetningsstoffer å sikre den endelige blandingen er egnet for levering i prøven miljøet uten tilstopping eller bremse. En ny tre-veis sprøyte coupler ble utviklet for å forbedre miksing ytelse og prøve homogenitet. Den andre fasen består av en ekstrudering test av et høyhastighets kamera direkte måle ekstrudering hastighet stabiliteten. Etter analyse av videodata, justeringer kan gjøres for eksempel forberedelse protokollen å forbedre eksperimentelle resultater. Disse prosedyrene kan tilpasses for å forberede andre proteiner TR-SFX datainnsamling, med minimal modifikasjoner, og vil bidra til effektiv bruk av begrenset XFEL beamtime. Med nye XFEL fasiliteter bare starte sin drift44,45 og overføring av injektor-baserte serielle data samling metoder til synchrotrons28,30,40,41 , de neste årene vil sikkert fortsette å tilby spennende ny innsikt i strukturelle dynamikken i et stadig bredere utvalg av protein mål.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

Høy viskositet mikro-ekstrudering sprøytebrukere har dramatisk redusert eksempel forbruk føljetong femtosecond krystallografisk eksperimenter (SFX) på X-ray gratis elektron lasere (XFELs). En rekke eksperimenter med lys-drevet proton pumpen bacteriorhodopsin har videre etablerte disse sprøytebrukere som foretrukket alternativ å levere krystaller for tid-løst føljetong femtosecond krystallografi (TR-SFX) å løse strukturelle endringer av proteiner etter photoactivation. For å få flere strukturelle øyeblikksbilder av høy kvalitet, er det viktig å samle inn store mengder data og sikre Lagersalg krystaller mellom hver pumpe laser puls. Her beskrive vi i detalj hvordan vi optimalisert byggesystemer i bacteriorhodopsin microcrystals for våre siste TR-SFX eksperimenter på Linac sammenhengende lys kilde (LCLS). Målet med metoden er å optimalisere ekstrudering for en stabil og kontinuerlig flyt samtidig opprettholde en høy tetthet av krystaller til å øke hastigheten på hvilke data kan samles i en TR-SFX eksperimentere. Vi oppnå dette målet ved å forberede lipidic kubikk fase med en homogen fordeling av krystaller bruker en roman treveis sprøyte kopling enheten etterfulgt av justere eksempel sammensetningen basert på målinger for ekstrudering stabilitet tatt med en rask kamerainnstillingene. Metodikken kan tilpasses å optimalisere flyten av andre microcrystals. Oppsettet vil være tilgjengelig for brukere av nye sveitsiske gratis elektron Laser.

Den ideelle starte materialet for prosedyrene som er beskrevet her (Figur 3) er høye tettheter av microcrystals innlemmet i tyktflytende bærematerialet for injektoren. Operasjonen krever 50 µL av krystall laden operatør for hvert preparat. Dette kan dyrkes i LCP som med bR9,10 brukes her som eksempel (Figur 4), eller tilberedt med krystaller vokst i konvensjonelle dam...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

Suksessen til en tid-løst føljetong femtosecond krystallografi eksperiment er avhengig for effektiv utvalg levering. Her beskriver vi for å optimalisere byggesystemer i bacteriorhodopsin microcrystals fra en høy viskositet mikro-ekstrudering injektor. Metodene er avhengig av prøven homogenisering med romanen treveis coupler og visualisering med et høyhastighets kamera.

Forbedre høy viskositet utelukkelse av Microcrystals for tid-løst føljetong Femtosecond krystallografi på røntgenlasere

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

Denne protokollen er utformet for å sikre at problemer som ofte oppstår under tidsfors løste seriekrystallografiske eksperimenter ikke vil kompromittere datakvaliteten. En stor fordel med denne metoden er tilpasningsevnen til individuelle krystallsystemer. Høyhastighetskameraprofilen gjør det også mulig for oss å måle ekstruderingsstabiliteten direkte.Først laster du 50 mikroliter krystallladen monooleinbasert LCP i en 100 mikrolitersprøyte ca. 30 minutter før injeksjonen. For injeksjon i et vakuummiljø, last fem mikroliter av MAG 7,9 og fem mikroliter flytende parafin inn i baksiden av en annen sprøyte. Hold sprøyten vertikalt, utvis luftboblene fra sprøyten.Koble sprøyten med MAG 7.9 og parafin til en vanlig sprøyten coupler. Og tøm luften fra coupleen ved å trykke forsiktig på stempelet til et lite volum av blandingen er synlig på spissen av parrnålen. Koble prøvesprøyten til sprøyten som tar bilen for ikke å føre inn luft i prøven.Bland i lipid og parafin ved å sende prøven gjennom miksen flere ganger. Deretter laster du 20 mikroliter forhåndsmixed LCP i en annen 100 mikrolitersprøyte. Fjern den tomme sprøyten fra mikseren og fest den forhåndsbiserte LCP til krystallen som inneholder sprøyten ved hjelp av en vanlig sprøyte coupler.Deretter passerer du prøven gjennom coupleen 100 ganger. For å bringe prøven inn i kubikkfasen, legg til tre mikroliter monoolein og bland 50 ganger. Gjenta denne prosedyren bare til en gjennomsiktig fase har dannet seg for å unngå et overskudd av monoolein.Som en foreløpig test for prøvestivhet og ekstruderbarhet, løsner du den tomme sprøyten fra sprøyten og holder sprøyten vertikalt, klemmer en liten mengde sampler gjennom coupler. Hvis den ekstruderte prøven danner en oppreist sylinder, er prøven klar for ekstruderingstesting. Juster det totale volumet av prøven til 100 mikroliter ved å legge til mer forhåndsblitt LCP.Fest prøvesprøyten og to tomme sprøyter til den treveis sprøyten. Bland minst 50 ganger ved å sende halvparten av prøven inn i den andre sprøyten og deretter trykke begge halvdelene av prøven inn i den tredje sprøyten samtidig. Plasser sprøyten som inneholder den blandede prøven under et stereomikroskop for å verifisere en homogen fordeling av krystaller.Tøm en HPLC-pumpe og alle vannledninger for å sikre at strømningshastighetene er nøyaktige. Deretter renser du det hydrauliske stadiet av injektoren. Deretter slår du på og kobler kameraet til den medfølgende programvaren.Med en direktesendt video som kjører for visuell tilbakemelding, plasserer du dysespissen midt på rammen og fokuserer med treaksestadiet. Sett bildefrekvensen på kameraet til 1000 bilder per sekund. Deretter setter du oppløsningen til 512 med 512 piksler.Når eksponeringstiden nå er angitt av bildefrekvensen, justerer du belysningsnivået til dysen er synlig. Flytt dysespissen slik at den er sentrert til venstre til høyre og er plassert i den øverste tredjedelen av rammen. Sett opp kameraet i tidsforløpsmodus.Sett intervallet til 30 sekunder og repetisjonene til 40 ganger. Sett utløsermodusen til tilfeldig. Og skriv inn antall rammer som skal registreres til 1000.Last nå reservoaret med 20 mikroliter av testprøven og fest kapillærdysen. Fest det fylte reservoaret til injektoren. Deretter fester du gassledningen til porten på dysen og starter gassstrømmen.Etter dette starter du pumpen og kameraopptaket samtidig. Overvåk ekstruderingen til pumpetrykket øker kraftig opp nær forventet slutttid. Deretter stopper du opptaket, slår av pumpen og lufter systemtrykket ved å åpne avlastningsventilen.Etter dette åpner du videofilen med analyseprogramvaren og kalibrerer måleverktøyene. Finn en ramme i videoen der det er en sporbar funksjon synlig i ekstruderingen. Ta opp rammenummeret.Deretter går du videoen videre til en ramme der den samme funksjonen er synlig, men som har flyttet fra posisjonen i forrige trinn. Ta opp rammenummeret. Bruk det rette linjemålingsverktøyet til å måle avstanden fra funksjonens start- og sluttpunkt via analysemål.Gjenta de forrige trinnene noen ganger for hvert segment av videoen. Til slutt plotter du dataserien. Det ideelle startmaterialet for prosedyren som er beskrevet her er høye tettheter av mikrokrystaller innlemmet i et viskøs bærermedium for injektoren.Proteinkrystaller ble brukt til å samle TRSFX-data om protonpumpede bakterier rhodopsin, som avslørte de ultraraske endringene som oppstår etter fotonabsorpsjon. Etter prøveforberedelse ved hjelp av en treveis couple, viser visuell inspeksjon av materialet i sprøyten prøvehomogenitet. Og mikroskopbilder kan bekrefte krystallenes tetthet.Prøven er i kubikkfasen når leveringsmediet er klart og viskøs. Turbid blandinger er en indikasjon på at prøven er i en svamp eller lameller fase, men er ikke avgjørende som høy krystall tetthet kan skjule LCP klarhet. En lavtrykkstest for å identifisere svampfasen kan utføres ved å trekke sprøytestempelet bort fra prøven.Under jettesten skal prøven ekstrudere en lang kontinuerlig kolonne med LCP som beveger seg i en nesten konstant hastighet. Prøver som kjører i dryppmodus indikerer at viskositeten er for lav. Data fra prøver som danner en kolonne, skal vise at ekstruderingen holder seg over en minimumshastighet diktert av eksperimentelle parametere.Etter optimalisering ved hjelp av denne protokollen tid-løse seriell krystallografiske data kan samles inn på en ekspert anlegget. Dette vil avsløre konformasjonsendringene i hele proteinet når det utfører sin funksjon.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

Forbereder Adherent Cells for X-ray fluorescens Imaging ved Kjemisk Fixation

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

X-ray Powder Diffraksjon i Conservation Science: Mot Rutine Crystal Structure Bestemmelse av korrosjonsprodukter på Heritage Kunstverk

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

Sedimentkjerne Extrusion Method på Millimeter oppløsning ved hjelp av en kalibrert, Gjenget-stang

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

Høytrykksenkelt Crystal Diffraksjon på PX ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

Kvantifisere X-Ray fluorescens Data ved hjelp av kart

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Tid-løst Photophysical karakteristikk av trilling-fangst organiske forbindelser på et oksygenfri miljø ved hjelp av en iCCD kamera

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

En eksperimentell protokoll for Femtosecond NIR/UV - XUV pumpe-sonden eksperimenter med fri-elektron lasere

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic brikker for In Situ Crystal X-ray Diffraksjon og In Situ dynamisk lysspredning for føljetong krystallografi

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

Viktig metall opptak i Gram-negative bakterier: X-ray fluorescens, Radioisotopes, og cellen fraksjoneres

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

Elemental-sensitive påvisning av kjemien i batterier gjennom myk X-ray absorpsjon spektroskopi og Resonant uelastisk X-ray spredning

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...