Name: uptake of new lipid-coated nanoparticles containing falcarindiol by human mesenchymal stem cells
Uploaded: 2019-02-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Les auteurs remercient Dr Moustapha Kassem (hôpital de l’Université d’Odense, Danemark) pour les cellules souches mésenchymateuses humaines. Les auteurs tiennent à remercier le centre danois de Bioimaging médical pour l’accès à leurs microscopes. Les auteurs remercient les fondements Carlsberg et Villum financièrement (E.A.C.). Les auteurs tiennent à souligner l’appui financier apporté par l’attribution du titre de professeur Niels Bohr de la Danish National Research Foundation.

1. nanoparticules synthèse par solvant rapide déplacement technique
<ol><li>Mettre en place ce qui suit pour la préparation des nanoparticules : un concentrateur de chauffage/échantillon de bloc, un dessiccateur, un système de distribution numérique avec une seringue de verre de 1 mL, un flacon de verre de 12 mL, un agitateur magnétique, une puce magnétique (15 mm x 4,5 mm, dans une forme cylindrique avec revêtement de polytétrafluoroéthylène [PTFE]) à l’intérieur de la fiole de verre et un évaporateu...

<ol>
	<li>Firestone, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Density+Lipoprotein+as+a+Vehicle+for+Targeting+Antitumor+Compounds+to+Cancer+Cells.">Low-Density Lipoprotein as a Vehicle for Targeting Antitumor Compounds to Cancer Cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 5 (2), 105-113 (1994).</li><li>Beloribi-Djefaflia, S., Vasseur, S., Guillaumond, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolic+reprogramming+in+cancer+cells.">Lipid metabolic reprogramming in cancer cells.</a> Oncogenesis. 5 (1), 189 (2016).</li><li>Xin, Y., Yin, M., Zhao, L., Meng, F., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+on+nanoparticle-based+drug+delivery+systems+for+cancer+therapy.">Recent progress on nanoparticle-based drug delivery systems for cancer therapy.</a> Cancer Biology &amp; Medicine. 14 (3), 228 (2017).</li><li>Merriel, S. 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Un protocole détaillé de fabrication de nanoparticules de lipides enduit pour la délivrance de médicaments avec le simple, méthode d’injection rapide rapide, reproductible et évolutive de ripage solvant a été suivi de27,28 et est présenté dans cet article, comme appliquée à falcarindiol. En contrôlant la vitesse de l’injection de la phase organique en phase aqueuse et en utilisant des lipides de revêtement à des concentrations appropriées pour...

Nanoparticules de lipides enduit voient un intérêt accru en ce qui concerne leur fonction comme systèmes de délivrance de médicaments pour le cancer thérapie1. Les cancers ont une altération reprogrammation lipide-métabolique2 et un besoin accru de cholestérol à proliférer3. Ils surexpriment LDLs1 et admirez LDLs plus que les cellules normales, dans la mesure où nombre de LDL d’un patient atteint de cancer peut même descendre de4. Captation des LDL favorise les phénotypes agressif5 entraînant une prolifération et invasion du sein cancer6. Une abondance de récepteurs LDL (LDLRs) est un indicateur pronostique du potentiel métastatique7. Inspiré par le LDL et son absorption par les cellules cancéreuses, une nouvelle stratégie a été appelée : rendre la drogue ressemblent aux aliments le cancer8. Ainsi, ces nouvelles nanoparticules drogue livraison conceptions8,9,,10 ont été inspirés par la conception de base et lipides-stabilisé du LDL naturel11 comme un mécanisme de prestation des médicaments anticancéreux pour les cellules cancéreuses. Ce passif ciblant le système prend en charge l’enveloppage de, notamment, médicaments hydrophobes, qui sont habituellement donnés sous forme posologique orale mais fournissent seulement une petite quantité de la drogue dans la circulation sanguine, limitant ainsi leur efficacité attendus12. Comme avec les liposomes stealth13, un revêtement de polyéthylène glycol (PEG) contribue à réduire toute réponse immunologique et s’étend de la circulation dans le sang pour l’absorption optimale de tumeur par la prétendue renforcement de perméation et effet de rétention (EPR) 14 , 15. Toutefois, en plus de, dans certains cas, l’instabilité dans la circulation et la distribution indésirable dans le système de16, certains obstacles demeurent non résolus, tels que comment et dans quelle mesure ces nanoparticules sont recueillies par les cellules et ce qui est leur sort intracellulaire. C’est ici que cet article se penche sur l’absorption de nanoparticules de médicament anticancéreux hydrophobe particulier falcarindiol, à l’aide de confocale et épifluorescence, techniques d’imagerie.
L’objectif de cette étude est de fabriquer des nanoparticules lipidiques-enduit de falcarindiol et d’étudier leur absorption intracellulaire dans les CSM. Ainsi, potentiellement stabiliser son administration, surmonter les défis associés à la livraison et à améliorer la biodisponibilité. Ainsi évaluer un nouveau système de livraison pour ce médicament anticancéreux. Auparavant, les falcarindiol a été administré oralement par une forte concentration purifiée falcarindiol comme un supplément alimentaire17. Cependant, il y a nécessité d’une approche plus structurée de livrer ce médicament prometteur. Par conséquent, les nanoparticules falcarindiol, phospholipides et cholestérol encapsulant monocouche avec la drogue purifiée qui constituent le noyau de la particule, ont été conçus. La méthode de l’injection rapide du solvant, déplacement, comme l’a récemment développé par Needham et al. 8, est utilisé dans cette étude pour encapsuler le polyacétylène falcarindiol.
La méthode a déjà été utilisée pour la fabrication de nanoparticules lipidiques pour encapsuler des18,d’agents d’imagerie diagnostique19, mais aussi de tester des molécules (trioléine)27 et médicaments (orlistat, stéarate de niclosamide)8 ,27,28. C’est une technique relativement simple lorsque réalisées avec les molécules de droite. Il forme des particules de taille nanométrique, à la limite de leur critique nucléation (~ 20 nm de diamètre), des solutés hydrophobes hautement insolubles, dissoutes dans un solvant polaire. L’échange de solvant se fait par une injection rapide de la solution organique dans un excès d’antisolvent (généralement, une phase aqueuse en un organique du 1 / 9 : rapport volume aqueux)20,21.
La conception compositionnelle des nanoparticules donnent lieu à de multiples avantages. Les composants de DSPC:Chol donnent une monocouche très serrée, presque imperméable, biocompatible et biodégradable. Le PEG fournit une interface stériquement stabilisante qui agit comme un bouclier d’opsonisation par le système immunitaire, ralentit toute l’absorption par le système réticulo-endothélial (foie et rate) et protégeant contre le système des phagocytes mononuclées, empêchant leur rétention et la dégradation du système immunitaire et par conséquent, augmentant leur circulation mi-temps dans le sang,22. Cela permet aux particules de circuler jusqu'à ce qu’ils extravasate sur les sites de malades, comme les tumeurs, où le système vasculaire n’est pas étanche, ce qui permet de EPR-effet de donner lieu à une accumulation passive des particules. En outre, la couche lipidique permet d’avoir le meilleur contrôle sur la taille des nanoparticules en piégeant cinétiquement l’âme à son noyau critique dimension27,28. Lipides induisent diverses propriétés de surface (y compris le peptide ciblant, qui n’était pas encore disponible pour ce projet), un noyau de drogue pure et une faible polydispersité22,27,28. La méthode utilisée pour l’analyse granulométrique est DLS, une technique qui permet aux chercheurs de mesurer la taille d’un grand nombre de particules en même temps. Toutefois, cette méthode peut fausser les mesures aux plus grandes tailles, si les nanoparticules ne sont pas monodisperses23. Cette question est évaluée avec la couche lipidique ainsi. Plus de détails sur ces conceptions fondamentales et la quantification de toutes les caractéristiques sont données dans les autres publications27,28.
La drogue encapsulée dans des nanoparticules est falcarindiol, un polyacétylène alimentaire trouvé dans les plantes de la famille des Apiaceae. C’est un métabolite secondaire du type de polyacétylènes aliphatiques de17C qui a été trouvé pour afficher des effets favorisant la santé, y compris l’activité anti-inflammatoire, des effets antibactériens et cytotoxicité contre un large éventail de lignées de cellules cancéreuses. Sa forte réactivité est liée à sa capacité d’interagir avec diverses biomolécules, agissant comme un agent alkylant très réactif contre mercapto et groupes aminés24. Falcarindiol a déjà été démontré pour réduire le nombre de lésions néoplasiques dans le côlon17,25, bien que les mécanismes biologiques sont encore inconnues. Cependant, c’est la pensée qu’il interagit avec des biomolécules telles que NF-κB, COX1, COX-2 et cytokines, inhibant leurs tumeur la progression et les cellule prolifération processus, menant à arrêtant le cycle cellulaire, le réticulum endoplasmique (re) mettre l’accent et l’apoptose 17,26 dans les cellules cancéreuses. Falcarindiol est utilisé dans cette étude comme un médicament anticancéreux exemple en raison de son potentiel anticancéreux et le mécanisme sont actuellement étudiés, et parce qu’il montre des effets anticancéreux prometteurs. L’assimilation des nanoparticules est testée au CSM et photographié à l’aide d’épifluorescence et microscopie confocale. Ce type de cellule a été choisi en raison de sa grande taille, ce qui les rend idéales pour la microscopie.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:965px;" width="966">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">12 mL Screw Neck Vial (Clear glass, 15-425 thread, 66 X 18.5 mm)</td>
			<td style="width:384px;">Microlab Aarhus A/S</td>
			<td style="width:160px;">ML 33154LP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">6 well plates</td>
			<td>Greiner Bio One International GmbH</td>
			<td style="width:160px;">657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Absolute Ethanol</td>
			<td>EMD Millipore (VWR)</td>
			<td>EM8.18760.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Chloroform</td>
			<td>Rathburn Chemicals Ltd.</td>
			<td>RH1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Cholesterol</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>700000P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Confocal Microscope</td>
			<td style="width:384px;">Zeiss LSM510</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Cover Slips thickness #1.5</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH &#38; Co</td>
			<td>117650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Desiccator</td>
			<td style="width:384px;">Self-build</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DiI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:160px;">D282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">DLS</td>
			<td style="width:384px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:160px;">DelsaMAXpro 3167-DMP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DSPC (Chloroform stock)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>850365C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DSPE PEG 2000 (Chloroform stock)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>880120C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">eVol XR</td>
			<td>SGE analytical science, Trajan Scientific Australia Pty Ltd.</td>
			<td>2910200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Fetal Bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:160px;">10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Fluorescence Miccroscope</td>
			<td style="width:384px;">Olymous IX81</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td>With Manual TIRF and Andor iXon EMCCD</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Incubator</td>
			<td style="width:384px;">Panasonic&#160;</td>
			<td style="width:160px;">MCO-18AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnetic flea</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>15 x 4.5 mm</td>
			<td>Cylindrical shape with PTFE coating</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnetic stirrer</td>
			<td>IKA</td>
			<td style="width:160px;">RT-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minimum Essential Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:160px;">32561-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:255px;">PBS tablets for cell culture</td>
			<td style="width:384px;">VWR Chemicals</td>
			<td>97062-732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Pen/strep</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>97063-708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Phosphate Buffer Saline (PBS, pH 7.4)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Rotary Evaporator</td>
			<td>Rotavapor, B&#252;chi Labortechnik AG</td>
			<td style="width:160px;">R-210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Sample concentrator&#160;</td>
			<td>Stuart, Cole-Parmer Instrument Company, LLC</td>
			<td style="width:160px;">SBHCONC/1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

uptake of new lipid-coated nanoparticles containing falcarindiol by human mesenchymal stem cells

Nanoparticules font l’objet d’un intérêt accru pour les systèmes de délivrance de médicaments pour le traitement du cancer. Nanoparticules de lipides enduit sont inspirent dans la structure et la taille des lipoprotéines de basse densité (LDL) parce que les cellules cancéreuses ont un besoin accru de cholestérol à proliférer, et cela a été exploitée comme un mécanisme de prestation de produits anticancéreux au cancer cellules. En outre, selon la chimie pharmaceutique, encapsulant la drogue peut être avantageuse pour éviter la dégradation du médicament lors de circulation in vivo. Par conséquent, dans cette étude, cette conception est utilisée pour fabriquer des nanoparticules de lipides enduit de la falcarindiol de médicaments anticancéreux, offrant un potentiel nouveau système de délivrance de falcarindiol afin de stabiliser sa structure chimique contre la dégradation et améliorer sa absorption par des tumeurs. Nanoparticules de falcarindiol, avec une monocouche de phospholipides et de cholestérol encapsulant le cœur purifié de drogue de la particule, ont été conçus. L’enduit monocouche de lipides se compose de 1,2-distéaroyl-SN-glycéro-3-phosphocholine (CSCB), le cholestérol (Chol) et 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (DSPE PEG 2000) ainsi que de la fluorescence étiquette DiI (rapports molaires de 43:50:5:2). Les nanoparticules sont fabriquées en utilisant la méthode d’injection rapide, qui est une technique simple et rapide pour précipiter des nanoparticules par bon-solvant anti-solvant échange. Il se compose d’une injection rapide d’une solution d’éthanol contenant les composants de nanoparticules en phase aqueuse. La taille des nanoparticules fluorescentes est mesurée à l’aide de diffusion dynamique de la lumière (DLS) à 74,1 ± 6,7 nm. L’absorption des nanoparticules est testée dans des cellules souches mésenchymateuses (CSM) humaines et photographié à l’aide de la fluorescence et la microscopie confocale. L’absorption des nanoparticules est observée dans le CSM, ce qui suggère la possibilité d’un tel médicament stable livraison système pour falcarindiol.

Deux types différents de nanoparticules ont été fabriquées, à savoir pure falcarindiol nanoparticules et nanoparticules de lipides enduit falcarindiol. Différentes concentrations de lipides et de cholestérol ont été testées. Comme indiqué dans le tableau 1, les nanoparticules non couchés formés dans l’eau et mesurées dans du PBS avaient un diamètre de 71 ± 20,3 nm avec un indice de polydispersité (PDI) de 0,571. Ces paramètres ont été mesurés sur un...

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Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells

Absorption de nouvelles nanoparticules lipides enduit contenant Falcarindiol par des cellules souches mésenchymateuses humaines

Cet article décrit l’encapsulation de falcarindiol en lipides enduit 74 nm nanoparticules. L’assimilation de nanoparticules par des cellules souches humaines en gouttelettes lipidiques est surveillée par imagerie de fluorescence et confocale. Nanoparticules sont fabriqués par la méthode de l’injection rapide du solvant en déplacement, et leur taille est mesurée par la technique de diffusion dynamique de la lumière.

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and ...

La fabrication de nanoparticules enduites de lipides avec la méthode d’injection rapide fournit un système stable d’administration de médicaments pour la thérapie contre le cancer. Cette technique est une technique simple, rapide, évolutive et reproductible pour la fabrication de nanoparticules qui encapsule les médicaments hydrophobes. Cette technique est applicable pour la fabrication de nanoparticules diagnostiques et thérapeutiques à partir de matériaux hydrphobes qui peuvent être efficacement utilisés dans plusieurs conditions de la maladie.Cette technique de fabrication, avec DLS, peut être utilisée pour étudier la nucléation et la croissance des matériaux hydrophobes, tels que les lipides, les protéines et les polymères. Connaître les propriétés chimiques physiques de votre substance médicamenteuse est essentiel avant de fabriquer les nanoparticules. En outre, assurez-vous d’utiliser les concentrations correctes de lipides de revêtement.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle pour montrer la simplicité de la technique de fabrication et pour montrer la livraison réussie du médicament comme nanoparticules aux cellules. Il faut prendre des précautions lorsqu’on travaille avec du chloroforme et du formaldéhyde, et il faut travailler sous un capot de fumée. Pour commencer, distribuez 2,4 millilitres de 250 micromolaires falcarindiol solution de stock dissous dans 70% d’éthanol dans un flacon de scintillation.À l’aide d’un concentrateur d’échantillon, évaporer la fraction liquide pendant environ quatre heures pour obtenir du falcarindiol sec. À l’aide du concentrateur de l’échantillon, livrer le gaz sur l’échantillon à température ambiante pour concentrer l’échantillon. Une fois séché, ajouter les composants indiqués ici au flacon de scintillation dans un capot de fumée, en s’assurant de nettoyer la seringue avec du chloroforme après avoir ajouté chaque composant pour éviter la contamination croisée.Fermez immédiatement les flacons contenant les lipides afin que le solvant ne s’évapore pas et modifie ainsi la concentration. Envelopper le flacon de papier d’aluminium pour protéger DiI de la lumière et laisser l’échantillon pendant la nuit dans le desiccateur pour évaporer le chloroforme. Le lendemain, dissoudre l’échantillon desséché dans de l’éthanol absolu pour faire un volume final de 1,2 millilitres.Cette solution représente la phase organique. Prenez un flacon de verre de 12 millilitres et remplissez-le de neuf millilitres d’eau purifiée. Ajouter ensuite une puce magnétique dans le flacon contenant neuf millilitres d’eau.Placer le flacon sur un agitateur magnétique et remuer à 500 r/h. Ensuite, fixez une seringue en verre d’un millilitre au système de distribution et tirez lentement le chloroforme dans et hors de la seringue en verre au moins 10 fois. Distribuez le chloroforme dans son collecteur de déchets à chaque fois.Le nettoyage de la seringue avec du chloroforme permet d’éviter toute contamination. Maintenant, amorcer la seringue avec de l’éthanol. L’amorçage remplace l’ancien solvant et élimine les bulles d’air.À l’aide de la seringue, aspirer un millilitre de la phase organique et insérer la seringue dans le flacon de verre jusqu’au milieu de la marque d’eau de neuf millilitres. Maintenez-le stable au milieu du flacon, et injectez la solution à 833 microlitres par seconde en appuyant sur le bouton de distribution sur le système de distribution. Cela génère 10 microlitres de 50 nanoparticules enrobées de lipides micromolaires de falcarindiol dans 10% d’éthanol.Cette vitesse d’injection s’est trouvée pour atteindre les nanoparticules les plus fines avec la distribution étroite de taille de particule. Lors de l’injection, il est important de s’assurer que l’aiguille est insérée au centre, stable et droite. Immédiatement après l’injection, retirer le flacon de l’agitateur et transférer l’échantillon dans un flacon de fond rond de 50 millilitres.Attaquez le flacon jusqu’à l’évaporateur rotatif et évaporez un millilitre du solvant organique à température ambiante. Soyez prudent pour éviter la formation excessive de bulles. Transférer la suspension nanoparticule du flacon dans un autre flacon de verre de 12 millilitres.Assurez-vous que le volume est de neuf millilitres, puis divisez l’échantillon en deux flacons de verre de 12 millilitres. Ajouter ensuite 0,5 millilitres d’eau ultra pure dans l’un des flacons et 0,5 millilitre de saline tamponnée de phosphate de 10 X dans l’autre flacon. Allumez l’instrument numérique de diffusion de la lumière et réglez la température désirée à 20 degrés Celsius jusqu’à ce qu’elle se stabilise.Réglez ensuite les paramètres de l’instrument tels qu’ils sont indiqués ici. Remplissez la cuvette en plastique d’un millilitre de suspension nanoparticule et commencez la mesure. Indiquez la taille mesurée en fonction du solvant utilisé.Ensemencer environ 50 000 cellules sur des glissements stériles de 1,5 couvercle placés dans une plaque de six puits pour obtenir une densité cellulaire d’environ 30 %, puis ajouter le milieu de culture afin d’avoir un volume final de trois millilitres dans chaque puits. Incuber les cellules pendant 24 heures dans des conditions de culture standard. Le lendemain, ajouter trois microlitres de la solution nanoparticule pour une concentration finale de falcarindiol de cinq micromolaires.Ensuite, retournez les cellules à l’incubateur pendant 24 heures. Après 24 heures de traitement, lavez les cellules deux fois avec du PBS, puis fixez-les en formaldéhyde à 4 % pendant 10 minutes à température ambiante. Après fixation, perméabiliser les cellules avec 0,1%Triton X-100 pendant 30 minutes.Ensuite, lavez-les deux fois avec PBS, et les tacher avec 250 microlitres de 300 nanomolaires DAPI pendant cinq minutes, protégés de la lumière. Placez le slip de couverture sur une glissière à l’aide d’une goutte de PBS. Tournez-vous vers un 150x subjectif, et transférez la diapositive au stade d’un microscope à fluorescence à champ large équipé d’une caméra CCD multipliée par électrons.Cellules d’image utilisant le canal GFP-LP. En outre, vérifiez l’absorption des nanoparticules dans les cellules en prenant des images de microscopie confocales à l’aide d’un objectif d’huile 63x avec une ouverture numérique de 1,4. Image DiI à l’aide d’un laser argon à 514 nanomètres et DAPI à l’aide d’un laser à deux photons à 780 nanomètres.Les nanoparticules non encoated du falcarindiol formées dans l’eau et mesurées dans PBS ont montré la polydispersité élevée, avec l’index de de 0.571. Cette valeur indique une distribution large et non uniforme de la taille des particules. En revanche, les nanoparticules enduites de lipides de falcarindiol fabriquées dans cette vidéo étaient de 74,1 nanomètres avec un indice de polydispersité de 0,182, a indiqué une distribution relativement monodisperse et uniforme des tailles de particules.Comme première observation des nanoparticules à l’intérieur des cellules, des images de microscopie d’épifluorescence ont été acquises après 24 heures de traitement. Les nanoparticules ont été visualisées comme des points blancs et lumineux, et on pourrait émettre l’hypothèse que les nanoparticules étaient situées à l’intérieur des cellules entourant le noyau. Pour vérifier que des nanoparticules de falcarindiol étaient entrées dans les cellules, la microscopie confoccale a été exécutée sur les cellules aussi bien.Un grand nombre de nanoparticules sont montrées ici, dispersées dans le cytoplasme dans chaque cellule. Ces résultats montrent que les nanoparticules agissent comme un système stable d’administration de médicaments pour le falcarindiol. Tout en essayant cette procédure, il est important d’injecter la solution à la bonne vitesse d’injection, en gardant l’ensemencement stable, au centre, pour assurer un bon mélange.Cette procédure peut être utilisée pour n’importe quel médicament hydrophobe pour formuler des nanoparticules thérapeutiques ou pour les agents d’imagerie pour formuler des nanoparticules diagnostiques qui peuvent être utilisées dans diverses conditions de la maladie, comme le cancer. Cette technique a permis de mener davantage de recherches sur le mécanisme par lequel les nanoparticules sont prises en charge par les cellules, ainsi que sur l’imagerie cellulaire vivante et sur l’étude de l’effet anticancéreux du médicament.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

L&#39;utilisation de cellules souches humaines périvasculaires pour la régénération osseuse

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

Recherche

Bio-ingénierie

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Microcapsules d&#39;alginate comme une plate-forme 3D pour la Propagation et différenciation des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) à différentes lignées

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

Le développement, l&#39;expansion et<em&gt; In vivo</em&gt; Suivi des cellules NK humaines à partir de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) et et induit des cellules souches pluripotentes (CISP)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

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Les cellules souches de programmation pour angiogenèse thérapeutique utilisant polymère biodégradable nanoparticules

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Isolement des cellules souches mésenchymateuses du périoste alvéolaire humaine et les effets de la vitamine D sur activité ostéogène du périoste dérivées des cellules

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Mesure du potentiel d’action optique unicellulaire dans les cardiomyocytes dérivés de cellules souches pluripotentes induites par l’homme

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