Name: improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers
Uploaded: 2019-02-28T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Gebhard Schertler, Rafael Abela ve Chris Milne yüksek viskozite enjektörleri PSI adlı kullanımını desteklemek için anıyoruz. Richard Neutze ve ekibi tartışmalar zaman çözüldü kristalografisi ve yüksek viskozite enjektörleri kullanarak örnek teslimat için kabul vardır. Mali destek için hibe 31003A_141235, 31003A_159558 (js için) İsviçre Ulusal Bilim Vakfı anıyoruz ve PZ00P3_174169 (için P.N.). Bu proje Avrupa Birliği'nin ufuk 2020 araştırma ve yenilik programı kapsamında Marie-Sklodowska-Curie hibe sözleşmesi No 701646 fon aldı.

1. protein Crystal numune hazırlama
<ol><li>Örnek enjekte edilebilir için önce yaklaşık 30 dk monoolein kristal yüklü yük 50 µL 100 µL şırıngada LCP dayalı.</li>
	<li>Atmosfer basıncında enjeksiyon için: ikinci bir şırınga arkası içine Sıvı parafin, yük 10 µL. Şırınga dikey tutarak, şırıngadan hava kabarcıkları sınırdışı.<ol>
<li>Vakum ortamı içine enjeksiyon için: yük 5 µL MAG 7,9 ve ikinci bir şırınga arkası içine Sıvı parafin 5 µL. Şırınga dikey tutarak, şır?...

TR-SFX yöntemi ile viskoz ekstrüzyon enjektör bacteriorhodopsin9,10 photosystem II ve13 yapısal dynamics çalışmaları için uygun bir teknik olduğu kanıtlanmıştır ve şimdi diğer sürüş proteinler çalışmaya hazır görünüyor İyon ışık temelli taşıma veya duyusal algı5,50fotoğraf biyolojik işlemler. Yukarıda açıklanan protokoller bacteriorhodopsin TR-...

Seri femtosecond kristalografisi (SFX) x-ışını serbest elektron lazerler (XFEL) oda sıcaklığında yapıları belirlemek için benzersiz özellikler yararlanan bir Yapısal Biyoloji mikrometre ölçekli kristalleri binlerce çoğu ekme tekniktir radyasyon hasarı "kırınım imha önce" ilke1,2,3.
Bir zaman çözüldü uzantısı SFX (TR-SFX) içinde XFEL üzerinden femtosecond bakliyat proteinler4,5yapısal değişiklikleri incelemek için kullanılır. Protein ilgi bir optik lazer (ya da başka bir etkinlik tetikleyici) ile sadece bir pompa-sonda kurulumunda XFEL tarafından önce vurulduğunu etkinleştirilir. Tam olarak pompa ve sonda nabız arasında gecikme kontrol ederek, hedef protein farklı eyaletlerde geçirilerek. Onbir büyüklük zamanında üzerinde yapısal değişikliklerin moleküler Filmler çeşitli protein hedefleri6,7,8,9dynamics çalışmaya yeni XFEL kaynakları güç göstermek, 10,11,12,13. Prensip olarak, yöntem dinamik spektroskopik ve statik yapı teknikleri bir, atomik çözünürlük yakınındaki protein dynamics içine bir bakış sağlayan katılır.
TR-SFX için basit sistemleri harekete geçirmek ile bir fotoğraf duyarlı bileşeni retina bacteriorhodopsin (bR)9,10, photosystem II12,13' te kromofor gibi endojen bir tetikleyici içerebilir, fotoaktif sarı protein (PYP)6,7 ters photoswitchable floresan protein11veya photolyzable karbon monoksit miyoglobin8. Hala geliştirme tekniği heyecan verici varyasyonları mix itimat ve enzimatik reaksiyonlar ya da yapısal değişiklikler16ikna etmek için kullanılan elektrik alan eğitim programları14,-15 enjekte. XFEL kaynakları sadece be elde edilebilir için birkaç yıl ve başarıları geleceğe extrapolating, yöntemi nasıl bizim anlayış açısından gerçek bir oyun değiştirici olarak potansiyel gösterir verilen bu proteinlerin işlevi.
Biyolojik örnekleri tek bir yüksek güç XFEL darbe maruz tarafından yok edilir çünkü protein kristalografisi yeni yaklaşımlar gerekliydi. Bu yordamları arasında Tekdüzen microcrystals büyük miktarda büyümeye yeteneği gelişmiş17,18,19olması gerekiyordu. Bir XFEL, veri toplamayı etkinleştirmek için bu kristaller gerekir teslim, atılan olup her XFEL darbe için yenilendi. XFELs 10-120 Hz'de kullanışlı bakliyat ateş göz önüne alındığında, örnek teslimat da sağlam ve sınırlayıcı tüketimi kristalleri tutarken hızlı, istikrarlı ve güvenilir, olmalıdır. Arasında en başarılı çözümler oda sıcaklığında kristal yüklü lipidik üçüncü aşama (LCP) sütunun pulsed röntgen ışını20akarsu bir işletmesi teslim etmek yüksek viskozite mikro-ekstrüzyon enjektör var. Rastgele odaklı kristalleri, gömülü nerede bir kırınım deseni kaydedilir bir Dedektör üzerine XFEL bakliyat dağılım x-ışınları tarafından yakalanan LCP akışında. Sık sık membran protein kristalleri17,21,22,23için henüz diğer yüksek viskozite taşıyıcı medya bir büyüme aracı olarak kullanıldığı gibi LCP bir örnek teslim orta için doğal bir seçim yapıldı. 24,25,26,27,28,29,30 ve çözünür proteinler31 de kullanıldığını enjektör içinde. SFX yüksek viskozite enjektör ile membran proteinleri13,32 G protein birleştiğinde reseptörleri (GPCRs)33,34dahil yapısı belirlenmesi sırasında başarılı olmuştur, 35,36,37, hem zaman hem de örnek etkili olurken yerli aşamalı38,39 için yeterli veri kalitesiyle. Şu anda, bu enjektörler daha düzenli olarak Oda sıcaklık ölçümleri sinkrotron kaynakları28,30,40,41 yanı sıra daha fazla sırasında için kullanılmakta olan teknik olarak TR-SFX deneyler XFELs9,10,13,42talep.
Karşılaştırılabilir TR SFX deneyler sıvı faz teslim akışı başlığı6,7,12odaklanmış gibi diğer enjektör türleri kullanılarak gerçekleştirilen, ancak, bu yöntem için pek çok protein miktarları mevcut değil gerektirir biyolojik olarak ilginç hedefleri. Viskoz ekstrüzyon bir ortalama tüketimi başına 10.000 dizin oluşturulmuş kırınım desenleri ile karşılaştırıldığında 9,35 mg protein 0,072 mg için sıvı jet kullanarak statik yapılar belirlenmesi için püskürtme (yani, 130 kat daha fazla örnek hakkında bildirilmiştir verimli)20. Yüksek viskozite enjektör sadece bu örnek verim43bazıları feda ederken uygun örnek teslimatı için TR SFX olmak gösterilmiştir. İçinde Nogly ve ark. (2018)10, örneğin, örnek tüketimi yaklaşık 1,5 olumlu nerede ortalama örnek tüketimi çok daha yüksek protein başına 10.000 74 mg ile PYP kullanarak benzer TR SFX deneyleri için karşılaştıran mg başına 10.000 dizin oluşturulmuş desen, yapıldı. Dizin oluşturulmuş desen6. Yüksek viskozite enjektörleri böylece protein mevcut miktarını sınırlayarak veya kristaller doğrudan LCP yetiştirilmektedir açık avantajları vardır.
TR-SFX için yüksek viskozite kullanarak birkaç teknik sorunları en güvenilir veri vermeye enjektörleri ele alınması gerekmektedir: akış hızı en az kritik değeri; kalmaya ihtiyacı isabet oranı veri toplama yavaş işlemez bir düzeyde muhafaza edilmelidir (örneğin, % 5'den büyük); ve örnek aşırı aksamalar teslim edilecek. İdeal olarak, bu koşullar zaten yerine kullanılabilir XFEL zamanı olabildiğince verimli bir şekilde kullanmak için uzun bir zamanlanmış TR SFX deneyin önce. Pricipally, bir yavaşlama LCP akışındaki birden fazla optik lazer nabız ve sonuç karışık etkin Birleşik Devletleri ile etkinleştirildi kristalleri problama veya umpumped malzeme ışının içinde beklenen pompalanan malzeme sondalama izin verebilir. Enjeksiyon öncesi test ek bir yararı, bir XFEL, veri toplama sırasında kapalı kalma saat başlıklarının tıkalı olmayan ekstrüzyon örnekleri, değiştirme, değiştirme için küme olarak küçültülür ve diğer bakım görevleri azaltılır olmasıdır.
Burada, örnek teslim yüksek viskozite mikro-ekstrüzyon enjektör ile TR SFX veri toplama için en iyi duruma getirmek için bir yöntem mevcut. İş yerinde bir sinkrotron beamline29 daha fazla bilgi beklenen isabet oranları ve kristal kırınım sağlamak, ancak kolaylık olması için açıklanan yöntemleri bir x-ışını kaynağına erişim güvenmeyin. Protokolümüze deneyler proton pompa bacteriorhodopsin10 retina isomerization yakalamak için en iyi duruma getirmek için geliştirilmiştir ve Ekstrüzyon ekstrüzyon izleyerek takip için kristal örnekleri hazırlama ile başlayan iki aşamada yapılmaktadır bir yüksek hızlı kamera Kurulumu kullanarak. Bir aşamasında, kristal yüklü LCP ek LCP, düşük geçiş sıcaklığı lipidler veya diğer katkı maddeleri son karışımı tıkanma veya yavaşlama'dır örnek ortamına uygun olduğundan emin olmak için ile karıştırılır. Yeni bir üç yönlü şırınga coupler karıştırma performans ve örnek homojenliği geliştirmek için geliştirilmiştir. İkinci aşama doğrudan ekstrüzyon hızı istikrar ölçmek için yüksek hızlı bir kamera tarafından kaydedilen bir ekstrüzyon testi oluşur. Video veri analizi, deneysel sonuçlar geliştirmek için örnek hazırlama protokolü için ayarlamalar yapılabilir. Bu yordamları en az değişikliklerle TR SFX veri toplama için diğer proteinler hazırlamak için uyarlanmış ve sınırlı XFEL beamtime verimli kullanmak için katkıda bulunacaktır. Sadece onların işlemi44,45 ve enjektör tabanlı seri veri toplama yöntemleri transfer synchrotrons28,30,40,41 başlayan yeni XFEL imkanları ile , önümüzdeki birkaç yıl mutlaka protein hedefleri hiç daha geniş bir yelpazesi yapısal dinamikleri heyecan verici yeni görüşler sağlamaya devam edecektir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="744">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Mosquito LCP Syringe Coupling</td>
			<td style="width:175px;">TTP labtech store</td>
			<td style="width:101px;">3072-01050</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1710 RNR, 100 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81065</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Hamilton Syringe 1750 RNR, 500 &#181;l</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td style="width:101px;">HA-81265</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Monoolein</td>
			<td style="width:175px;">Nu-Chek Prep, Inc.</td>
			<td style="width:101px;">M-239</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">7.9 MAG</td>
			<td style="width:175px;">Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td style="width:101px;">850534O</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">50% w/v PEG 2000</td>
			<td style="width:175px;">Molecular Dimensions</td>
			<td style="width:101px;">MD2-250-7</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Paraffin (liquid)</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:101px;">1.07162</td>
			<td style="width:224px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High speed camera</td>
			<td style="width:175px;">Photron</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:224px;">Photron Mini AX</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">High magnification lens</td>
			<td style="width:175px;">Navitar</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>12X Zoom Lens System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Three axis stage</td>
			<td style="width:175px;">ThorLabs</td>
			<td style="width:101px;">PT3/M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fiber light</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:101px;">OSL2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Fused silica fiber</td>
			<td style="width:175px;">Molex/Polymicro</td>
			<td style="width:101px;">TSP-505375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Lite touch ferrule</td>
			<td style="width:175px;">IDEX</td>
			<td style="width:101px;">LT-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">ASU high viscosity injector</td>
			<td style="width:175px;">Arizona State University</td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td>Purchasable from Uwe Weierstall (weier@asu.edu)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">HPLC pump</td>
			<td style="width:175px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:101px;">LC-20AD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Electronic gas regulator</td>
			<td style="width:175px;">Proportion Air</td>
			<td style="width:101px;">GP1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

improving high viscosity extrusion of microcrystals for time-resolved serial femtosecond crystallography at x-ray lasers

Yüksek viskozite mikro-ekstrüzyon enjektörleri büyük ölçüde X-ray serbest elektron lazerler (XFELs) seri femtosecond crystallographic deneyler (SFX) örnek tüketimi azaltılmıştır. Işık tahrik proton pompa bacteriorhodopsin kullanarak deneyler bir dizi daha fazla kurduk bu enjektörler kristalleri yapısal değişiklikleri gidermek zaman karar vermek seri halinde femtosecond kristalografisi (TR-SFX) için teslim etmek için tercih edilen bir seçenek olarak proteinler photoactivation sonra. Birden çok yapısal anlık görüntülerini yüksek kalite elde etmek için büyük miktarda veri toplamak ve kristalleri her pompa lazer nabız arasında boşluk sağlamak için önemlidir. Burada, biz nasıl biz bacteriorhodopsin microcrystals ekstrüzyon son TR SFX deneylerimiz Linac tutarlı ışık kaynağı (LCLS), en iyi şekilde ayrıntılı olarak tarif. Yönteminin amacı artış oranı kristallerinin yüksek yoğunluklu koruyarak ekstrüzyon istikrarlı ve sürekli bir akış için en iyi duruma getirmektir deneme veri TR SFX içinde de toplanabilir. Biz lipidik küp aşama kristalleri ile yüksek hızlı alınan ekstrüzyon istikrar tedavinin temel örnek kompozisyon ayarlayarak takip cihazı kaplin roman üç yollu kullanarak homojen dağılımı ile hazırlayarak bu hedefe ulaşmak kamera ayarları. Metodoloji diğer microcrystals akışını optimize etmek için adapte edilebilir. Belgili tanımlık tertibat yeni İsviçre ücretsiz elektron lazer tesis kullanıcıları için kullanılabilir hale gelir.

Burada açıklanan yordamları (şekil 3) için ideal başlangıç malzeme için enjektör viskoz taşıyıcı orta dahil microcrystals yüksek yoğunlukları vardır. Kristal bin Ladin'in taşıyıcı her hazırlık için yaklaşık 50 µL için yordamı çağırır. Bunlar doğrudan içinde LCP burada, örneğin (şekil 4), kullanılan veya geleneksel buharı difüzyon kurulumları içinde yetiştirilen kristalleri kullanılara...

Watch this Scientific Journal Video about Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers at JoVE.com

Improving High Viscosity Extrusion of Microcrystals for Time-resolved Serial Femtosecond Crystallography at X-ray Lasers

Bir seri femtosecond zaman çözüldü kristalografisi deney başarısı verimli örnek Teslimde bağlıdır. Burada, bacteriorhodopsin microcrystals bir yüksek viskozite mikro-ekstrüzyon enjektör üzerinden ekstrüzyon optimize etmek için iletişim kuralları açıklar. Metodoloji bir roman üç yönlü bağlaştırıcı ile örnek homojenizasyon ve görselleştirme ile yüksek hızlı bir fotoğraf makinesi yararlanır.

Microcrystals yüksek viskozite ekstrüzyon için zaman karar vermek seri halinde Femtosecond kristalografisi x-ışını lazerleri iyileştirilmesi

High-viscosity micro-extrusion injectors have dramatically reduced sample consumption in serial femtosecond crystallographic experiments (SFX) at X-ray ...

Bu protokol, zaman içinde çözülen seri kristalografik deneyler sırasında sık karşılaşılan sorunların veri kalitesinden ödün vermemelerini sağlamak için tasarlanmıştır. Bu yöntemin en büyük avantajlarından biri bireysel kristal sistemlerine adaptasyonudur. Yüksek hızlı kamera ekstrüzyon testi de bize doğrudan ekstrüzyon kararlılığını ölçmek için izin verir.İlk olarak, enjeksiyondan yaklaşık 30 dakika önce 100 mikrolitrelik bir şırıngaya 50 mikrolitre kristal yüklü monoolein bazlı LCP yükleyin. Vakum ortamına enjeksiyon için, beş mikrolitre MAG 7.9 ve beş mikrolitre sıvı parafini ikinci bir şırınganın arkasına yükleyin. Şırıngayı dikey olarak tutarak, hava kabarcıklarını şırıngadan dışarı at.Şırıngayı MAG 7.9 ve parafin ile standart bir şırınga bağlayıcısına bağlayın. Ve karışımın küçük bir hacim bağlayıcı iğne ucunda görünür kadar yavaşça piston üzerinde basarak beyit hava temizler. Numuneşin içine hava sokmamak için şırınga çiftini araba alarak şırınga çiftine bağlayın.Numuneyi çiftleyiciden birden fazla kez geçirerek lipid ve parafini karıştırın. Daha sonra, başka bir 100 mikrolitre şırınga premix LCP 20 mikrolitre yükleyin. Boş şırıngayı beyitten çıkarın ve önceden karıştırılmış LCP'yi standart bir şırınga beyiti kullanarak şırınga içeren kristale takın.Daha sonra, örnek 100 kez beyit ten geçirin. Kübik faz içine örnek getirmek için, monoolein üç mikrolitre ekleyin ve 50 kez karıştırın. Monoolein fazlalığından kaçınmak için saydam bir faz oluşana kadar bu işlemi tekrarlayın.Numune sertliği ve ekstrüzyon için bir ön test olarak, boş şırıngayı şırınga beyitinden ayırın ve şırıngayı dikey olarak tutarak, beyitten az miktarda numune alma. Ekstrüzyon numunesi dik bir silindir oluşturuyorsa, numune ekstrüzyon testi için hazırdır. Daha önceden karıştırılmış LCP ekleyerek numunenin toplam hacmini 100 mikrolitreye ayarlayın.Numune şırıngayı ve iki boş şırıngayı üç yönlü şırınga beyitine takın. Numunenin yarısını ikinci şırıngaya geçirerek ve numunenin her iki yarısını aynı anda üçüncü şırıngaya bastırarak en az 50 kez karıştırın. Kristallerin homojen dağılımını doğrulamak için karışık numuneyi içeren şırıngayı stereo mikroskop altına yerleştirin.Akış hızlarının doğru olduğundan emin olmak için bir HPLC pompasını ve tüm su hatlarını temizleyin. Daha sonra enjektörün hidrolik aşamasını temizle. Ardından, kamerayı açın ve sağlanan yazılıma bağlayın.Görsel geri bildirim için çalışan canlı bir video yla, meme ucunu çerçevenin ortasına yerleştirin ve üç eksenli sahneyle odak noktası haline getirin. Kameradaki kare hızını saniyede 1.000 kare olarak ayarlayın. Ardından, çözünürlüğü 512 piksele ayarlayın.Kare hızına göre ayarlanan pozlama süresiyle, enjektör görünene kadar aydınlatma düzeyini ayarlayın. Enjektör ucunu sola sola ortalayıp çerçevenin üst üçte birinde yer alabilmek için yeniden konumlandırın. Kamerayı zaman atlama modunda ayarlayın.Aralığı 30 saniyeye, tekrarları 40 kata ayarlayın. Tetikleyici modunu rastgele ayarlayın. Ve 1.000 kaydetmek için kare sayısını girin.Şimdi, rezervuarı test numunesinin 20 mikrolitresi ile yükleyin ve kılcal başlığı takın. Dolgulu hazneyi enjektöre takın. Daha sonra, gaz hattını nozuldaki bağlantı noktasına takın ve gaz akışını başlatın.Bunu takiben, aynı anda pompa ve kamera kaydı başlatın. Pompa basıncı beklenen bitiş saatine yakın keskin bir şekilde rampalı olana kadar ekstrüzyonu izleyin. Daha sonra, kayıt durdurmak, pompa kapatın ve kabartma vanası açarak sistem basıncı havalandırma.Bunu takiben, analiz yazılımı ile video dosyasını açın ve ölçüm araçlarını kalibre edin. Ekstrüzyonda izlenebilir bir özelliğin bulunduğu videoda bir kare bulun. Kare numarasını kaydedin.Ardından, videoyu aynı özelliğin görünür olduğu ancak önceki adımdaki konumundan hareket ettiği bir çerçeveye ilerletin. Kare numarasını kaydedin. Düz çizgi ölçüm aracını kullanarak, analiz ölçüsü ile özelliğin başlangıç ve bitiş noktasından uzaklığı ölçün.Videonun her bölümü için önceki adımları birkaç kez yineleyin. Son olarak, veri serisini çizin. Burada açıklanan işlem için ideal başlangıç malzemesi, enjektör için viskoz taşıyıcı ortama dahil edilen yüksek mikrokristal yoğunluklarıdır.Protein kristalleri proton pompalanan bakteri rodopsin üzerinde TRSFX verileri toplamak için kullanılmıştır, hangi fotoem emilimi sonra meydana gelen ultra hızlı değişiklikler ortaya. Üç yönlü bir beyit kullanılarak numune hazırlığından sonra, şırıngadaki malzemenin görsel incelemesi örnek homojenliğini gösterir. Ve mikroskop görüntüleri kristallerin yoğunluğunu doğrulayabilir.Teslimat ortamı açık ve viskoz olduğunda örnek kübik fazdadır. Bulanık karışımlar, numunenin sünger veya lamellar fazda olduğunun bir göstergesidir, ancak yüksek kristal yoğunluğu LCP'nin berraklığını gizleyebileceğinden kesin değildir. Sünger fazını belirlemek için bir alçak basınç testi, şırınga pistonluyu numuneden çekerek yapılabilir.Jet testi sırasında, örnek neredeyse sabit bir hızda hareket eden uzun sürekli bir LCP sütunu ekstrüzyon gerekir. Damlama modunda çalışan örnekler viskozitenin çok düşük olduğunu gösterir. Bir sütun oluşturan örneklerden elde edilen veriler, ekstrüzyonun deneysel parametreler tarafından dikte edilen minimum hızın üzerinde kaldığını göstermelidir.Bu protokol kullanılarak optimizasyon yapıldıktan sonra seri kristalografik veriler uzman bir tesiste toplanabilir. Bu işlevini yerine getirirken tüm protein konformasyonel değişiklikleri ortaya çıkaracaktır.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Preparing Adherent Cells for X-ray Fluorescence Imaging by Chemical Fixation

Kimyasal Fiksasyon X-ışını Floresans Görüntüleme Değme Hücreleri hazırlanması

X-ray fluorescence imaging allows us to non-destructively measure the spatial distribution and concentration of multiple elements simultaneously over ...

X-ray Powder Diffraction in Conservation Science: Towards Routine Crystal Structure Determination of Corrosion Products on Heritage Art Objects

Koruma Bilimi X-ışını Toz Kırınım: Miras Sanat Objects Korozyon Ürünleri Rutin Kristal Yapı Tayini Doğru

The crystal structure determination and refinement process of corrosion products on historic art objects using laboratory high-resolution X-ray powder ...

Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod

Bir Kalibre, Dişli-çubuk kullanarak Milimetre çözünürlükte Tortu Çekirdek Ekstrüzyon Yöntemi

Aquatic sediment core subsampling is commonly performed at cm or half-cm resolution. Depending on the sedimentation rate and depositional environment, ...

High Pressure Single Crystal Diffraction at PX^2

Yüksek Basınçlı PX de Tek Kristal Kırınımı ^ 2

In this report we describe detailed procedures for carrying out single crystal X-ray diffraction experiments with a diamond anvil cell (DAC) at the ...

Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS

HARİTALAR kullanarak x-ışını Floresans veri miktarının

The quantification of X-ray fluorescence (XRF) microscopy maps by fitting the raw spectra to a known standard is crucial for evaluating chemical ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Zaman karar vermek Photophysical karakterizasyonu üçlüsü-hasat organik bileşikler bir oksijensiz ortamı kullanarak bir ICCD kamera

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

An Experimental Protocol for Femtosecond NIR/UV - XUV Pump-Probe Experiments with Free-Electron Lasers

Bir deneysel protokol için Femtosecond NIR/UV-serbest elektron lazerler ile XUV pompa-sonda deneyler

This protocol describes key steps in performing and analyzing femtosecond pump-probe experiments that combine a femtosecond optical laser with a ...

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Microfluidic Chips for In Situ Crystal X-ray Diffraction and In Situ Dynamic Light Scattering for Serial Crystallography

Mikrosıvısal çip Situ Crystal x-ışını kırınım ve in Situ dinamik ışık saçılma seri kristalografisi için için

This protocol describes fabricating microfluidic devices with low X-ray background optimized for goniometer based fixed target serial crystallography. The ...

Essential Metal Uptake in Gram-negative Bacteria: X-ray Fluorescence, Radioisotopes, and Cell Fractionation

Ayagin Gram-negatif bakterilerde temel Metal alımı: x-ışını Floresans, Radioisotopes ve hücre ayırma

We demonstrate a scalable method for the separation of the bacterial periplasm from the cytoplasm. This method is used to purify periplasmic protein for ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

Pil ile yumuşak x-ışını soğurma spektroskopisi ve rezonans esnek olmayan x-ışını saçılması kimyada Elemental duyarlı tespiti

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...