Name: incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (nash) resolution
Uploaded: 2019-04-16T14:00:00
Duration: 4 min 14 s
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저자는 기꺼이 조직 처리 및 immunohistochemistry 전문성 샐리 리와 홀리 Koelkebeck의 도움을 인정합니다. 저자는 또한 기술 절차 및 축산 및 그들의 지원에 대 한도 나 Goldsteen 및 실험실 동물 자원 직원 (MedImmune, 버스, 메릴랜드) 감사합니다.

모든 생체 조건 실험 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) MedImmune, LLC의와 가이드와의 정책에 따라 관리 및 실험 동물의 사용, 8 판 (2011)에 대 한 실시 했다. 남성 C57BL6J 마우스는 고 지방, 고과 당, 높은 콜레스테롤 AMLN 다이어트에 배치 했다. 간 생 검 약리학 내정간섭의 시작에 앞서 3 주 다이어트, 26 주 후 수행 했다.
1. 고 수술 재료 준비
<ol><li>오토 클레이 브 멸 균 악기 (작은 지적 팁이 위, 무딘 팁 집게, 면봉, 거 즈 사각형, 7mm 스테이플/상처 클립과 스테이플러).</li>
	<li>취득, 복 벽 (PC 1 바늘으로 5-0 코팅된 흡수 봉합 적당 하다), (hemostatic 목적을 위해 사용 될)을 압축 하는 흡수 젤라틴 스폰지, 무 균 커튼 및 장갑, 요오드 기반 스크럽과 70% 에탄올 면봉/물티슈를 폐쇄 살 균 봉합 buprenorphine (0.05-0.1 mg/kg 복용량 당 마우스, 마우스 당 적어도 3 복용량) 및 외과 눈 연 고/윤 활.</li>
	<li>마 취 기화 isoflurane 함께 작성 하 여 준비.</li>
	<li>동물 사이의 빠른 악기 살 균을 위해 비드 소독 기를 켭니다.</li>
	<li>지구 온난화 표면 또는 동물 복구에 사용할 난방 패드를 켭니다.</li>
	<li>돈 적절 한 개인 보호 장비 (PPE) (즉, 마스크, 가운, 머리 모자, 장갑).</li>
</ol>2. 미리 수술 준비
<ol><li>효과 2-3 %isoflurane 흐름 유도 챔버에 마우스를 놓습니다.</li>
	<li>발가락-핀치에 응답의 부족은 마 취의 깊이 적절 한 확인 될 때까지 마우스를 관찰 합니다.</li>
	<li>눈 연 고를 사용 하 여 마 취와 관련 된 각 막의 건조를 방지 하기 위해.</li>
	<li>피하 buprenorphine를 관리 (0.05-0.1 mg/kg).</li>
	<li>즉시 동물 클리퍼 스를 사용 하 여 칼 프로세스의 꼬리 수술 부위의 면도.</li>
	<li>수술 부위의 면도 후 온수 표면 (37 ° C)에 마우스를 이동 합니다. 등 쪽 표면 아래로, 그리고 복 부 노출 되도록 하는 방식에 마우스를 놓습니다. 2-3%의 유량에서 isoflurane에의 납품을 촉진 하기 위하여 마 취 코 콘에는 마우스의 코를 삽입 합니다.</li>
	<li>깨끗 한 betadine과 70% 에탄올의 교체 면봉으로 수술 사이트 (3 회).</li>
	<li>연 무 균 수술 도구를 설정 합니다.</li>
	<li>장갑 제거 하 고 살 균 외과 장갑 바꿉니다.</li>
</ol>3. 수술
<ol><li>가 위 (1-2 cm), 칼 과정의 고 복 부 피부에 마우스의 왼쪽에 약간 즉시 꼬리 세로 절 개를 확인 합니다.</li>
	<li>무뚝뚝한 집게와가 위를 사용 하 여 복 벽에서 피부를 해 부.</li>
	<li>복 부 벽 고 밑 간 시각화.</li>
	<li>사용 하 여 살 균 메스 블레이드 만들기 (1-2 cm) 절 개 복 부 벽에 왼쪽 측면 엽 (LLL) 간의 시각화. 참고: 연구에 걸쳐 일관 된 수 있습니다. 관심의 다른 일반적인 돌출부는 오른쪽 중간 엽 (RML) 왼쪽 중간 엽 (내 인생을 사랑).</li>
	<li>절 개를 통해 왼쪽된 측면 엽 외부화</li>
	<li>옵션 1: 가볍게 엄지 및 집게 손가락은 LLL의 일부를 노출 하는 복 부 마사지.</li>
	<li>옵션 2: 장소 일부 꺼내 부드럽게 LLL 아래 멸 균 면봉 노출 될 수 있습니다.</li>
	<li>아래에 거짓말을 간 대 한 살 균과 수산화 표면 수 있도록 LLL 거 즈의 멸 균 식 염 수에 젖은 조각을 넣으십시오.</li>
	<li>살 균가 위 두 컷 하 여는 LLL에서 간 모양 조각을 잘라. 참고: 간 제거의 대략적인 크기는 30-50 밀리 그램 (< 쥐에 간 5%).</li>
	<li>간 쐐기 조각에 젤라틴 스폰지의 조각 크기에 비슷한 잘라. 집게를 사용 하 여 간의 컷된 부분에 스폰지를 삽입 합니다.</li>
	<li>집게와 장소에 스폰지를 보유 하 고 그것의 표면에 고착 하 고 hemostasis 달성 때까지 간 접촉을 유지.</li>
	<li>적절 한 관으로 간 생 검 조각 장소 (즉, 동결, 정착 액, 등.).</li>
	<li>부드럽게 하도록 스펀지를 방해 하지 않는 복 부 구멍으로 다시 간 장소.</li>
	<li>5-0 코팅된 흡수 봉합 시작 하 고 끝나는 전체 스퀘어 매듭으로 복 벽을 봉합.</li>
	<li>7mm 상처 클립 (또는 스테이플) 피부를 닫습니다.</li>
	<li>절 개의 완전 한 폐쇄는 되도록 상처 클립을 검사 합니다.</li>
	<li>코 콘에서 마우스를 제거 하 고 온수 표면에 깨끗 한 케이지를 넣습니다.</li>
	<li>장소 악기 구슬 소독 기 쥐 사이 10-20 미에 대 한 모든 유기 물질을 제거 하 여 유리 구슬 소독 기에 배치 하기 전에 멸 균 식 염 수를 사용 하 여 계기에서 한다 다는 것을 확인 하십시오.</li>
</ol>4. 수술 치료
<ol><li>의식 회복 자체를 마우스 오른쪽 수 있습니다 때까지 마우스를 모니터링 합니다.</li>
	<li>수술 후 관찰 기록 하 고 매일 dehiscence에 대 한 마우스를 확인.</li>
	<li>Buprenorphine의 두 번째 및 세 번째 복용량 관리 (0.05-0.1 mg/kg) 피하 6-8 시간 수술 후 및 다시 수술 24 시간 후.</li>
	<li>수술 후 7-10 일에 상처 클립을 제거 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brunt, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonalcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD)+activity+score+and+the+histopathologic+diagnosis+in+NAFLD:+distinct+clinicopathologic+meanings.">Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) activity score and the histopathologic diagnosis in NAFLD: distinct clinicopathologic meanings.</a> Hepatology. 53 (3), 810-820 (2011).</li><li>Brunt, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Pathology of nonalcoholic fatty liver disease.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 7 (4), 195-203 (2010).</li><li>Kleiner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+validation+of+a+histological+scoring+system+for+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease.</a> Hepatology. 41 (6), 1313-1321 (2005).</li><li>Diehl, A. M., Cause Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis,+and+Treatment+of+Nonalcoholic+Steatohepatitis.">Pathogenesis, and Treatment of Nonalcoholic Steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Golabi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+complications+and+challenges+in+nonalcoholic+steatohepatitis+screening+and+diagnosis.">Current complications and challenges in nonalcoholic steatohepatitis screening and diagnosis.</a> Expert Reviews of Gastroenterology and Hepatology. 10 (1), 63-71 (2016).</li><li>Roth, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+histologic+alcoholic+hepatitis+based+on+clinical+presentation+limits+the+need+for+liver+biopsy.">Prediction of histologic alcoholic hepatitis based on clinical presentation limits the need for liver biopsy.</a> Hepatology Communications. 1 (10), 1070-1084 (2017).</li><li>Kristiansen, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obese+diet-induced+mouse+models+of+nonalcoholic+steatohepatitis-tracking+disease+by+liver+biopsy.">Obese diet-induced mouse models of nonalcoholic steatohepatitis-tracking disease by liver biopsy.</a> World Journal of Hepatology. 8 (16), 673-684 (2016).</li><li>Trevaskis, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucagon-like+peptide-1+receptor+agonism+improves+metabolic,+biochemical,+and+histopathological+indices+of+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Glucagon-like peptide-1 receptor agonism improves metabolic, biochemical, and histopathological indices of nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 302 (8), G762-G772 (2012).</li><li>Tolbol, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+and+hepatic+effects+of+liraglutide,+obeticholic+acid+and+elafibranor+in+diet-induced+obese+mouse+models+of+biopsy-confirmed+nonalcoholic+steatohepatitis.">Metabolic and hepatic effects of liraglutide, obeticholic acid and elafibranor in diet-induced obese mouse models of biopsy-confirmed nonalcoholic steatohepatitis.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (2), 179-194 (2018).</li><li>Clapper, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+mouse+model+of+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis+reflecting+clinical+disease+progression+and+methods+of+assessment.">Diet-induced mouse model of fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis reflecting clinical disease progression and methods of assessment.</a> American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 305 (7), G483-G495 (2013).</li><li>Armstrong, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liraglutide+safety+and+efficacy+in+patients+with+non-alcoholic+steatohepatitis+(LEAN):+a+multicentre,+double-blind,+randomised,+placebo-controlled+phase+2+study.">Liraglutide safety and efficacy in patients with non-alcoholic steatohepatitis (LEAN): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 2 study.</a> Lancet. 387 (10019), 679-690 (2016).</li></ol>

S.O. C.R. 있으며 현재 직원 및 주주 MedImmune/아 스 트 라의. JLT은 직원 주주 MedImmune/아 스 트 라의 당시이 실험을 실시 했다.

여기 우리 마우스 간 생 검 절차 처음 추 외10, 설명 하 고 내 쉬, 이전 보고서6,9와 비슷한의 마우스 모델에서 자사의 유틸리티를 예증 하는 세부 사항에 설명 합니다. 간 생 검 절차는 내 쉬 형 사전 및 임상 치료에서 비슷한 방식으로 후 처리를 평가 하기 위한 유용한 도구입니다. 생 검 수 있습니다 직접 비교를 위해 각 주제에 대 한 즉, 두 시간 포인트 같은 마우스를 사용할 수 있습니다. 우리는 또한 변환의 가능성을 보여 줍니다. 생 검에서 입증 된 내 쉬 과목의 임상 실험에서 liraglutide 우리의 연구에서 우리는 향상 된 NAS에 대 한 66% 응답 속도 관찰 하는 반면 NAS에 39% 응답 속도 개선 (환자)을 elicited. 또한, 환자의 26% 악화, 대 14%와 36% 위약 팔에 각각119% 향상 된 섬유 증 점수를 했다. 우리의 연구에서 liraglutide 치료 17% 향상 속도 관찰합니다. 이러한 비교 기준 간 생 검의 힘을 강조 하 고 치료의이 클래스에 대 한 잠재적인 변환 이해를 적어도 확인 합니다.
그것은 제대로 조직학 특징을 분석 하는 생 검 절차 중 간 조직의 충분히 큰 조각 수확 중요 하지만 또한 너무 큰 간 간 기능 손상에 한 조각의. 이 수술 사망률 0 관찰 그리고 정상적인 식사 행동의 재개와 함께 1 일 이내 동물 완벽 하 게 복구 된. 따라서, 생 검 및 개입 연구의 시작 사이의 시간 동물 복구 하지 제한 이지만 샘플 처리, 분석, 및 후속 랜덤 시간에 의해 가능성이.
개입 마우스를 완벽 하 게 유도 하는 AMLN 내 쉬 다이어트의 결과로 간 섬유 증의 어떤 정도 개발 하지 않았다를 제외를 우리의 연구에 있는 가변성을 감소 도움이 되기 전에 섬유 증의 확인의 방법으로 간 생 검 절차를 활용 합니다. 또한, 터미널 간 샘플 및 내 쉬 점수 반대만 가능한 내 쉬 개선 개입의 영향을 이해 하는 우리의 기능 향상. 때까지 새 비-침략 적 기술을 더 탐험 널리 허용, 간 생 검은 유일한 내 쉬를 결정 하는 방법 입증 된.

무알코올 steatohepatitis (NASH) 진보적인 간 질병, 그리고 무 알콜 지방 간 질병 (NAFLD), 비만과 2 형 당뇨병의 그것의 협회 때문에 점점 유행 되 고 있는의 더 심각한 형태 이다. NAFLD/NASH, 또는 승인 된 생체 쉽게 질병의 진행을 평가에 대 한 승인된 없는 요법이 있다. 내 쉬 진단 조직학 염증, 평가 하 여 간 지질 (steatosis), 열기구, hepatocyte 및 섬유 증1,2,,34를 초과. 임상 시험에서 이러한 끝점 간 샘플 수집, 생 검을 통해 두 번째 간 생 검에서 일정 치료 기간 후에 연구 전에 평가 됩니다. 따라서, 테스트 에이전트의 효율성 평가 과목에 간 병리학에서 변화를 통해 이전 식별 계량 (즉, 생 검-입증 된) 치료 그룹에 무작위로 내 쉬. 이 같은 더 끝점은 잠재적인 내 쉬 치료제 전 임상 연구, 하지만 안락사 쥐에서 그리고 이렇게 효능 기준선 및 무 능력의 정도 대 한 이해 없이 터미널 조직에만 평가 하는 설치류 모델에서 자주 사용 제어 하려면 초기 질병 상태 치료 그룹 간의 차이 대 한.
NAFLD와 성인의 25% 상승된 한 혈 청 aminotransferase 레벨에 따라 내 쉬를 추정은, 비록 조직학 증거4이외의 내 쉬를 확인 없습니다 대체 확실 한 방법이 있다. 비 침 투 적인 방법, 방사선 modalities (초음파, 컴퓨터 단층 촬영 및 자기 공명 영상) 등 간 steatosis 감지 하도록 개발 되었습니다 하지만 그 방법을 내 쉬를 진단 하거나 섬유 증의 결정 수 없습니다. 일시적인 elastography는 유망한 비-침략 적 형식 간 강성을 측정 하기 위한 제공 합니다. 그것은 차별화 섬유 증 단계에서 정확 하 게 표시 되었습니다. 그러나, 정확도 더 높은 몸 질량 색인 (BMI)와 지방 조직 감소합니다. 5 이것은 NASH 환자 비만의 대다수 때문에 문제 이다. 이러한 방법의 임상 관련성 넘어 이러한 형식은 전 임상 연구에 활용 됩니다.
이 극복 하기 위해 닥터 조나단 로스의 연구 그룹 내 쉬6,,78의 Amylin 내 쉬 (AMLN) 마우스 모델에서 간 생 검 절차를 구현 하는 첫번째 이었다. 그들은 내 쉬 질병의 학위와 함께 생 검 및 대사 질환의 예측 타당성을 설명합니다. 내 쉬의 AMLN 모델에서 간 생 검 절차 및 치료 설정에서 특히 liraglutide의 효능을 평가 하기 위해 그 유틸리티 여기 우리가 자세히 설명 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:640px;" width="640">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:147px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:143px;">29405</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">5-0 suture</td>
			<td style="width:147px;">Ethicon</td>
			<td>J834G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">7mm Wound Clips</td>
			<td style="width:147px;">Reflex</td>
			<td style="width:143px;">203-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Absorbable gelatin sponge (GelFoam)</td>
			<td style="width:147px;">Pfizer</td>
			<td style="width:143px;">09-0353-01</td>
			<td>Compressed, Any Size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Alcohol Prep Pad</td>
			<td style="width:147px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">75856-902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Animal Clippers</td>
			<td style="width:147px;">Oster</td>
			<td style="width:143px;">78005010002</td>
			<td>Size 40 Blade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Artificial Tears</td>
			<td style="width:147px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:143px;">048272</td>
			<td>Tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser&#160;</td>
			<td>NDC 12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Iodine Prep Pads</td>
			<td style="width:147px;">Nice Pak Products</td>
			<td style="width:143px;">C12400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Sterile Drapes</td>
			<td style="width:147px;">Stoelting</td>
			<td style="width:143px;">50981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:184px;">Surgical Gloves</td>
			<td style="width:147px;">Medline</td>
			<td style="width:143px;">54720</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (nash) resolution

무알코올 steatohepatitis (NASH)의 치료에 대 한 치료를 평가 하는 임상 시험 관련 기준 및 연구 간 생 검, 그리고 질병 끝점, 종종 개선, 각 치료 팔의 %로 반영에 있는 개선의 평가의 끝 악화 또는 변하지 않게 남아 있었다. 상 상속 내 쉬 요법에 대 한 전통적인 전 임상 설치류 연구 종종 모르고 간 질환/내 쉬 존재 같이 쉽게 측정 가능한 끝점에 치료 그룹 randomizing 대신 치료 개입의 시작의 수준에 의해 제한 됩니다. 몸 무게, 신진 대사 상태 또는 유사한. 여기, 다이어트 유발 된 내 쉬 마우스 모델에서 섬유 증을 전시 하지 않는 마우스를 제외 처리 그룹 사이 유사한 섬유 증과 동물 동등 하 게 배포 하 고 초기 간 질환의 평가 대 한 간 생 검 기술을 설명 합니다. 이 수준은 다음 vivo에서 약리 효과 대 한 진정한 이해에 대 한 터미널, 사후 개입 수준 비교 될 수 있다 따라서 더 정확 하 게 임상 시험 디자인 전략을 반영 하 고. 마우스는 제대로 취 하 고 살 균 조건을 사용 하 여 수술에 대 한 준비. 작은 절 개는 복 부 상단에 고 간 왼쪽된 측면 엽 노출. 간의 수술로 제거 하 고 비슷한 크기의 조각을 흡수 젤라틴의 어떤 출혈을 멈추게 하는 그 자리에 들어가게 된다. 마우스는 수술 봉합 하 고 붙인 폐쇄 하 고 1 일 이내 다시 정상으로 회복 됩니다. 전체 프로세스는 마우스 마다 5-10 분 걸립니다. 여기 우리는 글 루카 곤 같은 펩 티 드-1 (GLP-1) 수용 체 주 작동 근 liraglutide 쥐에 내 쉬 끝점에의 영향을 평가 하기 위해 사전 연구 생을 활용 하 여이 절차의 유틸리티를 예증.

이 연구를 위해 쥐 치료 그룹에 무작위로 했다 (n = 12/그룹) 사전 연구 생 증 등급 및 몸 무게에 따라. 마우스 관리 되었다 차량 (PBS) 또는 liraglutide (nmol/5kg) 42 일 (차량 또는 복합 관리 10 mL/kg 피하, 일단 매일 볼륨을 복용량). 42 일에 쥐 비 금식 상태, 간 excised 및 조직학에 대 한 처리 (CO2 흡입)를 통해 안락사 되었다.
생 검 및 터미널 간 조각 하룻밤 10% 포 르 말린, 고정 했다 다음 hematoxylin 및 오신, 시리우스 레드, 표준 프로토콜9통해 얼룩 처리 되 고 포함 된 파라핀. 조직 섹션 내 쉬 활동 점수 (NAS) 시스템1,2에 따르면 병리학 자에 의해 멀게 방식에서 평가 됐다. NAS는 앞에서 설명한9steatosis, lobular 염증 및 hepatocyte 열기구 (0-3의 점수를 주어진 각 매개)에 대 한 질병의 정도 반영 합니다.
간 생 검을 허용 기준 (전 생 검) 섬유 증 점수에 대 한이 연구의 디자인으로 통합. 총 118 쥐 내 쉬 다이어트의 26 주 후 biopsied 되었고 간 섬유 증 및 steatosis 각 생 검 (그림 1)에 대 한 득점 했다. 이러한 118 마우스의 49 마우스는 낮은 섬유 증에 따라 제외 된 (0의 점수), 높은 섬유 증 (비정상적인 병 리 전시 4의 점수), 비정상적인 체중 감소 및 상처 치유. 69 마우스에 대 한 허용이 제외 기준 연구 그룹으로 할당 하 고 내 쉬 형 개선 치료 (그림 1) 보살을 왼쪽.
마우스는 6 주 동안 차량 또는 GLP 1R 주 작동 근 liraglutide (5 nmol/kg)로 치료 했다. 차량 처리 그룹에서 1 마우스 전시 악화 섬유 증 및 4 쥐 악화 NAS 점수를 보였다 (그림 2A-B). Liraglutide 치료 증 (그림 2C)의 전반적인 개선, 치료 그룹 개선의 17%와 변경 되지 않은 나머지 83% 연관 되었다. 마찬가지로, liraglutide 치료 향상 전반적인 NAS (그림 2D) 점수, 그룹의 66% 변동 NAS 점수와 33% 향상 된 데.
또한, liraglutide 치료 염증 개선, 그룹의 75%와 낮은 염증 점수 및 25% 변경된 (그림 3B)을 남아 있었다. 차량 치료 악화 염증, 더 높은 염증 점수를 갖는 그룹의 17%와 83% 변하지 않게 남아 있었다 (그림 3A). 베이스 라인 끝에서 변하지 않게 남아 있었다 steatosis 점수 모두 차량 및 liraglutide 처리 그룹 (그림 3A, B)에 연구. 염증 및 열기구 매개 변수 개별 마우스도 (그림 3C-F)을 표시 됩니다에 대 한 후 생 검 비교 대 사전.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig1.jpg"> 그림 1: 사전 심사 간 생 검 섬유 증 및 NAS 점수 . (A) 섬유 증, 간 생 검을 통해에 대 한 검사 했다 모든 118 쥐의 표현입니다. (B 와 C) 표시 초기 섬유 증 및 NAS 점수, 각각, 후 자격이 쥐 연구 그룹으로 분류 했다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig2.jpg"> 그림 2: 섬유 증 및 NAS 점수, 사전 생 검 및 사후 개입. 차량 (A, C) 또는 liraglutide 처리 (B, D) 마우스, 기준선 간 생 검 끝에서 측정에 대 한 백분율 응답자 분석 연구 간 섬유 증 단계 (A, B)에 대 한 샘플의 및 NAS (C, D). 각 그룹에 대 한 사전 연구에서 변경 후 연구 생 검 선으로 표시 됩니다. 각 단계 마다 득점 포인트는 약간 동물의 시각적 분리 수 있도록 이동,이 시각화 용도로 점수에 어떤 차이 반영 하지 않습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59130/59130fig3.jpg"> 그림 3: Steatosis, 염증 및 열기구, 전 생 검 및 사후 개입. 차량 (A, C, E) 또는 liraglutide 처리 (B, D, F) 쥐, 기준선 간 생 검 끝에서 측정에 대 한 백분율 응답자 분석 연구 간 샘플 steatosis의 점수 (A, B), (C, D) 염증과 열기구 (E, F). 각 그룹에 대 한 사전 연구에서 변경 후 연구 생 검 선으로 표시 됩니다. 각 단계 마다 득점 포인트는 약간 동물의 시각적 분리 수 있도록 이동,이 시각화 용도로 점수에 어떤 차이 반영 하지 않습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59130/59130fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis NASH Resolution

간 생 검 임상 설정에서 무알코올 steatohepatitis (steatosis, 염증, 열기구, hepatocyte 및 섬유 증)의 단계를 평가 하는 데 사용 됩니다. 여기, 우리는 평가 방식으로 더 많은 치료제의 임상 시험 정렬 있도록 조직학 분석을 위해 사용 될 수 있는 쥐에 지속 가능 간 생 검을 보여 줍니다.

무알코올 Steatohepatitis (NASH) 해상도 평가 하기 위해 쥐에 지속 가능 간 생 검 절차의

Clinical trials assessing therapies for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) involve a baseline and end of study liver biopsy, and ...

비알코올성 염간염 또는 NASH를 가진 마우스에 있는 이 생존가능한 간 생검 절차는 NASH가 없는 동물의 배제 및 내정간섭에 대한 반응의 정확한 측정을 둘 다 허용합니다. 이 절차는 간과의 사후 치료 병리학을 비교하고 약물 효능의 보다 정확한 평가를 허용하는 NASH 연구를 위한 임상 시험 설계를 밀접하게 모방합니다. 간 엽을 노출하는 것은 처음에 도전이 될 수 있습니다.손가락이나 면에 기울어진 어플리케이터로 조직을 먼저 노출하여 가장 적합한 것을 찾아보십시오. 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 1 - 2 센티미터, 세로 복부 피부 절개는 즉시 심경화 과정과 마취 마우스의 왼쪽에 약간 caudal합니다. 집게와 가위를 사용하여 복벽이 노출되고 간이 근육 조직 아래에 시각화 될 때까지 피부를 해부하십시오.멸균 메스 블레이드를 사용하여, 복부 벽에 1-2센티미터 절개를 하여 간 좌측 측삭 엽을 노출시키고, 왼쪽 측면 엽 아래에 멸균 면봉을 놓아 절개를 통해 노출되는 부분을 부드럽게 추출한다. 멸균식 식염수에 흠뻑 젖은 거즈 조각을 노출된 엽 아래에 놓고 멸균 가위를 사용하여 추출된 간에서 30-50밀리그램의 쐐기 모양의 조직을 소비합니다. 간 웨지 조각과 비슷한 크기의 흡수성 젤라틴 압축 스폰지 조각을 자르고 멸균 집게를 사용하여 스폰지를 간 절단 부위에 삽입합니다.젤라틴이 간 표면에 부착될 때까지 집게와 함께 스폰지를 제자리에 고정하고 혈청은 간 생검을 다운스트림 분석을 위한 적절한 용기에 넣기 전에 달성됩니다. 간을 복부로 부드럽게 돌려보내 스폰지를 방해하지 않도록 주의하고, 전체 정사각형 매듭으로 시작하고 끝나는 것은 5-0 코팅 된 흡수성 봉합사로 복부 벽을 봉합합니다. 그런 다음 7mm 상처 클립으로 피부를 닫고 배치 후 완전한 폐쇄를 확인하고 마우스를 완전한 회복이 될 때까지 모니터링하여 가열 된 표면의 깨끗한 케이지로 되돌릴 수 있습니다.이 대표적인 실험에서, 118 마우스는 NASH를 유도하기 위하여 지방, 과당 및 콜레스테롤에서 높은 관습 규정식에 29 주 후에 생검되었습니다. 섬유증과 스테토시스의 수준은 각 생검에 대해 다음 득점했다. 마우스는 저또는 높은 섬유증과 비정상적인 체중 감소 또는 상처 치유에 기초하여 연구에서 제외되었고, 나머지 마우스는 6주 동안 차량 또는 글루카곤 과 같은 펩티드-1 수용체 작용제 리라글루티드로 치료되었다.차량 처리 군에서, 1개의 마우스는 섬유증에 있는 증가를 보여주었고 4개의 마우스는 NASH 활동 점수에 있는 증가를 보여주었습니다. Liraglutide 처리는 섬유증의 전반적인 개선과 연관되었습니다, 와 17% 치료 단 개선 및 83% 변경되지 않은 남아. 마찬가지로, 리라글루티드 치료는 전체 NASH 점수를 향상, 와 함께 66% 향상 된 NASH 활동 점수를 나타내는, 33%는 변경되지 않은 남아.또한, liraglutide 치료는 염증을 개선, 와 함께 75% 치료 후 낮은 염증 점수를 가진 그룹의, 차량 치료 동물 염증의 증가 경험 하는 동안. Steatosis는 고뇌증 처리에 의해 영향을 받지 않았고, 개입 전후에 두 그룹에서 변경되지 않았습니다. 간을 과도하게 손상시키지 않도록 주의하여 필요에 맞게 적절하게 분석할 수 있도록 하십시오.이 절차는 NASH 간에서 새로운 치료법의 전 및 후 치료 효과를 비교하여 임상 시험 설계를 모방하는 데 사용할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Incorporation of a Survivable Liver Biopsy Procedure in Mice to Assess Non-alcoholic Steatohepatitis (NASH) Resolution

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

마우스의 간 국소 빈혈에 대한 교수형 - 체중 시스템의 사용

Acute liver injury due to ischemia can occur during several clinical procedures e.g. liver transplantation, hepatic tumor resection or trauma repair and ...

연구

의학

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

쥐의 뇌에 직접 약물 전달 이소성 점막 Engrafting 절차

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

Vivo에서 Photolabeling 신생아 쥐에 있는 조 혈 모 세포의 이동성 잠재력을 평가 하는 콜론에 셀의

Enteric bacterial communities are established early in life and influence immune cell development and function. The neonatal microbiota is susceptible to ...

Measurement of the Hepatic Venous Pressure Gradient and Transjugular Liver Biopsy

간 정맥 압력 그라데이션 및 경정맥 간 생검의 측정

Here we provide a detailed protocol describing the clinical procedure of hepatic venous pressure gradient (HVPG) measurement in patients with advanced ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

이식 품질 평가를 위해 화학 생검 사용

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

뮤린 정밀 절단 간 슬라이스 간 생물학의 Ex Vivo 모델로

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

3D Imaging of the Liver Extracellular Matrix in a Mouse Model of Non-Alcoholic Steatohepatitis

비알코올성 지방간염 마우스 모델에서 간 세포외 기질의 3D 이미징

Non-alcoholic steatohepatitis (NASH) is the most common chronic liver disease in the United States, affecting more than 70 million Americans. NASH can ...

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model

Palmitic Acid-Induced In Vitro 모델에서 비알코올성 지방간 질환에 대한 Platycodin D의 보호 효과 조사

The occurrence of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been increasing at an alarming rate worldwide. Platycodon grandiflorum is widely used as a ...