Name: agrobacterium tumefaciens and agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of potato and the promoter activity of a suberin gene by gus staining
Uploaded: 2019-03-29T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining at JoVE.c

עבודה זו נתמכה על ידי y Ministerio דה Innovación Ciencia (AGL2009-13745, FPI מענק PB), Ministerio דה Economía y Competitividad פדר מימון (AGL2012-36725, AGL2015-67495-C2-1-R), ואת אוניברסיטת ז'ירונה (PhD גרנט SF, גרנט SING11/1). המחברים מודים Inge ד ר ברואר (המכון לחקר שימושי קרקע, באוניברסיטת רוסטוק, רוסטוק, גרמניה), ד ר Salomé פרת (Centro נאסיונאל דה Biotecnología, מדריד, ספרד) למתן את rhizogenes א ואת המתח tumefaciens א , בהתאמה, ד ר מקסים סולר ואת ד ר אנה פלסנסיה בעזרה ותמיכה קיבל ב ייזום הניסויים טרנספורמציה rhizogenes א (Toulouse השלישי פול סבטייה אוניברסיטת — CNRS, צמח מחקר מעבדה (LRSV), Castanet Tolosan, צרפת). המחברים תודה שרה גומז (Departament de Biologia, UdG, גירונה) שלה סיוע חשוב בביצוע העבודה מעבדה, מטפל של צמחים, ואת Ferran Fontdecaba Sánchez קרלה שעזר בחלק מהניסויים בעוד הם עושים הפרויקטים התואר הסופי שלהם.

פרוטוקול טרנספורמציה rhizogenes א הותאם ושינית קרן ואח7 והיה גנוטיפ נבדק ssp יכולת להתקשר אלי ס . יכולת להתקשר אלי (cv. דזירה). פרוטוקול טרנספורמציה tumefaciens א היה הותאם שונה בנרג'י ואח22 ו אחרים שנבדקו היו יכולת להתקשר אלי ס ssp. יכולת להתקשר אלי (cv....

תפוחי אדמה, המערכת השכיחה ביותר להשגת יציבה הצמחים הטרנסגניים מלאה משתמשת הטרנספורמציה על ידי זנים Agrobacterium tumefaciens הדורשים organogenesis באמצעות phytohormones אקסוגני. למרות שהפרוטוקולים Agrobacterium מבוסס יש פוטנציאל להשתלב וקטור הלא-T-DNA רצף25, מתודולוגיה זו זמינה עדיין הכי קל ופחות ?...

מלבד האינטרס הכלכלי, הדור של הצמחים הטרנסגניים כולל הרלוונטיות שלה במחקר כדי להדגים את הפונקציה האולטימטיבי של גנים, להבין טוב יותר את פיזיולוגיה של הצמח ופיתוח. הנפוצים ביותר שיטה עבור צמח DNA ההכנסה הוא Agrobacterium-מתווכת טרנספורמציה. Agrobacterium tumefaciens הוא מסוגל לייצר עפצים הכתר הרקמה הנגועה מיני צמחים רבים על ידי הפעולה של שלה פלסמיד (Ti) בתדר הגידול. פלסמיד מכיל אזור T-DNA עם קבוצה של גנים אשר ניתן לשלב הגנום צמח, זירוז רקמת dedifferentiation1,2. ההחלפה של גנים אלה בתוך T-DNA על ידי transgene אפשרה את הדור של שינויים צמח מסוים הימנעות אפקטים פנוטיפי3. כדי להקל את transgene שיבוט לתוך T-DNA, האזור T-DNA יש כבר חתכתם ב פלסמיד עצמאי הנקרא פלסמיד בינארי, בעוד ששאר הגנים של פלסמיד Ti (הגנים התקפה אלימה לאפשר את מנגנוני העברת והוספה של T-DNA) היה להציב אותם פלסמיד המסייע. לחקר הביוטכנולוגיה צמח, שינוי על-ידי tumefaciens א יש מספר יתרונות: זה אינו צריך מכשירים יקרים, הוא מסוגל לייצר טרנספורמציה צמח ארעית ויציבה, והן מספר נמוך של ג'ין עותקים משולבים כרומוזום4. עם זאת, רוב הצמחים, אבל לא תודרנית, הדור של transformants יציב דורשת התחדשות הצמח בודד או מספר תאים באמצעות phytohormones אקסוגני, ביצוע תהליך זה מפרך וצורכת זמן. Rhizogenes א הוא גם מסוגל לשנות את הגנום צמח, בהפקת שורשים שעירים או שורשים adventitious באתרים זיהום עקב הביטוי של גנים rol ( לוקוסיםכבסיס) המקודדת בתדר שורש (Ri) פלסמיד5. למרות פחות למד יותר tumefaciens א, א rhizogenes משמש גם לקבלת הטרנסגניים שורשים. במקרה זה, rhizogenes א מכיל את המקורי T-DNA על פלסמיד רי ו פלסמיד בינארי עם השנייה T-DNA נושא את transgene. כאשר האתר זיהום גבעולים או hypocotyls, צמח מורכב ניתן להשיג, עם שורשים חדשים שעיר הטרנסגניים הבוקע פראי סוג יורה. לחלופין, שורשים טרנספורמציה שעיר יכול לגדול באופן עצמאי במבחנה בתקשורת עם כניסות מקור פחמן. השימוש rhizogenes א במקום tumefaciens א כדי לייצר רקמות הטרנסגניים הוא צובר רלוונטיות כאשר הבסיס הוא איבר המטרה, כי התחדשות הצמח לא נדרש, מכאן זה יותר מהר ויקרות פחות. מחקרים קודמים הדגימו מתודולוגיה זו הופקעו עבור אפיון פנוטיפי שורש גנים ספציפיים6,7,8,9.
תפוחי האדמה (יכולת להתקשר אלי סולנום) הוא היבול הרביעי החשוב ביותר בעולם על פי המזון והחקלאות של האו ם (FAO) מאז פקעת יש רלוונטיות התזונתיות לצריכה אנושית על היותך מקור טוב של ויטמינים ומינרלים. מסיבה זו, תפוחי אדמה מוקם באור הזרקורים של ביוטכנולוגיה חקלאית, ונחשב גם כמו מודל ביולוגיים גנטיים, התפתחותית מחקרים10,11. תפוחי אדמה טרנספורמציה תרמה בצורה משמעותית להבנת המנגנונים המולקולריים שבבסיס הרקמות suberized דרך אפיון גנים המעורבים suberin, שעווה ביוסינטזה12,13,14 ,15,16,17, suberin מונומר התחבורה18 ו שעתוק בתקנה19. Suberin feruloyl טרנספראז הגן, לריב, הוא אחד הגנים biosynthetic הוחלף נגזר מאופיין האלה; downregulation שלה מעורר ליקוי חזקה של ההגנה periderm, אשר הוא מתואם עם ירידה חזקה אסטרים ferulate של suberin, שעוות פקעות תפו א14. / ת, שורשים, זרעים של תודרנית, הסתרה באמצעות של שלו בשם orthologue (ASFT/RWP1) הפגינו גם תפקידה בהפקת אלקיל ferulates20,suberin21. תפוחי אדמה, הקו כתב תעתיק לריב , הנוגדן לריב הראה בהתאמה כי הפעילות יזם החלבון נמצאים את exodermis, endodermis, phellogen-הנגזרים, רקמות הפצועים15.
בעבודה זו, אנחנו פירוט נוהל באמצעות rhizogenes א כדי לייצר שורשים שעירים הטרנסגניים נשמרים ביורה פראי סוג, תפוחי אדמה ללא הפרדות צבע מפעלים לייצור או טוחנות לגדול באופן עצמאי בתוך חוץ גופית. אנו מספקים גם את הפרוטוקול באמצעות tumefaciens א כדי לקבל תפוחי אדמה הטרנסגניים מלאה צמחים. כמקרה, rhizogenes א tumefaciens א טרנספורמציה עם וקטור בינארי זהה משמשים להשגת שורשים עם האמרגן לריב נהיגה גאס כתב גנים. התוצאות שדווחו, בהשוואה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:559px;" width="559">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Acetone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1.310.071.21
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Acetosyringone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Acros
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			115540050
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Aquarium pump
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Prodac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			MP350
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Autoclave
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Ragpa Strelimatic
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Bacteriological agar
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1800
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			BAP
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			B0904
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:20px;">
			Beef extract
			</td>
			<td style="width:161px;height:20px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:20px;">
			1700
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:20px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Plant growing cabinet
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Nuaire
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Carbenicillin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			C0109
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Cefotaxime sodium
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			C0111
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			DMSO
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Merck
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1029310161
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ecotron infors
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			HT
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			29378
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ethanol
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Merck
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1,009,831,011
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Falcon tube
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Control tecnica
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			CFT011500
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ferricyanate
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			101001081
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Ferrocyanate
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			100979088
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:63px;">
			Flask (8.06 cm diameter and 11.3 cm height) and plastic lid for in vitro culture
			</td>
			<td style="width:161px;height:63px;">
			Apiglass
			</td>
			<td style="width:101px;height:63px;">
			ref16
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:63px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			GA3
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G7645
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Gamborg B5 media
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G0210
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Gelrite
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G1101
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Glucosa
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			G5767
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Kanamycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			K1377
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Leukopor tape
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			BSN Leukopor
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			BDF47467
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Lupe
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Wild-Heerbrugg
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			M420
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Magnetic shaker
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Agimatic
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			7000243
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			MES hydrate
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			M2933-25G
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			MgSO4
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			131404
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Microscope
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Olympus
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Minufugue centrifugue 5415R
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Eppendorf
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Murashige and Skoog media
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			M0254.0050
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Na2HPO4
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			131679
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NAA
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			N0903
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NaCl
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			131659
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NaH2PO4
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			58282
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			NightSea Stereo
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			SFA Moonting Adapter
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Parafilm
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Anorsa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			PRFL-001-001
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Peptone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1616
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Petri dishes (90 x 14)
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Anorsa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			200200
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			pHmetre
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Crison
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Phytotron
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Inkoa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			RFTI-R5485
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Plant Agar
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			P1001
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Refrigeratot
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Liebherr Medline
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Rifampicin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Duchefa
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			R0146
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Spectinomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			59007
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Spectrophotometer
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Shimadzu
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Square plates (120 x 120)
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Deltalab
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			200204
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Streptomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			S6501
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:22px;">
			Sucrose
			</td>
			<td style="width:161px;height:22px;">
			Panreac
			</td>
			<td style="width:101px;height:22px;">
			131621
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:22px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Surgical blades
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Swann-Morton
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			201
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Surgical needle
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			NIPRO
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			015/0204
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Triptone
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1612
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Triton
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Serva
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			37240
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Unimax 1010 shaker
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Heidolph
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Vacuum
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Dinko
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:63px;">
			x-GlcA (5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-glucuronic acid, sodium salt anhydrous)
			</td>
			<td style="width:161px;height:63px;">
			Biosynth
			</td>
			<td style="width:101px;height:63px;">
			B-7398
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:63px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Yeast extract
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Lab Conda
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1702.00
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:216px;height:21px;">
			Zeatin riboside
			</td>
			<td style="width:161px;height:21px;">
			Sigma
			</td>
			<td style="width:101px;height:21px;">
			1001042850
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:80px;height:21px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

agrobacterium tumefaciens and agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of potato and the promoter activity of a suberin gene by gus staining

Agrobacterium sp. הוא אחד מהשיטות הנפוצה ביותר כדי להשיג את הצמחים הטרנסגניים כפי זה יש את היכולת להעביר ולשלב משלו-T-DNA הגנום של הצמח. כאן, אנו מציגים שתי מערכות טרנספורמציה לשינוי גנטית צמחים תפוחי אדמה (סולנום יכולת להתקשר אלי). בשינוי tumefaciens א , עלים נגועים, התאים טרנספורמציה נבחרו, מפעל חדש טרנספורמציה מוחלטת נוצר מחדש באמצעות phytohormones ב- 18 שבועות. בשינוי rhizogenes א , נובעת נגועים על ידי הזרקת החיידקים עם מחט, חדשים המתגלים טרנספורמציה שעיר השורשים מזוהים באמצעות סמן ניאון אדום, השורשים הלא-טרנספורמציה יוסרו. ב- 5-6 שבועות, המפעל וכתוצאה מכך הוא שילוב של צילומים פראי סוג עם שורשים שעירים טרנספורמציה מפותחת. להגברת ביומסה, שורשים שעירים טרנספורמציה יכול להיות טוחנות, מופצות עצמית. אנחנו מוחלים הן Agrobacterium -מתווכת שינוי שיטות להשגת שורשים לבטא את גן מדווח גאס מונחה על ידי יזם ג'ין biosynthetic הוחלף נגזר suberin. ההליך מכתימים גאס מסופק ומאפשר תא לוקליזציה של אינדוקציה יזם. שתי השיטות, הראו השורשים תפוחי אדמה טרנספורמציה מכתים suberized endodermis, exodermis, ובנוסף, בשורשים rhizogenes א הפכה הפעילות גאס גאס זוהה גם הופעתה של השורשים הצדדיים. תוצאות אלו מראים כי rhizogenes א יכול להיות כלי אלטרנטיבי מהר ללמוד הגנים מבוטאים שורשים.

Agrobacterium rhizogenes -מתווכת תפוחי אדמה טרנספורמציה
כתב יד זה, מוצג התהליך צעד אחר צעד כדי להשיג root טרנספורמציה עם rhizogenes א . איור 1 מציג סקירה של ההליך, אשר בסך הכל לוקח כ 5-6 שבועות (מתוך הזרקה של rhizogenes ?...

Watch this Scientific Journal Video about Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining at JoVE.c

Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining

Agrobacterium tumefaciens , Agrobacterium rhizogenes-מתווכת טרנספורמציה של תפוחי אדמה, יזם פעילות של גן Suberin על ידי גאס Staining

כאן, אנו מציגים שני פרוטוקולים להפוך את תפוחי האדמה צמחים. הטרנספורמציה Agrobacterium tumefaciens מוביל צמח מהונדס מלאה בעוד Agrobacterium rhizogenes מייצרת הטרנסגניים שורשים שעירים יורה פראי סוג זה יכול להיות עצמי שעבר בירושה. אנחנו מכן לזהות יזם פעילות על-ידי גאס צביעת שורשים טרנספורמציה.

Agrobacterium sp. is one of the most widely used methods to obtain transgenic plants as it has the ability to transfer and integrate its own T-DNA into ...

השינוי התווך בגרובקטריום הוא שיטה קלה לייצור צמחי תפוחי אדמה מהונדסים גנטית. על מנת להבין תפקודי גנים ספציפיים ותרומתם לפיזיולוגיה של האיברים. טרנספורמציה על ידי רזוגנים אגרובקטריום הוא כלי חזק להערכת במהירות שורשים תפקוד גנים, כמו תוצאות דומות ניתן להשיג על ידי טרנספורמציה tumefaciens אגרובקטריום.הדגימו את ההליך הזה יהיו סנדרה פרננדז-פינן, פוסט-דוק, וג'ניפר לופז, סטודנטית של maste5r מהמעבדה שלנו. התחל בגידול מושבת אגרובקטריום אחת בן לילה בחמישה מיליליטר של מרק תמצית שמרים, או בינוני YEB, בתוספת אנטיביוטיקה בצינור צנטריפוגה 50 מיליליטר ב 28 מעלות צלזיוס, ב 200 סיבובים לדקה. לטרנספורמציה א-tumefaciens, למדוד את הצפיפות האופטית למחרת בבוקר.כאשר הצפיפות האופטית ב 600 ננומטר, או OD 600 מגיע 0.6 לאחד, צנטריפוגה מיליליטר אחד של תרבות האגרובקטריום resuspend את גלולה במיליליטר אחד של מדיום YEB טרי ללא אנטיביוטיקה. לאחר הכביסה השנייה, יש להשתמש מחדש את גלולה במדיום YEB טרי ללא אנטיביוטיקה, לריכוז המתאים כדי לקבל OD סופי 600 של 0.8, ולמקם את התאים החיידקיים על קרח. עבור טרנספורמציה צמחית באמצעות A.rhizogenes, בזהירות להעביר צמח תורם מתרבות בינונית 2MS ל 120 על ידי 120 מילימטרים צלחת מרובעת, ולהשתמש מחט כירורגית להזריק שלושה microliters מתרבות A.rhyzogenes ל internodes גזע שונים ככל האפשר.לאחר מכן מיד להעביר את הצמח כולו לצלחת מרובעת חדשה המכילה מדיום MS מוצק, בתוספת 0.1 מילימולר אצטוסירינגון. לאחר הנחת צמח שני על אותה צלחת, הפך באותו אופן, לאטום את הצלחת עם סרט כירורגי, ומניחים את הצלחת אנכית בתוך ארון צמיחה במשך ארבעה ימים. מעבירים את הצמח לצלחת מרובעת עם מדיום MS בתוספת נתרן cefotaxime להרוג את A.rhizogenes ולהמקם את הצלחת אטומה אנכית בתוך ארון צמיחה במשך ארבעה ימים.לאחר 10 עד 12 ימים, שורשים שעיר חדש יופיע. השינוי שלהם יכול להיות מאושר על ידי מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי. בשלב זה, excise השורשים המקומיים של כל צמח, ולהעביר את הצמחים לצלחת מרובעת חדשה עם מדיום MS, בתוספת נתרן cefotaxime להרוג את A.rhizogenes.כדי להשיג צמח מרוכב, תן שורשים שעיר מהונדס לגדול עוד שלושה עד ארבעה שבועות במדיום MS, בתוספת נתרן cefotaxime. לשינוי צמחים באמצעות A.tumefaciens. חותכים ומ מניחים עלה מצמח בן שלושה עד ארבעה שבועות בצלחת פטרי, ולהשתמש באזמל לעשות אחד עד שלושה חתכים רוחביים ממרכז העלה לקצוות מבלי לחתוך את חתיכות העלה.ולהוציא את הפטיול. מיד מניחים את העלה לתוך צלחת פטרי המכיל 10 מיליליטר של טרי 2MS נוזלי בינוני, צד abaxial למעלה, ולכסות את הצלחת. מוסיפים במהירות 80 מיקרוליטרים של תרבות ה-A.tumefaciens למדיום הנוזלי ומערבבים בעדינות את המדיום במשך דקה אחת כדי להפיץ הומוגנית את הפתרון החיידקי.לאחר מכן לאטום בזהירות ולכסות את הצלחת עם רדיד אלומיניום עבור דגירה של יומיים בתא 24 מעלות צלזיוס. בתום תקופת הטרנספורמציה, מעבירים את העלים לצד העבקסיאלי למעלה, למדיום הנודע, מגרדים פינצטה עבור דגירה של שבוע בקבינט הצמיחה. בסוף הדגירה, להעביר את העלים, בצד abaxial למעלה, על פינצטה גירד לירות גרימת בינוני, ודגירה העלים בקבינט צמיחה.כאשר המצנחים הגיחים הם בגובה של כשני ס"מ, חותכים שלושה מצנחים מגיחים מכל אחד מהם. מניחים עד חמישה אירועי טרנספורמציה שונים מצנח לתוך flasks תרבות בודדים המכילים מדיום MG בתוספת נתרן cefotaxime כדי לאפשר השתרשות, ולתייג את תת הקבוצה בהתאם מתאים דגירה שלושה עד ארבעה שבועות בארון הצמיחה עד המצנחים הם נמרצים. בסוף הדגירה, לבחור את הצמח הנמרץ ביותר של כל אירוע, לחתוך את מקטעי apical של המצנח עם שלושה עד ארבעה internodes מכל צמח.מניחים את הקטעים לתוך בקבוקון תרבות המכיל 2MS בינוני בתוספת נתרן cefotaxime ולגדל את הצמחים עד שהם מפתחים מצנחים נמרצים ושורשים. כדי לבצע בדיקה גנטית של בטא-גלוקוקונידס או GUS, תקן את השורשים מתרבות צמחית של שבועיים עד שלושה שבועות במבחנה עם אצטון מקורר של 90% במשך 20 דקות על קרח. בסוף ההתקבעות, לשטוף את השורשים פעמיים במים מזוקקים ולטפל השורשים עם פתרון טרי GUS מכתים תחת ואקום במשך 20 דקות.בסוף הטיפול בוואקום, מניחים את השורשים על 37 מעלות צלזיוס בחושך במשך כארבע שעות. כאשר צבע כחול גלוי, לשטוף את השורשים פעמיים עם 70%אתנול, ולהמחיש את הכתמים תחת מיקרוסקופ שדה בהיר. שורשים שערים שהשתנו מפגינים פלורציה אדומה כאשר הם מוארים באור ירוק, בעוד ששליטה שלילית על אגרובקטריום לא מעוצב אינה מדגימה פלורציה כזו, מה שמצביע על התאמת סמן הטרנספורמציה האדומה של DS לזיהוי שורשים שערים מהומנים.כאן, כתמי GUS בשורשים של צמחים מהומשים המתקבלים על ידי A.tumefaciens ושורשים שערים מהו מהודרים המתקבלים על ידי A.rhizogenes מוצגים. כפי שנצפה, שורשים שהשתנו עם A, tumefaciens וגדל במבחנה, להפגין כתמים כחולים endodermis, שכבת תא בין קליפת המוח ואת stele. בשורשים מפותחים יותר, התיוג הכחול הוא מטושטש בשכבה החיצונית, המתאים exodermis.בשורשים שערים שעברו טרנספורמציה שהושגו על ידי A.rhizogenes, וגדל הידרופוניקה, סמן GUS ממוקם במיוחד בתוך אנדודרמה בהופעתם של שורשים לצדד באזורים הפצועים וב exodermis. בנוסף להיותה שיטה מהירה, השורשים הטרנסגניים המתקבלים עם קנה שורשים אגרובקטריום נשאו גם את ה- DNA מהפלסמיד מעורר השורש, אשר עשוי לרוקן כמה תהליכים הנשלטים ישירות. השורשים השעירות הטרנסגניים המתקבלים עם קנה שורשים אגרובקטריום ניתן לשמור בזמן שהם יורים, אבל לחילופין יכול להיות באתר עד מופץ במבחנה לייצור תחבורה מסיבית.טרנספורמציית תפוחי האדמה מספקת כלי טוב לבדיקה של תפקוד הגנים והפעלת האמרגן, וגם כדי לייצר כללים מתודולוגיים במין בעל עניין אגרונומי גבוה. האורגניזם מהונדס גנטית צריך להיות מושלך בבטחה לאחר השימוש כדי למנוע זיהום סביבתי. כמו כן, פתרון גז מכיל נגזרת ציאניד רעיל, כך ללבוש הגנה להשליך את הפתרון בבטחה.

Research

JoVE Journal

Environment

Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

קביעת מיקרוביאלית התאית אנזים הפעילות במים, קרקעות, ומשקעים באמצעות מבחני Microplate תפוקה גבוהה

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Optimized Negative Staining: a High-throughput Protocol for Examining Small and Asymmetric Protein Structure by Electron Microscopy

מכתים שלילי אופטימלי: פרוטוקול תפוקה גבוהה לבחינת מבנה חלבון קטן וסימטרי על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים

Structural determination of proteins is rather challenging for proteins with molecular masses between 40 - 200 kDa. Considering that more than half of ...

Transient Gene Expression in Tobacco using Gibson Assembly and the Gene Gun

ביטוי גנים חולף בטבק באמצעות גיבסון הרכבה והאקדח הגן

In order to target a single protein to multiple subcellular organelles, plants typically duplicate the relevant genes, and express each gene separately ...

Design and Construction of an Urban Runoff Research Facility

עיצוב ובנייה של מתקן מחקר ניגר עירוני

As the urban population increases, so does the area of irrigated urban landscape. Summer water use in urban areas can be 2-3x winter base line water use ...

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

EPA שיטת המדידה של 1615. Enterovirus ומופע norovirus במים על ידי תרבות וRT-qPCR. חלק שלישי. איתור וירוסים על ידי RT-qPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

Spotting Cheetahs: Identifying Individuals by Their Footprints

בחינת ברדלסים: אנשי זיהוי על ידי עקביהם

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

הפקת DNA-RNA סימולטני החוף משקעים וכימות של 16S rRNA גנים תעתיקי ידי בזמן אמת PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Empirical, Metagenomic, and Computational Techniques Illuminate the Mechanisms by which Fungicides Compromise Bee Health

אמפירית, Metagenomic, שיטות חישוביות להאיר את מנגנוני הבריאות דבורה איזה פשרה קוטלי פטריות

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered ...

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

זיפרגליים Balanus improvisus כמודל ימית - Culturing, ביטוי גנים

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...