Name: uptake of new lipid-coated nanoparticles containing falcarindiol by human mesenchymal stem cells
Uploaded: 2019-02-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Авторы благодарят за мезенхимальных стволовых клеток человека д-р Мустафа Кассем (Больница университета Оденсе, Дания). Авторы благодарят датский медицинский центр Bioimaging для доступа к их микроскопы. Авторы благодарят Carlsberg и Виллум основы для финансовой поддержки (для E.A.C.). Авторы признают финансовую поддержку, оказываемую премии профессора Нильса Бора от датского национального фонда научных исследований.

1. наночастицы синтез быстрого растворителя ветра техника
<ol><li>Настройка следующих наночастиц подготовки: блок отопителя/образец концентратор, сушильный шкаф, цифровой дозатор с 1 мл шприц стекла, стекло 12 мл во флаконе, Магнитная мешалка, магнитные блоху (15 x 4.5 мм, в цилиндрическую форм...

<ol>
	<li>Firestone, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Density+Lipoprotein+as+a+Vehicle+for+Targeting+Antitumor+Compounds+to+Cancer+Cells.">Low-Density Lipoprotein as a Vehicle for Targeting Antitumor Compounds to Cancer Cells.</a> Bioconjugate Chemistry. 5 (2), 105-113 (1994).</li><li>Beloribi-Djefaflia, S., Vasseur, S., Guillaumond, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolic+reprogramming+in+cancer+cells.">Lipid metabolic reprogramming in cancer cells.</a> Oncogenesis. 5 (1), 189 (2016).</li><li>Xin, Y., Yin, M., Zhao, L., Meng, F., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+on+nanoparticle-based+drug+delivery+systems+for+cancer+therapy.">Recent progress on nanoparticle-based drug delivery systems for cancer therapy.</a> Cancer Biology &amp; Medicine. 14 (3), 228 (2017).</li><li>Merriel, S. W. D., Carroll, R., Hamilton, F., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+unexplained+hypoalbuminaemia+and+new+cancer+diagnoses+in+UK+primary+care+patients.">Association between unexplained hypoalbuminaemia and new cancer diagnoses in UK primary care patients.</a> Family Practice. 33 (5), 449-452 (2016).</li><li>Yue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesteryl+ester+accumulation+induced+by+PTEN+loss+and+PI3K/AKT+activation+underlies+human+prostate+cancer+aggressiveness.">Cholesteryl ester accumulation induced by PTEN loss and PI3K/AKT activation underlies human prostate cancer aggressiveness.</a> Cell Metabolism. 19 (3), 393-406 (2014).</li><li>dos Santos, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDL-cholesterol+signaling+induces+breast+cancer+proliferation+and+invasion.">LDL-cholesterol signaling induces breast cancer proliferation and invasion.</a> Lipids in Health and Disease. 13 (16), (2014).</li><li>Gallagher, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+tumor+LDLR+expression+accelerates+LDL+cholesterol-mediated+breast+cancer+growth+in+mouse+models+of+hyperlipidemia+HHS+Public+Access.">Elevated tumor LDLR expression accelerates LDL cholesterol-mediated breast cancer growth in mouse models of hyperlipidemia HHS Public Access.</a> Oncogene. 36 (46), 6462-6471 (2017).</li><li>Needham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottom+up+design+of+nanoparticles+for+anti-cancer+diapeutics:+"put+the+drug+in+the+cancer's+food".">Bottom up design of nanoparticles for anti-cancer diapeutics: "put the drug in the cancer's food".</a> Journal of Drug Targeting. 24 (9), 836-856 (2016).</li><li>Lacko, A. G., Mconnathy, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+cancer+chemotherapy+using+synthetic+nanoparticles.">Targeted cancer chemotherapy using synthetic nanoparticles.</a> United States Patent Application Publication. , (2009).</li><li>Nikanjam, M., Gibbs, A. R., Hunt, C. A., Budinger, T. F., Forte, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+nano-LDL+with+paclitaxel+oleate+as+a+targeted+drug+delivery+vehicle+for+glioblastoma+multiforme.">Synthetic nano-LDL with paclitaxel oleate as a targeted drug delivery vehicle for glioblastoma multiforme.</a> Journal of Controlled Release. 124 (3), 163-171 (2007).</li><li>Teerlink, T., Scheffer, P. G., Bakker, S. J. L., Heine, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+data+from+LDL+composition+and+size+measurement+are+compatible+with+a+discoid+particle+shape.">Combined data from LDL composition and size measurement are compatible with a discoid particle shape.</a> Journal of Lipid Research. 45 (5), 954-966 (2004).</li><li>Schweizer, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I+study+of+niclosamide+in+combination+with+enzalutamide+in+men+with+castration-resistant+prostate+cancer.">A phase I study of niclosamide in combination with enzalutamide in men with castration-resistant prostate cancer.</a> PLoS ONE. 13 (8), 0202709 (2018).</li><li>Allen, T. M., Hansen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+of+stealth+versus+conventional+liposomes:+effect+of+dose.">Pharmacokinetics of stealth versus conventional liposomes: effect of dose.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1068 (2), 133-141 (1991).</li><li>Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Enhanced+Permeability+and+Retention+(EPR)+Effect+in+Tumor+Vasculature:+The+Key+Role+of+Tumor-Selective+Macromolecular+Drug+Targeting.">The Enhanced Permeability and Retention (EPR) Effect in Tumor Vasculature: The Key Role of Tumor-Selective Macromolecular Drug Targeting.</a> Advances in Enzyme Regulation. 41 (1), 189-207 (2001).</li><li>Wong, A. D., Ye, M., Ulmschneider, M. B., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+of+the+Enhanced+Permeation+and+Retention+(EPR)+Effect.">Quantitative Analysis of the Enhanced Permeation and Retention (EPR) Effect.</a> PLoS ONE. 10 (5), 0123461 (2015).</li><li>Khodabandehloo, H., Zahednasab, H., Hafez, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanocarriers+Usage+for+Drug+Delivery+in+Cancer+Therapy.">Nanocarriers Usage for Drug Delivery in Cancer Therapy.</a> Iranian Journal of Psychiatry and Behavioral Sciences. 9 (2), (2016).</li><li>Kobaek-Larsen, M., El-Houri, R. B., Christensen, L. P., Al-Najami, I., Frett&#233;, X., Baatrup, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+polyacetylenes,+falcarinol+and+falcarindiol,+isolated+from+carrots+prevents+the+formation+of+neoplastic+lesions+in+the+colon+of+azoxymethane-induced+rats.">Dietary polyacetylenes, falcarinol and falcarindiol, isolated from carrots prevents the formation of neoplastic lesions in the colon of azoxymethane-induced rats.</a> Food &amp; Function. 8, 964-974 (2017).</li><li>Hervella, P., Parra, E., Needham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulation+and+retention+of+chelated-copper+inside+hydrophobic+nanoparticles:+Liquid+cored+nanoparticles+show+better+retention+than+a+solid+core+formulation.">Encapsulation and retention of chelated-copper inside hydrophobic nanoparticles: Liquid cored nanoparticles show better retention than a solid core formulation.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 102, 64-76 (2016).</li><li>Hervella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chelation,+formulation,+encapsulation,+retention,+and+in+vivo+biodistribution+of+hydrophobic+nanoparticles+labelled+with+57Co-porphyrin:+Octyl+Amine+ensures+stable+chelation+of+cobalt+in+Liquid+Nanoparticles+that+accumulate+in+tumors.">Chelation, formulation, encapsulation, retention, and in vivo biodistribution of hydrophobic nanoparticles labelled with 57Co-porphyrin: Octyl Amine ensures stable chelation of cobalt in Liquid Nanoparticles that accumulate in tumors.</a> Journal of Controlled Release. , (2018).</li><li>Zhigaltsev, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottom-up+design+and+synthesis+of+limit+size+lipid+nanoparticle+systems+with+aqueous+and+triglyceride+cores+using+millisecond+microfluidic+mixing.">Bottom-up design and synthesis of limit size lipid nanoparticle systems with aqueous and triglyceride cores using millisecond microfluidic mixing.</a> Langmuir. 28 (7), 3633-3640 (2012).</li><li>Aubry, J., Ganachaud, F., Cohen Addad, J. -. P., Cabane, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoprecipitation+of+Polymethylmethacrylate+by+Solvent+Shifting:1+Boundaries.">Nanoprecipitation of Polymethylmethacrylate by Solvent Shifting:1 Boundaries.</a> Langmuir. 25 (4), 1970-1979 (2009).</li><li>Karnik, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Platform+for+Controlled+Synthesis+of+Polymeric+Nanoparticles.">Microfluidic Platform for Controlled Synthesis of Polymeric Nanoparticles.</a> Nano Letters. 8 (9), 2906-2912 (2008).</li><li>Gaumet, M., Vargas, A., Gurny, R., Delie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+for+drug+delivery:+The+need+for+precision+in+reporting+particle+size+parameters.">Nanoparticles for drug delivery: The need for precision in reporting particle size parameters.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 69 (1), 1-9 (2018).</li><li>Christensen, L. P., Brandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioactive+polyacetylenes+in+food+plants+of+the+Apiaceae+family:+Occurrence,+bioactivity+and+analysis.">Bioactive polyacetylenes in food plants of the Apiaceae family: Occurrence, bioactivity and analysis.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 41 (3), 683-693 (2016).</li><li>Kobaek-Larsen, M., Christensen, L. P., Vach, W., Ritskes-Hoitinga, J., Brandt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+Effects+of+Feeding+with+Carrots+or+(-)+-Falcarinol+on+Development+of+Azoxymethane-Induced+Preneoplastic+Lesions+in+the+Rat+Colon.">Inhibitory Effects of Feeding with Carrots or (-) -Falcarinol on Development of Azoxymethane-Induced Preneoplastic Lesions in the Rat Colon.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53, 1823-1827 (2005).</li><li>Jin, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antitumor+natural+compound+falcarindiol+promotes+cancer+cell+death+by+inducing+endoplasmic+reticulum+stress.">The antitumor natural compound falcarindiol promotes cancer cell death by inducing endoplasmic reticulum stress.</a> CellDeath &amp; Disease. 3, 1-9 (2012).</li><li>Walke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physico-Chemical+Parameters+of+Nanoparticles+that+Govern+Prodrug+Design+and+Application+in+Anticancer+Nanomedicine+in+Physics,+Chemistry,+Pharmacy.">Physico-Chemical Parameters of Nanoparticles that Govern Prodrug Design and Application in Anticancer Nanomedicine in Physics, Chemistry, Pharmacy.</a> University of Southern Denmark (SDU). , (2018).</li><li>Walke, P. B., Hervella, P., Needham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-Coated+Stealth+Nanoparticles+of+Novel+Hydrophobic+Prodrug,+Niclosamide+Stearate,+as+Cancer+Therapeutic:+Formulation+and+Physico-Chemical+Characterization+of+Nanoparticles.">Lipid-Coated Stealth Nanoparticles of Novel Hydrophobic Prodrug, Niclosamide Stearate, as Cancer Therapeutic: Formulation and Physico-Chemical Characterization of Nanoparticles.</a> 6th International Pharmaceutical Federation Pharmaceutical Sciences World Congress. , (2017).</li></ol>

Подробный протокол для изготовления липидов покрытием наночастицы для доставки лекарств с простой, быстрый, воспроизводимые и масштабируемых быстрого инъекционный метод жидкостной перехода был затем27,28 и представлен в этом документе, как применяется ?...

Липидов покрытием наночастиц наблюдаем повышенный интерес относительно их функция как систем доставки препарата для терапии рака1. Опухоли имеют изменения метаболизма липидов перепрограммирования2 и повышенная потребность в холестерин размножаться3. Они overexpress LDL1 и в более LDL, чем нормальные клетки, в той степени, в какой больной раком ЛПНП игр может даже пойти вниз4. ЛПНП поглощение способствует агрессивная фенотипов5 приводит к распространению и вторжения в груди Рак6. Обилие рецепторов ЛПНП (LDLRs) является индикатором прогностические метастатического потенциала7. Вдохновленный ЛПНП и его поглощение раковых клеток, Новая стратегия называется: сделать выглядеть как пища рака наркотиков8. Таким образом эти новые наночастиц наркотиков доставки образцов8,9,10 были вдохновлены стабилизировать ядро и липидов дизайн природных LDL11 как механизм для доставки противораковые препараты для раковых клеток. Этот пассивный ориентации системы доставки поддерживает инкапсуляцию, особенно, гидрофобные наркотиков, которые обычно даются в форме устной дозировке, но обеспечивают лишь небольшое количество наркотиков в кровь, так что ограничение их ожидаемой эффективности12. Как с стелс липосомы13, полиэтиленгликоль (PEG) покрытие помогает уменьшить иммунологического ответа и расширяет циркуляции в крови для оптимального опухоли поглощения, якобы более проникновение и эффект удержания (EPR) 14 , 15. Однако, в дополнение к, в некоторых случаях, нестабильность в циркуляции и нежелательных распределения в системе16, некоторые препятствия остаются нерешенными, например, каким образом и в какой степени такие наночастицы принимаются клетки и что такое их внутриклеточного судьба. Именно здесь, что этот документ рассматривается наночастиц поглощение гидрофобные противораковый препарат falcarindiol, с помощью конфокальной и эпифлуоресцентного методы визуализации.
Цель исследования – для изготовления липидов покрытием наночастиц falcarindiol и изучить их внутриклеточного поглощения в использования. Таким образом, потенциально стабилизации своей администрации, преодоление проблем, связанных с доставкой и повышение биодоступности. Таким образом, оценка новой системы доставки для этого противораковый препарат. Ранее falcarindiol были администрируемых устно через falcarindiol высокой концентрации очищенный как дополнение питания17. Однако существует необходимость более структурированный подход к доставить этот перспективный препарат. Таким образом falcarindiol наночастиц, фосфолипидов и холестерина, инкапсулируя монослой с очищенного препарата, составляющие ядро частицы, были разработаны. Метод быстрого введения растворителя ветра, как недавно разработанный Needham et al. в этом исследовании используется 8, для инкапсуляции полиацетилена falcarindiol.
Этот метод ранее использовался для изготовления липидов наночастиц для инкапсуляции диагностических изображений агентов18,19, а так же проверить молекул (линоленовой)27 и наркотиков (орлистат, niclosamide стеарат)8 ,27,28. Это относительно простой метод, когда осуществляется с правом молекул. Он образует наноразмерных частиц, на пределе их критического нуклеации (диаметр ~ 20 Нм), высоко нерастворимых гидрофобные растворенных веществ, растворенных в Полярный растворитель. Растворителя обмен осуществляется путем быстрого инъекции раствора органического в избытке antisolvent (обычно, водной фазе в органических 1:9: соотношение Водный объем)20,21.
Композиционный дизайн наночастиц порождают множественные преимущества. DSPC:Chol компоненты обеспечивают очень плотный, почти непроницаемой, биосовместимых и биологически монослоя. КОЛЫШЕК обеспечивает труднодоступных стабилизирующим интерфейс, который действует как щит от опсонизацию, иммунной системы, замедление любой поглощение ретикулоэндотелиальной системы (печень и селезенка) и защита от одноядерных фагоцитарной системы, предотвращая их удержание и деградации иммунной системой и следовательно, увеличивая их циркуляции тайм в крови22. Это позволяет частицам распространить до тех пор, пока они extravasate на больные места, таких как опухоли, где протекающая сердечно-сосудистой системы, позволяя ЭПР эффект привести к пассивной накопления частиц. Кроме того слой липидов позволяет иметь лучший контроль над наночастиц размер кинетически треппинг ядро его измерения критических ядро27,28. Липиды побудить различные свойства поверхности (включая ориентации, пептид, который еще не был доступен для этого проекта), чистый препарат ядра и низкой полиизопрена22,27,28. Метод, используемый для анализа частиц размером является DLS, техника, которая позволяет исследователям для измерения размера большого числа частиц в то же время. Однако этот метод может смещения измерения до больших размеров, если наночастиц не монодисперсными23. Этот вопрос оценивается с липидный слой также. Более подробную информацию об этих основных конструкций и количественная оценка всех характеристик приведены в других публикаций27,28.
Препарат, инкапсулированные в наночастиц является falcarindiol, пищевые полиацетилена, найдено в растения из семейства зонтичные. Это вторичные метаболиты из алифатических C17полиацетилен типа, который был найден для отображения здоровь повышая влияния, включая противовоспалительной активностью, антибактериальный эффект и цитотоксичность против широкого спектра линий клеток рака. Его высокая реакционная способность связана с его способностью взаимодействовать с различными биомолекул, действуя как очень реактивной алкилирующий агент против меркапто и амино группы24. Falcarindiol ранее было показано, уменьшить количество опухолевых поражений в Колон-17,25, хотя биологические механизмы до сих пор неизвестны. Однако это мысль, что он взаимодействует с биомолекулами например NF-κB, COX1, так, COX-2, и подчеркнуть, цитокины, подавляя их опухоли прогрессии и клеток распространения процессов, привело к аресту клеточного цикла, эндоплазматический ретикулум (ER) и апоптоза 17,26 в раковых клетках. Falcarindiol используется в данном исследовании, как пример противораковые наркотиков благодаря противоопухолевой потенциал и механизм в настоящее время изучаются, и потому что он показывает многообещающие противораковые эффекты. Клеточного поглощения наночастиц испытывается в использования и образы с помощью эпифлуоресцентного и confocal микроскопии. Этот тип ячейки был выбран из-за ее большого размера, что делает их идеальными для микроскопии.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:965px;" width="966">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">12 mL Screw Neck Vial (Clear glass, 15-425 thread, 66 X 18.5 mm)</td>
			<td style="width:384px;">Microlab Aarhus A/S</td>
			<td style="width:160px;">ML 33154LP</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">6 well plates</td>
			<td>Greiner Bio One International GmbH</td>
			<td style="width:160px;">657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Absolute Ethanol</td>
			<td>EMD Millipore (VWR)</td>
			<td>EM8.18760.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Chloroform</td>
			<td>Rathburn Chemicals Ltd.</td>
			<td>RH1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Cholesterol</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>700000P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Confocal Microscope</td>
			<td style="width:384px;">Zeiss LSM510</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Cover Slips thickness #1.5</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH &#38; Co</td>
			<td>117650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Desiccator</td>
			<td style="width:384px;">Self-build</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DiI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:160px;">D282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">DLS</td>
			<td style="width:384px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:160px;">DelsaMAXpro 3167-DMP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DSPC (Chloroform stock)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>850365C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DSPE PEG 2000 (Chloroform stock)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>880120C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:255px;">eVol XR</td>
			<td>SGE analytical science, Trajan Scientific Australia Pty Ltd.</td>
			<td>2910200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Fetal Bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:160px;">10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Fluorescence Miccroscope</td>
			<td style="width:384px;">Olymous IX81</td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td>With Manual TIRF and Andor iXon EMCCD</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Incubator</td>
			<td style="width:384px;">Panasonic&#160;</td>
			<td style="width:160px;">MCO-18AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnetic flea</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>15 x 4.5 mm</td>
			<td>Cylindrical shape with PTFE coating</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Magnetic stirrer</td>
			<td>IKA</td>
			<td style="width:160px;">RT-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minimum Essential Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td style="width:160px;">32561-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:255px;">PBS tablets for cell culture</td>
			<td style="width:384px;">VWR Chemicals</td>
			<td>97062-732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Pen/strep</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>97063-708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Phosphate Buffer Saline (PBS, pH 7.4)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Rotary Evaporator</td>
			<td>Rotavapor, B&#252;chi Labortechnik AG</td>
			<td style="width:160px;">R-210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Sample concentrator&#160;</td>
			<td>Stuart, Cole-Parmer Instrument Company, LLC</td>
			<td style="width:160px;">SBHCONC/1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

uptake of new lipid-coated nanoparticles containing falcarindiol by human mesenchymal stem cells

Наночастицы находятся в центре внимания повышенный интерес в системах доставки препарата для лечения рака. Липидов покрытием наночастиц вдохновлены в структуре и размер липопротеидов низкой плотности (LDL) потому, что раковые клетки имеют повышенная потребность холестерина размножаться, и это была использована как механизм для доставки противораковые препараты рака клетки. Кроме того в зависимости от наркотиков, химия инкапсуляции препарат может быть выгодным, чтобы избежать деградации препарата во время циркуляции в естественных условиях. Таким образом, в этом исследовании, эта конструкция используется для изготовления липидов покрытием наночастиц противораковый препарат falcarindiol, обеспечивая потенциал новой системы доставки falcarindiol для того чтобы стабилизировать его химическое строение против деградации и улучшить его поглощение опухоли. Falcarindiol наночастиц, с фосфолипидов и холестерина монослоя, инкапсулирующий ядро очищенного препарата частицы, были разработаны. Однослойные покрытия липидов состоит из 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), холестерин (Чхоль) и 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (DSPE PEG 2000) наряду с люминесцентные Метка DiI (молярное соотношение 43:50:5:2). Наночастицы изготовлены с использованием метода быстрой инъекции, который является быстрый и простой способ осадок наночастиц, хорошо растворитель для обмена анти растворителя. Он состоит из быстрого введения этанола раствор, содержащий компоненты наночастиц в водной фазе. Размер наночастиц флуоресцентные измеряется с помощью динамического рассеяния света (DLS) на 74,1 Нм ± 6,7. Поглощение наночастиц испытывается в мезенхимальных стволовых клеток человека (использования) и образы, используя флуоресценции и confocal микроскопии. Поглощение наночастиц наблюдаются в использования, предлагая возможности для такой системы доставки стабильного наркотиков для falcarindiol.

Два различных видов наночастиц были сфабрикованы, а именно: чистый falcarindiol наночастиц и липидов покрытием falcarindiol наночастиц. Были протестированы различные концентрации холестерина и липидов. Как показано в таблице 1, немелованной наночастиц в воде и измеряет?...

Watch this Scientific Journal Video about Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells at JoVE.com

Uptake of New Lipid-coated Nanoparticles Containing Falcarindiol by Human Mesenchymal Stem Cells

Усвоение новых липидов покрытием наночастиц, содержащих Falcarindiol, мезенхимальных стволовых клеток человека

Эта статья описывает инкапсуляции falcarindiol в липидной оболочкой 74 Нм наночастиц. Клеточного поглощения наночастиц, стволовых клеток человека в липидного капель контролируется флуоресцентные и конфокальная томография. Наночастицы изготавливаются методом быстрой инъекции растворителя ветра, и их размер измеряется с методом динамического рассеяния света.

Nanoparticles are the focus of an increased interest in drug delivery systems for cancer therapy. Lipid-coated nanoparticles are inspired in structure and ...

Изготовление наночастиц с липидным покрытием с помощью метода быстрой инъекции обеспечивает стабильную систему доставки лекарств для лечения рака. Этот метод является простой, быстрой, масштабируемой и воспроизводимой техникой изготовления наночастиц, которая инкапсулирует гидрофобные препараты. Этот метод применим для изготовления диагностических и терапевтических наночастиц из гидрофобных материалов, которые могут быть эффективно использованы в нескольких заболеваниях.Этот метод изготовления, наряду с DLS, может быть использован для изучения нуклеации и роста гидрофобных материалов, таких как липиды, белки и полимеры. Зная физические химические свойства вашего препарата вещество имеет решающее значение перед изготовлением наночастиц. Также обязательно используйте правильные концентрации липидов покрытия.Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, чтобы показать простоту техники изготовления и показать успешную доставку препарата в качестве наночастиц в клетки. Меры предосторожности должны быть приняты при работе с хлороформом и формальдегидом, и работа под капотом дыма не требуется. Для начала, обойтись 2,4 миллилитров 250 микромолярной фалкариндиол фондовый раствор растворяется в 70% этанола в сцинтилляционный флакон.Используя концентратор образца, испаряйте жидкую фракцию в течение примерно четырех часов, чтобы получить сухой фалькариндиол. Используя концентратор образца, доставайте газ по образцу при комнатной температуре, чтобы сконцентрировать образец. После того, как сушеные, добавить компоненты, показанные здесь, чтобы сцинтилляционный флакон в дым капот, убедившись, что для очистки шприца с хлороформом после добавления каждого компонента, чтобы избежать перекрестного загрязнения.Затем немедленно закройте флаконы, содержащие липиды, чтобы растворитель не испарился и тем самым модифицировать концентрацию. Оберните флакон алюминиевой фольгой, чтобы защитить DiI от света и оставьте образец на ночь в десикаторе, чтобы испарять хлороформ. На следующий день растворите высушенный образец в абсолютном этаноле, чтобы сделать окончательный объем 1,2 миллилитров.Это решение представляет собой органическую фазу. Возьмите стеклянный флакон на 12 миллилитров и заполните его девятью миллилитров очищенной воды. Затем добавьте магнитную блоху во флакон, содержащий девять миллилитров воды.Поместите флакон на магнитный мешалка и перемешайте при 500 об/мин. Затем прикрепите один миллилитр стеклянный шприц к системе дозирования и медленно вытяните хлороформ в и из стеклянного шприца по крайней мере 10 раз. Каждый раз высовывьте хлороформ в свой сборщик отходов.Очистка шприца хлороформом помогает избежать загрязнения. Теперь премьер шприц с этанолом. Priming заменяет старый растворитель, а также удаляет любые пузырьки воздуха.Используя шприц, аспирировать один миллилитр органической фазы, и вставить шприц в стеклянный флакон до середины девяти миллилитров водяной марки. Поддерживайте его устойчивым в середине флакона, и вводить раствор на 833 микролитров в секунду, нажав кнопку дозирования на дозаторной системы. Это генерирует 10 микролитров 50 микромоляных липидов покрытием наночастиц фалкариндиола в 10% этанола.Эта скорость впрыска была найдена для достижения лучших наночастиц с узким распределением размера частиц. При введении, важно, чтобы убедиться, что игла вставляется в центре, устойчивый и прямой. Сразу после инъекции снимите флакон с мешалки и перенесите образец в круглую нижнюю колбу на 50 миллилитров.Атака колбы на роторный испаритель, и испаряется один миллилитр органического растворителя при комнатной температуре. Будьте осторожны, чтобы избежать избыточного образования пузыря. Перенесите подвеску наночастиц из колбы в еще 12 миллилитров стеклянного флакона.Убедитесь, что объем составляет девять миллилитров, а затем разделить образец на два 12 миллилитров стеклянных флаконов. Затем добавьте 0,5 миллилитров ультра чистой воды в один из флаконов и 0,5 миллилитра 10X фосфата буферного солевого раствора в другом флаконе. Включите цифровой прибор рассеяния света и установите нужную температуру до 20 градусов по Цельсию, пока она не стабилизируется.Затем установите параметры инструмента, как показано здесь. Заполните пластиковый кюветт одним миллилитром наночастицы подвески, и начать измерение. Сообщите о измеренном размере в зависимости от используемого растворителя.Семя примерно 50 000 клеток на стерильных 1,5 крышки скользит помещены в шесть хорошо пластины для получения плотности клеток примерно 30%Затем добавить культуры среды для того, чтобы иметь окончательный объем из трех миллилитров в каждой хорошо. Инкубировать клетки в течение 24 часов в стандартных условиях культуры. На следующий день добавьте три микролитров раствора наночастиц для окончательной концентрации фалкариндиола в пять микромоляров.Затем верните клетки в инкубатор на 24 часа. После 24 часов лечения, мыть клетки дважды с PBS, а затем исправить их в 4%формальдегид в течение 10 минут при комнатной температуре. После фиксации, пронизывают клетки с 0,1%Triton X-100 в течение 30 минут.Затем мыть их дважды с PBS, и пятно их с 250 микролитров 300 наномолярных DAPI в течение пяти минут, защищенных от света. Поместите крышку скольжения на слайд с помощью капли PBS. Поверните к 150x субъективному, и перенесите скольжение к этапу широкоугольного флуоресцентного микроскопа, оснащенного электронной умноженной камерой CCD.Ячейки изображений с использованием канала GFP-LP. Кроме того, проверить поглощение наночастиц в клетки, принимая конфокальные микроскопии изображения с помощью 63x нефтяной цели с численной диафрагмой 1,4. Изображение DiI с использованием аргонового лазера на 514 нанометров и DAPI с использованием двух фотон-лазера на 780 нанометров.Неокрашенные наночастицы фалкариндиола, образую которые образуются в воде и измеряются в PBS, показали высокую полидисперсность, при этом индекс PD составил 0,571. Это значение указывает на широкое и неуниформное распределение размеров частиц. В отличие от этого, липидные наночастицы фалкариндиола, изготовленные в этом видео, были 74,1 нанометров с индексом полидисперсности 0,182, что указывает на относительно монодисперсное и равномерное распределение размеров частиц.В качестве первого наблюдения наночастиц внутри клеток, эпифлуоресценции микроскопии изображения были приобретены после 24 часов лечения. Наночастицы были визуализированы как белые, яркие точки, и можно предположить, что наночастицы были расположены внутри клеток, окружающих ядро. Чтобы убедиться, что фалькариндиол наночастицы вошли в клетки, конфокальные микроскопии была выполнена на клетках, а также.Здесь показано большое количество наночастиц, разбросанных в цитоплазме в каждой клетке. Эти результаты показывают, что наночастицы действуют как стабильная система доставки лекарств для фалкариндиола. При попытке этой процедуры, важно, чтобы придать решение на правильной скорости впрыска, сохраняя посев устойчивый, в центре, чтобы обеспечить надлежащее смешивание.Эта процедура может быть использована для любого гидрофобного препарата, чтобы сформулировать терапевтические наночастицы или для изображений агентов сформулировать диагностические наночастицы, которые могут быть использованы в различных условиях заболевания, таких как рак. Этот метод позволил проработать механизм, с помощью которого наночастицы подхврошяются клетками, а также визуализацию живых клеток и изучить противораковый эффект препарата.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

Использование прав Периваскулярная стволовых клеток для регенерации костной

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Альгината микрокапсулы в качестве 3D-платформа для распространения и дифференциации эмбриональных стволовых клеток человека (чЭСК) для разных линий

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

Развитие, расширение и<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Контроль за соблюдением NK-клетки из человеческих эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

Стволовые Программирование Клетки для терапевтической ангиогенеза Использование биоразлагаемых полимерных наночастиц

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

Ordering Single Cells and Single Embryos in 3D Confinement: A New Device for High Content Screening

Заказ отдельных клеток и Single зародышами в 3D конфайнмента: Новое устройство для высокого содержания скрининга

Biological cells are usually observed on flat (2D) surfaces. This condition is not physiological, and phenotypes and shapes are highly variable. Screening ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on PolyÃƒÅ½Ã‚Âµ-caprolactone Electrospun Yarns

Оптимизация пристрастие к мезенхимальных стволовых клеток человека на поли (ε-капролактон) Electrospun пряжи

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Correlative Light- and Electron Microscopy Using Quantum Dot Nanoparticles

Коррелятивное свето- и электронной микроскопии с помощью Quantum Dot Наночастицы

A method is described whereby quantum dot (QD) nanoparticles can be used for correlative immunocytochemical studies of human pathology tissue using ...

Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Human Alveolar Periosteum and Effects of Vitamin D on Osteogenic Activity of Periosteum-derived Cells

Изоляция мезенхимальных стволовых клеток человека надкостницей альвеолярного и эффекты витамина d на Остеогенные активность клеток, надкостницы, полученных

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the ...

Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining

Масштабируемое поколение зрелых мозжечковых органоидов из плюрипотентных стволовых клеток человека и характеристика иммуностимулированием

The cerebellum plays a critical role in the maintenance of balance and motor coordination, and a functional defect in different cerebellar neurons can ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

Измерение потенциала оптического действия одной клетки в кардиомиоцитах, полученных из человеческих плюрипотентных стволовых клеток

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...