Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Reconocemos Gebhard Schertler, Rafael Abela y Chris Milne para apoyar el uso de inyectores de alta viscosidad a la PSI. Richard Neutze y su equipo son reconocidos por las discusiones sobre Cristalografía tiempo resuelto y entrega de la muestra utilizando inyectores de alta viscosidad. Apoyo financiero, reconocemos la Swiss National Science Foundation para becas de 31003A_141235, 31003A_159558 (a J.S.) y PZ00P3_174169 (a p). Este proyecto ha recibido financiación del programa de innovación bajo la concesión de Marie Sklodowska-Curie acuerdo No 701646 e investigación de horizonte 2020 de la Unión Europea.

1. preparación de la muestra de cristal de proteína
<ol><li>30 minutos antes de que la muestra va a ser inyectado, carga 50 μl de monoolein cargados de cristal base LCP en jeringa de 100 μl.</li>
	<li>Para la inyección a presión atmosférica: carga 10 μl de parafina líquida en la parte posterior de una segunda jeringa. Sosteniendo la jeringa verticalmente, expulsar las burbujas de aire de la jeringa.<ol>
<li>Para inyección en vacío ambiente: carga 5 μl de MAG 7.9 y 5 μl de parafina líquida en la parte post...

El método TR-SFX con el inyector de extrusión viscoso ha demostrado para ser una técnica viable para los estudios de la dinámica estructural de bacteriorhodopsin9,10 y fotosistema II13 y ahora parece dispuesto a estudiar las proteínas conduce a otro procesos biológicos de la foto transporte iónico basados en luz como percepción sensorial5,50. Los protocolos descritos anteri...

Femtosegundo serial Cristalografía (SFX) es una técnica de biología estructural que explota las propiedades únicas de láseres de electrones libres de rayos x (XFEL) para determinar estructuras de temperatura de miles de cristales de tamaño micrométrico y vencer la mayoría de el daño de la radiación por la "difracción antes de destrucción" principio1,2,3.
En una extensión de tiempo-resolved de SFX (TR-SFX), los pulsos de femtosegundo del XFEL se utilizan para estudiar cambios estructurales en las proteínas4,5. La proteína de interés se activa con un láser óptico (u otro disparador de la actividad) justo antes de ser baleado por el XFEL en una configuración de prueba de bomba. Precisamente controlando el retardo entre pulsos de bomba y sonda, la proteína diana puede ser capturada en diferentes Estados. Películas moleculares de cambios estructurales sobre once órdenes de magnitud en tiempo de demuestran el poder de las nuevas fuentes XFEL para estudiar la dinámica de varias proteínas objetivos6,7,8,9, 10,11,12,13. Principalmente, el método se une a las técnicas estructurales espectroscópicas y estáticas dinámicas en uno, proporcionando un vistazo en la dinámica de la proteína en cerca de resolución atómica.
Sistemas simples para TR-SFX pueden contener un activador endógeno de activación con un componente fotosensible como retina de bacteriorhodopsin (bR)9,10, cromóforos en fotosistema II12,13, proteínas fotoactivas amarillo (PEP)6,7 reversible fotoconmutables proteína fluorescente11, o el monóxido de carbono de un photolyzable en mioglobina8. Interesantes variaciones de la técnica todavía en desarrollo dependen de la mezcla e inyectan esquemas14,15 para estudiar reacciones enzimáticas o un campo eléctrico que se utiliza para inducir cambios estructurales16. Teniendo en cuenta que fuentes XFEL sólo han estado disponibles desde hace unos años y extrapolando más allá de los éxitos en el futuro, el método muestra potencial como un cambio real con respecto a nuestra comprensión de cómo función de las proteínas.
Porque las muestras biológicas se destruyen por una única exposición a una alta energía de pulso XFEL, nuevos enfoques a la cristalografía de proteínas fueron necesarios. Entre estos procedimientos, la capacidad de cultivar grandes cantidades de microcristales uniforme debían ser desarrollados17,18,19. Para habilitar la recopilación de datos en un XFEL, estos cristales deben ser entregados descarta y entonces renovados por cada pulso XFEL. Dado que XFELs fuego utilizables pulsos de 10-120 Hz, entrega de la muestra debe ser rápido, estable y confiable, manteniendo también a los cristales intacto y limitando el consumo. Entre las soluciones más exitosas es un inyector de micro-extrusión de alta viscosidad, que entrega un contínuamente streaming columna de temperatura ambiente cargado de cristal lipídica cúbico fase (LCP) en todo el pulsado de haz de rayos x20. Cristales orientados al azar, incrustados en la secuencia de la LCP, que son interceptados por la dispersión de pulsos XFEL rayos x en un detector donde se registra un patrón de difracción. LCP fue una elección natural para un medio de entrega de muestra como se utiliza con frecuencia como un medio de crecimiento de membrana proteína cristales17,21,22,23, otros medios de alta viscosidad del portador 24,25,26,27,28,29,30 y31 de proteínas solubles se han utilizado también en el inyector. SFX con el inyector de alta viscosidad ha sido exitosa durante la determinación de la estructura de la membrana proteínas13,32 incluyendo G proteína-juntó los receptores (GPCRs)33,34, 35,36,37, con la calidad de los datos suficiente para nativos fase38,39 mientras que tiempo y muestra eficiente. Actualmente, estos inyectores se utilizan más habitualmente para la medición de temperatura en sincrotrón fuentes28,30,40,41 , así como durante la más técnicamente exigiendo experimentos TR-SFX en XFELs9,10,13,42.
Experimentos de TR-SFX comparables se han realizado con otros tipos de inyector como fase líquida entrega un flujo enfocado boquilla6,7,12, sin embargo, este método requiere cantidades de proteínas no está disponibles para muchos objetivos biológicamente interesantes. Para la determinación de estructuras estáticas usando extrusión viscoso un consumo medio de 0,072 mg de proteína por patrones de difracción indexadas 10.000 en comparación con mg 9,35 para el chorro de líquido han divulgado los inyectores (es decir, alrededor de 130 veces más muestra eficiente)20. El inyector de alta viscosidad ha demostrado ser un dispositivo de entrega de muestra viable para TR-SFX mientras sólo sacrificar algunas de esta muestra eficacia43. En Nogly et al (2018)10, por ejemplo, consumo de muestra era alrededor de 1,5 mg por 10.000 patrones indexados, que compara favorable a experimentos similares de TR-SFX con el PEP que consumo de media de la muestra fue mucho mayor con 74 mg de proteína por cada 10.000 patrones indexadas6. Inyectores de alta viscosidad así tienen claras ventajas cuando es la limitación de la cantidad de proteína disponible o cristales se cultivan directamente en LCP.
Para TR-SFX con alta viscosidad inyectores para obtener los datos más confiables varias cuestiones técnicas deben abordarse: la velocidad de flujo debe permanecer por encima del valor crítico mínimo; la tasa de éxito debe mantenerse a un nivel que no recopilación de datos lenta (por ejemplo, más de 5%); y la muestra tiene que ser entregado sin interrupciones excesivas. Idealmente, estas condiciones se cumplen ya mucho antes de que un experimento de TR-SFX programado con tiempo disponible XFEL tan eficientemente como sea posible. Pricipally, una desaceleración en el flujo LCP puede permitir cristales que se activan con más de un pulso de láser óptico y resultar en Estados activos mixtos de sondeo o sondeo material bombeado cuando umpumped material se espera que en la viga. Un beneficio adicional de la prueba de inyección es que se reduce al mínimo tiempo de inactividad durante la recogida de datos en un XFEL tiempo relegado a sustitución de inyectores obstruidos, cambio de muestras no-extrudado, y otras tareas de mantenimiento se reduce.
Aquí, presentamos un método para optimizar la entrega de la muestra para la recolección de datos TR-SFX con un inyector micro-extrusión de alta viscosidad. Para simplificar, los métodos descritos no dependen del acceso a una fuente de rayos x, aunque trabajo en un sincrotrón línea29 ofrecerá más información sobre expectativas de tasa de éxitos y de difracción del cristal. Nuestros protocolos fueron desarrollados para optimizar los experimentos para capturar isomerización retiniana en la bomba de protones bacteriorhodopsin10 y se llevan a cabo en dos fases a partir de preparación de muestras de cristal para extrusión seguido de control de la extrusión usando una configuración de la cámara de alta velocidad. En primera fase, el LCP cargados de cristal se mezcla con LCP adicional, transición baja temperatura lípidos u otros aditivos para asegurar que la mezcla final es conveniente para la entrega en el entorno de muestra sin obstrucción o reducción. Un nuevo acoplador de la jeringuilla de tres vías fue desarrollado para mejorar la homogeneidad mezcla de rendimiento y de la muestra. La segunda fase consiste en una prueba de extrusión grabada por una cámara de alta velocidad para medir directamente la estabilidad de la velocidad de extrusión. Tras el análisis de los datos de vídeo, pueden hacer ajustes en el protocolo de preparación de muestra para mejorar los resultados experimentales. Estos procedimientos pueden ser adaptados para preparar otras proteínas para la recogida de datos TR-SFX, con modificaciones mínimas y contribuirán al uso eficiente del limitado XFEL beamtime. Con nuevas instalaciones XFEL, empezando su funcionamiento44,45 y la transferencia de métodos de recolección de datos en serie basado en el inyector a sincrotrones28,30,40,41 , los próximos años seguramente continuará brindando emocionantes nuevas penetraciones en la dinámica estructural de una gama cada vez más amplio de objetivos de proteína.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

Alta viscosidad micro-protuberancia inyectores han reducido dramáticamente el consumo muestra en serie femtosecond experimentos cristalográficos (SFX) en láseres de electrones libres de rayos x (XFELs). Una serie de experimentos utilizando el bacteriorhodopsin de bomba de protones impulsada por la luz más han establecido estos inyectores como una opción preferente para entregar cristales para Cristalografía de femtosegundo serial tiempo resuelto (TR-SFX) resolver los cambios estructurales de proteínas después de la fotoactivación. Para obtener múltiples copias instantáneas estructurales de alta calidad, es esencial para recoger grandes cantidades de datos y garantizar la separación de cristales entre cada pulso de láser de bomba. Aquí, describimos en detalle cómo hemos optimizado la extrusión de bacteriorhodopsin microcristales para nuestros experimentos recientes de TR-SFX en la fuente de luz coherente Linac (LCLS). El objetivo del método es optimizar la extrusión de un flujo estable y continuo manteniendo una alta densidad de cristales para aumentar la velocidad en que los datos pueden recogerse en un TR-SFX experimentar. Logramos este objetivo mediante la preparación de la fase cúbica lipídica con una distribución homogénea de cristales utilizando una jeringa de tres vías novedosa dispositivo seguido ajustando la composición de la muestra basada en medidas de la estabilidad de la protuberancia con una alta velocidad de enganche configuración de la cámara. La metodología puede adaptarse para optimizar el flujo de otros microcristales. La instalación estará disponible para los usuarios de las nuevas instalaciones de láser de electrón libre suizo.

El material partido ideal para los procedimientos descritos aquí (figura 3) son altas densidades de microcristales incorporados en medio viscoso portador para el inyector. El procedimiento requiere aproximadamente 50 μl de portador cargado de cristal para cada preparación. Estos se puede cultivar directamente en LCP como con el bR9,10 utilizado aquí como ejemplo (figura 4</str...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

El éxito de un experimento de Cristalografía de femtosegundo serial tiempo resuelto es dependiente en la entrega de la muestra eficiente. Aquí, describimos protocolos para optimizar la extrusión de bacteriorhodopsin microcristales de un inyector micro-extrusión de alta viscosidad. La metodología se basa en la homogeneización de la muestra con un nuevo acoplador de tres vías y la visualización con una cámara de alta velocidad.

Mejora de extrusión de alta viscosidad de microcristales para Cristalografía de femtosegundo Serial tiempo resuelto en láseres de rayos x

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

Este protocolo se ha diseñado para garantizar que los problemas que se encuentran con frecuencia durante los experimentos cristalográficos en serie resueltos en el tiempo no comprometan la calidad de los datos. Una de las principales ventajas de este método es su adaptabilidad a los sistemas de cristal individuales. La prueba de extrusión de cámara de alta velocidad también nos permite medir directamente la estabilidad de la extrusión.En primer lugar, cargue 50 microlitros de LCP a base de monoolela cristalina en una jeringa de 100 microlitros unos 30 minutos antes de la inyección. Para la inyección en un entorno de vacío, cargue cinco microlitros de MAG 7.9 y cinco microlitros de parafina líquida en la parte posterior de una segunda jeringa. Sosteniendo la jeringa verticalmente, expulse las burbujas de aire de la jeringa.Conecte la jeringa con MAG 7.9 y la parafina a un acoplador de jeringa estándar. Y purgue el aire del acoplador presionando suavemente el émbolo hasta que un pequeño volumen de la mezcla sea visible en la punta de la aguja del acoplador. Conecte la jeringa de muestra al acoplador de la jeringa que lleva el coche para no introducir aire en la muestra.Mezclar en el lípido y la parafina pasando la muestra a través del acoplador varias veces. A continuación, cargue 20 microlitros de LCP premezclado en otra jeringa de 100 microlitros. Retire la jeringa vacía del acoplador y conecte el LCP premezclado al cristal que contiene la jeringa utilizando un acoplador de jeringa estándar.A continuación, pase la muestra a través del acoplador 100 veces. Para llevar la muestra a la fase cúbica, añadir tres microlitros de monooleina y mezclar 50 veces. Repita este procedimiento hasta que se haya formado una fase transparente para evitar un exceso de monooleina.Como prueba preliminar para la rigidez y la extrusión de la muestra, desprenda la jeringa vacía del acoplador de la jeringa y sostenga la jeringa verticalmente, apriete una pequeña cantidad de toma de muestras a través del acoplador. Si la muestra extruida forma un cilindro vertical, entonces la muestra está lista para pruebas de extrusión. Ajuste el volumen total de la muestra a 100 microlitros añadiendo más LCP premezclado.Coloque la jeringa de muestra y dos jeringas vacías en el acoplador de jeringa de tres vías. Mezclar al menos 50 veces pasando la mitad de la muestra a la segunda jeringa y luego presionando ambas mitades de la muestra en la tercera jeringa simultáneamente. Coloque la jeringa que contiene la muestra mixta bajo un microscopio estéreo para verificar una distribución homogénea de cristales.Purgue una bomba HPLC y todas las líneas de agua para asegurarse de que los caudales sean precisos. A continuación, purgue la etapa hidráulica del inyector. A continuación, encienda y conecte la cámara al software suministrado.Con un vídeo en directo para obtener retroalimentación visual, coloque la punta de la boquilla en el centro del marco y enfójela con la etapa de tres ejes. Establezca la velocidad de fotogramas de la cámara en 1.000 fotogramas por segundo. A continuación, establezca la resolución en 512 por 512 píxeles.Con el tiempo de exposición ahora ajustado por la velocidad de fotogramas, ajuste el nivel de iluminación hasta que la boquilla sea visible. Vuelva a colocar la punta de la boquilla de modo que se centre de izquierda a derecha y se encuentre en el tercio superior del marco. Configure la cámara en modo de lapso de tiempo.Establezca el intervalo en 30 segundos y las repeticiones en 40 veces. Establezca el modo de disparo al azar. E introduzca el número de fotogramas que desea grabar en 1.000.Ahora, cargue el depósito con 20 microlitros de la muestra de prueba y conecte la boquilla capilar. Fije el depósito lleno al inyector. A continuación, conecte la línea de gas al puerto de la boquilla e inicie el flujo de gas.Después de esto, inicie simultáneamente la bomba y la grabación de la cámara. Supervise la extrusión hasta que la presión de la bomba aumente bruscamente cerca de la hora de finalización esperada. A continuación, detenga la grabación, apague la bomba y desahogue la presión del sistema abriendo la válvula de alivio.Después de esto, abra el archivo de vídeo con el software de análisis y calibrar las herramientas de medición. Encuentre un fotograma en el vídeo donde haya una función rastreable visible en la extrusión. Registre el número de fotograma.A continuación, avance el vídeo a un fotograma donde la misma función esté visible pero se haya movido desde su posición en el paso anterior. Registre el número de fotograma. Con la herramienta de medición de línea recta, mida la distancia desde el punto inicial y final de la entidad a través de la medida de análisis.Repita los pasos anteriores varias veces para cada segmento del vídeo. Por último, trace la serie de datos. El material de partida ideal para el procedimiento descrito aquí son las altas densidades de microcristales incorporadas en un medio portador viscoso para el inyector.Los cristales proteicos se utilizaron para recopilar datos TRSFX sobre la bacteria bombeada de protones rodopsin, que reveló los cambios ultra rápidos que se producen después de la absorción de fotones. Después de la preparación de la muestra utilizando un acoplador de tres vías, la inspección visual del material en la jeringa muestra homogeneidad de la muestra. Y las imágenes del microscopio pueden confirmar la densidad de los cristales.La muestra se encuentra en fase cúbica cuando el medio de entrega es transparente y viscoso. Las mezclas turbias son una indicación de que la muestra está en una fase de esponja o lamelar, pero no son concluyentes, ya que la alta densidad cristalina puede oscurecer la claridad del LCP. Se puede realizar una prueba de baja presión para identificar la fase de esponja tirando del émbolo de la jeringa de la muestra.Durante la prueba de chorro, la muestra debe extruir una larga columna continua de LCP que se mueve a una velocidad casi constante. Las muestras que se ejecutan en modo de goteo indican que la viscosidad es demasiado baja. Los datos de las muestras que forman una columna deben mostrar que la extrusión permanece por encima de una velocidad mínima dictada por los parámetros experimentales.Después de la optimización utilizando este protocolo, los datos cristalográficos serie de resolución de tiempo se pueden recopilar en una instalación experta. Esto revelará los cambios conformacionales en toda la proteína a medida que realiza su función.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

Preparación de células adherentes, por Imágenes de fluorescencia de rayos X por Química Fijación

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

Investigación

Química

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

Difracción de polvo de rayos X en Ciencias de la Conservación: Hacia rutina de determinación de estructura cristalina de los productos de corrosión de objetos de arte del patrimonio

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

Método de extrusión de sedimentos Core con una resolución milimétrica Utilizando una varilla roscada-calibrado

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

Alta Presión cristal único Difracción en PX ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

Cuantificar datos de fluorescencia de rayos x usando mapas

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Tiempo-resolved fotofísicas caracterización de trío cosecha compuestos orgánicos en un libre de oxígeno ambiente usando un iCCD cámara

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

Un protocolo Experimental de femtosegundo NIR/UV - XUV bomba sonda experimentos con láseres de electrones libres

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Chips de microfluídica para dispersión ligera dinámica In Situ mediante difracción de rayos x de cristal y In Situ para la cristalografía Serial

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

Absorción de Metal esencial en bacterias Gram-negativas: rayos x de fluorescencia, radioisótopos y fraccionamiento de la célula

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

Detección sensible al elemental de la química en las baterías a través de espectroscopia de absorción de rayos x blandos y dispersión inelástica resonante de la radiografía

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...