Name: behavioral approaches to studying innate stress in zebrafish
Uploaded: 2019-05-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish at JoVE.com

Bu çalışma, Jüpiter yaşam bilimi girişimi 'nden Florida Atlantic University 'de ERD ve ACK 'e fon tarafından destekleniyordu. Bu çalışma Ayrıca hibe R21NS105071 (ACK ve ERD) ve R15MH118625 (ERD) Ulusal Sağlık Enstitüleri 'nden verilir tarafından desteklenmektedir.

Protokol, kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi Florida Atlantik Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. hazırlık
<ol><li>Davranış etütler gerçekleştirmek için yalıtılmış bir oda belirleyin veya bir odanın bir bölümünü kapatmak için yalıtın. Not: Oda bozulmamış olmalıdır ve balık normal davranışını kesintiye kaçınmak için düşük trafik var.</li>
	<li>Aşağıdaki malzeme ve ekipman davranışsal odaya taşıyın: (i) bir kamera ve objektif...

Zebrafish, yeni bir tankta sağlam bir stres tepkisi sergiler Burada, Yetişkin zebrafish stres yanıtlarını incelemek için basit bir davranışsal yaklaşım tarif, ve farmakoloji kullanarak stres basit bir ölçü olarak yaklaşımı doğrulamak.
Yeni tank testi, zebra balığı ve diğer balık türlerinde doğuştan gelen stresin incelenmesi için yaygın olarak kullanılan bir testtir12,14,<sup class="xre...

Stres tepkiler olası zararlı veya olumsuz uyaranlara kaynaklanan davranış ve fizyolojik durumları değiştirilir. Stres tepkiler Hayvan Krallığı boyunca temin edilir ve bir organizmanın hayatta kalması için önemlidir1. Yıllar süren araştırmalar, stres devletlerinin temelindeki genetik ve nöronal mekanizmalar hakkında bilgilerimizi büyük ölçüde genişletmiştir. Bugün, amigdala ve striatum2gibi beynin alanları ve kortikotropin serbest hormon (CRH) gibi genetik faktörler ve glukokortikoid (gr) ve mineralokortikoid reseptörleri ( Bay) kapsamlı3,4,5,6okudu. Bu kritik bulgulara rağmen, genetik ve nöronal stresin düzenlenmesi hakkında pek bilinmemektedir. Bu nedenle, birçok stres ile ilgili bozukluklar terapötik eksikliği muzdarip.
Genetiği değiştirilebilen model organizmalar, davranışların genetik ve nöronal kontrolünün çalışmasında yararlı bir araç sağlar. Balık modelleri, özellikle, son derece güçlüdür: onlar kısa nesil zaman ile küçük organizmalar, bir laboratuar ortamında kullanımı facile, onların genomları kolayca değiştirilebilir, ve, bir omurgası olarak, onlar sadece genetik paylaşmak, aynı zamanda nöroanatomik memeli meslektaşları ile Homoloji7,8. Stresi ölçmek için standart testler, genetik mutasyonlar içeren zebrafit hatları ile eşleştirilebilir veya hassas nöronal alt setlerin manipülasyonunun mümkün olduğu ve tek genlerin veya tanımlanmış nöronların etkileri hızla ve verimli bir şekilde değerlendirilebilir.
Davranışsal olarak, stres yanıtları, hiper-aktivite veya uzun süreli (' donma ')9, azaltılmış keşif10, hızlı nefes, azaltılmış gıda alımı11dönemleri olarak balık karakterize edilebilir ve bir yer-bir tank alt için tercih12. Örneğin, tanıdık olmayan bir tank içine yerleştirildiğinde, Yetişkin zebra balığı ve diğer küçük balık modelleri tankın alt yarısı için bir başlangıç tercihi gösterir, henüz, zamanla, Balık yakın eşit frekans12ile üst ve alt yarısı keşfetmeye başlar. Tedavi yetişkinlerin anksiyete neden balık hemen üst yarım10keşfetmek için bilinen ilaçlar ile,13. Bunun tersi olarak, endişeyi artıran ilaçlar, balık tankının alt yarısında güçlü bir tercih göstermesine neden olur12,14,15. Böylece, düşük keşif ve tank alt yarısında tercih stres basit ve güvenilir göstergeleri vardır.
Çoğu omurga gibi, balık stres tepkiler Hipotalamik-hipofiz-inter-renal eksen aktivasyonu ile tahrik edilir (HPI; memelilerde Hipotalamik-hipofiz-adrenal [hPa] eksenine benzer)14,16. Hipotalamik nöronlar hormon kortikotropin-serbest hormon ifade (CRH) hipofiz için sinyal, hangi sırayla serbest adrenokortikotropik hormon serbest (ACTH). ACTH o zaman inter-böbrek bezi üretmek ve salgıya kortizol, hangi aşağı hedefleri16, bunlardan biri CRHüreten hipotalamik nöronların negatif geribildirim olan bir dizi vardır sinyalleri3,17, 18,19.
Burada, doğuştan gelen stresin davranışsal önlemlerini değerlendirmek için bir yöntem tarif ediyoruz. Davranış için, biz detay protokolleri yeni tank dalış testi12,14kullanarak. Daha sonra, bir örnek olarak, bilinen bir anksiyolitik ilaç, Buspirone, stres davranışsal önlemleri azaltır göstermektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1043px;" width="1042">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:217px;">Camera</td>
			<td style="width:264px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;">We use Point Grey Grasshopper3 USB camera with lens from Edmund Optics.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:217px;">Infrared filter</td>
			<td style="width:264px;">Edmund Optics</td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:217px;">Video Acquisition Program</td>
			<td style="width:264px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;">Use programs such as Virtualdub or FlyCapture because the acquisition framerate can be set.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:217px;">Infrared LED lights</td>
			<td style="width:264px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:217px;">Assay tank</td>
			<td style="width:264px;">Aquaneering</td>
			<td style="width:181px;">Part number ZT180</td>
			<td style="width:380px;">Size: M3 1.8 liter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:217px;">Stand and clamp, or standard tripod for camera</td>
			<td style="width:264px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:217px;">250mL beaker</td>
			<td style="width:264px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:217px;">Tracking software</td>
			<td style="width:264px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:380px;">We use Ethovision XT 13 from Noldus Information Technology</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:217px;">Buspirone chloride</td>
			<td style="width:264px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:181px;">B7148</td>
			<td style="width:380px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:217px;">Randomized trial generator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We use the RANDBETWEEN function in Microsoft Excel</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

behavioral approaches to studying innate stress in zebrafish

Stresli uyaranlara uygun şekilde yanıt vermek, bir organizmanın hayatta kalması için önemlidir. Kapsamlı araştırma stres ile ilgili hastalıklar ve psikiyatrik bozukluklar geniş bir spektrumunda yapılmış, henüz daha iyi terapötik geliştirmek için stres genetik ve nöronal düzenleme içine daha fazla çalışmalar hala gereklidir. Zebra balığı stres nöral temelleri araştırmak için güçlü bir genetik model sağlar, orada mutant ve transgenik hatları büyük bir koleksiyon var gibi. Ayrıca, farmakoloji kolayca zebrafish için uygulanabilir, çoğu ilaç doğrudan suya eklenebilir gibi. Biz zebrafish doğuştan stres tepkiler çalışması için bir yöntem olarak ' yeni tank testi ' kullanımı burada tarif ve nasıl potansiyel anksiyolitik ilaçlar tahlil kullanılarak doğrulanabilir gösterir. Yöntem kolayca genetik mutasyonlar içeren zebra balığı hatları ile birleşebilir, ya da hassas nöral devreleri manipüle etmek için transgenik yaklaşımlar kullanılır. Tahlil de diğer balık modellerinde kullanılabilir. Birlikte, açıklanan protokol diğer laboratuvarlara bu basit tahlil kabulü kolaylaştırmak gerekir.

Zebra balığı 'te stres incelenmesi Vahşi tip zebrafish zaman içinde stres davranışını incelemek için, biz yeni tank testinde AB gerinim24 yetişkin balık test. AB yetişkinleri, yukarıda açıklandığı gibi protokole tabi tutulmuştur. Kısaca, Balık davranış odasında bir tankta 1-h iklimlendirme dönemi verildi. Bir birey 10 dakika boyunca bir kabı yerleştirilir ve daha sonra yavaşça taze sistem suyu ile dolu bir tanıdık olmayan...

Watch this Scientific Journal Video about Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish at JoVE.com

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Bu yazıda yetişkin zebrafish stres davranışsal ölçmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, stresli bir durumda, zebra balığı bir tankın alt yarısını tercih ettiği doğuştan gelen eğilimin avantajlarından yararlanır. Biz de Farmakoloji ile tahlil bağlantı için yöntemleri tarif.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Yeni tank tsay Zebrafish güçlü genetik araçları ile birleştirecek beynin stres modüle nasıl ve nasıl sinir devreleri disregulated olabilir incelemek için bir yöntem sunuyor. Genetik ve nöronal sinyal yolları zebra balığı ve memeliler arasında son derece korunmuştur ve bu teknik stres tepkisinin altında yatan mekanizmaları daha iyi anlamamıza yardımcı olabilir. Yöntem Zebrafish özgü değildir ve Meksika kör mağara balığı ile kullanılan ve bu nedenle potansiyel olarak diğer balık türlerine genişletilebilir.Deneme çalışması, başarılı bir izleme elde etmek için hayvanın arka plana karşı uygun aydınlatma ve karşıtlığını belirlemek için yararlı olabilir. Tsay nadiren kullanılır, ancak ilgili bir süreç olabilir. Adımları görselleştirmek, diğer araştırmacıların yordamı başarıyla yürütmelerine yardımcı olur.Laboratuvarda doktora sonrası doktora yapan Jacqueline Chin ve lisans öğrencisi Lydia Albert bu prosedürü sergileyecekler. 250 mililitrelik bir kabı ve en az iki tutarak tankı balık sistemi suyuyla doldurarak başlayın. Testsabahı, en az bir saat boyunca alışmak üzere davranış odasına tüm balık transfer etmeden önce bireysel tutma tankları içine her deneysel durum için en az 10 yetişkin Zebrafish aktarın.Tankları, hayvanların durumu veya genotipinin deneyciye göre kör olduğunu etiketlayın ve tek bir yetişkini önceden doldurulmuş kabın içine nazikçe yerleştirmek için bir ağ kullanın. Yetişkin balık yavaşça deneysel roman tankı içine beher gelen su ve balık dökme den önce 10 dakika boyunca kabın içinde alışmak için izin verin. Balık tanka girer girer gelmez, kamera kaydına başlayın ve balıklara ek bir sıkıntı oluşmasını önlemek için kurulumdan uzaklaşın.Kayıt bittiğinde, bireyi yeni tanktan çıkarın ve balığı yeni bir tanka yerleştirin. Ilgi belirli ilaçların etkilerini değerlendirmek için, sistem su 250 mililitre beaers bir çalışma konsantrasyonu için ilaç seyreltmek. Sadece kontrol olarak sistem suyu olan bir kabı kullanmak.Test edenin post-analize kadar tedavi koşullarına kör olduğundan emin olmak için ilacın ve kontrol behemlerinin kimliklerini maskeleyin ve temel davranışsal stres yanıtı elde etmek için gösterildiği gibi yeni bir tank testi yapın. Temel kaydın sonunda, balığı sadece tatlı sistem suyu içeren bir yıkama kabına aktarmadan önce balığı 10 dakika lığına test beherlerinden birine aktarmak için bir ağ kullanın. Özellikle çeşitli ilaç tedavileri söz konusu olduğunda, kontrol balıklarının kazara dozlanmasını önlemek için her bir tedavi kabı için belirlenen ayrı ağlar kullanmak önemlidir.10 dakika sonra, ikinci bir roman tank testi için yeni bir roman tankı içine balık yerleştirin. Testin sonunda yetişkin Zebrafish'i yeni bir tutma tankına aktarın ve deneysel ilacın çapraz kontaminasyonunu önlemek için bir sonraki adım için ikinci yeni tanktaki sistem suyunu taze sistem suyuyla değiştirin. Tüm denemelerin sonunda, balık tesisine bireyleri geri dönün.Burada 10 dakikalık yeni tank testinin ilk ve son dakikasında tek bir Zebrabalığının lokomotor aktivitesi gösterilmiştir. Tanka ilk girdiğinde, balıklar genellikle zamanın çoğunu yeni tankın dibinde geçirirler. Ancak zamanla, yetişkin balıktankın üst harcanan zaman miktarında kademeli bir artış göstermektedir.Gerçekten de, ilk dakika boyunca tankın üst kısmında harcanan toplam süre, yeni tank testinin son dakikasına göre çok daha kısadır. Buna karşılık, ilk ve son dakika arasında kat edilen toplam mesafe önemli bir fark ortaya koymaktadır. Bu temsili deneyde, yetişkin Zebrafish lokomotor yollarının analizi, tek başına araca maruz kalan yetişkin grupları için tedavi öncesi ve sonrası Zebrabalığı yüzme aktivitesi arasında çok az fark ortaya koymuştur.Buna karşılık, anksiyolitik bir ilaca maruz kalan yetişkinler, ilaca maruz kalmadan önce aynı balığın lokomotor yollarına kıyasla tankın üst kısmında büyük miktarda zaman harcamış. Bu farklılıklar genel olarak daha az hareket ten kaynaklanmadı, çünkü herhangi bir grup için seyahat mesafesi önemli bir fark ölçülmedi. Davranışsal ritimler sirkadiyen süreçlerden etkilendiği için, her deney için günün aynı saatinde farklı günlerde gerçekleştirilen deneysel kopyaları gerçekleştirdiğinden emin olun.Açık alan testi veya diğer fizyolojik stres ölçümleri gibi ek davranışsal tahliller, yeni tank dalış testinden elde edilen sonuçları daha da doğrulamak için yapılabilir. Bu yöntem stres, korku ve anksiyete ile ilgili soruları ele almak için yüksek bir iş tamtarı kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Behavior

The Resident-intruder Paradigm: A Standardized Test for Aggression, Violence and Social Stress

Resident-saldırgan Paradigma: Saldırganlık, Şiddet ve Sosyal Stres için Standart Test

This video publication explains in detail the experimental protocol of the resident-intruder paradigm in rats. This test is a standardized method to ...

The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

Kauçuk El Illusion Paradigma bir Amaç Davranış Tedbir Alınması Aracı Olarak Crossmodal Congruency Görev

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Usulü Sıçanlar Pavlovyan klimalı Alkol arayan Davranış Bağlam kaynaklı Yenileme İnceleyecek

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Asymmetric Walkway: A Novel Behavioral Assay for Studying Asymmetric Locomotion

Asimetrik Yürüme Yolu: Asimetrik Locomotion incelenmesi için Yeni Bir Davranış Testi

Behavioral assays are commonly used for the assessment of sensorimotor impairment in the central nervous system (CNS). The most sophisticated methods for ...

A Mouse Model of Subchronic and Mild Social Defeat Stress for Understanding Stress-induced Behavioral and Physiological Deficits

Stres kaynaklı Davranış ve Fizyolojik Açıkları Anlamak Subkronik ve Hafif Sosyal Yenilgi Stres Fare Modeli

Stressful life events often increase the incidence of depression in humans. To study the mechanisms of depression, the development of animal models of ...

An Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Instigating Depressive Symptoms, Behavioral Changes and Negative Health Outcomes in Rodents

Tahrik Depresif Belirtiler, Davranış Değişiklikleri ve Kemirgenler Negatif Sağlık Kazanımları için Öngörülemeyen Kronik Hafif Stres Protokolü

Chronic, unresolved stress is a major risk factor for the development of clinical depression. While many preclinical models of stress-induced depression ...

Behavioral Disturbances: An Innovative Approach to Monitor the Modulatory Effects of a Nutraceutical Diet

Davranış bozuklukları: Bir Nutraceutical Diyet düzenleyici etkileri izlemek için Yenilikçi Bir Yaklaşım

In dogs, diets are often used to modulate behavioral disturbances related to chronic anxiety and stress caused by intense and restless activity. However, ...

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

Anhedonia farelerde Inducing için öngörülemeyen kronik hafif stres Protokolü

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

Stres gelişmiş korku öğrenme, travma sonrası stres bozukluğu güçlü bir kemirgen modeli

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

A Visual Guide for Studying Behavioral Defenses to Pathogen Attacks in Leaf-Cutting Ants

Patojen için davranışsal savunma eğitimi için görsel bir kılavuz içinde yaprak kesme karıncalar saldırıları

The complex lifestyle, evolutionary history of advanced cooperation, and disease defenses of leaf-cutting ants are well studied. Although numerous studies ...