Name: sample preparation for mass-spectrometry-based proteomics analysis of ocular microvessels
Uploaded: 2019-02-22T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation for Mass-spectrometry-based Proteomics Analysis of Ocular Microvessels at JoVE.com

ويدعم الدكتور مانيكام "الداخلية جامعة أبحاث التمويل" (1 ستوف) من "المركز الطبي الجامعي" في "يوهانس جوتنبرج جامعة ماينز" ومنحة من الأوقيانوغرافية ألماني (MA 8006/1-1).

وأجريت جميع إجراءات تجريبية باستخدام العينات الحيوانية في الالتزام الصارم برابطة البحوث في الرؤية وبيان "طب العيون" (آرفو) "استخدام الحيوانات" في أوفثالميك وأبحاث الرؤية والمبادئ التوجيهية للمؤسسات. أجريت هذه الدراسة والموافقة على قسم لطب العيون، "جامعة ماينز المركز الطبي".
<p class="jove_conten...

<ol>
	<li>Mandal, N., Heegaard, S., Prause, J. U., Honor&#233;, B., Vorum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+proteomics+with+emphasis+on+two-dimensional+gel+electrophoresis+and+mass+spectrometry.">Ocular proteomics with emphasis on two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry.</a> Biological Procedures Online. 12, 56-88 (2010).</li><li>Gregorich, Z. R., Ge, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Top-down+proteomics+in+health+and+disease:+Challenges+and+opportunities.">Top-down proteomics in health and disease: Challenges and opportunities.</a> Proteomics. 14, 1195-1210 (2014).</li><li>Aebersold, R., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry-based+proteomics.">Mass spectrometry-based proteomics.</a> Nature. 422, 198-207 (2003).</li><li>Aebersold, R., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-spectrometric+exploration+of+proteome+structure+and+function.">Mass-spectrometric exploration of proteome structure and function.</a> Nature. 537, 347-355 (2016).</li><li>Cehofski, L. J., Mandal, N., Honor&#233;, B., Vorum, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+platforms+in+vitreoretinal+proteomics.">Analytical platforms in vitreoretinal proteomics.</a> Bioanalysis. 6, 3051-3066 (2014).</li><li>Manicam, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+Unravels+the+Regulatory+Mechanisms+in+Human+Tears+Following+Acute+Renouncement+of+Contact+Lens+Use:+A+Comparison+between+Hard+and+Soft+Lenses.">Proteomics Unravels the Regulatory Mechanisms in Human Tears Following Acute Renouncement of Contact Lens Use: A Comparison between Hard and Soft Lenses.</a> Scientific Reports. 8, 11526 (2018).</li><li>Perumal, N., Funke, S., Pfeiffer, N., Grus, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+lacrimal+proline-rich+protein+4+(PRR+4)+in+human+tear+proteome.">Characterization of lacrimal proline-rich protein 4 (PRR 4) in human tear proteome.</a> Proteomics. 14, 1698-1709 (2014).</li><li>Perumal, N., Funke, S., Pfeiffer, N., Grus, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomics+analysis+of+human+tears+from+aqueous-deficient+and+evaporative+dry+eye+patients.">Proteomics analysis of human tears from aqueous-deficient and evaporative dry eye patients.</a> Scientific Reports. 6, 29629 (2016).</li><li>Perumal, N., Funke, S., Wolters, D., Pfeiffer, N., Grus, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+reflex+tear+proteome+reveals+high+expression+of+lacrimal+proline-rich+protein+4+(PRR4).">Characterization of human reflex tear proteome reveals high expression of lacrimal proline-rich protein 4 (PRR4).</a> Proteomics. 15, 3370-3381 (2015).</li><li>Perumal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+human+aqueous+humour+proteome:+A+comparison+of+the+genders.">Characterization of the human aqueous humour proteome: A comparison of the genders.</a> PloS ONE. 12, 0172481 (2017).</li><li>Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posterior+ciliary+artery+circulation+in+health+and+disease+the+Weisenfeld+lecture.">Posterior ciliary artery circulation in health and disease the Weisenfeld lecture.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 749-757 (2004).</li><li>Zeitz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glaucoma+progression+is+associated+with+decreased+blood+flow+velocities+in+the+short+posterior+ciliary+artery.">Glaucoma progression is associated with decreased blood flow velocities in the short posterior ciliary artery.</a> British Journal of Ophthalmology. 90, 1245-1248 (2006).</li><li>Verma, N., Rettenmeier, A. W., Schmitz-Spanke, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+use+of+Sus+scrofa+(pig)+as+a+model+system+for+proteomic+studies.">Recent advances in the use of Sus scrofa (pig) as a model system for proteomic studies.</a> Proteomics. 11, 776-793 (2011).</li><li>Foulds, W. S., Kek, W. K., Luu, C. D., Song, I. C., Kaur, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porcine+model+of+selective+retinal+capillary+closure+induced+by+embolization+with+fluorescent+microspheres.">A porcine model of selective retinal capillary closure induced by embolization with fluorescent microspheres.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 51, 6700-6709 (2010).</li><li>Sanchez, I., Martin, R., Ussa, F., Fernandez-Bueno, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parameters+of+the+porcine+eyeball.">The parameters of the porcine eyeball.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 249, 475-482 (2011).</li><li>Manicam, C., Perumal, N., Pfeiffer, N., Grus, F. H., Gericke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+insight+into+the+proteome+landscape+of+the+porcine+short+posterior+ciliary+arteries:+Key+signalling+pathways+maintaining+physiologic+functions.">First insight into the proteome landscape of the porcine short posterior ciliary arteries: Key signalling pathways maintaining physiologic functions.</a> Scientific Reports. 6, 38298 (2016).</li><li>Shevchenko, A., Tomas, H., Havli, J., Olsen, J. V., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-gel+digestion+for+mass+spectrometric+characterization+of+proteins+and+proteomes.">In-gel digestion for mass spectrometric characterization of proteins and proteomes.</a> Nature Protocols. 1, 2856-2860 (2006).</li><li>Feist, P., Hummon, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+challenges:+sample+preparation+techniques+for+microgram-quantity+protein+analysis+from+biological+samples.">Proteomic challenges: sample preparation techniques for microgram-quantity protein analysis from biological samples.</a> International Journal of Molecular Sciences. 16, 3537-3563 (2015).</li><li>Cox, B., Emili, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+subcellular+fractionation+and+protein+extraction+for+use+in+mass-spectrometry-based+proteomics.">Tissue subcellular fractionation and protein extraction for use in mass-spectrometry-based proteomics.</a> Nature Protocols. 1, 1872-1878 (2006).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+mouse+liver+plasma+membrane:+use+of+differential+extraction+to+enrich+hydrophobic+membrane+proteins.">Proteomic analysis of mouse liver plasma membrane: use of differential extraction to enrich hydrophobic membrane proteins.</a> Proteomics. 5, 4510-4524 (2005).</li><li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+recovery+and+identification+of+membrane+proteins+from+rat+hepatic+cells+using+a+centrifugal+proteomic+reactor.">Improved recovery and identification of membrane proteins from rat hepatic cells using a centrifugal proteomic reactor.</a> Molecular &amp; Cellular Proteomics. 10, 111 (2011).</li><li>de la Cuesta, F., Mourino-Alvarez, L., Baldan-Martin, M., Moreno-Luna, R., Barderas, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+proteomics+to+the+management+of+vascular+disorders.">Contribution of proteomics to the management of vascular disorders.</a> Translational Proteomics. 7, 3-14 (2015).</li><li>Cottingham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1DE+proves+its+worth...+again.">1DE proves its worth... again.</a> Journal of Proteome Research. 9, 1636 (2010).</li></ol>

التنميط البروتين شاملة لمجموعة متنوعة من عينات العين خطوة أولى هامة ولا غنى عنها لتوضيح الآليات الجزيئية ومسارات مما يشير إلى تورط في الصحة والمرض. من أجل الحصول على بيانات عالية الجودة، وضمان إمكانية تكرار نتائج للنتائج التي تم الحصول عليها من هذه التحليلات، خطوات إعداد العينة السابقة ?...

النهوض في الميدان البروتيوميات، أي تصاريح متكاملة وغير مسبوقة من السلطة جمع البيانات، وإلى حد كبير ثورة فهمنا للآليات الجزيئية الكامنة وراء بعض ظروف المرض، وكذلك كما هو الحال في ما يعكس الدولة الفسيولوجية لخلية معينة السكان أو الأنسجة1،2،،من34. البروتيوميات أثبت أيضا أن تكون منبرا هاما في أبحاث العيون نظراً لحساسية وغير متحيزة تحليل العينات العين المختلفة التي تيسر تحديد علامات المرض المحتملة للتشخيص، والتشخيص في نهاية المطاف يدل على أناقة بالعديد من الدراسات في السنوات الأخيرة، بما في ذلك بعض من خاصتي1،5،6،،من78،،من910. ومع ذلك، غالباً ما يصعب الحصول على العينات البشرية لتحليل البروتين نظراً لأسباب أخلاقية، خاصة بالنظر إلى الحاجة إلى مواد مراقبة من الأشخاص الأصحاء للتحليلات المقارنة يمكن الاعتماد عليها. من ناحية أخرى، كما أنها تمثل تحديا للحصول على كمية كافية من عينات لتحليلات جماعية والمطيافيه الأمثل وموثوق بها. هذا أمر بالغ الأهمية لا سيما للمواد البيولوجية المحدودة الجماهيري مثل الأوعية الدموية الدقيقة للعين. واحد هذه الرئيسية خلف المقلة الأوعية الدموية التي تضطلع بدور محوري في تنظيم تدفق الدم العين هو شريان الهدبية الخلفية قصيرة (sPCA). قد يؤدي أي اضطراب أو الحالات الشاذة في هذا السرير الأوعية الدموية في الانعكاسات السريرية الشديدة، التي يمكن أن تؤدي إلى الآلية المرضية للعديد من الأمراض التي تهدد البصر مثل الزرق ونونارتيريتيك الأعصاب البصرية الدماغية الأمامية (NAION)11 , 12-ومع ذلك، هناك نقص الدراسات توضيح التغييرات البروتين في هذا السرير الشرياني بسبب العيوب المذكورة أعلاه. ولذلك، في السنوات الأخيرة، الخنازير البيت (مستأنسةالبري Sus لينيوس، 1758) برز كنموذج حيوان جيدة في أبحاث العيون نظراً لأوجه التشابه مورفولوجك والنشوء والتطور عالية بين البشر والخنازير13، ،من 1415. عينات العين الخنزير متاحة بسهولة، والأهم من ذلك، يتم تمثيل أكثر دقة للأنسجة البشرية.
ونظرا للدور الهام لهذه الأوعية الدموية في العين، فضلا عن ندرة منهجية تهتم لاستخراج البروتين الفعال والتحليلات من هذه ميكروفيسيلس، نحن تميزت سابقا البروتين sPCA الخنزيري الداخل باستخدام بروتوكول التي أسفرت عن تحديد هوية عدد كبير من البروتينات16. وبناء على هذه الدراسة، لدينا كذلك الأمثل ووصف متعمق منهجيتنا في هذا المقال، الذي يسمح تحليل البروتين من المبالغ الدقيقة للعينات باستخدام sPCA الخنزير كنموذج الأنسجة. أن كان الهدف الرئيسي من هذه الدراسة وضع منهجية متوافقة مع مرض التصلب العصبي المتعدد للأوعية الدموية العين وسائل محدودة، قدمنا أدلة تجريبية كبيرة أن وصف سير العمل يمكن أيضا تطبيقها على نطاق واسع لعينات مختلفة تستند إلى الأنسجة.
ومن المتوقع أن يقوم سير العمل هذا سوف تكون مفيدة لإعداد عالي الجودة المتوافقة مع مرض التصلب العصبي المتعدد عينات من كميات صغيرة من المواد لإجراء تحاليل شاملة من البروتين.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1040px;" width="1039">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:436px;">A. Chemicals</td>
			<td style="width:281px;"></td>
			<td style="width:120px;"></td>
			<td style="width:203px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1, 4-Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">1.11474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium bicarbonate (ABC, CH&#8325;NO&#8323;)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5.33005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Calcium chloride dihydrate (CaCl2)&#160;</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td>5239.1</td>
			<td>2.5 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (PBS)&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Formic acid (CH2O2)</td>
			<td style="width:281px;">AppliChem</td>
			<td style="width:120px;">A0748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">HPLC-grade acetonitrile (ACN, C2H3N)</td>
			<td style="width:281px;">AppliChem</td>
			<td style="width:120px;">A1605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">HPLC-grade methanol (CH3OH)</td>
			<td style="width:281px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:120px;">M/4056/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HPLC-grade water&#160;</td>
			<td style="width:281px;">AppliChem</td>
			<td style="width:120px;">A1589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iodoacetamide (IAA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">I6125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kalium chloride (KCl)&#160;</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td>6781.1</td>
			<td>4.7 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Kalium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td>3904.2</td>
			<td>1.2 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LC-MS-grade acetic acid</td>
			<td style="width:281px;">&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td style="width:120px;">AE69.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Magnesium sulphate (MgSO4)&#160;&#160;</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td style="width:120px;">261.2</td>
			<td>1.2 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NuPAGE Antioxidant</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td style="width:120px;">NP0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NuPAGE LDS Sample buffer&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td>NP0007</td>
			<td>4x</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NuPAGE MES SDS Running Buffer&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td>NP0002</td>
			<td>20x</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NuPAGE Sample reducing agent&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td>NP0004</td>
			<td>10x</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SeeBlue Plus2 pre-stained protein standard&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td style="width:120px;">LC5925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sequencing grade modified trypsin</td>
			<td style="width:281px;">Promega</td>
			<td style="width:120px;">V5111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td>9265.2</td>
			<td>118.3 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td>965.3</td>
			<td>25 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Trifluoroacetic acid (TFA,&#160; C2HF3O2)</td>
			<td style="width:281px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:120px;">108178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#945;-(D)-(+)- Glucose monohydrate</td>
			<td>&#160;Carl Roth&#160;</td>
			<td>6780.1</td>
			<td>11 mM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">B. Reagents and Kits</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5mm zirconium oxide beads&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Next Advance</td>
			<td style="width:120px;">ZROB05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.0mm zirconium oxide beads&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Next Advance</td>
			<td style="width:120px;">ZROB10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Colloidal Blue Staining&#160; Kit</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td style="width:120px;">LC6025</td>
			<td>To stain 25 mini gels per kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NuPAGE 4-12 % Bis-Tri gels</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td>
			<td>NP0321BOX</td>
			<td>1.0 mm, 10-well</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce Bicinchoninic Acid (BCA) Protein Assay Kit&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:120px;">23227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ProteoExtract Transmembrane Protein Extraction Kit, TM-PEK</td>
			<td style="width:281px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:120px;">71772-3</td>
			<td>20 reactions per kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Protein Extraction Reagent (T-PER)</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:120px;">78510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C. Tools</td>
			<td style="width:281px;"></td>
			<td style="width:120px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96-well V-bottom plates</td>
			<td style="width:281px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:120px;">651180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Corning 96-well flat-bottom plates</td>
			<td style="width:281px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">CLS3595-50EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable microtome blades</td>
			<td>pfm Medical</td>
			<td>207500014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable scalpels #21</td>
			<td>pfm Medical</td>
			<td>200130021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection pins&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:120px;">PK47.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td style="width:281px;">&#160;Fine Science Tools</td>
			<td style="width:120px;">14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon conical centrifuge tubes (50 mL)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mayo scissors, Tough cut</td>
			<td style="width:281px;">&#160;Fine Science Tools</td>
			<td style="width:120px;">14130-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision tweezers</td>
			<td style="width:281px;">&#160;Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>Type 5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision tweezers, straight with extra fine tips</td>
			<td style="width:281px;">Carl Roth</td>
			<td>LH53.1</td>
			<td>Type 5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Self-adhesive sealing films for microplates</td>
			<td style="width:281px;">Ratiolab (vWR)</td>
			<td style="width:120px;">RATI6018412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard pattern forceps</td>
			<td style="width:281px;">&#160;Fine Science Tools</td>
			<td style="width:120px;">11000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student Vannas spring scissors</td>
			<td>&#160;Fine Science Tools</td>
			<td>91501-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas capsulotomy scissors&#160;&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Geuder</td>
			<td style="width:120px;">19760</td>
			<td>&#160;Straight, 77 mm</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ZipTipC18 pipette tips</td>
			<td style="width:281px;">Merck Millipore</td>
			<td>ZTC18S096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D. Equipment and devices</td>
			<td style="width:281px;"></td>
			<td style="width:120px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">150 &#215; 0.5 mm BioBasic C18 column</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Scientific, Rockford, USA</td>
			<td style="width:120px;">72105-150565</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 &#215; 0.5 mm BioBasic C18 pre-column&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Scientific, Rockford, USA</td>
			<td style="width:120px;">72105-030515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amicon Ultra-0.5 3K Centrifugal Filter Devices&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:120px;">UFC500396</td>
			<td>Pack of 96.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Analytical balance</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>H51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Autosampler&#160;</td>
			<td>CTC Analytics AG, Zwingen, Switzerland</td>
			<td style="width:120px;">HTS Pal</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BBY24M Bullet Blender Storm&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Next Advance</td>
			<td style="width:120px;">NA-BB-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf concentrator, model 5301</td>
			<td style="width:281px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:120px;">Z368172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf microcentrifuge, model 5424</td>
			<td style="width:281px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:120px;">05-403-93</td>
			<td>Non-refrigerated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heraeus Primo R Centrifuge</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:120px;">75005440</td>
			<td>Refrigerated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Labsonic M Ultrasonic homogenizer&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Sartorius</td>
			<td style="width:120px;">BBI-8535027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LC-MS pump, model Rheos Allegro</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Scientific, Rockford, USA</td>
			<td style="width:120px;">22080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LTQ Orbitrap XL mass spectrometer&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific, Bremen, Germany</td>
			<td style="width:120px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multiskan Ascent plate reader&#160;</td>
			<td style="width:281px;">Thermo Labsystems</td>
			<td style="width:120px;">v2.6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rotator with vortex&#160;</td>
			<td style="width:281px;">neoLab</td>
			<td style="width:120px;">7-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Titanium probe (&#216; 0.5mm, 80mm long)</td>
			<td style="width:281px;">Sartorius</td>
			<td style="width:120px;">BBI-8535612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrasonic bath, type RK 31</td>
			<td style="width:281px;">Bandelin</td>
			<td style="width:120px;">329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xcell Surelock Mini Cell</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>El0001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation for mass-spectrometry-based proteomics analysis of ocular microvessels

استخدام معزولة من الأوعية الدموية العين في المختبر فك الدولة الفيزيولوجية المرضية للعين باستخدام النهج التكنولوجية المتقدمة اتسع اتساعاً كبيرا فهمنا لبعض الأمراض. الطيف الكتلي (مللي ثانية)-برز البروتيوميات أساس كأداة قوية لكشف التغيرات في الآليات الجزيئية والبروتين مما يشير إلى مسارات في الأسرة بالأوعية الدموية في الصحة والمرض. نموذج إعداد الخطوات قبل تحاليل مرض التصلب العصبي المتعدد غير حاسمة للحصول على النتائج استنساخه وتوضيح متعمقة للبروتين المعقدة. هذا مهم خاصة لإعداد ميكروفيسيلس العين، حيث كمية العينة المتاحة لتحليلات محدودة في كثير من الأحيان وهكذا، يشكل تحديا لاستخراج البروتين المثلى. هذه المقالة تسعى لتوفير بروتوكولا فعالة وسريعة وقوية لإعداد عينة من مثالية خلف المقلة العين الأوعية الدموية سرير توظيف الشرايين الهدبية الخلفية قصيرة الخنزير. ويركز هذا الأسلوب على إجراءات استخراج البروتين من المادة طافية وبيليه من العينة بعد تجانس، عينة التنظيف باستخدام أجهزة الطرد المركزي عامل التصفية قبل تنقية التفريد والببتيد هلام أحادي البعد الخطوات للقياس الكمي خالية من التسمية في نظام MS تاين خطية فخ أيون-أوربيتراب اليكتروسبراي لوني سائل. على الرغم من أن هذا الأسلوب قد وضعت خصيصا لتحليلات البروتيوميات ميكروفيسيلس العين، كما قدمنا أدلة مقنعة على أن فإنه يمكن أيضا سهولة استخدام العينات الأخرى المستندة إلى الأنسجة.

توافر عينة محدودة واحدة من العقبات الرئيسية في أبحاث العيون. وفي المقابل، تعطي أساليب الاستخراج للبروتين المثلى من كميات صغيرة من عينات مثل الأوعية الدموية العين غالباً ما تكون قابلة للنقاش. وحتى الآن، هناك ندرة في أساليب خاصة لاستخراج البروتين من الأوعية الدموية خلف ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Sample Preparation for Mass-spectrometry-based Proteomics Analysis of Ocular Microvessels at JoVE.com

Sample Preparation for Mass-spectrometry-based Proteomics Analysis of Ocular Microvessels

توصيف البروتين من أسرة microvascular العين أمر حيوي لفهم متعمق للعديد من أمراض العين في البشر. وتوضح هذه الدراسة طريقة فعالة وسريعة وقوية لاستخراج البروتين وإعداد عينة من الأوعية الدموية الصغيرة التي توظف الشرايين الهدبية الخلفية قصيرة الخنزير كسفن النموذجي لتحليلات الجماهيري-قياس الطيف الكتلي المستندة البروتيوميات.

إعداد نموذج للإعلام-قياس الطيف الكتلي المستندة البروتيوميات تحليل ميكروفيسيلس العين

The use of isolated ocular blood vessels in vitro to decipher the pathophysiological state of the eye using advanced technological approaches has greatly ...

يعد إعداد عينات عالية الجودة متوافقة مع الطيف الطيفي لتحليل البروتيوم الشامل لعينات العين أمرًا بالغ الأهمية لتوضيح الآليات الجزيئية ومسارات الإشارة المتورطة في الصحة والمرض. يمثل تدفق العمل الموصوف نهجًا بسيطًا ولكنه قوي لخطوات إعداد العينات الصارمة التي يتم تلبيتها خصيصًا لتحليل العينات المحدودة الكتلة مثل الأوعية الدموية الدقيقة العينية. على الرغم من أن الهدف الرئيسي من الدراسة هو وضع منهجية متوافقة مع MS لأوعية الدم العينية، يمكن تطبيق تدفق العمل الموصوف على نطاق واسع على عينات مختلفة من الخلايا والأنسجة.عموما، قد الأفراد الجدد لهذه الطريقة النضال لأن تحديد وعزلة اختيار الشريان الخلفي القصير، أو فروع SPCA، يمكن أن يكون تحديا. تم الحصول على عيون بورسين جديدة ، جنبا إلى جنب مع العصب البصري والأنسجة الخارجية ، من المسلخ المحلي على الفور بعد الوفاة. ضع كرة العين في غرفة تشريح تحتوي على عازلة Krebs-Henseleit الباردة للجليد.قطع بعناية بعيدا العضلات المحيطة والأنسجة مع زوج من مقص مايو حادة. جعل شق مع مشرط، وقطع الكرة الأرضية على طول الطائرة الاستوائية مع زوج من مقص مايو حادة حتى يتم فصل العين إلى النصفين الأمامي والخلفي. إزالة الجسم الزجاجي قدر الإمكان من النصف الخلفي للعين باستخدام زوج من ملقط نمط القياسية.بعد استخدام دبابيس التشريح لتثبيت بعناية أسفل النصف الخلفي من العين، وقطع بلطف بعيدا الأنسجة الضامة المحيطة العصب البصري، لفضح الأوعية الدموية الرجعية الكامنة مع زوج من مقص الربيع Vannas الطالب. عزل الشريان الأمامي القصير paraoptic وsytal مع الأنسجة الضامة المحيطة بها مع زوج من ملاقط الدقة من النوع الخامس ومقص فاناس capsulotomy. قم بإزالة الأنسجة الضامة بلطف من الأجزاء الشريانية باستخدام ملاقط ومقصات إضافية دقيقة قبل شطف الشرايين المعزولة في PBS الباردة لإزالة الملوثات وبقايا الدم.تجمع الشرايين من عينين للحصول على تكرار بيولوجي واحد، ثم تزن العينات باستخدام توازن تحليلي. إلى كل أنبوب، إضافة خليط من 0.5 و1 ملليمتر من الخرز أكسيد الزركونيوم تليها الخرز أكسيد بروتين الأنسجة استخلاص. الآن، تحميل الأنابيب عينة في الخلاط التجانس.تعيين جهاز ضبط الوقت إلى دقيقتين، تعيين مستوى السرعة إلى ستة، وبدء التجانس. بعد تشغيل، والتحقق من العينات التجانس الكامل والحفاظ على عينات على الجليد في ما بين كل تشغيل. كرر الدورة حتى يتم التجانس تماما العينات.المتجانسة بعناية في أنابيب صغيرة جديدة. الطرد المركزي العينات في 10،000 مرات G لمدة 20 دقيقة في أربع درجات مئوية إلى بيليه البروتينات غير القابلة للذوبان. بعناية الماصات الفائقة التي تحتوي على البروتينات القابلة للذوبان دون لمس طبقة بيليه، ونقلها إلى أنابيب صغيرة مركزية جديدة.إضافة 200 ميكرولترات من استخراج العازلة 2A وخمسة microliters من كوكتيل مثبطات البروتياز لكل عينة بيليه. ثم، تعليق بيليه عدة مرات مع ماصة. استخدام التجانس بالموجات فوق الصوتية لتجانس تماما بيليه.تعيين السعة إلى 60 ودورة واحدة. استخدام مسبار مصنوع من التيتانيوم، وهو مناسب لتجانس العينات ذات الأحجام الصغيرة. تزج في التحقيق في بيليه واستخراج خليط العازلة على الجليد، واضغط على زر البداية.Sonicate العينة حتى يتم تجانس كتل بيليه تماما، والتوقف لبضع ثوان بين كل sonication. تحقق من التجانس الكامل بصريا. اخلطي المتجانس عدة مرات مع ماصة لضمان عدم وجود كتل.استخدام أجهزة تصفية الطرد المركزي مع قطع ثلاثة كيلودالتون لهذا الإجراء. أدخل وحدة فلتر القطع ذات الثلاثة كيلودالتون في أنبوب microcentrifuge. Pipette 200 ميكرولترات من التجانس عينة لجهاز تصفية واحد، وإضافة 200 ميكرولترات من المياه ديونيد في نفس المرشح.بعد وضعها بشكل آمن، ضع وحدة التصفية في جهاز طرد مركزي، وتدور لمدة 14،000 مرة G لمدة 15 دقيقة في أربع درجات مئوية. بعد الطرد المركزي، فصل وحدة التصفية التي تحتوي على تركيز العينة من أنبوب الطرد المجهري الذي يحتوي على الترشيح، والتخلص من الترشيح. إعادة تشكيل التركيز عن طريق إضافة 400 ميكرولترات من المياه ديوند في وحدة التصفية.بعد تكرار الترشيح ثلاث مرات، بعناية ماصة العينة تنظيفها التركيز في ميكروتيوب نظيفة. إعداد العينات لكهربية جل أحادية البعد كما هو مبين في بروتوكول النص، وخلط جيدا مع ماصة. سخني العينات على حرارة 70 درجة مئوية في سخان كتلة جافة لمدة 15 دقيقة، وتبرد لدرجة حرارة الغرفة.قم بتحميل 50 ميكروغرام من العينة لكل حارة باستخدام ماصة بعناية، بالإضافة إلى معيار البروتين الملطخ كمعيار كتلة جزيئية. تشغيل المواد الهلامية لمدة 60 دقيقة تقريبا في الجهد المستمر من 175 فولت. في نهاية المدى، وإزالة بعناية هلام من لوحة كاسيت باستخدام سكين هلام، ونقل هلام في مربع تلطيخ هلام.تنفيذ تحديد وتلطيخ الجل كما هو موضح في بروتوكول النص. يهز المواد الهلامية في حل تلطيخ بين عشية وضحاها للحصول على أفضل النتائج الشاملة. بعناية decant حل تلطيخ واستبدالها ب 200 ملليلتر من المياه الأيونية قبل هز المواد الهلامية لمدة سبع إلى ثماني ساعات على الأقل في الماء لمسح الخلفية.استخراج عصابات البروتين من هلام مع شفرات microtome جديدة نظيفة. قطع الفرقة إلى قطع صغيرة، ونقل بعناية القطع هلام في أنابيب microcentrifuge 1.5 ملليلتر. إضافة 500 ميكرولترات من محلول الديستين التي تحتوي على 100 ميليملي الميكربونات و acetonitrile.احتضان العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة ، مع اهتزاز في بعض الأحيان. ماصة بعناية من حل destaining. تحقق بصريا عن أي أنابيب مع البقعة المتبقية، وتكرار هذه الخطوة إذا قطع هلام لا تزال ملطخة باللون الأزرق.إضافة ما يقرب من 400 ميكرولترات من حل DTT الطازجة، واحتضان في 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد التخلص من محلول الخفض مع ماصة، أضف ما يقرب من 400 ميكرولترات من محلول IAA الطازج، واحتضان في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. إزالة العازلة alkylating مع ماصة وتجاهل.إضافة 500 ميكرولتر من الأسيتونيتريل أنيق في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 إلى 15 دقيقة، حتى تتقلص قطع هلام وتصبح مبهمة. الماصات خارج الأسيتونيتريل، والهواء الجافة قطع هلام لمدة خمس إلى 10 دقائق تحت غطاء محرك السيارة. ثم، ماصة 50 ميكرولترات من محلول التربسين في كل أنبوب لتغطية قطع هلام تماما، واحتضان الأنابيب في أربع درجات مئوية.بعد 30 دقيقة، إضافة حجم كاف من المخزن المؤقت التربسين لتغطية قطع هلام تماما إذا لزم الأمر. احتضان العينات بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. لأداء استخراج الببتيد، ماصة بعناية محلول الببتيد المستخرج من الأنابيب ونقلها لتنظيف الأنابيب الدقيقة.جفف المتبخر الفائق في جهاز تبخر فراغ الطرد المركزي. إضافة 100 ميكرولترات من استخراج العازلة إلى كل أنبوب مع القطع هلام، واحتضان لمدة 30 دقيقة مع اهتزاز. الماصات المكبر في نفس الأنابيب الدقيقة التي تحتوي على الببتيدات المستخرجة وفقاً للنطاقات الخاصة بها، وتجف في جهاز طرد مركزي فراغي.الانتقال إلى تنقية الببتيد و السائل الكروماتوغرافيا- كهربية تأين MS /MS التحليلات كما هو موضح في بروتوكول النص. يتم تصوير الكمية الإجمالية من البروتينات في العينات المستخرجة مع كل نوع من المنظفات هنا. وجاء أعلى عائد من الأنسجة المستخرجة مع العازلة استخراج بروتين الأنسجة، تليها DDM، CHAPS، ASB-14، وأقل عائد من ACN و TFA.وعلى نحو متسق، كانت البروتينات الإجمالية المحددة هي الأعلى أيضاً في العينة العازلة المستخلصة من استخراج البروتينات النسيجية، واتبعت نفس الاتجاه الذي اتبعه إجمالي العائد. يظهر هنا هو مقارنة من البعد واحد جل الكهربائية الكهربائية ملامح البروتين من SPCA، قبل وبعد التعرض لإعداد العينة الأمثل وخطوات التنظيف. وعموما، لوحظ وجود درجة عالية من التشوه وسوء الفصل بين عصابات البروتين في الممر الثالث.ويبين هذا الملف أن العينات قد تحتوي على كاشف الاستخراج، وكذلك الملوثات مثل الدهون والحطام الخلوي. ومع ذلك ، فإن عينات SPCA التي تم فصلها إلى فائقة بيليه ، ومن ثم خضعت للبروتوكول الأمثل ، أسفرت عن مثالية أحادية الأبعاد هلام التشكيلات الكهربائية. الطريقة الأمثل لاستخراج البروتين السريعة، قوية، وفعالة من microvessels العين يمكن أيضا أن تطبق بسهولة على عينات أخرى الأنسجة القائمة.يظهر هنا ملامح البروتين من عظمى وبيليه من الدماغ مورين وعينات الأنسجة القلبية. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر أن تخضع العينات إلى التجانس الكامل ، لفصل المابير عن البيليه ، وإزالة الملوثات وكواشف الاستخراج. بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال طب العيون التجريبي والترجمة لاستكشاف بروتيوم الأوعية الدموية الداخلية بدقة باستخدام عيون البورcine كنموذج.

Research

JoVE Journal

Biology

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

الغربية التنشيف : إعداد نموذج لكشف

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

الأيضية وصفها وغشاء التقطير للالمقارن تحليل البروتين من<em&gt; نبات الأرابيدوبسيس thaliana</em&gt; الثقافات تعليق خلية

Plasma membrane microdomains are features based on the physical properties of the lipid and sterol environment and have particular roles in signaling ...

Proteomic Sample Preparation from Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissue

إعداد نموذج البروتين من الفورمالين الثابتة والبارافين جزءا لا يتجزأ من نسيج

Preserved clinical material is a unique source for proteomic investigation of human disorders. Here we describe an optimized protocol allowing large scale ...

Enrichment of Extracellular Matrix Proteins from Tissues and Digestion into Peptides for Mass Spectrometry Analysis

إثراء خارج الخلية مصفوفة البروتينات من الأنسجة والهضم في الببتيدات لتحليل الطيف الكتلي

The extracellular matrix (ECM) is a complex meshwork of cross-linked proteins that provides biophysical and biochemical cues that are major regulators of ...

Sample Preparation for Mass Cytometry Analysis

إعداد نموذج لتحليل قداس الخلوي

Mass cytometry utilizes antibodies conjugated with heavy metal labels, an approach that has greatly increased the number of parameters and opportunities ...

An Alternative Approach for Sample Preparation with Low Cell Number for TEM Analysis

طريقة بديلة لإعداد نموذج مع انخفاض عدد الخلايا لتحليل تيم

Transmission electron microscopy (TEM) provides details of the cellular organization and ultrastructure. However, TEM analysis of rare cell populations, ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

نموذج إعداد وتصوير اكسوسوميس مجهر إلكتروني

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

إعداد عينة المنمنمة مجهر إلكتروني

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Comprehensive Workflow of Mass Spectrometry-based Shotgun Proteomics of Tissue Samples

سير عمل شامل من Mass Spectrometry القائم على بروتيوميات بندقية من عينات الأنسجة

Recent advances in mass spectrometry have resulted in deep proteomic&#160;analysis along with the generation of&#160;robust and&#160;reproducible ...

Sample Preparation for Metabolic Profiling using MALDI Mass Spectrometry Imaging

إعداد عينة للتنميط الأيضي باستخدام التصوير الطيفي الشامل MALDI

Metabolomics, the study to identify and quantify small molecules and metabolites present in an experimental sample, has emerged as an important tool to ...