Name: incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (nash) resolution
Uploaded: 2019-04-16T14:00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution at JoVE.com

الكتاب الاعتراف بامتنان مساعدة هولي كولكيبيك ولي سالي للخبرة في مجال تجهيز الأنسجة وإيمونوهيستوتشيميستري. كما يشكر المؤلفون دونا جولدستين وموظفي "المختبر الموارد الحيوانية" (ميديموني، غايثرسبيرغ، دكتوراه في الطب) لمساعدتها مع الإجراءات التقنية وتربية الحيوانات والرعاية.

أجريت جميع التجارب المجراة في وفقا لسياسات "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) ميديموني، شركة ذات مسؤولية محدودة وبالاتفاق مع الدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، والطبعة الثامنة (2011). ووضعت C57BL6J الفئران الذكور على النظام الغذائي أملن عالية من الدهون، وسكر الفاكهة عالية، والكوليسترول العالية. وتم إجراء خزعات الكبد بعد 26 أسبوعا في النظام الغذائي، 3 أسابيع قبل بدء التدخل الدوائي.
1-الحصول على وإعداد المواد الجراحية
<ol><li>اﻷوتوكﻻف الصكوك العقيمة (صغيرة تلميح إلى المقص والملقط نصيحة فظة، مسحات القطن، الساحات شاش، مقاطع 7 ملم دبابيس/الجرح ودباسة).</li>
	<li>الحصول على أو خياطة العقيمة لإغلاق جدار البطن (5-0 خياطة الامتصاص المغلفة بإبرة PC-1 مناسبة) والإسفنج الجيلاتين الامتصاص مضغوطة (لاستخدامها لأغراض مرقئ) والستائر العقيمة وقفازات، فرك المستندة إلى اليود و 70% إيثانول مسحات/مناديل ، البوبرينورفين (0.05-0.1 مغ/كغ الجرعة الواحدة الماوس؛ وعلى الأقل 3 جرعات كل الماوس) والعين الجراحية مرهم/تزييت.</li>
	<li>إعداد المبخر للتخدير بملء مع إيسوفلوراني.</li>
	<li>قم بتشغيل معقم حبة، للتعقيم أداة سريعة بين الحيوانات.</li>
	<li>بدوره على سطح الاحترار أو وسادة التدفئة، لاستخدامها لاسترداد الحيوان.</li>
	<li>دون مناسبة معدات الوقاية الشخصية (معدات الوقاية الشخصية) (أي، قناع، ثوب، بونيه الشعر، قفازات).</li>
</ol>2-مرحلة ما قبل الجراحية التحضير
<ol><li>ضع الماوس في قاعة توجيهي مع تدفق isoflurane 2-3% للتأثير.</li>
	<li>ملاحظة الماوس حتى يؤكد عدم الاستجابة رشة تو عمق التخدير المناسب.</li>
	<li>استخدام مرهم عين لمنع جفاف القرنية المرتبطة بالتخدير.</li>
	<li>إدارة البوبرينورفين تحت الجلد (0.05-0.1 مغ/كغ).</li>
	<li>يحلق موقع الجراحية والذيلية فورا عملية الرهابه، استخدام مقص الحيوان.</li>
	<li>حرك الماوس على سطح ساخن (37 درجة مئوية) وبعد الحلاقة موقع الجراحية. ضع الماوس في مثل هذه طريقة حيث أن السطح الظهرية إلى الأسفل، ويتم كشفها في البطن. إدراج آنف الماوس في مخروط الآنف التخدير تسهيل إيصال إيسوفلوراني بمعدل تدفق من 2-3%.</li>
	<li>تنظيف الموقع الجراحي بالتناوب مسحات من تدين والايثانول 70% (3 مرات).</li>
	<li>فتح وإعداد الأدوات الجراحية المعقمة.</li>
	<li>إزالة القفازات واستبدال مع القفازات الجراحية المعقمة.</li>
</ol>3-الجراحة
<ol><li>جعل شق طولي بالمقص (1-2 سم)، والذيلية فورا عملية الرهابه وقليلاً على الجانب الأيسر للماوس، في جلد البطن.</li>
	<li>بلانت تشريح الجلد بعيداً عن جدار البطن باستخدام الملقط، والمقص.</li>
	<li>الكشف عن جدار البطن ووضع تصور للكبد تحتها.</li>
	<li>استخدام تكوين شفرة مشرط معقم شق (1-2 سم) في جدار البطن لتصور الفص الجانبي الأيسر (التعلم مدى الحياة) في الكبد. ملاحظة: أن تكون متسقة في جميع أنحاء الدراسة. هي الأخرى الفصوص المشتركة لمصلحة حق الآنسي الفص (RML) والفص الأيسر الآنسي (حب حياتي).</li>
	<li>تخريج الفص الجانبي الأيسر من خلال الشق.</li>
	<li>الخيار 1: طفيفة تدليك البطن بالإبهام والسبابة لفضح جزء من التعلم مدى الحياة.</li>
	<li>الخيار 2: مكان مسحه القطن معقمة تحت التعلم مدى الحياة بلطف سحب جزء معرضة.</li>
	<li>ضع قطعة شاش تحت التعلم مدى الحياة للسماح لسطح العقيمة ورطب للكبد على الاستلقاء على عقيمة غارقة في المياه المالحة.</li>
	<li>قص قطعة على شكل آسفين من الكبد من التعلم مدى الحياة بإجراء تخفيضات اثنين مع مقص معقم. ملاحظة: الحجم التقريبي للكبد تجري إزالته 30-50 مغ (< 5% الكبد في الفئران).</li>
	<li>قص قطعة من الأسفنج الجيلاتين مماثلة في حجم إلى آسفين قطعة من الكبد. إدراج الأسفنج إلى قطع جزء من الكبد باستخدام الملقط.</li>
	<li>عقد الأسفنج في المكان مع الملقط والبقاء على اتصال مع الكبد حتى أنها تلتزم بسطح الكبد والارقاء ويتحقق.</li>
	<li>مكان قطعة خزعة الكبد في أنبوب مناسب (أي المجمدة، مثبت، إلخ.).</li>
	<li>بلطف ضع الكبد مرة أخرى في تجويف البطن، مع الحرص على عدم إزعاج الأسفنج.</li>
	<li>خياطة جدار البطن مع 5-0 المغلفة خياطة الامتصاص تبدأ وتنتهي مع عقده مربعة كاملة.</li>
	<li>إغلاق الجلد مع 7 ملم الجرح مقاطع (أو المواد الغذائية الأساسية).</li>
	<li>فحص القصاصات الجرح التأكد من أن هناك إغلاقاً كاملا للشق.</li>
	<li>إزالة الماوس من مخروط الآنف ووضعه في قفص نظيف على سطح ساخن.</li>
	<li>أدوات المكان إلى المطهر حبة بين الفئران 10-20 س. تأكد من يجب إزالة جميع المواد العضوية من الصكوك استخدام المحلول الملحي المعقم قبل وضع في التعقيم حبة الزجاج.</li>
</ol>4-بعد العمليات الجراحية الرعاية
<ol><li>رصد الماوس حتى يستعيد وعيه ويمكن الحق نفسه.</li>
	<li>تسجيل الملاحظات بعد العمليات الجراحية، والتحقق من الفئران يوميا ل dehiscence.</li>
	<li>إدارة جرعة الثانية والثالثة من البوبرينورفين (0.05-0.1 مغ/كغ) ح 6-8 تحت الجلد ما بعد الجراحة والجراحة بعد 24 ساعة مرة أخرى.</li>
	<li>إزالة مقاطع الجرح في 7-10 أيام بعد الجراحة.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brunt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD)+activity+score+and+the+histopathologic+diagnosis+in+NAFLD:+distinct+clinicopathologic+meanings.">Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and the histopathologic diagnosis in NAFLD: distinct clinicopathologic meanings.</a> Hepatology. 53 (3), 810-820 (2011).</li><li>Brunt, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Pathology of nonalcoholic fatty liver disease.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 7 (4), 195-203 (2010).</li><li>Kleiner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+validation+of+a+histological+scoring+system+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease.</a> Hepatology. 41 (6), 1313-1321 (2005).</li><li>Diehl, A. M., Cause Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis,+and+Treatment+of+Nonalcoholic+Steatohepatitis.">Pathogenesis, and Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Golabi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+complications+and+challenges+in+nonalcoholic+steatohepatitis+screening+and+diagnosis.">Current complications and challenges in nonalcoholic steatohepatitis screening and diagnosis.</a> Expert Reviews of Gastroenterology and Hepatology. 10 (1), 63-71 (2016).</li><li>Roth, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+histologic+alcoholic+hepatitis+based+on+clinical+presentation+limits+the+need+for+liver+biopsy.">Prediction of histologic alcoholic hepatitis based on clinical presentation limits the need for liver biopsy.</a> Hepatology Communications. 1 (10), 1070-1084 (2017).</li><li>Kristiansen, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obese+diet-induced+mouse+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis-tracking+disease+by+liver+biopsy.">Obese diet-induced mouse models of nonalcoholic steatohepatitis-tracking disease by liver biopsy.</a> World Journal of Hepatology. 8 (16), 673-684 (2016).</li><li>Trevaskis, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucagon-like+peptide-1+receptor+agonism+improves+metabolic,+biochemical,+and+histopathological+indices+of+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Glucagon-like peptide-1 receptor agonism improves metabolic, biochemical, and histopathological indices of nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 302 (8), G762-G772 (2012).</li><li>Tolbol, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+and+hepatic+effects+of+liraglutide,+obeticholic+acid+and+elafibranor+in+diet-induced+obese+mouse+models+of+biopsy-confirmed+nonalcoholic+steatohepatitis.">Metabolic and hepatic effects of liraglutide, obeticholic acid and elafibranor in diet-induced obese mouse models of biopsy-confirmed nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (2), 179-194 (2018).</li><li>Clapper, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+mouse+model+of+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis+reflecting+clinical+disease+progression+and+methods+of+assessment.">Diet-induced mouse model of fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis reflecting clinical disease progression and methods of assessment.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 305 (7), G483-G495 (2013).</li><li>Armstrong, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liraglutide+safety+and+efficacy+in+patients+with+non-alcoholic+steatohepatitis+(LEAN):+a+multicentre,+double-blind,+randomised,+placebo-controlled+phase+2+study.">Liraglutide safety and efficacy in patients with non-alcoholic steatohepatitis (LEAN): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 2 study.</a> Lancet. 387 (10019), 679-690 (2016).</li></ol>

س وس. ر. من الموظفين الحاليين و/أو الأسهم من ميديموني/استرا زينيكا. وكان الينابيع الموظف والأسهم من ميديموني/استرا زينيكا في الوقت أجريت هذه التجارب.

هنا يصف لنا بالتفصيل الإجراء خزعة الكبد الماوس أولاً وصف المصفق et al.10، وتجسد فائدتها في طراز ماوس ناش، مماثلة للتقارير السابقة6،9. الإجراء خزعة الكبد أداة قيمة لتقييم النمط الظاهري ناش قبل وبعد العلاج، بطريقة مشابهة للتي يؤديها في التجارب العلاجية السريرية. الخزعة يسمح للمقارنة المباشرة لكل موضوع، أي الفئران نفسها يمكن أن تستخدم لكل من النقاط الزمنية. كما نبدي إمكاناتها متعدية الجنسيات. في التجارب سريرية في مواضيع ناش خزعة-ثبت، أثارت liraglutide نسبة 39% استجابة (المرضى مع تحسن) في ناس، بينما لاحظنا في دراستنا بمعدل 66% مستجيب لناس محسنة. وعلاوة على ذلك، كان 26 في المائة مرضى درجة التليف تحسين مع 9 ٪ سوءا، مقابل 14 في المائة و 36 في المائة في الذراع الغفل، على التوالي11. لقد لاحظنا في دراستنا، بمعدل 17% تحسن مع العلاج ليراجلوتيدي. تسليط الضوء على سلطة خزعة الكبد الأساس هذه المقارنات وتأكيد التفاهم متعدية الجنسيات المحتملة، على الأقل لهذه الفئة من العلاجية.
أنها حاسمة بالنسبة لحصاد قطعة كبيرة بما يكفي من أنسجة الكبد أثناء إجراء خزعة لتحليل الميزات النسيجي بشكل صحيح، ولكن أيضا ليست كبيرة جداً من قطعة من الكبد بخرق وظيفة الكبد. لاحظنا بمعدل وفيات صفر مع هذه الجراحة، والحيوانات وبدأ تعافي تماما في يوم واحد مع استئناف السلوك العادي للأكل. هكذا، الوقت بين خزعة والشروع في الدراسة تدخل محدودة لا باسترداد الحيوان ولكن من المرجح بالوقت الذي يستغرقه تجهيز العينات والتحليل والعشوائية اللاحقة.
استخدام الإجراء خزعة الكبد كطريقة لتأكيد التليف قبل التدخل ساعد على الحد من تقلب في دراستنا، مما يسمح لنا باستبعاد الفئران التي لم تتطور تماما درجة التليف الكبدي نتيجة النظام الغذائي الذي يحفز ناش أملن. وعلاوة على ذلك، فإنه تعزيز قدرتنا على فهم أفضل لأثر التدخلات الممكنة تحسين ناش، مقابل فقط الحصول على عينة الكبد المحطة الطرفية ونقاط ناش. حتى يتم مواصلة استكشاف تقنيات جديدة غير الغازية ومقبولة على نطاق واسع، خزعة الكبد هو فقط ثبت طريقة لتحديد ناش.

عدم الكحولية steatohepatitis (ناش) هو مرض كبد تدريجيا، وشكلاً أكثر حدة من مرض الكبد الدهني (NAFLD)، التي أصبحت أكثر انتشارا بسبب ارتباطه بالسمنة ومرض السكري من النوع 2. هناك لا العلاجات المعتمدة ل NAFLD/ناش، أو المؤشرات الحيوية المعتمدة لتقييم تطور المرض سهولة. يتم تشخيص ناش الأشيع بتقييم التهاب، فائض الدهن الكبدي (ذلك) وتتمثل في تضخم وتليف1،2،،من34. في التجارب السريرية، ويتم تقييم هذه النهاية قبل الدراسة في عينة كبد التي جمعت عن طريق خزعة، ومن خزعة كبد ثانية بعد فترة زمنية معينة من علاج. وهكذا، تقييم فعالية عامل الاختبار عن طريق التغيير في أمراض الكبد في المواضيع مع الكمية المحددة مسبقاً (أي، ثبت في خزعة) ناش التي هي عشوائية لمجموعات العلاج. غالباً ما تستخدم هذه النهاية النسجية ذاتها في القوارض نماذج تقييم إمكانية التداوي ناش في الدراسات السريرية، ولكن فقط في الأنسجة الطرفية من الفئران euthanized وهكذا دون فهم لدرجة الفعالية في خط الأساس، وعدم القدرة للتحكم في وجود اختلافات بين مجموعات العلاج في حالة المرض الأساس.
على الرغم من أن 25% بالغين مع نافلد يفترض أن يكون ناش استناداً إلى مستويات aminotransferase المصل مرتفعة، توجد أية أساليب نهائية بديلة لتأكيد ناش خلاف الأدلة النسيجي4. أساليب موسع، مثل طرائق الإشعاعي (الموجات فوق الصوتية والتصوير المقطعي والتصوير بالرنين المغناطيسي) قد وضعت للكشف عن ذلك الكبد، ولكن هذه الأساليب لا يمكن تشخيص ناش أو تحديد مرحلة التليف. الاستوجرافي عابر يوفر طريقة غير الغازية واعدة لقياس صلابة الكبد. فقد ثبت أن تكون دقيقة في التفريق بين مراحل التليف. ومع ذلك، الدقة تتناقص مع ارتفاع مؤشر كتلة الجسم (BMI) والأنسجة الدهنية. 5 وهذه مشكلة نظراً لغالبية المرضى ناش يجري يعانون من السمنة المفرطة. تتجاوز أهمية سريرية لهذه النهج، تستخدم أيا من هذه الطرائق في الدراسات الإكلينيكية.
للتغلب على هذا، كانت المجموعة البحثية للدكتور جوناثان روث أول تنفيذ إجراء خزعة كبد في نموذج ناش6،،من78الماوس ناش أميلين (أملن). ووصفوا المصدوقية التنبؤية خزعة بدرجة من المرض ناش وترابط مع الأمراض الأيضية. هنا يصف لنا بالتفصيل الإجراء خزعة الكبد في نموذج أملن ناش وفائدتها في إعداد علاجية، على وجه التحديد لتقييم فعالية ليراجلوتيدي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:640px;" width="640">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:147px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:143px;">29405</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">5-0 suture</td>
			<td style="width:147px;">Ethicon</td>
			<td>J834G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">7mm Wound Clips</td>
			<td style="width:147px;">Reflex</td>
			<td style="width:143px;">203-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Absorbable gelatin sponge (GelFoam)</td>
			<td style="width:147px;">Pfizer</td>
			<td style="width:143px;">09-0353-01</td>
			<td>Compressed, Any Size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Alcohol Prep Pad</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">75856-902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Animal Clippers</td>
			<td style="width:147px;">Oster</td>
			<td style="width:143px;">78005010002</td>
			<td>Size 40 Blade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Artificial Tears</td>
			<td style="width:147px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:143px;">048272</td>
			<td>Tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser&#160;</td>
			<td>NDC 12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Iodine Prep Pads</td>
			<td style="width:147px;">Nice Pak Products</td>
			<td style="width:143px;">C12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Sterile Drapes</td>
			<td style="width:147px;">Stoelting</td>
			<td style="width:143px;">50981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Surgical Gloves</td>
			<td style="width:147px;">Medline</td>
			<td style="width:143px;">54720</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (nash) resolution

التجارب السريرية تقييم العلاجات للعلاج غير الكحولية steatohepatitis (ناش) تنطوي خط الأساس ونهاية الدراسة الكبد خزعة، وتقييم التحسن في النهاية المرض، غالباً ما تنعكس كنسبة مئوية من كل ذراع العلاج أن تتحسن، سوءا أو ظلت دون تغيير. دراسات القوارض السريرية التقليدية المفترضة ناش العلاجات غالباً محدودة بسبب عدم معرفة مستوى الكبد مرض/ناش الحالية في بدء التدخل العلاجي، بدلاً من التعشئه مجموعات العلاج في النهاية يمكن قياسها بسهولة مثل وزن الجسم، وحالة التمثيل الغذائي أو ما شابه ذلك. وهنا يصف لنا تقنية خزعة كبد في الناجمة عن النظام الغذائي ناش الفأر نموذجا، لتقييم أمراض الكبد الأساس بغية استبعاد الفئران التي لا تظهر التليف وتوزيعها بالتساوي مع التليف مماثلة بين مجموعات معاملة الحيوانات. يمكن بعد ذلك مقارنة هذه المستويات إلى مستويات المحطة الطرفية، بعد التدخل لفهم أصدق للتأثيرات الدوائية المجراة في ومما يعكس بشكل أدق استراتيجيات تصميم التجربة السريرية. الماوس بشكل صحيح تخديره وإعدادها لعملية جراحية باستخدام ظروف معقمة. يتم إجراء شق صغير في الجزء العلوي من البطن ويتم كشفها الفص الجانبي الأيسر للكبد. آسفين الكبد هو إزالتها جراحيا، وهو وضع قطعة مماثلة الحجم من الجيلاتين قابلة للامتصاص في مكان عمله لوقف أي نزيف. الماوس جراحيا خياطة وتدبيس مغلقة وسوف تسترد مرة أخرى إلى طبيعتها خلال يوم 1. تستغرق العملية كاملة 5-10 دقيقة للماوس. هنا نحن تجسد مدى فائدة هذا الإجراء بالاستفادة من خزعة قبل دراسة لتقييم تأثير مثل الجلوكاجون الببتيد-1 (GLP-1) مستقبلات مؤثر liraglutide في النهاية ناش في الفئران.

لهذه الدراسة، كانت عشوائية الفئران إلى مجموعات العلاج (n = 12/مجموعة) استناداً إلى عينة الدراسة ما قبل التليف الصف ووزن الجسم. كانت تدار من الفئران مركبة (PBS) أو ليراجلوتيدي (نمول 5/كغ) لمدة 42 يوما (السيارة أو المركبة التي تدار 10 مل/كغ جرعة وحدة التخزين، تحت الجلد، مرة واحدة يوميا). في يوم 42، قد euthanized الفئران (عن طريق استنشاق أول أكسيد الكربون2 ) في الدولة غير صامت، والكبد اقتطعت وتجهيزها لعلم الأنسجة.
ثم البارافين الكبد خزعة والمحطة الطرفية القطع كانت ثابتة بين عشية وضحاها في الفورمالين 10%، جزءا لا يتجزأ والمجهزة الهيماتوكسيلين ويوزين و "الأحمر سيريوس"، تلطيخ عبر البروتوكولات القياسية9. أقسام الأنسجة قيمت بشكل أعمى بأخصائي وفقا لنظام سجل النشاط ناش (NAS)1،2. الناس يعكس درجة المرض لذلك والتهاب مفصص وتتمثل تضخم (كل معلمة تعطي درجة من 0-3) كما هو موضح سابقا9.
إدراج عينة من كبد في تصميم هذه الدراسة يسمح لدرجة تليف (خزعة قبل) خط أساس. كان ما مجموعة 118 الفئران فحص بعد 26 أسبوعا حمية ناش وتليف الكبد وذلك سجل لكل عينة (الشكل 1). استبعدت الفئران 49 من هذه الفئران 118، استناداً إلى انخفاض التليف التليف عالية (درجة صفر)، (نقاط من 4، التي أظهرت علم الأمراض غير طبيعي)، وفقدان الوزن غير طبيعي أو التئام الجروح. تركت هذه معايير الاستبعاد يسمح للفئران 69 لتعيين مجموعات الدراسة والبحث عن تحسينات في النمط الظاهري ناش بعد المعالجة (الشكل 1).
وعولج الفئران مع السيارة أو liraglutide مؤثر GLP-1R (نمول 5/كغ) لمدة 6 أسابيع. في المجموعة المعالجة بالمركبات، الماوس 1 المشاركة تفاقم التليف و 4 الفئران أظهرت تدهور ناس درجة (الشكل 2 أ-ب). وكانت معاملة Liraglutide المقترنة مع تحسين شامل التليف (الشكل 2)، 17% من تحسين مجموعة العلاج و 83% المتبقية دون تغيير. وبالمثل، تحسن معاملة liraglutide ناس عموما نقاط (الشكل 2D)، مع 66 في المائة المجموعة التي تحسنت درجة ناس و 33% ظلت دون تغيير.
بالإضافة إلى ذلك، تحسنت المعاملة liraglutide التهاب، مع 75% المجموعة وجود انخفاض درجة التهاب ونسبة 25 في المائة ما زال دون تغيير (الشكل 3B). معاملة مركبة تفاقم الالتهاب، مع 17% مجموعة لها أعلى درجة التهاب و 83% لم يتغير (الشكل 3A). سجل ذلك لم يتغير من خط الأساس لإنهاء الدراسة في كل مركبة و liraglutide معاملة المجموعات (الشكل 3 أ، ب). قبل مقابل خزعة بعد إجراء مقارنات للفئران الفردية على التهاب وتضخم المعلمات كما تظهر (الشكل 3-F).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig1.jpg"> رقم 1: الفحص المسبق تليف الكبد خزعة ونقاط ناس . (أ) تمثيل جميع الفئران 118 التي تم فرزهم التليف، عن طريق خزعة الكبد. (ب وج) تظهر التليف الأساس ونقاط ناس، على التوالي، بعد أن تم فرز الفئران المؤهلة إلى مجموعات الدراسة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig2.jpg"> رقم 2: التليف وناس نقاط، خزعة قبل وبعد التدخل. تحليل نسبة المستجيب للمركبات (أ، ج) أو (ب د) يعامل liraglutide الفئران، مقاسا من خزعة الكبد الأساس لوضع حد لمن عينة الدراسة الكبد لمرحلة التليف (أ، ب) وناس (ج، د). لكل مجموعة، يتم الإشارة إلى التغيير من مرحلة ما قبل الدراسة إلى عينة الدراسة بعد انتهاء خط. النقاط في كل خطوة التهديف هو إزاحة قليلاً للسماح بفصل مرئي من الحيوانات، وهذا هو فقط لأغراض التصور ولا تعكس أي اختلاف في نقاط. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig3.jpg"> الشكل 3: ذلك والتهاب وتضخم وخزعة قبل وبعد التدخل. تحليل نسبة المستجيب للمركبات (A, C, E) أو (ب، د، و) يعامل liraglutide الفئران، مقيسا من خزعة الكبد الأساس لوضع حد لمن عينة الدراسة الكبد لذلك نقاط (أ، ب)، التهاب (ج، د) وتضخم (ه، و). لكل مجموعة، يتم الإشارة إلى التغيير من مرحلة ما قبل الدراسة إلى عينة الدراسة بعد انتهاء خط. النقاط في كل خطوة التهديف هو إزاحة قليلاً للسماح بفصل مرئي من الحيوانات، وهذا هو فقط لأغراض التصور ولا تعكس أي اختلاف في نقاط. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution at JoVE.com

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

في إعدادات السريرية، يتم استخدام عينة من كبد لتقييم مراحل غير الكحولية steatohepatitis (ذلك والتهاب وتتمثل تضخم وتليف). نحن هنا، لتوضيح البقاء خزعة كبد في الفئران التي يمكن استخدامها لإجراء تحاليل نسيجية للتمكين من تقييم العوامل العلاجية بطريقة أكثر مواءمة مع التجارب السريرية.

إدراج إجراء خزعة الكبد البقاء في الفئران لتقييم القرار غير الكحولية Steatohepatitis (ناش)

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

هذا الإجراء خزعة الكبد التي يمكن النجاة منها في الفئران المصابة بالتهاب الكبد غير الكحولية، أو ناش، يسمح لكل من استبعاد الحيوانات التي ليس لديها ناش والقياس الدقيق للاستجابات للتدخلات. يحاكي هذا الإجراء عن كثب تصميم التجارب السريرية لدراسات ناش التي تقارن أمراض ما بعد العلاج مقابل ما قبل العلاج للكبد وتسمح بتقييم أكثر دقة لفعالية الدواء. يمكن أن يكون تعريض فص الكبد تحديًا في البداية.ممارسة فضح الأنسجة بإصبعك أو قضيب القطن يميل أولاً للعثور على أفضل مناسبة لك. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع إصبع، وجعل واحد إلى اثنين من سنتيمتر، شق الجلد البطني الطولي فورا caudal لعملية xiphoid وقليلا إلى الجانب الأيسر من الماوس المطهر. استخدام ملقط ومقص لقص تشريح بعيدا الجلد حتى يتعرض جدار البطن والكبد يمكن تصور تحت الأنسجة العضلية.باستخدام شفرة مشرط معقمة، قم بعمل شق من سنتيمتر واحد إلى سنتيمترين في جدار البطن لفضح الفص الجانبي الأيسر للكبد، ووضع مسحة قطنية معقمة تحت الفص الجانبي الأيسر لاستخراج الجزء ليتم كشفه بلطف من خلال الشق. ضع قطعة شاش معقم من الشاش ذات اللباة المالحة تحت الفص المكشوف ، واستخدم مقصًا معقمة لاستخراج قطعة من الأنسجة على شكل إسفين من 30 إلى 50 ملليغرامًا من الكبد المستخرج. قطع قطعة من الإسفنج المضغوطة هلامية تمتص مماثلة في الحجم لقطعة إسفين من الكبد، واستخدام ملقط العقيمة لإدراج الاسفنج في الجزء قطع من الكبد.عقد الاسفنج في مكان مع ملقط حتى الجيلاتين يلتصق سطح الكبد ويتم تحقيق الهوساسي قبل وضع خزعة الكبد في وعاء مناسب لتحليلها المصب. عودة بلطف الكبد إلى تجويف البطن، مع الحرص على عدم إزعاج الاسفنج، وبدءا ونهاية مع عقدة مربعة كاملة، خياطة جدار البطن مع خياطة 5-0 المغلفة امتصاص. ثم، أغلق الجلد بمقاطع جرح من عيار سبعة ملليمترات، مما يؤكد الإغلاق الكامل بعد وضعها، واعيد الماوس إلى قفص نظيف على سطح ساخن مع المراقبة حتى الشفاء التام.في هذه التجربة التمثيلية ، تم خزين 118 فئرانًا بعد 29 أسبوعًا على نظام غذائي مخصص عالي الدهون والفركتوز والكوليسترول للحث على ناش. ثم تم تسجيل مستوى التليف والسكتة العصبية لكل خزعة. تم استبعاد الفئران من الدراسة على أساس التليف المنخفض أو العالي وفقدان الوزن غير الطبيعي أو التئام الجروح ، وتم علاج الفئران المتبقية بسيارة أو ناهض مستقبلات الببتيد -1 الشبيه بالغلوكة لمدة ستة أسابيع.في المجموعات المعالجة بالمركبات، أظهر فأر واحد زيادة في التليف وأظهرت أربعة فئران زيادة في درجة نشاط ناش. ارتبط علاج Liraglutide بتحسن شامل للتليف ، مع تحسن 17 ٪ من مجموعة العلاج و 83 ٪ من دون تغيير. وبالمثل، حسّن علاج ليراتغلوتيد النتيجة الإجمالية لـ NASH، حيث أظهر 66٪ من المجموعة درجة نشاط ناش محسنة، وظل 33٪ دون تغيير.بالإضافة إلى ذلك، تحسن علاج ليراتغلوتيد الالتهاب، حيث أن 75٪ من المجموعة تعاني من انخفاض درجة الالتهاب بعد العلاج، في حين شهدت الحيوانات المعالجة بالمركبات زيادة في الالتهاب. لم يتأثر الستاتسيس بالعلاج المتألم ، ولم يتغير في كلتا المجموعتين قبل وبعد التدخل. يجب الحرص على عدم الإفراط في الضرر قطعة من الكبد مختاتم للتأكد من أنه يمكن تحليلها بشكل مناسب لاحتياجاتك.يمكن استخدام هذا الإجراء لتقليد تصاميم التجارب السريرية من خلال مقارنة آثار ما قبل وبعد العلاج من العلاجات الجديدة على كبد ناش.

Research

JoVE Journal

Medicine

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

استخدام نظام اعدام الوزن لالإسكيمية الكبد في الفئران

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

تطوير نموذج من جانب واحد lesioned الفأر 6 OHDA من مرض باركنسون

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

منتبذ المخاطي Engrafting إجراءات تسليم المخدرات مباشرة الى المخ في الفئران

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

في فيفو فوتولابيلينج الخلايا في القولون لتقييم إمكانية الهجرة من الخلايا المكونة للدم في الفئران حديثي الولادة

Enteric bacterial communities are established early in life and influence immune cell development and function. The neonatal microbiota is susceptible to ...

Measurement of the Hepatic Venous Pressure Gradient and Transjugular Liver Biopsy

قياس التدرج الضغط الوريدي الكبدي وخزعة الكبد عبرة

Here we provide a detailed protocol describing the clinical procedure of hepatic venous pressure gradient (HVPG) measurement in patients with advanced ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

استخدام خزعة كيميائية لتقييم جودة الكسب غير المشروع

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

المورين الدقة قطع شرائح الكبد كنموذج السابق فيفو بيولوجيا الكبد

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

تصوير 3D لمصفوفة الكبد خارج الخلية في نموذج فأر لالتهاب الكبد الدهني غير الكحولي

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

التحقيق في الآثار الوقائية للبلاتيكودين D على مرض الكبد الدهني غير الكحولي في نموذج المختبر الناجم عن حمض النخيل

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...