Name: agrobacterium tumefaciens and agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of potato and the promoter activity of a suberin gene by gus staining
Uploaded: 2019-03-29T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining at JoVE.c

هذا العمل كان يدعمها y Innovación دي وزارة العلوم (AGL2009-13745، منحة الاستثمار في الحوافظ المالية للجريدة الرسمية) ص دي وزارة الاقتصاد كومبيتيتيفيداد و FEDER التمويل (AGL2012 36725، AGL2015-67495-C2-1-R) وجامعة جيرونا (منحة الدكتوراه لسادس، ومنحة SING11/1). الكتاب ممتنون للدكتور إنجي شقيق (معهد "استخدام الأراضي"، جامعة روستوك، روستوك، ألمانيا)، والدكتور سالومي برات (Centro ناسيونال دي الفن التكنولوجيا الحيوية، مدريد، إسبانيا) لتوفير رهيزوجينيس (أ) وسلالة توميفاسينس (أ) ، على التوالي، والدكتور مارسال سولير والدكتورة أنا بلاسينثيا للمساعدة والدعم الذي تتلقاه في الشروع في تجارب التحول رهيزوجينيس ألف (جامعة تولوز الثالث بول ساباتييه-يزار، ومختبر البحوث النباتية (لرسف)، كاستانيت التخصص، فرنسا). يشكر المؤلفون سارة غوميز (خلية دي بيولوجيا، UdG، جيرونا) لمساعدتها القيمة في الاضطلاع بالأعمال المختبرية والعناية بالنباتات، وفونتديكابا فيران وكارلا سانشيز الذي ساعد مع بعض التجارب بينما كانوا يفعلون مشاريعها الدرجة النهائية.

بروتوكول التحويل رهيزوجينيس (أ) تم تكييفها وتعديلها من القرن et al.7 وكان النمط الوراثي اختبار ssp البطاطا س. . البطاطا (عام ديزيريه). بروتوكول التحويل A. tumefaciens تم تكييفها وتعديلها من بانيرجي et al.22 والأنماط الجينية اختبار ssp البطاطا س. . البطاطا...

في البطاطا، يستخدم النظام الأكثر شيوعاً للحصول على النباتات المعدلة وراثيا كاملة مستقرة التحول بسلالات tumefaciens المتبعة التي تتطلب أورجانوجينيسيس باستخدام فيتوهورمونيس الخارجية. على الرغم من أن البروتوكولات المتبعة على أساس لديه القدرة على دمج متجه غير-تي-الحمض النووي التسلسل<s...

وبصرف النظر عن الفائدة الاقتصادية، جيل النباتات المعدلة وراثيا وقد أهميته الخاصة في البحث لإظهار وظيفة الجينات في نهاية المطاف، وفهم أفضل لفسيولوجيا النبات والتنمية. الأكثر استخداماً الأسلوب لمصنع الإدراج الحمض النووي هو المتبعة-بوساطة التحويل. Tumefaciens المتبعة قادرة على توليد الصفراوات التاج في الأنسجة المصابة من العديد من الأنواع النباتية بفعل بلازميد (Ti) الأورام المسببة لها. بلازميد يحتوي على منطقة تي-الحمض النووي مع مجموعة من الجينات التي ستدمج في جينوم النبات والحث على الأنسجة ديديفيرينتييشن1،2. أتاح تبادل هذه الجينات داخل تي-الحمض النووي بالتحوير توليد تعديلات محددة مصنع تجنب التأثيرات المظهرية3. تيسيرا للتحوير الاستنساخ في تي-الحمض النووي، وقد تم اقتطعت منطقة تي-دنا في بلازميد مستقل يسمى بلازميد ثنائي، بينما الباقون جينات تي بلازميد (الجينات الفوعة التي تسمح لآليات نقل والإدراج تي-دنا) كانت وضع في بلازميد مساعد. لبحوث التكنولوجيا الحيوية النباتية، التحول من A. tumefaciens مزايا عديدة: لا تحتاج إلى أجهزة مكلفة، وقادرة على توليد تحول المصنع مستقرة وعابرة، وانخفاض عدد الجينات التي يتم دمج النسخ كروموسوم4. ومع ذلك، يتطلب توليد ترانسفورمانتس مستقرة لمعظم النباتات، ولكن لا نبات، تجديد المصنع من واحد أو بعض الخلايا باستخدام فيتوهورمونيس الخارجية، مما يجعل هذه العملية شاقة وتستغرق وقتاً طويلاً. ألف-رهيزوجينيس أيضا قادرة على تعديل جينوم النبات، إنتاج جذور شعر أو جذور العارض في مواقع الإصابة بسبب التعبير عن الجينات رول (الجذر المكاني) المشفرة في بلازميد (Ri) الذي يحفز الجذر5. على الرغم من الدراسة أقل من توميفاسينس أ، رهيزوجينيس أ- يستخدم أيضا للحصول على جذور المحورة وراثيا. في هذه الحالة، يتضمن rhizogenes أ الأصلي تي-الحمض النووي بلازميد Ri وبلازميد ثنائي مع ثانية تي-دنا تحمل التحوير. عندما يكون موقع الإصابة في ينبع أو هيبوكوتيلس، يمكن الحصول مصنع مركبة، مع جذور المعدلة وراثيا شعر الجديدة الناشئة من النوع المتوحش يطلق النار. وبدلاً من ذلك، يمكن أن تنمو جذور تحول شعر مستقلة في المختبر في وسائل الإعلام مع الكربون مصدر المدخلات. استخدام رهيزوجينيس (أ) بدلاً من توميفاسينس (أ) لإنتاج الأنسجة المعدلة وراثيا يكتسب أهمية عند الجذر هو الجهاز المستهدف، لأن تجديد مصنع غير مطلوب ومن ثم أنها أسرع وأقل تكلفة. وقد أثبتت الدراسات السابقة هذه المنهجية المعتمدة لتوصيف المظهرية الجذر جينات محددة6،7،،من89.
البطاطس (البطاطا) هو رابع أهم محصول في العالم وفقا منظمة الأغذية والزراعة "الأمم المتحدة" (الفاو) منذ الدرنة أهميتها الغذائية للاستهلاك البشري لكونها مصدر جيد للفيتامينات والمعادن. ولهذا السبب، تم وضع في دائرة الضوء للتكنولوجيا الحيوية الزراعية البطاطا ويعتبر أيضا كنموذج جيد بيولوجية الجينية والتنموية الدراسات10،11. تحويل البطاطا ساهم مساهمة كبيرة في فهم الآليات الجزيئية الأنسجة سوبيريزيد الكامنة من خلال وصف الجينات المعنية صابرين والشمع الحيوي12،13،14 15، ،،من1617، النقل مونومر صابرين18 والنسخ البند19. صابرين فيرولويل ترانسفيراز الجينات، فهت، واحد من هذه الجينات السكروز تتسم؛ أن downregulation تثير ضعف قوية للحماية من بيريديرم، الذي يرتبط مع انخفاض قوي في اﻻسترات فيرولاتي من صابرين والشموع في البطاطا الدرنات14. في الوقت ذاته، أن الضربة القاضية لما أورثولوجوي المفترضة (أسفت/RWP1) في جذور وبذور نبات، أظهرت أيضا دورها في إنتاج الألكيل فيرولاتيس في سوبيرين،من2021. في البطاطا، الخط النسخي مراسل فهت وجسم فهت أظهرت على التوالي أن نشاط المروج والبروتين تقع في اكسوديرميس، endodermis، فيلوجين-المشتقات والأنسجة جرح15.
في هذا العمل، نحن التفصيل بروتوكول باستخدام رهيزوجينيس (أ) لإنتاج جذور شعر المعدلة وراثيا التي يتم الاحتفاظ بها في تبادل لإطلاق النار نوع البرية أو توليد نباتات البطاطا المركب اقتطعت لتنمو بصورة مستقلة في المختبر. كما أننا نقدم البروتوكول استخدام A. tumefaciens للحصول على نباتات كاملة من البطاطا المعدلة وراثيا. كدراسة حالة، تستخدم rhizogenes ألف و A. tumefaciens تحول مع ناقل ثنائي نفس الحصول على الجذور مع المروج فهت قيادة غوس مراسل الجينات. وأفادت النتائج ومقارنة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:559px;" width="559">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Acetone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1.310.071.21
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Acetosyringone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Acros
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			115540050
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Aquarium pump
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Prodac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			MP350
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Autoclave
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Ragpa Strelimatic
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Bacteriological agar
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1800
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			BAP
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			B0904
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:20px;">
			Beef extract
			</td>
			<td style="width:161px;height:20px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:20px;">
			1700
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:20px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Plant growing cabinet
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Nuaire
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Carbenicillin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			C0109
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Cefotaxime sodium
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			C0111
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			DMSO
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Merck
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1029310161
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ecotron infors
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			HT
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			29378
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ethanol
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Merck
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1,009,831,011
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Falcon tube
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Control tecnica
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			CFT011500
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ferricyanate
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			101001081
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ferrocyanate
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			100979088
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:63px;">
			Flask (8.06 cm diameter and 11.3 cm height) and plastic lid for in vitro culture
			</td>
			<td style="width:161px;height:63px;">
			Apiglass
			</td>
			<td style="width:101px;height:63px;">
			ref16
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:63px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			GA3
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G7645
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Gamborg B5 media
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G0210
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Gelrite
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G1101
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Glucosa
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G5767
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Kanamycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			K1377
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Leukopor tape
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			BSN Leukopor
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			BDF47467
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Lupe
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Wild-Heerbrugg
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			M420
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Magnetic shaker
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Agimatic
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			7000243
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			MES hydrate
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			M2933-25G
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			MgSO4
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			131404
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Microscope
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Olympus
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Minufugue centrifugue 5415R
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Eppendorf
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Murashige and Skoog media
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			M0254.0050
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Na2HPO4
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			131679
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NAA
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			N0903
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NaCl
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			131659
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NaH2PO4
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			58282
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NightSea Stereo
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			SFA Moonting Adapter
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Parafilm
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Anorsa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			PRFL-001-001
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Peptone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1616
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Petri dishes (90 x 14)
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Anorsa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			200200
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			pHmetre
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Crison
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Phytotron
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Inkoa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			RFTI-R5485
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Plant Agar
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			P1001
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Refrigeratot
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Liebherr Medline
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Rifampicin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			R0146
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Spectinomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			59007
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Spectrophotometer
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Shimadzu
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Square plates (120 x 120)
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Deltalab
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			200204
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Streptomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			S6501
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:22px;">
			Sucrose
			</td>
			<td style="width:161px;height:22px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:22px;">
			131621
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:22px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Surgical blades
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Swann-Morton
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			201
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Surgical needle
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			NIPRO
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			015/0204
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Triptone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1612
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Triton
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Serva
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			37240
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Unimax 1010 shaker
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Heidolph
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Vacuum
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Dinko
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:63px;">
			x-GlcA (5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronic acid, sodium salt anhydrous)
			</td>
			<td style="width:161px;height:63px;">
			Biosynth
			</td>
			<td style="width:101px;height:63px;">
			B-7398
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:63px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Yeast extract
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1702.00
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Zeatin riboside
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1001042850
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

agrobacterium tumefaciens and agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of potato and the promoter activity of a suberin gene by gus staining

Sp. المتبعة إحدى الطرق الأكثر استخداماً للحصول على النباتات المعدلة وراثيا، كما أن لديها القدرة على نقل وإدماج الخاصة تي-الدنا في الجينوم المصنع. هنا، نحن نقدم اثنين من أنظمة التحويل تعديلها وراثيا نباتات البطاطس (البطاطا). في تحول A. tumefaciens ، مصابون بأوراق ويتم تحديد الخلايا المحولة ويتم إعادة إنشاء محطة جديدة لتحول كاملة باستخدام فيتوهورمونيس في 18 أسبوعا. في رهيزوجينيس (أ) التحول، مصابون ينبع عن طريق حقن البكتيريا بإبرة وجذور شعر تحول ظهرت جديدة يتم الكشف عنها باستخدام علامة نيون أحمر وتتم إزالة جذور عدم تحويلها. في 5-6 أسابيع، المصنع الناتجة مركب من نوع البرية تبادل لإطلاق النار مع جذور شعر تحول نمواً كاملا. يمكن لزيادة الكتلة الأحيائية، اقتطعت جذور شعر محولة والذاتي نشر. ونحن تطبيق كلا التحول الأساليب المتبعة-بوساطة للحصول على جذور التعبير عن الجينات مراسل غوس يقودها أحد المروجين جينات السكروز صابرين. يرد الإجراء المصبوغة غوس ويسمح التعريب خلية التعريفي المروج. في كلتا الطريقتين، أظهرت أن جذور البطاطا تحول غوس تلطيخ في endodermis سوبيريزيد واكسوديرميس، بالإضافة إلى ذلك، في جذور رهيزوجينيس (أ) تحول النشاط غوس اكتشفت أيضا في ظهور الجذور الجانبية. وتوحي هذه النتائج أن رهيزوجينيس أ- يمكن أن تكون أداة سريعة بديلة لدراسة الجينات التي يتم التعبير عنها في جذور.

رهيزوجينيس المتبعة -بوساطة تحويل البطاطا
ويرد في هذه المخطوطة، الإجراء خطوة بخطوة للحصول على الجذر المحولة مع رهيزوجينيس أ . الشكل 1 نظرة عامة من الإجراءات، التي تحيط بالإجمال حوالي 5-6 أسابيع (?...

Watch this Scientific Journal Video about Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining at JoVE.c

Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining

توميفاسينس المتبعة و rhizogenes المتبعة-بوساطة التحول من البطاطا ونشاط المروج الجين صابرين ب Staining غوس

وهنا، نقدم البروتوكولين الملحقين بتحويل نباتات البطاطا. تحويل tumefaciens المتبعة يؤدي إلى مصنع وراثيا كاملة في حين rhizogenes المتبعة تنتج جذور شعر المعدلة وراثيا في تبادل لإطلاق النار نوع البرية يمكن أن منشور ذاتيا. ثم يمكننا الكشف عن نشاط المروج غوس تلطيخ في جذور محولة.

Agrobacterium sp. is one of the most widely used methods to obtain transgenic plants as it has the ability to transfer and integrate its own T-DNA into ...

التحول بوساطة البكتيريا الزراعية هو وسيلة سهلة لإنتاج نباتات البطاطا المعدلة وراثيا. من أجل فهم وظائف الجينات محددة ومساهمتها في فسيولوجيا الجهاز. التحول بواسطة رهيزوجنات البكتيريا الزراعية هو أداة قوية لتقييم الجذور التي تعمل الجينات بسرعة، كما يمكن الحصول على نتائج مماثلة عن طريق التحول الزراعية tumefaciens.إثبات هذا الإجراء سيكون ساندرا فرنانديز بينان، وهي ما بعد الطبيب، وجنيفر لوبيز، طالبة maste5r من مختبرنا. تبدأ من خلال زراعة مستعمرة واحدة البكتيريا الزراعية بين عشية وضحاها في خمسة ملليلتر من مرق استخراج الخميرة، أو YEB المتوسطة، وتستكمل مع المضادات الحيوية في أنبوب الطرد المركزي 50 ملليلتر في 28 درجة مئوية، في 200 التناوب في الدقيقة الواحدة. لتحويل tumefaciens، وقياس الكثافة البصرية في صباح اليوم التالي.عندما تصل الكثافة البصرية في 600 نانومتر، أو OD 600 0.6 إلى واحد، الطرد المركزي ملليلتر واحد من ثقافة البكتيريا الزراعية وإعادة تثبيت بيليه في ملليلتر واحد من YEB المتوسطة الطازجة دون المضادات الحيوية. بعد الغسيل الثاني، resuspend بيليه في YEB المتوسطة الطازجة دون المضادات الحيوية، إلى التركيز المناسب للحصول على OD النهائي 600 من 0.8، ووضع الخلايا البكتيرية على الجليد. لتحويل النباتات باستخدام A.rhizogenes، نقل بعناية نبات المانحة من ثقافة متوسطة 2MS إلى 120 في 120 ملليمتر لوحة مربعة، واستخدام إبرة جراحية لحقن ثلاثة ميكرولترات من ثقافة A.rhyzogenes إلى معتقلين الجذعية المختلفة ممكن.ثم نقل فورا المصنع بأكمله إلى لوحة مربعة جديدة تحتوي على صلبة MS المتوسطة، تستكمل مع acetosyringone 0.1 ميليمولار. بعد وضع مصنع ثان على نفس لوحة، تحولت في نفس الطريقة، وختم لوحة مع الشريط الجراحي، ووضع لوحة عموديا داخل خزانة النمو لمدة أربعة أيام. نقل النبات إلى لوحة مربعة مع MS المتوسطة تكملها الصوديوم cefotaxime لقتل A.rhizogenes ووضع لوحة مختومة عموديا داخل مجلس الوزراء النمو لمدة أربعة أيام.بعد 10 إلى 12 يوما، سوف تظهر جذور جديدة مشعر. ويمكن تأكيد تحولها عن طريق المجهر ستيريو الفلورسنت. في هذا الوقت، مكوس الجذور الأصلية لكل نبات، ونقل النباتات إلى لوحة مربعة جديدة مع المتوسطة MS، تستكمل مع الصوديوم cefotaxime لقتل A.rhizogenes.للحصول على نبات مركب، والسماح للجذور المشعرة المعدلة وراثيا تنمو لمدة ثلاثة إلى أربعة أسابيع أخرى في المتوسط MS، تستكمل مع الصوديوم سيفوتاكسيم. لتحويل النباتات باستخدام A.tumefaciens. قطع ووضع ورقة من نبات من ثلاثة إلى أربعة أسابيع القديمة في طبق بتري، واستخدام مشرط لجعل واحد إلى ثلاثة تخفيضات عرضية من وسط ورقة إلى حواف دون قطع قطع من ورقة.واستبعاد petiole. ضع على الفور ورقة في طبق بتري تحتوي على 10 ملليلتر من 2MS السائلة الطازجة المتوسطة، الجانب abaxial حتى، وتغطية لوحة. بسرعة إضافة 80 ميكرولتررس من ثقافة A.tumefaciens إلى المتوسطة السائلة وتحريك بلطف المتوسطة لمدة دقيقة واحدة لتوزيع المحلول البكتيري بشكل متجانس.ثم ختم بعناية وتغطية لوحة مع رقائق الألومنيوم لاحتضان لمدة يومين في غرفة 24 درجة مئوية. في نهاية فترة التحول، نقل الأوراق abaxial الجانب حتى، إلى المتوسطة القاسية المحفزة، كشط مع ملاقط لاحتضان لمدة أسبوع واحد في مجلس الوزراء النمو. في نهاية الحضانة، ونقل الأوراق، و abaxial الجانب حتى، على تبادل لاطلاق النار الملتزر كشط الحث المتوسطة، واحتضان الأوراق في مجلس الوزراء النمو.عندما تكون الزلقان ظهرت حوالي سنتيمترين، وقطع ثلاثة المزالق الناشئة من كل قاسية. ضع ما يصل إلى خمسة أحداث تحويل مظلة مختلفة في قارورة الثقافة الفردية التي تحتوي على قارورة MG المتوسطة المكملة مع الصوديوم cefotaxime للسماح بالتأصيل ، وتسمية المجموعة الفرعية حسب الاقتضاء لاحتضان لمدة ثلاثة إلى أربعة أسابيع في مجلس الوزراء النمو حتى تصبح المزلق قوية. في نهاية الحضانة، حدد المصنع الأكثر قوة من كل حدث، وقطع شرائح من المزلقة مع ثلاثة إلى أربعة internodes من كل مصنع.ضع الأجزاء في قارورة ثقافية تحتوي على 2MS المتوسطة المكملة مع الصوديوم cefotaxime وتنمو النباتات حتى أنها تطوير المزالق القوية والجذور. لأداء بيتا جلوكرونيديز أو GUS مقايسة الجينات مراسل الهيستوكيميائية, إصلاح الجذور من اثنين إلى ثلاثة أسابيع في زرع النبات في المختبر مع 90٪ الأسيتون المبردة لمدة 20 دقيقة على الجليد. في نهاية التثبيت، وغسل جذور مرتين في الماء المقطر وعلاج الجذور مع حل تلطيخ GUS الطازجة تحت فراغ لمدة 20 دقيقة.في نهاية العلاج الفراغي، ضع الجذور عند 37 درجة مئوية في الظلام لمدة أربع ساعات. عندما يكون اللون الأزرق مرئيًا، قم بغسل الجذور مرتين بنسبة 70٪ من الإيثانول، وتصور تلطيخ تحت مجهر ميداني مشرق. تظهر الجذور المشعرة المتحولة فلورانس أحمر عندما تضاء بالضوء الأخضر ، في حين أن السيطرة السلبية على البكتيريا الزراعية غير المُنقلة لا تظهر أي فلورانس من هذا القبيل ، مما يشير إلى ملاءمة علامة التحول الحمراء DS لتحديد الجذور المشعرة المعدلة وراثيا.هنا ، يتم عرض تلطيخ GUS في جذور النباتات المعدلة وراثيا التي تم الحصول عليها من قبل A.tumefaciens والجذور المشعرة المعدلة وراثيا التي حصلت عليها A.rhizogenes. كما لوحظ، والجذور تحولت مع A، tumefaciens ونمت في المختبر، وإظهار تلطيخ الأزرق في endodermis، طبقة الخلية بين القشرة و stele. في جذور أكثر تطورا، ووضع العلامات الزرقاء غير مكتمل في الطبقة الخارجية، المقابلة ل exodermis.في جذور مشعر متحولة التي حصلت عليها A.rhizogenes، ونمت في الزراعة المائية، وتقع علامة GUS على وجه التحديد داخل endodermis في ظهور جذور جانبية في المناطق الجرحى وفي exodermis. بالإضافة إلى كونها طريقة سريعة ، فإن الجذور المعدلة وراثيا التي تم الحصول عليها مع ريزوجينيات البكتيريا الزراعية حملت أيضًا الحمض النووي من البلازميد المسبب للجذور ، والتي قد تحرر بعض العمليات التي يتم التحكم فيها مباشرة. ويمكن الحفاظ على جذور الشعر المعدلة وراثيا التي تم الحصول عليها مع رهيزوجنات البكتيريا الزراعية أثناء تبادل لاطلاق النار، ولكن بدلا من ذلك يمكن أن تكون في الموقع حتى نشرها في المختبر لإنتاج العبور ضخمة.ويوفر تحول البطاطا أداة جيدة للتحقق من وظيفة الجينات وتنشيط المروج، وكذلك لإنتاج قواعد منهجية في نوع من الاهتمام الزراعي العالي. وينبغي التخلص من الكائن المحور وراثياً بأمان بعد استخدامه لتجنب التلوث البيئي. أيضا، يحتوي محلول الغاز على مشتق السيانيد السام، لذلك ارتداء الحماية والتخلص من الحل بأمان.

Research

JoVE Journal

Environment

Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

تقرير من خارج الخلية الميكروبية نشاط انزيم في المياه، والتربة، والرواسب باستخدام إنتاجية عالية صفيحة ميكروسكوبية فحوصات

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

الأمثل تلطيخ سلبي: بروتوكول عالية الإنتاجية للدراسة صغيرة وغير المتناظر هيكل البروتين بواسطة المجهر الإلكتروني

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

Transient Gene Expression in Tobacco using Gibson Assembly and the Gene Gun

عابر التعبير الجيني في التبغ باستخدام الجمعية جيبسون وجين غون

In order to target a single protein to multiple subcellular organelles, plants typically duplicate the relevant genes, and express each gene separately ...

Design and Construction of an Urban Runoff Research Facility

تصميم وبناء منشأة أبحاث الجريان السطحي في المناطق الحضرية

As the urban population increases, so does the area of irrigated urban landscape. Summer water use in urban areas can be 2-3x winter base line water use ...

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

مختبر الأحيائي تغذية الأسماك لتقييم آخر Antipredatory من المركبات الثانوية من الأنسجة من الكائنات البحرية

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

EPA الطريقة 1615. قياس الفيروسة المعوية ونوروفيروس التواجد في المياه عن طريق الثقافة وRT-QPCR. الجزء الثالث. كشف الفيروس عن طريق RT-QPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

Spotting Cheetahs: Identifying Individuals by Their Footprints

اكتشاف الفهود: الأفراد تحديد من آثارهم

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

الحمض النووي الريبي في وقت واحد استخراج من الرواسب الساحلية والكمي ل16S الجينات الريباسي والنصوص التي في الوقت الحقيقي PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Empirical, Metagenomic, and Computational Techniques Illuminate the Mechanisms by which Fungicides Compromise Bee Health

التجريبية ومواد وتقنيات حسابية إلقاء الضوء على الآليات "مبيدات الفطريات وسط النحل الصحية"

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered ...

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

أوزة إيمبروفيسوس بالانوس "نموذج البحرية"-استزراع و "التعبير الجيني"

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...