Name: effect of anti-c-fms antibody on osteoclast formation and proliferation of osteoclast precursor in vitro
Uploaded: 2019-03-18T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Effect of Anti-c-fms Antibody on Osteoclast Formation and Proliferation of Osteoclast Precursor In Vitro at JoVE.com

هذا العمل كان تدعمها جزئيا كاكينهي JSPS منحة من "الجمعية اليابانية" "تعزيز العلوم" (رقم 16 ك 11776 إلى حاء ك، ك 17 رقم 17306 إلى ك. س.، رقم 16 ك 20637 إلى ك. ك.، رقم 16 ك 20636 إلى م. س.، رقم 18 ك 09862 م أولاً.).

وأجريت جميع الإجراءات الحيوانية ورعاية الحيوانات وفقا لجامعة توهوكو القواعد والأنظمة.
1-مورين اللكتات التشريح والمناولة
<ol><li>قبل التشريح، ملء صفيحة مع حوالي 50 مل من α-الفنزويلية تبعاً لحجم الحاوية ووضعه على الجليد. وهذا سيكون بمثابة وعاء جمع حتى اكتمال تشريح العظام جميع. ?...

<ol>
	<li>Crotti, T. N., Dharmapatni, A. A., Alias, E., Haynes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoimmunology:+Major+and+Costimulatory+Pathway+Expression+Associated+with+Chronic+Inflammatory+Induced+Bone+Loss.">Osteoimmunology: Major and Costimulatory Pathway Expression Associated with Chronic Inflammatory Induced Bone Loss.</a> Journal of Immunology Research. 2015, 281287 (2015).</li><li>Teitelbaum, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+resorption+by+osteoclasts.">Bone resorption by osteoclasts.</a> Science. 289 (5484), 1504-1508 (2000).</li><li>Azuma, Y., Kaji, K., Katogi, R., Takeshita, S., Kudo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+induces+differentiation+of+and+bone+resorption+by+osteoclasts.">Tumor necrosis factor-alpha induces differentiation of and bone resorption by osteoclasts.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (7), 4858-4864 (2000).</li><li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor+alpha+stimulates+osteoclast+differentiation+by+a+mechanism+independent+of+the+ODF/RANKL-RANK+interaction.">Tumor necrosis factor alpha stimulates osteoclast differentiation by a mechanism independent of the ODF/RANKL-RANK interaction.</a> Journal of Experimental Medicine. 191 (2), 275-286 (2000).</li><li>Kim, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast+differentiation+independent+of+the+TRANCE-RANK-TRAF6+axis.">Osteoclast differentiation independent of the TRANCE-RANK-TRAF6 axis.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (5), 589-595 (2005).</li><li>Redlich, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclasts+are+essential+for+TNF-alpha-mediated+joint+destruction.">Osteoclasts are essential for TNF-alpha-mediated joint destruction.</a> Journal of Clinical Investestigation. 110 (10), 1419-1427 (2002).</li><li>Abu-Amer, Y., Ross, F. P., Edwards, J., Teitelbaum, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-stimulated+osteoclastogenesis+is+mediated+by+tumor+necrosis+factor+via+its+P55+receptor.">Lipopolysaccharide-stimulated osteoclastogenesis is mediated by tumor necrosis factor via its P55 receptor.</a> Journal of Clinical Investestigation. 100 (6), 1557-1565 (1997).</li><li>Zha, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+contributes+to+postmenopausal+osteoporosis+by+synergistically+promoting+RANKL-induced+osteoclast+formation.">TNF-alpha contributes to postmenopausal osteoporosis by synergistically promoting RANKL-induced osteoclast formation.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 102, 369-374 (2018).</li><li>Kitaura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-CSF+mediates+TNF-induced+inflammatory+osteolysis.">M-CSF mediates TNF-induced inflammatory osteolysis.</a> Journal of Clinical Investigation. 115 (12), 3418-3427 (2005).</li><li>Kimura, K., Kitaura, H., Fujii, T., Hakami, Z. W., Takano-Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-c-Fms+antibody+inhibits+lipopolysaccharide-induced+osteoclastogenesis+in+vivo.">Anti-c-Fms antibody inhibits lipopolysaccharide-induced osteoclastogenesis in vivo.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 64 (2), 219-227 (2012).</li><li>Kimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+anti-c-Fms+antibody+inhibits+osteoclastogenesis+in+a+mouse+periodontitis+model.">An anti-c-Fms antibody inhibits osteoclastogenesis in a mouse periodontitis model.</a> Oral Diseases. 20 (3), 319-324 (2014).</li><li>Kitaura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+M-CSF+receptor+c-Fms+antibody+inhibits+mechanical+stress-induced+root+resorption+during+orthodontic+tooth+movement+in+mice.">An M-CSF receptor c-Fms antibody inhibits mechanical stress-induced root resorption during orthodontic tooth movement in mice.</a> Angle Orthodontist. 79 (5), 835-841 (2009).</li><li>Kitaura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+anti-c-Fms+antibody+inhibits+orthodontic+tooth+movement.">An anti-c-Fms antibody inhibits orthodontic tooth movement.</a> Journal of Dental Research. 87 (4), 396-400 (2008).</li><li>Bettina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-CSF+Mediates+Host+Defense+during+Bacterial+Pneumonia+by+Promoting+the+Survival+of+Lung+and+Liver+Mononuclear+Phagocytes.">M-CSF Mediates Host Defense during Bacterial Pneumonia by Promoting the Survival of Lung and Liver Mononuclear Phagocytes.</a> Journal of Immunology. 196 (12), 5047-5055 (2016).</li><li>Dougall, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RANK+is+essential+for+osteoclast+and+lymph+node+development.">RANK is essential for osteoclast and lymph node development.</a> Genes &amp; Develpoment. 13 (18), 2412-2424 (1999).</li><li>Wiktor-Jedrzejczak, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+absence+of+colony-stimulating+factor+1+in+the+macrophage-deficient+osteopetrotic+(op/op)+mouse.">Total absence of colony-stimulating factor 1 in the macrophage-deficient osteopetrotic (op/op) mouse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 87 (12), 4828-4832 (1990).</li><li>Yang, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+macrophage+colony-stimulating+factor+in+ankylosing+spondylitis+and+rheumatoid+arthritis.">Increased expression of macrophage colony-stimulating factor in ankylosing spondylitis and rheumatoid arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 65 (12), 1671-1672 (2006).</li><li>Takei, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+macrophage-colony+stimulating+factor+levels+in+synovial+fluid+of+loose+artificial+hip+joints.">High macrophage-colony stimulating factor levels in synovial fluid of loose artificial hip joints.</a> The Journal of Rheumatology. 27 (4), 894-899 (2000).</li></ol>

في هذه الدراسة، ونحن التحقيق في تأثير الأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة على تشكيل المستحثة رانكل اوستيوكلاست، اوستيوكلاست تنف α-المستحثة بتشكيل وانتشار السلائف اوستيوكلاست CSF المستحثة م. وجدنا أن المبلغ الفعلي للأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة لتثبيط أوستيوكلاستوجينيسيس...

الآكلة خلايا متخصصة للغاية، وأنها تفرق من الخلايا الجذعية المكونة للدم من خلال دمج متعددة اوستيوكلاست السلائف. أنها ضرورية لإعادة عرض العظام صحية والمساهمة في ارتشاف العظم باثولوجي المرتبطة بأمراض عظمية الالتهابات مثل التهاب المفاصل وأمراض اللثة1.
الدالة أوستيوكلاستوجينيسيس واوستيوكلاست هي توسط عاملين أساسيين؛ مستعمرة بلعم حفز المنشط مستقبلات للعامل النووي كابا-ب يجند (رانكل) وعامل (م-CSF). M-CSF ورانكل هامان ل التمايز اوستيوكلاست2. وثمة عامل آخر هو ما ثبت للحث على تشكيل اوستيوكلاست من نخاع العظم الضامة في المختبر هو عامل نخر الورم ألفا (تنف-α)3،،من45. تنف-α تشكيل اوستيوكلاست وساطة قد ثبت أن تكون حاسمة بالنسبة لعظام النهايات في أمراض العظام المدمرة مثل التهاب المفاصل6وامراض اللثة7و8من هشاشة العظام بعد سن إلياس.
ج-fms مستقبلات غشاء للخدمات القطرية م ويتوسط العمل به. دور ج-fms توثيقاً جيدا في الأدب كما أنها بينت أن إدارة جسم مضاد ضد ج-fms (الأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة) تماما اعتقل أوستيوكلاستوجينيسيس في نموذج لالتهاب المفاصل كذلك في تنف-α التي يسببها تقرحات العظام بينما وكان أوستيوكلاستوجينيسيس بعيدة من المشترك ملتهبة قوية لا تزال9. الإدارة للأجسام المضادة-ج-fms تثبيط ارتشاف العظم وتشكيل اوستيوكلاست الناجمة عن lipopolysaccharide (LPS) في الماوس كالفاريا10 كذلك كما هو الحال في التهاب اللثة الناجم عن لبس نموذج11. وعلاوة على ذلك، أعاقت الأجسام المضادة-ج-fms ارتشاف الجذر الميكانيكية الناجمة عن الإجهاد أثناء حركة الأسنان تقويم الأسنان12، فضلا عن حركة الأسنان تقويم الأسنان وارتشاف العظام المرتبطة بتقويم الأسنان حركة13.
M-CSF أبلغ إلى الوظائف الأخرى التي تعتبر أساسية للاستجابة المناعية المضيف. نظراً لغياب م-CSF في الفئران op/op مع الالتهاب الرئوي البكتيري يؤدي إلى زيادة عبء البكتيرية ونشر البكتيريا للكبد مع نخر كبدي14. ولذلك، المهم M-CSF للاستجابة المناعية في الحماية من العدوى.
وتوضح هذه الدراسة بفعل تأثير الأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة على م-CSF ورانكل أو تنف-α تشكيل اوستيوكلاست في المختبر والخدمات القطرية م التي يسببها انتشار السلائف اوستيوكلاست. هذا البروتوكول يوضح عزل خلايا نخاع العظام مورين من العظام الطويلة، والخطوات لتوليد الضامة نخاع العظام (بم) التي تعتبر كسلائف اوستيوكلاست والحث على التفريق بين بم في الآكلة مولتينوكلير اثنين الأساليب؛ أما رانكل أو تنف-α. ويقارن البروتوكول أيضا إلقاء القبض على أوستيوكلاستوجينيسيس في كلتا الطريقتين باستخدام الأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة.
العملية التي انتزعت نخاع العظام واستخدامها لاحقاً لتوليد السلائف اوستيوكلاست يعول عليها في إنتاج كميات كبيرة من الثقافات اوستيوكلاست الصرفة التي يمكن استخدامها في العديد من التطبيقات المصب مثل اختبار المخدرات. استخدام رانكل أو تنف-α للحث على أوستيوكلاستوجينيسيس في هذا البروتوكول يميز أوستيوكلاستوجينيسيس كعملية الفسيولوجية (رانكل) من أوستيوكلاستوجينيسيس كعملية باثولوجي (تنف-α)، التي توفر بدورها اثنين من الإجراءات البديلة لتوجيه قرار منها واحد متفوقة من حيث المواد الكاشفة لاستخدامها في تطبيقات المتلقين للمعلومات. ويوفر هذا البروتوكول أيضا أسلوب الذي يمكن أن نحدد تركيز مناسب للأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة التي يمكن استخدامها بأمان للدراسات المعنية بارتشاف العظام وأمراض عظمية في وقت لاحق.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-c-Fms antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>AFS98, a rat monoclonal, antimurine, c-Fms antibody (IgG2a)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNF-&#945;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Recombinant murine TNF-&#945; prepared in our laboratory. TNF-&#945; cDNA fragment cloned by RT-PCR and cloned into a pGEX-6P-I (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) to generate a GST-fusion protein. GST-TNF-&#945; was expressed in Escherichia coli BL21 cells cells (Stratagene, La Jolla, CA). The cells were lysed under nondenaturing conditions and GST-TNF-&#945; was purified over a glutathione-Sepharose column. GST was cleaved off by PreScission Protease (Amersham Biosciences) by manufacturer&#8217;s directions and was removed by a glutathione-Sepharose column.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>PEPROTECH</td>
			<td>315-11</td>
			<td>Recombinant Murine sRANK Ligand, Source: E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Recombinant human M-CSF. 1/10 vol of CMG14&#8211;12 cell line culture supernatant at 5X106&#160;cells in a 10-cm suspension culture dish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Wako</td>
			<td></td>
			<td>with L-Glutamine and phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>s1820-500</td>
			<td>Fetal Bovine Serum French Origin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>100 mm x 20 mm style dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Thermofischer Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Nun clon Delta surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting kit-8</td>
			<td>Dojindo, Kumamoto, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Sunrise REMOTE; Tekan Japan, Kawasaki, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>40 &#956;m Nylon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>50 mL CentriStar cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Wako</td>
			<td></td>
			<td>Polyoxyethylene (10) Octyphenyl ether</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

effect of anti-c-fms antibody on osteoclast formation and proliferation of osteoclast precursor in vitro

يعيد البناء العظام عملية معقدة، وأنها تنطوي على فترات للترسيب وارتشاف. ارتشاف العظام هو عملية بموجبها العظام هو موزعة حسب الآكلة في الاستجابة للمحفزات المختلفة. اوستيوكلاست السلائف تفرق في الآكلة مولتينوكلير ردا على مستعمرة بلعم حفز المنشط مستقبلات ليجند العامل النووي كابا-ب (رانكل) وعامل (م-CSF). تحت ظروف مرضية، الشخصية سيتوكين مختلفة وتنطوي على مزيج السيتوكينات الالتهابية. ألفا عامل نخر الورم (تنف-α) واحد من السيتوكينات الأكثر أهمية كما أنها وجدت بكميات كبيرة في المناطق المعنية مع عظام النهايات التحريضية. والغرض من هذا البروتوكول هو توفير أسلوب الذي يتم عزل مورين نخاع العظام لتوليد الآكلة عن طريق الاستقراء مع الخدمات القطرية م وأما رانكل أو تنف-α التي سوف تكون منعت في وقت لاحق بزيادة جرعة من الأضداد المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة، مستقبلات ل M-CSF. وتبرز هذه التجربة القيمة العلاجية للأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة في أمراض التهاب العظام ارتشاف.

والغرض من هذا البروتوكول هو تقييم تأثير الأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة على تشكيل اوستيوكلاست حضور رانكل أو تنف-α، وتحديد أثر م-CSF على انتشار السلائف اوستيوكلاست. وقد قدمنا في هذا البروتوكول، عملية موثوقة التي تتولد كميات كبيرة من الثقافات اوستيوكلاست نقية. لقد...

Watch this Scientific Journal Video about Effect of Anti-c-fms Antibody on Osteoclast Formation and Proliferation of Osteoclast Precursor In Vitro at JoVE.com

Effect of Anti-c-fms Antibody on Osteoclast Formation and Proliferation of Osteoclast Precursor In Vitro

ويشمل هذا البروتوكول تشريح العظام الطويلة موريني والعزلة نخاع العظام، توليد الضامة نخاع العظام وإنتاج الآكلة مستعمرة بلعم حفز المنشط مستقبلات ليجند العامل النووي كابا-ب (رانكل) وعامل (م-CSF) باستخدام أو ألفا عامل نخر الورم (تنف-α) واعتقالهم من قبل الأضداد المضادة-ج-fms، مستقبلات M-CSF.

تأثير الأجسام المضادة-ج-المكتب الاتحادي للهجرة على تشكيل اوستيوكلاست وانتشار اوستيوكلاست السلائف في المختبر

Bone remodeling is a complex process and it involves periods of deposition and resorption. Bone resorption is a process by which bone is broken down by ...

تسلط هذه التجربة الضوء على القيمة العلاجية للأجسام المضادة المضادة لمضادات الـ C-fms في أمراض اضطراب العظام الالتهابي، مثل التهاب المفاصل الروماتويدي والتهاب اللثة. العملية التي يتم من خلالها استخراج نخاع العظم واستخدامها لتوليد السلائف العظمية ، تسفر عن كميات كبيرة من العظام النقية ، والتي يمكن استخدامها في تطبيقات متعددة المصب. يوفر هذا البروتوكول طريقتين بديلتين لنشأة العظام، إما باستخدام رانكل ليجند أو TNF ألفا.بالإضافة إلى ذلك، يوفر هذا الأسلوب نظرة ثاقبة تأثير الأجسام المضادة المضادة-c-fms على تكوين العظام. عرض مرئي لهذا الإجراء يطلع الباحث على عملية تشريح و الحصول على خلايا نخاع العظام بكميات كبيرة. لبدء ملء لوحة من شأنها أن تكون بمثابة حاوية جمع مع ما يقرب من 50 ملليلتر من ألفا MEM، اعتمادا على حجم الحاوية، ووضعها على الجليد.استخدام دبابيس لاختراق من خلال النخيل والقدمين من الماوس القتل الرحيم لإصلاحه في موقف supine، ورذاذ جيدا مع الإيثانول 70٪. استخدم مقصًا جراحيًا معقمة وملاقطًا لإجراء شق جلدي على مستوى الورك وتمديده إلى القدمين ، مما يعرض العضلات. تحديد موقع وقطع وتر ربط العضلات رباعية.قشر العضلات بعيدا وقطع على مستوى الورك. ثم حدد مكان وتر ربط عضلة أوتار الركبة إلى العظام. قشر بعيدا العضلات تعريض العظام، وتحرير اوتار الركبة من تعلقها، والتأكد من عدم قطع في العظام.ضع المقص بين رأس عظم الفخذ ومساحة المفصل. قطع في ذلك تحرير عظم الفخذ، ولكن الحفاظ على العظام سليمة، والتي سوف تمكن مفرزة من العظام دون خطر التعرض لنخاع العظام. قطع العضلات تعلق على الساق بطريقة مماثلة.ثم قطع الساق خالية من تعلقها في مفصل الكاحل، مع الحفاظ على العظام سليمة لتجنب التلوث. استخدام شفرات مقص ومناديل مختبر لكشط أي الأنسجة الرخوة المتبقية من عظم الفخذ والساق ووضعها في لوحة معدة مع ألفا MEM وضعت على الجليد. وينبغي أن يتم تشريح بعناية للحد من التلوث.هذا هو السبب في إزالة الأنسجة الرخوة الشاملة وتوطين العظام حاسمة. املأ حقنة إبرة قياس 30 مع ألفا ميوم. افصل الساق وعظم الفخذ بعيدًا عن مفصل الركبة ، وقطع نهايات العظم الطويل من كلا الجانبين باستخدام المقص.استخدام ملاقط لعقد العظام من رمح. أدخل الإبرة في مساحة النخاع إلى العظم واغسل محتوى النخاع ببطء في طبق ثقافة ستة سنتيمترات وكرره لجميع العظام. سوف تتحول إلى اللون الأبيض العظام، مما يدل على استخراج جميع محتوى نخاع العظام.استخدام 40 ميكرومتر مصفاة خلية النايلون للضغط على استخراج نخاع العظم في أنبوب جهاز طرد مركزي مخروطي 50 ملليلتر. جهاز طرد مركزي الأنبوب في 300 مرة G لمدة خمس دقائق. تجاهل المُندفع.لغسل، إضافة خمسة ملليلتر من ألفا MEM إلى بيليه. Pipette الخلايا لفصل لهم، الطرد المركزي، وتكرار غسل ما مجموعه مرتين. بعد عد هذه الخلايا المعزولة، كما هو موضح في المخطوطة، بذور 10 ملايين خلية لكل 10 ملليلترات، في طبق ثقافة 10 سنتيمترات، وإضافة M-CSF إلى الخلايا.احتضان الثقافة في 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاثة أيام. إزالة المتوسطة بعد ثلاثة أيام، وغسل الخلايا مرتين بقوة مع 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني لإزالة الخلايا غير المُخلّصة. إضافة خمسة ملليلتر من درجة حرارة الغرفة 0.02٪ التربسين-EDTA وBBS، واحتضان في 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة خمس دقائق.دقيق بدقة الخلايا لفصل لهم. مراقبة الثقافة تحت المجهر للتأكد من أن الخلايا قد تم فصلها وتظهر مدورة وطفوة في وسائل الإعلام. عندما يتم فصل الخلايا، إلغاء تنشيط التفاعل عن طريق إضافة خمسة ملليلترات من MEM ألفا.جمع الخلايا في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر والطرد المركزي في 300 مرة G لمدة خمس دقائق. بعد التخلص من المابير، اغسل بخمسة ملليلترات من ألفا ميوم، والطرد المركزي مرة أخرى عند 300 مرة G لمدة خمس دقائق. إعادة تعليق بيليه في 10 ملليلتر من ألفا MEM.بذور 1 مليون خلية لكل 10 ملليلتر في طبق ثقافة 10 سنتيمترا، وإضافة M-CSF. احتضان الثقافة في 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاثة أيام. حصاد الخلايا المرفقة، والتي تمثل BMMs السلائف العظمية بعد ثلاثة أيام، كما فعلت سابقا خلال توليد من BMMs.بذور BMMs في 50، 000 خلية لكل 200 لتر ميكرو من ألفا MEM في لوحة 96 جيدا في بئر. إلى كل بئر، إضافة المحفزات المطلوبة. ثم يضاف M-CSF لتركيز نهائي من 100 نانوغرام لكل ملليلتر.إضافة المضادة-c-fms الأجسام المضادة لكل بئر. احتضان لوحة في 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أربعة أيام، في حين تغيير وسائل الإعلام كل يومين لمدة أربعة أيام. ثم المضي قدما في تلطيخ والملايس، كما هو موضح في المخطوطة.تم تقييم تكوين العظام في M-CSF وCL الثقافة المعالجة، مع الأجسام المضادة C-fms. مع 101،000 نانوغرام لكل ملليلتر المضادة لC-FMS الأجسام المضادة، لوحظ انخفاض كبير في عدد من العظام مقارنة مع التحكم. وحيث أنه، مع واحد من كل 10 نانوغرام لكل ملليلتر مضاد C-fms، لم يكن هناك انخفاض كبير.ثم، تم تقييم تشكيل العظام في M-CSF و TNF ألفا الثقافة المعالجة، مع المضادة-c-fms الأجسام المضادة. مع 10، 100، 1،000 نانوغرام لكل ملليلتر المضادة ل-c-fms، لوحظ انخفاض كبير في عدد من العظام مقارنة مع السيطرة، مع عدم وجود انخفاض كبير في نانوغرام واحد لكل ملليلتر. وثقافة M-CSF مع 1, 10, 100 نانوغرام لكل ملليلتر المضادة للجسم المضاد C-fms, لم يكن هناك انخفاض كبير في عدد السلائف العظمية مقارنة مع السيطرة.ومع ذلك، عند 000 1 نانوغرام لكل ملليلتر، كان هناك انخفاض كبير في عدد السلائف العظمية، مما يشير إلى أن هناك حاجة إلى تركيز يصل إلى 000 1 نانوغرام لكل ملليلتر لمنع انتشار السلائف العظمية بشكل كبير. تأكد من تحرير السندات مع الحفاظ على العظام سليمة، والتي سوف تقلل من فرصة للتلوث.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

تشكيل بيوفيلم في المختبر في غرفة الشرائح 8 جيد

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Measurement of Antibody Effects on Cellular Function of Isolated Cardiomyocytes

قياس تأثيرات على الأجسام المضادة من وظيفة الخلوية Cardiomyocytes متفرقة

Dilated cardiomyopathy  (DCM) is one of the main causes for heart failure in younger adults1.  Although genetic disposition and exposition to toxic ...

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

وتأثير متناغم من الضوء المرئي والجنتاميسين على<em&gt; Pseudomona الزنجارية</em&gt; الكائنات الدقيقة

Recently there were several publications on the  bactericidal effect of visible light, most of them claiming that blue part of  the spectrum (400 nm-500 ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

التحقيق في آثار البروبيوتيك على المكورات الرئوية الاستعمار باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; الالتزام الفحص

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

طرق للكشف الكمي للجسم التي يسببها تكملة التنشيط على خلايا الدم الحمراء.

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

Macrophage Cholesterol Depletion and Its Effect on the Phagocytosis of Cryptococcus neoformans

بلعم الكولسترول استنفاد وتأثيره على البلعمة من<em&gt; المستخفية المورمة</em

Cryptococcosis is a life-threatening infection caused by pathogenic fungi of the genus Cryptococcus. Infection occurs upon inhalation of spores, which are ...

Generation of Lymphocytic Microparticles and Detection of their Proapoptotic Effect on Airway Epithelial Cells

جيل من الليمفاوي المجهرية الدقيقة وكشف لهم تأثير Proapoptotic على الخلايا الظهارية مجرى الهواء

Interest in the biological roles of cell membrane&#8211;derived vesicles in cell&#8211;cell communication has increased in recent years. Microparticles ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

عالية الإنتاجية قياس خارج الخلية DNA الإصدار والكمي NET تشكيل في العدلات الإنسان<em&gt; في المختبر</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

فك رموز والتصوير إمراض وحبال من<em&gt; المتفطرة خراج</em&gt; في الزرد الأجنة

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

زيكا الفيروسات نظام المعدية خلية الثقافة و<em&gt; في المختبر</em&gt; وقائية تأثير الانترفيرونات

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...