Name: modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier
Uploaded: 2019-02-02T14:30:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier at JoVE.com

Detta arbete fick stöd av naturen Science Foundation beviljandet av Hubei-provinsen, Kina [Grant No. 2018CFB761].

1. djurhållning
<ol><li>Använd 12 veckor gammal Kunming möss. Obs: Vi använde möss (n = 40, 20 män, 37 – 46 g, menar 42.38 ± 2.39 g) från den experimentella djur Center i Tongji Medical College.</li>
	<li>Hus på möss under standart villkorar med fri tillgång till mat och dricksvatten. Hålla två möss i en 530 cm2 bur med trä rakning sängkläder.</li>
	<li>Upprätthålla en rumstemperatur mellan 21 – 23 °C.</li>
	<li>Mata möss med en normal salt kost (0,3% NaCl) under hela studien.</li>
</ol>2. blod provsamling
<ol><li>Förbered följande utrustning: vakuumrör (1 mL), fjärilsnål, monokel förstoringsglas och besöksförbud plasthållare. Placera dem på en steril yta (figur 1).</li>
	<li>Placera en mus i ett besöksförbud plasthållare och tvätta stjärten med varmt vatten (20 – 30 °C). Torka svansen med 70% etanol-mättade bomullstussar att expandera venen. Välj höger eller vänster svans venen för blodprovstagning. Förstå den nedre delen av svansen försiktigt och hålla svansen rakt under blod provsamling.</li>
	<li>Samla in blod. Om jämföra metoder, samla in blod i två grupper: ”experimental” gruppen med hjälp av proceduren som vi har utvecklat, presenteras nedan, och ”konventionella” gruppen med en konventionell metod, också presenteras nedan.<ol>
<li>Experimentell samling:<ol>
<li>Bära en monokel förstoringsglaset för att förbättra visning för punktering av venen som svans. Infoga 22 G fjäril nålens spets i en av laterala svans vener på en ställning cirka halva sträckan distalt från spetsen av svansen på en ängel ca 10°, mot basen av svansen för flera prover.</li>
			<li>Infoga gummi slutet av fjäril nålen i det vakuum bloduppsamlingsrör samla blod (figur 2). Obs: Om blodet slutar flöda ut under blodinsamling, nål vinkeln snabbt justeras. För att undvika koagulation i nålen, en annan punktering position bör väljas om blodet slutar flöda ut efter 15 s.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Konventionell metod:<ol>
<li>För in nålen ansluten till en spruta in i laterala venerna ungefär en tredjedel av avståndet distalt från spetsen av svansen.</li>
			<li>När blodet visas i navet, dra tillbaka kolven långsamt för att samla in blod (figur 3)7. Obs: För att ytterligare belysa effekterna av varierande erfarenhet med blodinsamling, en nybörjare och expert valdes för att samla in blodprov med experimentella och konventionella metoder samtidigt.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Efter blodinsamling, nålen och tryck på punktering poängen att stoppa blödning. Sedan släpper musknappen från besöksförbud plasthållare och återgå musen till sin bur. Obs: Det har rapporterats att upp till 10% av totala blod volym kan säkert bort från ett friskt djur på 2 veckors intervall8, så ca 175 µL blod samlades varje gång i enlighet med etiska principer.</li>
	<li>Använda rör med EDTA för att samla plasma och använda rören utan antikoagulantia för att samla serum. Försiktigt Invertera röret flera gånger och sätta dem på isen vertikalt.</li>
	<li>Centrifugera blodet provet samling rören i en kyld centrifug vid 1 000 x g i 10 min att separera plasma och serum. Obs: Framgångsrik blodtappning definieras som att erhålla en volym av 175 µL varje gång. Högst tre punkteringar bör utföras, och en misslyckad blodinsamling definieras som en total blodvolym på mindre än 175 µL efter tredje punkteringen. Provtagning varaktighet definieras som tiden från svans ven punkteringen till borttagning av nålen efter blodtappning.</li>
	<li>Samla in blod två gånger i intervaller om 2 veckor8.</li>
</ol>3. statistisk analys
<ol><li>Använda kommersiellt tillgängliga statistisk programvara för analys. Presentera data som medelvärde ± standardavvikelse, använder p < 0,05 som cutoff för statistisk signifikans.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Grouzmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sampling+methodology+is+crucial+for+precise+measurement+of+plasma+catecholamines+concentrations+in+mice.">Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice.</a> European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).</li><li>Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sublingual+and+submandibular+blood+collection+in+mice:+a+comparison+of+effects+on+body+weight,+food+consumption+and+tissue+damage.">Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage.</a> Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).</li><li>Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+sublingual+vein+in+mice+and+hamsters:+a+suitable+alternative+to+retrobulbar+technique+that+provides+large+volumes+and+minimizes+tissue+damage.">Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage.</a> Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).</li><li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+blood+collection+in+the+mouse.">Methods of blood collection in the mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li><li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System.">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).</li></ol>

Författarna har något att avslöja.

Föreliggande studie beskriver en lätt att lära blod insamlingsmetod hos möss som är överlägsen konventionella tekniker. Första kan metoden bemästras enkelt med en hög framgång. För det andra, det är baserat på principen om vakuum undertryck och möjliggör kontinuerlig ritning av blod med minskad risk för direkt blodexponering, vilket också minskar risken för kontaminering och hemolys9. För det tredje, denna metod är genomförbart för frekvent provtagning av blod med tillräckliga volymer från möss under en kort tidsperiod för olika forskningsändamål. Dessutom förfarandet tillfogar endast minimal skada på möss, och blodinsamling kan utföras utan användning av bedövningsmedel; Således, påverkan av stress respons och bedövningsmedel på blodprov kan undvikas.
Svans venen är en överlägsen plats för blodprovstagning enligt godkända protokoll7. Dock är det inte alltid lätt att få tillräcklig blodvolym från tunn svans vener med låga flöden. I detta fall, huden är vanligtvis uppskuren och ven blir penetrerad av en lansett, eller slutet av svansen avlägsnas snabbt genom en rakhyvel.
Detta protokoll syftar till att förbättra metodiken för blodinsamling från möss använder vakuum blod insamlingssystemet, som kräver en vakuum bloduppsamlingsrör för prov och fjärilsnål monokeln förstoringsglas. Detta vakuum blod provtagningssystem som vanligtvis används för insamling av blodprov från patienter i daglig klinisk praxis10. Med hjälp av en monokel förstoringsglas är den perfekta punktering en svans ven lättare att hitta. När spetsen av en nål sätts in i svansen venen, kommer automatiskt blodflödet i vakuum röret på grund av undertryck. Efter drar nålen från svans venen, kommer som blockeras i katetern blodflödet till samlande vakuumrör på grund av vakuum.
Följande tips är viktiga för framgångsrik tillämpning av metoden. Först varje mus kroppsvikt bör vara 40 g eller högre för att minska svårigheten i punktera och få tillräckligt med blod. Andra, när det gäller misslyckade blodinsamling, praktiker bör försök att dra ut injektionsnålen långsamt tills blodet fortsätter att strömma ut. För det tredje är det nödvändigt att förlänga svansen för att undvika någon rörelse vid blodprovstagning. Hålla nålen försiktigt kan hjälpa till att hålla kanylspetsen i venen så musen svans flyttas. Om blodet slutar flöda ut under blodinsamling, fjärde justeras nål vinkeln i tid. För att undvika koagulation i nålen, en annan punktering position bör väljas om blodet slutar flöda ut efter 15 s. Slutligen rekommenderas i samarbete med två operatörer medan du använder denna teknik för att samla blod från möss.
Kort sagt, är metoden antagna vakuum blod insamling för användning i möss säker, genomförbart och lätt att träna. Denna metod gör frekvent provtagning av blod med tillräcklig blod volymer från icke-sövd möss.

Blodprovstagning från djur som är inblandade i experiment är en grundläggande forskning teknik. Det finns några tillgängliga metoder för blodinsamling av från möss, inklusive svans snips och punktera av hjärtat, retro-orbital plexus, halsvenen, caudal ven och vena cava. Helst bör blod samlas i ett minimalt invasivt sätt, med minimal inverkan på djurens hälsa. Men de vanligaste teknikerna ofta orsaka stress på djur och kan påverka forskning resultat1. Blodinsamling från retro-orbital plexus kan användas för att erhålla tillräckligt blodvolym från möss2. Men, det kan resultera i svår vävnadsskada och tillåter inte för att få blodet upprepade gånger i kort tid intervall3.
Den kaudala ven är en överlägsen plats för blodinsamling av, som orsakar minimal skada på möss. Dock svans venerna i möss är tunna, och det är ibland svårt att få tillräckligt med blod genom konventionella punktering teknik. I vissa fall krävs upprepade punkteringar för att få önskad blodvolym. Anestesi är också allmänt rekommenderas att underlätta blodprovstagning från svans venerna i möss.  Dessutom kan en skalpell, rak kant rakblad eller vass sax behövas ta bort ändarna på svansar att erhålla den nödvändiga blod prov4. Vi har tidigare rapporterat framgångsrika blodinsamling från svans venerna i icke-nedsövd råttor i det vakuum blod prov insamlingssystemet, vilket minskade risken för blod föroreningar och undvika behovet av upprepade punkteringar5. Denna studie rapporterar liknande blod insamling metoder i icke-sövd möss.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:585px;" width="583">
	<tbody>
		<tr height="78">
			<td height="78" style="height:78px;width:166px;">Double-pointed needle</td>
			<td style="width:135px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:129px;">20163151718</td>
			<td style="width:154px;">22G (0.7 mm x 25 mm)</td>
		</tr>
		<tr height="78">
			<td height="78" style="height:78px;width:166px;">Eyeglass magnifier</td>
			<td style="width:135px;">Vergroberung</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:154px;">1.5x</td>
		</tr>
		<tr height="78">
			<td height="78" style="height:78px;width:166px;">Normal salt diet for mice</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:154px;">Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study.</td>
		</tr>
		<tr height="78">
			<td height="78" style="height:78px;width:166px;">Plastic holder</td>
			<td style="width:135px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:154px;">35-45 g rat hoder</td>
		</tr>
		<tr height="78">
			<td height="78" style="height:78px;width:166px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td style="width:135px;">SPSS Inc, Chicago; USA</td>
			<td style="width:129px;">Version 17.0.</td>
			<td style="width:154px;"></td>
		</tr>
		<tr height="90">
			<td height="90" style="height:91px;width:166px;">Syringe</td>
			<td style="width:135px;">Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China</td>
			<td style="width:129px;">20160911A</td>
			<td style="width:154px;">1 mL (Matching needle size: 0.45&#215;16RW LB)</td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:166px;">Vacuum blood collection system</td>
			<td style="width:135px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:129px;">20171222</td>
			<td style="width:154px;">1 mL (&#934;12.4&#215;L75)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modified blood collection from tail veins of non-anesthetized mice with a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier

Blod provtagning är grunden för experimentell forskning på djur. Det är viktigt att erhålla adekvat blodprov för olika forskningsändamål. Svans venerna i möss är små, och det är ibland svårt att få krävs blodvolymen genom konventionella punktering metoder. Denna studie undersöker överlägsenhet av upprepade blod provsamling från svans venerna i möss genom användning av ett vakuum blod insamling systemet och glasögon förstoringsglas (experimentgruppen) jämfört med konventionella blodprovstagning metoder (konventionella gruppen) , utförs av nybörjare och experter, respektive. Med hjälp av en monokel förstoringsglas infogas en fjäril nålspetsen i svansen venen i varje mus i den experimentella gruppen. När venen blir penetrerad framgångsrikt, samlas ett blodprov i vakuum samling röret genom införande av gummi slutet av en fjärilsnål i det vakuum bloduppsamlingsrör. Kolven används sedan för att samla blod utan hjälp av glasögon förstoringsglaset i gruppen konventionella. Andelen framgångsrika för blod provtagning av nybörjare och experter visade sig vara 70% vs. 100% (p < 0,01) i experimentgruppen och 35% jämfört med 85% (p < 0,01) i gruppen konventionella. För både nybörjare och experter var punktering gånger krävs för att få krävs blodprov betydligt lägre i den experimentella gruppen jämfört med konventionella gruppen (2.40 ± 0,75 vs. 2.90 ± 0,31, p < 0,05; 1,15 ± 0,37 vs. 1,55 ± 0,76, p < 0,05). Avslutningsvis presenteras blod provtagning tekniken är genomförbart och lätt att träna och gör frekvent provtagning av adekvat blod volymer från icke-sövd möss.

Kroppsmassa, blod insamling volymer och provtagning varaktigheter för de två grupperna Blodprover samlades från 20 möss (10 hanar) två gånger med 2 veckors intervall i varje grupp. Genomsnittlig kroppsmassa möss var likartad mellan de experimentella och konventionella grupperna för nybörjare och experter, respektive (42.40 g ± 1,42 g vs 42.65 g ± 1.14 g, p > 0,05; 42.55 g ± 2,91 g vs 43,20 g ± 2,69 g, p > 0,05). Insamlade blodet volymer och provtagning varaktigheter var liknande mellan de två grupperna i experter (184.25 µL ± 11.95 µL vs. 171.75 µL ± 25,61 µL, p > 0,05; 1,85 min ± 0,68 min vs. 2.17 min ± 0.80 min, p > 0,05). Dock sågs högre insamlade blodet volymer och kortare provtagning varaktigheter i experimentella gruppen jämfört med konventionella gruppen i nybörjare (172.00 µL ± 15.17 µL vs. 148.50 µL ± 30,22 µL, p < 0,01; 3.11 min ± 0,44 min vs. 4.08 min ± 0,61 min, p < 0,01). Jämfört med nybörjare, experter samlas in högre blod volymer och visade lägre provtagning tider med hjälp av experimentella och konventionella metoder (184.25 µL ± 11.95 µL vs. 172.00 µL ± 15.17 µL, p < 0,01; 171.75 µL ± 25,61 µL vs. 148.50 µL ± 30,22 µL, p < 0,05; 1,85 min ± 0,68 min vs 3.11 min ± 0,44 min, p < 0,01; 2.17 min ± 0.80 min vs. 4.08 min ± 0,61 min, p < 0,05) (tabell 1).
Framgångsrika och punktering gånger av de två grupperna Jämförelse av framgång priser mellan nybörjare och experter var 70% (14/20) vs. 100% (20/20) (p < 0,01) i experimentgruppen och 35% (7/20) jämfört med 85% (17/20) (p < 0,01) i gruppen konventionella. Högre andelen framgångsrika sågs också i experimentella gruppen jämfört med konventionella gruppen i nybörjare [70% (14/20) respektive 35% (7/20), p < 0,05]. Både nybörjare och experter var antalet punkteringar signifikant lägre i de experimentella gruppen jämfört med konventionella gruppen (2.40 ± 0,75 vs. 2.90 ± 0,31, p < 0,05; 1,15 ± 0,37 vs. 1,55 ± 0,76, p < 0,05). Jämfört med nybörjare, observerades lägre punktering gånger för experter med experimentella och konventionella metoder. (1,15 ± 0,37 vs. 2.40 ± 0,75, p < 0,01, 1,55 ± 0,76 vs. 2.90 ± 0,31, p < 0,01) (Tabell 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59136/59136fig1.jpg"> Figur 1: utrustning. Visas är 1 mL vakuum blod insamling rör och en 22 G fjärilsnål (vänster), en monokel förstoringsglas (mitten) och en återhållande plasthållare (höger). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59136/59136fig1large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59136/59136fig2.jpg"> Figur 2: framgångsrik blodtappning i experimentgruppen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59136/59136fig2large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59136/59136fig3.jpg"> Figur 3: framgångsrik blodtappning i gruppen konventionella. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59136/59136fig3large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2">Experimentella gruppen</td>
			<td colspan="2">Konventionella gruppen</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>nybörjare</td>
			<td>expert</td>
			<td>nybörjare</td>
			<td>expert</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kroppsmassa (g)</td>
			<td>42.4±1.42</td>
			<td>42.55±2.91</td>
			<td>42.65±1.14</td>
			<td>43.20±2.69</td>
		</tr>
<tr>
<td>Insamlade blodvolym (µL)</td>
			<td>172.00±15.17</td>
			<td>184.25±11.95#
</td>
			<td>148.50±30.22*
</td>
			<td>171.75±25.61#
</td>
		</tr>
<tr>
<td>Provtagning varaktighet (min)</td>
			<td>3.11±0.44</td>
			<td>1.85±0.68#
</td>
			<td>4.08±0.61*
</td>
			<td>2.17±0.80#
</td>
		</tr>
<tr>
<td>Blod insamling gånger</td>
			<td>20</td>
			<td>20</td>
			<td>20</td>
			<td>20</td>
		</tr>
<tr>
<td>Genomsnittligt antal punkteringar</td>
			<td>2.40±0.75</td>
			<td>1.15±0.37#
</td>
			<td>2.90±0.31*
</td>
			<td>1.55±0.76## *
</td>
		</tr>
<tr>
<td>En tid punktering</td>
			<td>3</td>
			<td>17</td>
			<td>0</td>
			<td>12</td>
		</tr>
<tr>
<td>Två gånger punktera</td>
			<td>6</td>
			<td>3</td>
			<td>2</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tre gånger punktera</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>Misslyckades</td>
			<td>6</td>
			<td>0</td>
			<td>13</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>Framgång</td>
			<td>70%</td>
			<td>100%#
</td>
			<td>35%*
</td>
			<td>85%#
</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1: jämförelse av resultat mellan grupperna experimentella och konventionell. * p < 0,05, ** p < 0,01, experimentell metod kontra konventionell metod. #p < 0,05, ##p < 0,01, nybörjare vs. expert.

Watch this Scientific Journal Video about Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier at JoVE.com

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Denna studie rapporterar blodprovstagning från svans ven i möss med en vakuum extraktion rörledningssystemet med monokel förstoringsglas. Vår metod är lätt att öva och kunde användas för upprepade blodprov hos möss.

Modifierade blodinsamling från svans venerna i icke-sövd möss med en vakuum blod insamlingssystem och glasögon Skärmförstoraren

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

Denna studie rapporterar blodprov från svansvenen hos möss med hjälp av ett vakuum extraktionsrör system med glasögon förstoringsglas. Vår metod är lätt att öva och kan användas för upprepande blodprovstagning hos möss. En mus placeras i plast fasthållande hållare först.Stjärten rengörs och torkas av med 70%etanol. Då föraren bär glasögonförstoraren för att förbättra visningen av musen svans. En fjäril nål spets sedan införas i en av de vidgade laterala svans vener, och blodet samlas in i vakuum uppsamlingsröret genom gummi änden av fjärilsnålen.Slutligen nålen avlägsnas och blodinsamlingsprocessen är klar. Svansvenen är en föredragen plats för blodprovstagning. Denna blodprovstagningsmetod är relaterad till minimal skada på möss, dock är svansvenen hos mössen mycket tunn så det är ibland svårt att punktera, här beskriver vi en enkel svansvenen blodprovtagningsmetod i på labbtest möss med hjälp av ett vakuum extraktionsrör system.Denna metod är enkel och effektiv och den kan användas för att få fram erforderligt blod upprepade gånger hos möss. Förfarandet kommer att demonstreras av två medlemmar av vårt laboratorium, Xiaoyan Liu och Wusong Zou Till att börja med placerar vi en plastsnahållande hållare, vakuumrör med gummipropp, och en dubbel spetsig nål, och glasögonförstorare på en steril yta. Därefter placerar du en mus i plaståterhållaren.Fram- och baktassar av musen ska vara i ett bekvämt läge. För att få blodprov, tvätta svansen med varmt vatten 20 till 30 Celsius grader, torka svansen med 70%etanol mättade bomullstussar för att expandera venen. Välj höger eller vänster svansven för blodprovstagning.Ta tag i nedre delen av svansen försiktigt och håll svansen rak under blodprovssamling. Använd glasögonförstoraren för att förbättra visningen för att underlätta punktering av svansvenen. Sätt in 22 gauge butterfly needle tip i en av de laterala svansvenerna runt en halv distala från spetsen av svansen i vinkel på cirka 10 grader, rör sig mot basen av svansen för flera prover.Samla in blod i vakuumuppsamlingsröret genom att föra in gummiänden på fjärilsnålen i vakuumbloduppsamlingsröret. Svansen på möss kan användas för flera blodsamlingar, så ofta som behövs, enligt det godkända protokollet. Det är inte alltid lätt att få tillräckligt med blodvolym från den tunna och låga blodflödessvansvenen hos möss med den traditionella metoden.Vår metod är enkel och effektiv och kan användas för att få tillräcklig blodvolym upprepade gånger hos möss. Det rapporteras att upp till 10%av den totala blodvolymen säkert kan avlägsnas från ett friskt djur med två veckors mellanrum, så omkring 175 mikroliters blodprov av möss samlades varje gång i enlighet med etik rektorer. Två, det är viktigt att förlänga svansen för att undvika dess rörelse i processen för blodprovstagning.För att undvika blodkoagulering i nålen bör ett annat punkteringsläge väljas om blod slutar rinna ut över 15 sekunder. Framgångsrik blodinsamling definierades som att erhålla 175 mikroliters blod varje gång. Maximal punktering gånger sattes till tre prövningar.Om den totala blodvolymen var lägre att 175 mikroliter efter den tredje punktering, definierades det som en misslyckad blodinsamling. När adekvat provvolym har samlats in, dra tillbaka nålen från venen och kort tillämpa tryck på insättningsstället för att stoppa blödningen. För att samla in plasma, använd rör som innehåller EDTA, ett antikoaguleringsmedel, försiktigt invertera röret flera gånger för att blanda antikoaguleringsmedel med blodet och placera proverna på is vertikalt.Snurra helblodsprovsuppsamlingsrör i den kylda centrifugen i 10 minuter. Extrahera plasma, var noga med att inte störa de röda och vita blodkroppsskikten. För att samla serin, använd rör utan antikoagulant.Båda typerna av prover kan användas omedelbart eller lagras vid under 80 grader Celsius i upp till ett år. Denna studie syftade till att undersöka överlägsenhet upprepade blodprov insamling från svans ven av möss genom vakuum blodinsamling system och glasögon förstoringsglas. Experimentell grupp i jämförelse med den konventionella blodprovtagningsmetoden.Konventionell grupp, av nybörjare respektive experter, samlade blodvolym och provtagning varaktighet var liknande mellan två grupper för experter, dock ökad insamlad blodvolym och kortare provtagning varaktighet sågs i experimentell grupp jämfört med den konventionella gruppen för nybörjare. Högre framgång sågs också i den experimentella gruppen jämfört med den konventionella gruppen för nybörjare. Denna blodprovstagningsmetod är lätt att bemästra och har en hög framgång.Antalet misslyckade punktering kunde minskas till en jämfört med med traditionell metod. Dessutom orsakar detta förfarande endast minimal skada på möss, det är bara svanstejpen hos mössen utan behov av bedövningsmedel, att påverkan av stressrespons i bedövningsmedel på blodprovet kunde undvikas.

Research

JoVE Journal

Behavior

Method for Simultaneous fMRI/EEG Data Collection during a Focused Attention Suggestion for Differential Thermal Sensation

Metod för samtidig fMRI / EEG-datainsamling under ett fokuserat uppmärksamhetsförslag för differential termisk sensation

In the present work, we demonstrate a method for concurrent collection of EEG/fMRI data. In our setup, EEG data are collected using a high-density ...

Construction of Microdrive Arrays for Chronic Neural Recordings in Awake Behaving Mice

Konstruktion av Microdrive arrayer för kroniska neurala Recordings i Vakna uppför Möss

State-of-the-art electrophysiological recordings from the brains of freely behaving animals allow researchers to simultaneously examine local field ...

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

Kontextuell och cued rädsla Conditioning Test Med hjälp av en videoanalyssystem hos möss

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Assessment of Murine Exercise Endurance Without the Use of a Shock Grid: An Alternative to Forced Exercise

Bedömning av murina Exercise Endurance utan användning av en chock Grid: Ett alternativ till Forcerad Motion

Using laboratory mouse models, the molecular pathways responsible for the metabolic benefits of endurance exercise are beginning to be defined. The most ...

The Attentional Set Shifting Task: A Measure of Cognitive Flexibility in Mice

Uppmärksamhets Set Shifting Uppgift: Ett mått på kognitiv flexibilitet hos möss

Cognitive impairment, particularly involving dysfunction of circuitry within the prefrontal cortex (PFC), represents a core feature of many ...

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Den modifierade Hole Board - Mätning Beteende, Kognition och social interaktion i möss och råttor

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Protocol for Data Collection and Analysis Applied to Automated Facial Expression Analysis Technology and Temporal Analysis for Sensory Evaluation

Protokoll för datainsamling och analys Applied till Automated Ansiktsuttryck analysteknik och Temporal Analys för sensorisk utvärdering

We demonstrate a method for capturing emotional response to beverages and liquefied foods in a sensory evaluation laboratory using automated facial ...

The Treadmill Fatigue Test: A Simple, High-throughput Assay of Fatigue-like Behavior for the Mouse

Löpbandet Trötthet Test: En enkel, med hög kapacitet Analys av trötthet-liknande beteende för musen

Fatigue is a prominent symptom in many diseases and disorders and reduces quality of life for many people. The lack of clear pathogenesis and failure of ...

A Method for Manipulating Blood Glucose and Measuring Resulting Changes in Cognitive Accessibility of Target Stimuli

En metod för manipulering av blodglukos och mäta resulterande förändringar i kognitiv Tillgång till Target Stimuli

Much research in social psychology has investigated the impact of bodily energy need on cognition and decision-making.  As such, blood glucose, the body's ...

Short Session High Intensity Interval Training and Treadmill Assessment in Aged Mice

Kort Session högintensiv intervallträning och löpband bedömning i åldern möss

High intensity interval training (HIIT) is emerging as a therapeutic approach to prevent, delay, or ameliorate frailty. In particular short session HIIT, ...