Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Vi erkänner Gebhard Schertler, Rafael Abela och Chris Milne för att stödja användningen av hög viskositet spridare på PSI. Richard Neutze och hans team är erkända för diskussioner om tid-löst kristallografi och prov leverans med hög viskositet spridare. För finansiellt stöd, vi erkänner schweiziska National Science Foundation för bidrag 31003A_141235, 31003A_159558 (att J.S.) och PZ00P3_174169 (att P.N.). Detta projekt har beviljats medel från EU: s Horizon 2020 forsknings- och innovationsprogrammet under Marie-Sklodowska-Curie stipendiet avtal nr 701646.

1. protein Crystal provberedning
<ol><li>Ca 30 min innan provet är att injiceras, baserat belastning 50 µL av kristall-lastad monoolein LCP i 100 µL spruta.</li>
	<li>För injektion vid atmosfäriskt tryck: belastning 10 µL av flytande paraffin på baksidan av en andra spruta. Håll sprutan vertikalt, utvisa luftbubblor från sprutan.<ol>
<li>För injektion i vakuum miljö: last 5 µL av MAG 7,9 och 5 µL av flytande paraffin på baksidan av en andra spruta. Håll sprutan vertikalt, utvisa luftbubblor från sprutan...

TR-SFX metoden med trögflytande extrudering injektorn har visat sig vara en livskraftig teknik för strukturdynamik studier av bacteriorhodopsin9,10 och fotosystem II13 och nu verkar redo att studera proteiner som kör andra Foto biologiska processer såsom ljus-driven ion transport eller sensorisk perception5,50. De protokoll som beskrivs ovan var utformade för att maximera fram...

Seriell femtosekund kristallografi (SFX) är en strukturbiologi-teknik som utnyttjar de unika egenskaperna hos röntgen fri elektron lasrar (XFEL) att fastställa rumstemperatur strukturer från tusentals mikrometerstort kristaller medan outrunning de flesta av den strålning skadan ”diffraktion innan förstörelsen” principen1,2,3.
I en tid-löst förlängning av SFX (TR-SFX) används de femtosekund pulserna från XFEL att studera strukturella förändringar i proteiner4,5. Proteinet av intresse aktiveras med en optisk laser (eller en annan aktivitet trigger) strax före att bli skjuten av XFEL i en pump-probe setup. Genom att exakt kontrollera fördröjningen mellan pumpen och sonden pulser, kan Målproteinet fångas i olika stater. Molekylär filmer av strukturella förändringar över elva storleksordningar i tid visar kraften i de nya XFEL källorna att studera dynamiken i flera protein mål6,7,8,9, 10,11,12,13. Huvudsakligen, sammanfogar metoden de dynamiska spektroskopiska och statiska strukturella teknikerna till en, som ger en glimt till protein dynamics på nära atomär upplösning.
Enkla system för TR-SFX kan innehålla en endogen utlösa aktivering med en foto-känslig komponent som retinal bacteriorhodopsin (bR)9,10, chromophores i fotosystem II12,13, fotoaktiva gul protein (PYP)6,7 reversibelt photoswitchable fluorescerande protein11eller en photolyzable kolmonoxid i myoglobin8. Spännande varianter av tekniken fortfarande under utveckling beroende mix och injicera system14,15 för att studera enzymatiska reaktioner eller ett elektriskt fält används för att framkalla strukturella förändringar16. Med tanke på att XFEL källor har bara funnits i några år och extrapolera tidigare framgångar in i framtiden, metoden visar potential som en riktig spel-växlare med avseende på vår förståelse av hur proteiner fungerar.
Eftersom biologiska prover förstörs av en enstaka exponering för en hög effekt XFEL puls, krävdes nya strategier för röntgenkristallografi. Bland dessa förfaranden, möjlighet att odla stora mängder enhetliga microcrystals behövde vara utvecklade17,18,19. För att aktivera datainsamling på en XFEL, måste dessa kristaller levereras, kasseras, och sedan förnyas för varje XFEL puls. Med tanke på att XFELs eld användbara pulser på 10-120 Hz, måste prov leverans vara snabb, stabil och pålitlig, samtidigt också hålla kristallerna intakt och begränsa konsumtion. Bland de mest framgångsrika lösningarna är en hög viskositet mikro-extrudering injektor, som levererar ett musikutbud streaming kolumn i rumstemperatur crystal-lastad lipidic cubic fas (LCP) över de pulsade X-ray balk20. Slumpmässigt orienterade kristaller, inbäddade i LCP-bäcken, som avlyssnas av XFEL pulser scatter röntgen på en detektor där en diffraktionsmönster registreras. LCP var ett naturligt val för ett prov leverans medium som det används ofta som ett odlingsmedium för membran protein kristaller17,21,22,23, ännu andra hög viskositet datamedier 24,25,26,27,28,29,30 och lösliga proteiner31 har också använts i injektorn. SFX med hög viskositet injektorn har varit framgångsrik under strukturbestämning av membranet proteiner13,32 inklusive G-proteinkopplade receptorer (varandra)33,34, 35,36,37, med datakvalitet tillräckligt för infödda fasa38,39 samtidigt vara både tid och prov effektivt. För närvarande är dessa spridare används mer rutinmässigt för rumstemperatur mätningar vid synkrotron källor28,30,40,41 samt under mer tekniskt krävande TR-SFX experiment vid XFELs9,10,13,42.
Jämförbara TR-SFX experiment har utförts med andra typer av injektor som vätskefasen leverans i ett flöde fokuserade munstycke6,7,12, men denna metod kräver protein belopp inte tillgängliga för många biologiskt intressanta mål. För bestämning av statiska strukturer med trögflytande extrudering en genomsnittlig konsumtion av 0.072 mg protein per 10 000 indexerade diffraktionsmönster jämfört med 9,35 mg för flytande jet har munstycken rapporterats (dvs ca 130 gånger fler prov effektiv)20. Hög viskositet injektorn har visat sig vara en livskraftig prov leverans enhet för TR-SFX medan endast offra några av detta prov effektiviteten43. I Nogly et al. (2018)10, till exempel prov konsumtion var ca 1,5 mg per 10 000 indexerade mönster, vilket positivt kan jämföras med liknande TR-SFX experiment med den PYP där genomsnittsprov konsumtion var mycket högre med 74 mg protein per 10 000 indexerade mönster6. Hög viskositet spridare alltså klara fördelar när mängden protein tillgängligt är begränsande eller när kristaller odlas direkt i LCP.
För TR-SFX med hög viskositet spridare ge mest pålitliga data flera tekniska problem behöver åtgärdas: flöde hastighet måste förbli över ett minsta kritiska värde; säljfrekvens bör behållas på en nivå som inte återger datainsamling långsam (t.ex. större än 5%); och prov har levereras utan alltför stora störningar. Helst dessa villkor uppfylls redan långt innan en schemalagd TR-SFX experiment att använda tillgänglig XFEL tid så effektivt som möjligt. Pricipally, en avmattning i LCP-dataströmmen kan sondera kristaller som aktiverades med flera optiska laserpulsen och resultatet i blandade aktiva staterna eller sondera pumpade materialet när umpumped material förväntas i balken. En ytterligare fördel med injektion pre-provande är att driftstopp under datainsamling på en XFEL minimeras som tid förpassas till ersätta tilltäppta munstycken, byta ut icke-strängpressning prover, och andra underhållsuppgifter reduceras.
Här presenterar vi en metod för att optimera prov leverans för TR-SFX datainsamling med en hög viskositet mikro-extrudering injektor. För enkelhetens skull lita de beskrivna metoderna inte på tillgång till en röntgen källa, även om arbetet på en synkrotron beamline29 skulle tillhandahålla ytterligare information om förväntade slå priser och crystal diffraktion. Våra protokoll utvecklades för att optimera experiment för att fånga retinal isomerization i proton-pump bacteriorhodopsin10 och genomförs i två faser börjar med förbereda crystal prover för extrudering följt av övervakning extrudering med en höghastighetskamera setup. I fas ett blandas crystal-lastad LCP med ytterligare LCP, låg övergång temperatur lipider, eller andra tillsatser för att säkerställa den slutliga blandningen är lämplig för leverans i prov miljön utan igensättning eller sakta. En ny tre-vägs spruta coupler utvecklades för att förbättra blandning prestanda och provets homogenitet. Den andra fasen består av en extrudering test registreras av en höghastighetskamera att direkt mäta extrudering hastighet stabilitet. Efter analysen av videodata, justeringar kan göras till protokollet prov förberedelse att förbättra experimentella resultat. Dessa förfaranden kan anpassas för att förbereda andra proteiner för TR-SFX datainsamling, med minimala ändringar, och kommer att bidra till en effektiv användning av begränsade XFEL beamtime. Med nya XFEL faciliteter precis börjat sin drift44,45 och överföring av injektor-baserade seriella datainsamlingsmetoder till synkrotroner28,30,40,41 , de närmaste åren kommer säkert fortsätta att ge spännande nya insikter i den strukturella dynamiken i ett allt större utbud av protein mål.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

High-viscosity mikro-extrudering spridare har dramatiskt minskat prov förbrukning i seriell femtosekund kristallografiska experiment (SFX) på röntgen fri elektron lasrar (XFELs). En serie experiment med hjälp av ljus-driven proton pump bacteriorhodopsin har ytterligare etablerat dessa spridare som föredra att leverera kristaller för tid-löst seriell femtosekund crystallography (TR-SFX) att lösa strukturella förändringar av proteiner efter ljusaktivering. För att få flera strukturella ögonblicksbilder av hög kvalitet, är det viktigt att samla in stora mängder data och säkerställa clearance av kristaller mellan varje pump laserpuls. Här beskriver vi i detalj hur vi optimerat extrudering av bacteriorhodopsin microcrystals för våra senaste TR-SFX experiment på Linac koherent ljus källa (LCLS). Målet med metoden är att optimera extrudering för en stabil och kontinuerlig flöde samtidigt som en hög täthet av kristaller för att öka hastigheten på vilka data som kan samlas i en TR-SFX experimentera. Vi uppnår detta mål genom att förbereda lipidic cubic fas med en homogen fördelning av kristaller med en roman trevägs spruta kopplingsanordning följt genom att justera provets sammansättning baserat på mätningar av extrudering stabilitet med ett höghastighetståg kameran setup. Metoden kan anpassas för att optimera flödet av andra microcrystals. Installationen kommer att vara tillgängliga för användare av den nya schweiziska fri elektron Laser-anläggningen.

Perfekt utgångsmaterial för de förfaranden som beskrivs här (figur 3) är höga tätheter av mikrokristaller införlivas trögflytande datamedium för injektorn. Förfarandet kräver cirka 50 µL av crystal lastade bärare för tillredningen. Dessa kan odlas direkt i LCP som med bR9,10 används här som ett exempel (figur 4), eller tillagas med kristaller odlas i konv...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

Framgången för en tid-löst seriell femtosekund kristallografi experiment är beroende av effektiva prov leverans. Här beskriver vi protokoll för att optimera extrudering av bacteriorhodopsin microcrystals från en hög viskositet mikro-extrudering injektor. Metodiken bygger på provet homogenisering med en roman trevägs koppling och visualisering med en höghastighetskamera.

Att förbättra hög viskositet extrudering av Mikrokristaller för tid-löst seriell femtosekund Crystallography på röntgen lasrar

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

Det här protokollet har utformats för att säkerställa att problem som ofta påträffas under tidsförklarade seriell kristallografiska experiment inte kommer att äventyra datakvaliteten. En stor fördel med denna metod är dess anpassningsförmåga till enskilda kristallsystem. Den höga hastighetskamera extrudering test ger oss också möjlighet att direkt mäta extrudering stabilitet.Först, ladda 50 mikroliter av crystalladen monoolein baserad LCP i en 100 microliter spruta ca 30 minuter före injektionen. För injektion i vakuummiljö, ladda fem mikroliter av MAG 7.9 och fem mikroliter av flytande paraffin i baksidan av en andra spruta. Håll sprutan vertikalt, utvisa luftbubblorna från sprutan.Anslut sprutan med MAG 7.9 och paraffin till ett vanligt sprutkopplare. Och rensa luften från kopplaren genom att försiktigt trycka på kolven tills en liten volym av blandningen är synlig vid spetsen av kopplaren nålen. Anslut provsprutan till sprutan kopplare tar bil inte att införa någon luft i provet.Blanda i lipid och paraffin genom att passera provet genom kopplaren flera gånger. Därefter laddar du 20 mikroliter av färdigblandad LCP i en annan 100 mikroliterspruta. Ta ut den tomma sprutan ur kopplaren och fäst den förblandade LCP på den kristall som innehåller sprutan med hjälp av ett vanligt sprutcnre.Sedan, passera provet genom kopplaren 100 gånger. För att få provet i kubikfasen, tillsätt tre mikroliter monoolein och blanda 50 gånger. Upprepa detta förfarande bara tills en transparent fas har bildats för att undvika ett överskott av monoolein.Som ett preliminärt test för provstyvhet och extruderingsförmåga, lösgör den tomma sprutan från sprutamparen, och håll sprutan vertikalt, pressa en liten mängd provtagare genom kopplaren. Om det strängpressade provet bildar en upprätt cylinder, då provet är redo för extrudering testning. Justera provets totala volym till 100 mikroliter genom att lägga till mer färdigblandad LCP.Fäst provsprutan och två tomma sprutor på det trevägssprutas kopplaren. Blanda minst 50 gånger genom att skicka hälften av provet i den andra sprutan och tryck sedan in båda provhalvorna i den tredje sprutan samtidigt. Placera sprutan som innehåller blandprovet under ett stereomikroskop för att verifiera en homogen fördelning av kristaller.Rensa en HPLC pump och alla vattenledningar för att säkerställa att flödeshastigheterna är korrekta. Därefter, rensa den hydrauliska skede av injektorn. Därefter slår du på och ansluter kameran till den medföljande programvaran.Med en livevideo som körs för visuell återkoppling placerar du munstyckets spets i mitten av ramen och för den i fokus med treaxliga scenen. Ställ in bildfrekvensen på kameran till 1, 000 bilder per sekund. Ställ sedan in upplösningen på 512 med 512 pixlar.Med den exponeringstid som nu ställs in av bildfrekvensen, justera belysningsnivån tills munstycket är synligt. Placera om munstyckets spets så att den centreras till vänster till höger och ligger i den övre tredjedelen av ramen. Ställ in kameran i tidsförloppsläge.Ställ in intervallet på 30 sekunder och upprepningarna till 40 gånger. Ställ in avtryckarläget på slump. Och ange antalet ramar för att spela in till 1, 000.Nu, ladda reservoaren med 20 mikroliter av testprovet och fäst kapillärmunstycket. Fäst den fyllda behållaren på injektorn. Fäst sedan gasledningen i porten på munstycket och starta gasflödet.Efter detta, samtidigt starta pumpen och kameran inspelningen. Övervaka extrudering tills pumptrycket kraftigt ramper upp nära den förväntade sluttiden. Sedan, stoppa inspelningen, stäng av pumpen, och vent systemets tryck genom att öppna avlastningsventilen.Efter detta öppnar du videofilen med analysprogramvaran och kalibrerar mätverktygen. Hitta en ram i videon där det finns en spårbar funktion som syns i extrudering. Spela in bildrutenumret.Därefter för videon vidare till en bildruta där samma funktion är synlig men har flyttat från sin position i föregående steg. Spela in bildrutenumret. Med hjälp av verktyget för mätning av den raka linjen mäter du avståndet från funktionens start- och slutpunkt via analysera mått.Upprepa föregående steg några gånger för varje segment av videon. Slutligen rita dataserien. Det idealiska utgångsmaterialet för det förfarande som beskrivs här är höga tätheter av mikrokristaller införlivas i en viskös bärare medium för injektorn.Protein kristaller användes för att samla in TRSFX data på protonpumpade bakterier rhodopsin, som avslöjade ultra snabba förändringar som sker efter foton absorption. Efter provberedning med hjälp av ett trevägss kopplare visar visuell kontroll av materialet i sprutan provhomogenitet. Och mikroskopbilder kan bekräfta kristallerna densitet.Provet är i kubikfasen när leveransmediet är klart och visköst. Turbida blandningar är en indikation på att provet är i en svamp- eller lamellfas, men är inte avgörande eftersom hög kristalltäthet kan skymma LCP:s klarhet. Ett lågtryckstest för att identifiera svampfasen kan utföras genom att dra undan sprutkolven från provet.Under jettestet bör provet extrudera en lång kontinuerlig kolumn av LCP som rör sig med en nästan konstant hastighet. Prover som körs i ett droppande läge indikerar att viskositeten är för låg. Data från prover som bildar en kolumn bör visa att extrudering stannar över en lägsta hastighet dikteras av experimentella parametrar.Efter optimering med hjälp av detta protokoll time-resolve seriell kristallografiska data kan samlas in på en expert anläggning. Detta kommer att avslöja de konformationella förändringarna i hela proteinet som den utför sin funktion.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

Förbereda Vidhäftande Cells för röntgen fluorescens avbildning av Chemical Fixering

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

X pulverröntgendiffraktionsmönster i Conservation Science: Mot Rutin Crystal strukturbestämning av korrosionsprodukter på Heritage konstföremål

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

Sedimentpropp Extrusion Method på Millimeter Resolution hjälp av en kalibrerad, Gäng-rod

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

Högtrycks Single Crystal diffraktion på PX ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

Kvantifiera X-Ray fluorescens Data med hjälp av kartor

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Tid-löst Photophysical karakterisering av triplett-skörd organiska föreningar i en syrefri miljö med en iCCD kamera

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

Ett experimentellt protokoll för femtosekund NIR/UV - XUV Pump-Probe experiment med gratis-elektron lasrar

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Mikroflödessystem marker för In Situ Crystal röntgendiffraktion och In Situ dynamiska ljusspridning för seriell Crystallography

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

Väsentliga metall upptag i gramnegativa bakterier: X-ray fluorescens, radioisotoper, och Cell fraktionering

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

Elemental-känslig detektion av kemi i batterier genom mjuk X-ray Absorption spektroskopi och Resonant oelastisk X-ray Scattering

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...