Name: identifying per- and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow
Uploaded: 2019-04-18T14:00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow at JoVE.c

US Environmental Protection Agency, gennem dens kontor for forskning og udvikling, finansieret og forvaltet den forskning, der er beskrevet her. Dette dokument har gennemgået af US Environmental Protection Agency, Office for forskning og udvikling, og godkendt til offentliggørelse. Synspunkterne i denne artikel, er dem af forfatterne og nødvendigvis repræsenterer ikke synspunkter eller politikker af US Environmental Protection Agency. Denne forskning blev delvist understøttet af en udnævnelse til Postdoctoral forskningsprogrammet på den nationale eksponering Research Laboratory administreres af Oak Ridge Institut for videnskab og uddannelse gennem tværinstitutionelle aftale DW89992431601 mellem de US Department of Energy og US Environmental Protection Agency.

1. indsamling af vandprøver
<ol><li>Forberedelse af PFAS Standard bestande<ol>
<li>Forbered en PFAS standard blanding i methanol indeholdende alle målrettede forbindelser af interesse (f.eks., PFOA, PFOS, HFPO-DA) på 1 ng/µL. Dette er den oprindelige PFAS blanding. Kommercielt tilberedt blandinger er også tilgængelige (dvs. PFAC blanding A og Mix B).</li>
		<li>Forbered en standard blanding indeholdende matchede stabil isotop mærket (SIL) PFAS forbindelser (f.eks. 13C4- PFOA, 13C8- PFOS, 13C3- HFPO-DA) på 1 ng/µL. Dette er er PFAS blanding. Kommercielt tilberedt blandinger er også tilgængelige (dvs. MPAFC blanding A og Mix B). Bemærk: Hvis en SIL version af den målrettede PFAS er tilgængelig, et surrogat med lignende struktur og kæde længde kan bruges (fx 13C2- PFHxA for HFPO-DA)</li>
	</ol>
</li>
	<li>Forberedelse af feltet tomt (FB), Spike tom (SB) prøver<ol>
<li>Fylde to, ren high density polypropylen (HDPE) eller polypropylen (PP) flasker med 1.000 mL laboratorium deioniseret (DI) vand, kendt for at være PFAS gratis. Forsigtig: PFAS materialer ofte har udefineret toksicitet og/eller kræftfremkaldende virkning. Bør udvises forsigtighed at undgå oral eller hud udsættelse for standarder eller stamopløsninger.</li>
		<li>Tilføje en mængde af PFAS standard blanding til en af flaskerne i en endelig koncentration svarer til de forventede prøve koncentrationer (f.eks. 100 ng/L). Dette er Spike tom (SB).</li>
		<li>Tilsættes 5 mL 35% salpetersyre konserveringsmiddel til Spike tom.</li>
		<li>Bære både SB prøve og unspiked felt blank til prøveudtagning placering som kontrol.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Feltet prøveudtagning Bemærk: Prøve collector bør bære nitrilhandsker og prøve fra strømmende systemer, hvor det er muligt. Tap prøver må til at flyde og reagensglasset før prøvetagning (2-3 min).<ol>
<li>Indsamle 500-1.000 mL vand fra feltet placering i en ren HDPE eller PP flaske.</li>
		<li>Tilsættes 5 mL 35% salpetersyre konserveringsmiddel til prøven flasker og feltet være tomt. Forsigtig: salpetersyre er ætsende og et stærkt oxidationsmiddel</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. prøven udvinding
Bemærk: PFAS er allestedsnærværende og vedvarende. Sikre, at alle opløsningsmidler er af den højeste kvalitet og er blevet analyseret for lavt niveau PFAS forurening. Grundigt skyl alle laboratorieudstyr bruges til at forberede standarder før forberede blindprøver og prøver.
<ol><li>Prøven forbehandling<ol>
<li>Hæld hver prøve i en separat, forhånd renset 1 L HDPE dimitterede cylinder og registrere det nøjagtige volumen.</li>
		<li>Der tilsættes 10 mL methanol til tømte prøve flaske, cap det og ryst godt for at skylle adsorberet PFAS fra flaske interiør.</li>
		<li>Returnere den målte vandprøven til skylles flasken med methanol skyl.</li>
	</ol></li>
	<li>Standardkurven for kvantitering<ol>
<li>Udfylde otte, 1 L HDPE/PP flasker med PFAS-fri osmosevand.</li>
		<li>Vælg otte jævnt fordelte koncentrationer der dækker de ønskede kvantitering vifte. For eksempel: 10, 25, 50, 100, 250, 500, 750 og 1000 ng/L for en række 10-1.000 ng/L.</li>
		<li>Tilføje en mængde af indfødte PFAS mix til hver flaske til at give de endelige PFAS koncentrationer i 2.2.2 (f.eks. 100 µL PFAS Mix A til 1L DI vand = 100 ng/L).</li>
	</ol></li>
	<li>Intern standard tilsætning Bemærk: Tilsætning af stabil isotop mærket intern standard (IS) er kun nødvendigt hvis kvantitative resultater er ønsket ud over ikke-målrettet analyse.<ol>
<li>Tilføje er PFAS blandingen til hver prøve i en koncentration på tilnærmelse af midtpunktet af kalibreringskurven (f.eks. 250 µL af er PFAS mix = 250 ng/L)</li>
	</ol></li>
	<li>Filtrering<ol>
<li>Filtrer prøver gennem GF/A glas fiber filtre (47 mm, 1,6 µm porestørrelse) under blid vakuum ind en pre rengjort 1 L HDPE sugekolbe.</li>
		<li>Hvis partikler forbliver i flasken, skylles med yderligere deioniseret vand ind i filteret. Returnere filtreret vand til prøve flaske eller en ny container for faste fase udvinding.</li>
	</ol></li>
	<li>Faste fase ekstraktion (SPE) Bemærk: Patron koncentration beskrevet her bruger en konstant strøm stempelpumpe. Alternative metoder til koncentration ved hjælp af et vakuum mangfoldige20 eller en on-line SPE-LC-MS17 opsætning er muligt men ikke diskuteres.<ol>
<li>Betingelse en svag anion exchange (voks) patron med 25 mL methanol.</li>
		<li>Betingelse voks patronen med en yderligere 25 mL deioniseret vand.</li>
		<li>Position pumpe tegne slangen i filtreret prøve flasker og etiket SPE patroner med tilsvarende prøve navne.</li>
		<li>Pumpe 500 mL prøve vand gennem patron ved en konstant gennemstrømningshastighed på 10 mL/min. (500 mL i alt), udsmid gennemstrømnings-flydende affald. Bemærk: Større eller mindre mængder kan være koncentreret afhængigt af forventede prøve koncentrationer.</li>
		<li>Fjern blækpatronen fra stempelpumpe til eluering. Bemærk: Hvis koncentrere sig yderligere prøver ved hjælp af den samme pumpe, stempelpumpe skal tømmes med 25 mL methanol før du installerer den næste patron for ækvilibrering.</li>
		<li>Overføre SPE patron til et vakuum manifold og udstyre med eksterne glas reservoir.</li>
		<li>Skyl SPE patron med 4 mL 25 mm, pH 4,0 natrium acetat buffer under blid vakuum. Kassér gennemstrømningen. Vaske SPE patron med 4 mL neutral methanol. Bemærk: Neutral vask brøkdel kan afhentes, hvis specifikke nonionisk polar analysander forventes. Ellers, kassere affald</li>
		<li>Placere en 15 mL polypropylen centrifugeglasset under hver SPE patron til at indsamle elueringsvæsken. Elueres prøve med 4 mL af 0,1% ammoniumhydroxid i methanol.</li>
		<li>Fjerne eluering tube og reducere eluatet volumen til 500-1.000 µL af fordampning under tør nitrogen stream i et vandbad ved lidt forhøjet temperatur (40 ° C).</li>
		<li>Koncentreret prøve ekstrakter kan opbevares inden analyse ved stuetemperatur.</li>
	</ol></li>
	<li>Målrettet LC-MS/MS kvantitering<ol>
<li>Fortyndet 100 µL af prøven uddrag med 300 µL af 2 mM ammonium acetat buffer i en HPLC prøve hætteglas.</li>
		<li>Kalibrere og Blandingen henstår en HPLC og MS systemer ifølge producentens anvisninger. Bemærk: Baggrunden PFAS er almindeligt opdaget på grund af brugen af fluorpolymer komponenter for de fleste LC systemer og i prøven hætteglas septa. Bekræfte, at de påviselige mængder i tomme ubetydelig før brug. Ændring af LC systemet skal erstatte Teflon komponenter er foreslået, hvor det er muligt. Brug af en analytisk "hold-up" kolonne støder op til LC blandeventil er også foreslået29.</li>
		<li>Forberede en analytisk worklist bestående af standardkurven, prøver og en yderligere replikat af standardkurven at vurdere apparatskred på tværs af flugt. Et eksempel worklist er vist i tabel 1.</li>
		<li>Analysere prøverne ved hjælp af LC og MS metoder, der fastsættes for den målrettede forbindelser af interesse. Eksempel LC gradient er vist i tabel 2 og MS metodeparametre er vist i tabel 3 og tabel 4. Yderligere kan detaljeret diskussion findes i McCord et al.21.</li>
		<li>Generere en standardkurve fra de standard prøver ved hjælp af forholdet mellem toparealerne af analysand til den interne standard versus koncentrationen af analysanden. Generere en kvadratisk regression formel med 1 / x vægtning for koncentration forudsigelse9.</li>
		<li>Kvantificere målrettede analysander i hver prøve ved hjælp af rede standard kurver og forholdet mellem toparealerne (standard område / område) for hver måling.</li>
		<li>Hvis koncentrationen overstiger kalibreringsområdet, fortyndes den oprindelige prøve med Deioniseret vand tilsat passende er koncentration og Udpak igen at bringe koncentration i rækken egnede.</li>
	</ol></li>
	<li>Ikke-målrettet indsamling af LC-MS/MS data<ol>
<li>Fortyndet 100 µL af prøven uddrag med 300 µL af 2 mM ammonium acetat buffer i en HPLC prøve hætteglas.</li>
		<li>Kalibrere og Blandingen henstår en HPLC og høj opløsning MS ifølge producentens anvisninger.</li>
		<li>Forberede en analytisk worklist som 2.6.2.</li>
		<li>Ved hjælp af instrumentet software, indsamle LC-MS data med en bred scanning MS1 i data-afhængige tilstand at indsamle MS/MS. eksempel LC gradient i tabel 5. Yderligere diskussion af Apparatindstillingen kan findes i Strynar et al.30 og Newton et al.31. Bemærk: For forbedret MS/MS kvalitet data-afhængige analyse kan gennemføres med en foretrukne ion listen af et undersæt af funktioner tilbage efter databehandling i 2.8.1-2.8.8.</li>
	</ol></li>
	<li>Ikke-målrettede databehandling Bemærk: Dataanalyse kan udføres med en bred vifte af software og disse metoder afspejler ikke den eneste eller bedste metode til en vilkårlig datasæt. Hvor det er muligt, foretage en generisk beskrivelse, der kan udføres i alternative software. Behandling af den eksempel, der anvendes i dette manuskript blev udført ved hjælp af leverandør specifikke software (Software 1 og Software 2) som beskrevet i Newton et al.31.<ol><li>Udføre molekylære funktion udvinding af kemiske egenskaber ved hjælp af en af flere open source software pakker32,33 eller sælger software til at identificere monoisotopic masserne, retentionstider og integreret toparealer af kemiske funktioner.<ol>
<li>Vælg i Software 1, Tilføj/Fjern eksempelfiler > Tilføj filer og vælge de rå data fra ikke-øremærket eksperimentet og derefter ramte OK.</li>
			<li>I Software 1 Vælg Batch rekursiv funktion udvinding > åben metode... at indlæse en preestablished metode, eller manuelt redigere softwareindstillinger. Profinder indstillinger for funktionen udvinding findes i tabel 6.</li>
			<li>I Software 1, efter funktionen udvinding, Vælg fil > Eksporter som CSV..., fil > Eksporter som CEF..., eller fil > Eksporter som PFA... til videreforarbejdning. CEF filer er antaget for den resterende del af beskrivelsen.</li>
			<li>I Software 2 (MPP) oprette et nyt eksperiment med Type uidentificeret og arbejdsgangstype Guiden Importer Data , og klik på OK.</li>
			<li>I MPP Vælg datafiler og Find de eksporterede Software 1 resultater (enten CEF eller PFA) til indfoersel; Klik næste indtil Justering Parameter indstillinger vises.</li>
			<li>LPF, angive de sammensatte justeringsværdier til 0,0 (justering blev allerede udført i funktionen udvinding af Software 1, trin 2.8.1.2) og klik derefter næste gennem trinene indtil Finish er tilgængelige.</li>
		</ol></li>
		<li>Filtrer identifikationer baseret på analytiske reproducerbarhed. Hvis der foreligger flere Kontraprøverne, der udtages, funktioner bør være til stede i > 80% af enkelte replikater og har en analytisk variationskoefficient (CV) < 30%<ol>
<li>På LPF Vælg eksperimentel Opsætning > eksperiment gruppering og tildele hver rå fil en gruppe, der svarer til dens oprindelse stikprøve (dvs., replikater fra samme kilde bør være i samme gruppe). Flere grupper kan oprettes svarende til indlejrede variabler (fx instrumental vs tekniske replikater).</li>
			<li>På LPF Vælg eksperimentel Opsætning > Opret fortolkning derefter vælge parameteren eksperiment (dvs. gruppere) og klik på næste , indtil Finish er tilgængelige. Dette vil oprette en kategori der fremtidige filtrering kan operere på.</li>
			<li>På LPF Vælg kvalitetskontrol > Filtrer efter frekvens. Sæt enhed liste til Alle enheder og fortolkning at prøve Group(non-averaged) oprettet i 2.8.2.2, så ramt næste.</li>
			<li>For inputparametre, indstille enhed fastholdelse på 80% af stikprøven i mindst én betingelse og derefter Klik på næste , indtil Finish er tilgængelige. Navn på listen frekvens filtreret funktioner</li>
			<li>På LPF Vælg kvalitetskontrol > Filter på prøve variation. Indstille listen enhed til frekvens filtreret funktioner fra 2.8.2.4 og fortolkning til Group(non-averaged), derefter ramte næste.</li>
			<li>Vælg alternativknappen for Rådata og interesse vifte af koefficienten for variationen < 30%. Klik på Næste > Udfør og gemme listen som CV filtreret funktioner.</li>
		</ol></li>
		<li>Fjern funktioner hvor ingen prøver har væsentligt højere (> 3 fold) overflod end tomt felt (FB) stikprøven.<ol>
<li>På LPF Vælg analyse > Fold ændring. Sæt enhed liste til CV filtreret funktioner og fortolkning at prøve gruppe derefter slå næste. Vælg indstillingen fold Skift til alle mod enkelt betingelse og vælg betingelse FB eller hvad gruppenavnet for den forarbejdede blindprøve var.</li>
			<li>På den følgende skærm, indstille Fold-Change cutoff til 3.0 og klikke sig igennem til slutningen af vejledningen. Gemme listen som FC filtreret liste.</li>
		</ol></li>
		<li>Udfører binær sammenligning af individuelle prøver af interesse mod en passende baggrund prøve (fx opstrøms vs neden for en punktkilde) til at bestemme fold-ændringer til individuelle kemiske egenskaber.<ol>
<li>På LPF Vælg analyse > Filter på vulkanen afbilde. Angiv listen enhed til FC filtreret liste og fortolkning til gruppen.</li>
			<li>Fold-ændring betingelse par vælge to prøver til sammenligning (f.eks. en parret opstrøms og nedstrøms prøve) og vælg test Mann-Whitney uparret.</li>
			<li>For foreløbig analyse, ikke vælge en værdi til flere test korrektion på følgende skærmbillede, klikke sig igennem til resultatet plottet.</li>
			<li>Vælg en fold-change cutoff 3.0 og en p-værdi cutoff til 0,1 på skærmbilledet resultater. Derefter Finish og eksportere listen som Prelim resultater.</li>
		</ol></li>
		<li>For hver funktion, der er tilbage efter filtrering, skal du generere forudsagte kemiske formula(s) fra den nøjagtige masse og sammensatte masse spektrum.<ol>
<li>Vælg i MPP, resultater fortolkning > IDBrowser id og enhed Prelim resultatlisten.</li>
			<li>Vælg identificere alle forbindelser ved hjælp af Molekylær formel generator (MFG) som identifikationsmetode, der i IDBrowser.</li>
			<li>I formlen generere indstillinger tilføje F til kolonnen elementer og angive maksimalt til 50, så vælg Afslut. Vælg Gem og vende tilbage til at vende tilbage til MPP efter formel generation.</li>
			<li>I MPP, højreklikke på den filtrerede og MFG matchede enhed liste og vælg Eksporter listen. Gem resultaterne.</li>
		</ol></li>
		<li>Undersøge monoisotopic massen af arter på funktionslisten over reducerede signifikant kemiske for dem, der indeholder masse defekter vejledende af fluorination; Se form og Fiehn34.</li>
		<li>Bemærk kemiske serien indeholder fælles polyfluorination motiver (CF2 af (m/z 49.9968), CF2O (m/z 65.9917), CH2CF2O (m/z 80.0074), osv.) ved hjælp af en masse defekt plot eller software algoritme; Se diskussion afdeling, Liu et al.17, Loos et al.35 og Dimzon et al.36.</li>
		<li>Søg forudsagte kemiske formler eller neutral masserne mod EPA kemi Dashboard-databasen og/eller andre databaser til at returnere eventuelle kemiske strukturer.<ol>
<li>Åbn værktøjet EPA Comptox kemikalier Dashboard Batch Search (https://comptox.epa.gov/dashboard/dsstoxdb/batch_search) og Indsæt liste over identifikatorer (enten formler eller masserne) i boksen id efter valg af id type (dvs., MS-klar Formel eller Monoisotopic masse).</li>
			<li>Vælg Download kemiske Data... og også vælge enhver fysisk/kemiske/toksikologi data ønskede for potentielle kampe fra dropdown.</li>
		</ol></li>
		<li>Ved hjælp af kemiske intuition og tilgængelige referencedata, fjerne usandsynligt kampe fra listen over potentielle kemiske struktur for hver formel baseret på gennemførlighed på grund af kemiske stabilitet, fysiske egenskaber såsom ionizability eller hydrophobicity, tilstedeværelsen fremstilling af kemikalier fra nærliggende kilder, osv. I mangel af supplerende data, kan spektrale feasibility blive placeret udelukkende ud fra litteratur prævalens; Se McEachran et al.37.</li>
		<li>Bekræfte strukturer ved hjælp af tilgængelige standarder og/eller målrettet høj opløsning MS/MS matching af fragmenter mod spektre fra databaser, i siliciummangan teoretiske spektre eller manuel datasikring.</li>
	</ol></li>
</ol>

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Prøven håndtering og forberedelse Optagelse af reference/spike standarder er af afgørende betydning for enhver målrettet analyse, da de giver en bagstopper for at kontrollere analytiske validitet. Manglende QC prøver forhindrer enhver vurdering af nøjagtigheden af resultaterne; den allestedsnærværende karakter af fluorochemicals betyder, at chancen for forurening af feltprøver, behandling af materialer eller LC-MS system er ikke ualmindeligt og skal regnskabsføres. Yderligere, det giver mulighed for validering af protokollen uanset variation i den daglige prøve behandling, som mange af skridt kan være meget varierende, især SPE-selskabet og prøve koncentration trin. Udvinding af både ældre og nye perfluorinated kemikalier kan være stærkt påvirket af valget af stationær fase for koncentration, og komponenter af kilde prøver, som pH og saltholdighed46. Indflydelse af prøven betingelser bør overvejes, hvis bestemte kategorier af pefluorinated kemikalier er af interesse. Alternative stikprøveprogrammer forberedelse for vand ekstrakter kan anvendes, hvis opsætningen laboratorium er tilgængelige og downstream dataanalyse forbliver lignende.
Målrettet dataanalyse Forbindelser med tilgængelige standarder og matchede, stabile isotop mærket interne standarder, er de primære bekymring for dataanalyse instrumental og bestemmelse af metode detektionsgrænser og egnet rapportering intervaller kan bestemmes på en laboratorium ved laboratoriet grundlag ved hjælp af standard metoder, såsom signal-støj-forholdet fra laveste-niveau-standard spikes47. I mangel af matchede interne standarder kan opstå fejl fra forkerte matrixeffekter og præcis back-forudsigelse af spidse prøver kan anvendes til at vurdere nøjagtigheden af målingerne. Når mangler standarder for at forberede en kurve, et kvantitativt skøn med en ukendt kan gøres ved at behandle det ens til en nøje afstemt standard sammensatte, men fejl i estimatet er på rækkefølgen af 10 + fold med begrænset evne til at kvantificere usikkerheden, se McCord, Newton og Strynar21. I disse tilfælde tendens data kan stadig være indsamlet, men koncentrationen skøn er i sagens natur upålidelige.
Ikke-øremærket dataanalyse Peak picking indstillinger har en betydelig indvirkning på antallet af kemiske funktioner identificeret, men kvaliteten af funktion udvælgelse er også stærkt påvirket. Beslutninger af interesse i peak plukning er 1) intensiteten af individuelle masserne skal medtages i spectra, ion overflod tærskel 2) intensiteten af uddraget Kromatogrammets toppe betragtes funktioner, funktion overflod tærskel 3) funktion opdagelse frekvens, Repliker tærsklen og 4) analytisk variation, CV tærskel (figur 10).
Indstilling urealistisk lave tærskler for peak picking resultater i en eksponentiel stigning i prøven tid at løse yderligere funktioner i stadig lav overflod (tabel 7). Ion-overflod tærskel filtre masse spektrale beskrivere hvor nok af de enkelte isotop mængder ikke kan passere grænsen. Dette vælger ideelt kun for funktioner med kvalitet MS spektre, sikre de rigtige kemiske funktioner i stedet for instrumental støj, og giver mulighed for formel forudsigelse i downstream behandling. En passende tærskel er baseret på instrumentale støj, helst mindst 3 x støj tærsklen for MS1 scanner. Funktionen overflod tærskel filtre kemiske egenskaber baseret på intensitet eller område af funktionen kromatografiske udvundet. Dette trin giver mulighed for afvisning af lav overflod toppe, der er typisk af dårlig kromatografiske kvalitet, har høje afvigelser eller resultatet af andre fattige software udvinding. En passende tærskel skal fastlægges pr. eksperiment, og matrix baseret på et acceptabelt niveau af dårlig funktion generation (fx funktioner under tærsklen udviser uacceptabelt dårlige kromatografi). Analytiske QC kan yderligere bruges til at afvise funktioner på kromatografisk baseret på inkonsekvent identifikation i analytisk og/eller forberedende flergangsbestemmelser (Repliker tærskel) eller baseret på dårlig reproducerbarhed på tværs af flergangsbestemmelser (CV tærskel). Relevante niveauer afhænger af kvaliteten af peak integration software bruges og de kemiske enheder under undersøgelsen. Vandopløselige perfluorerede forbindelser og let optimeret integration protokoller, funktioner bør identificeres i 80 + % af analytiske replikater og CVs forventes at falde til under 30%, som beskrevet i afsnittet metoder.
Toppene opdaget fra ikke-målrettet analyse give ikke kvantitative skøn over koncentrationer af materialer registreres. Yderligere, sande ubekendte identitet kan være svært at bekræfte fordi Roman forbindelser er fraværende fra offentligt tilgængelige databaser. Roman Strukturbestemmelse kræver omfattende analyse med flere metoder og kræver ekspertise i både massespektrometri og kemi. Normalisere toparealer kemiske funktioner kan dog yde semi-kvantitative skøn over koncentrationer af ubekendte fra kendte arter21. Hvis konsekvent prøveudtagning og forberedelsestrin er ansat, kan trend tidsoplysninger for individuelle arter oprettes for at overvåge persistens af et kemisk stof ind i fremtiden som svar til en individuel art skal være konsekvent spærring store variationer i matrix21.
Den primære fordel ved denne metode er udvidelsesmuligheder prøve behandling tillade både målrettet og disse analyse. Mens målrettet analyse giver tilsvarende eller superior kvantitative oplysninger, mangler det meget bredde af analyse ønsket når der beskæftiger sig med nye materialer, samt deres forhold til matrix materialer. Anvende en målrettet metode, eller endda en mistænkt screening metode baseret udelukkende på kendte materialer og begrænset databaser er helt blind for tidligere ubemærket arter, selvom de kan have betydelige sundhedsmæssige virkninger. Som software forbedrer og databaser bliver mere robust, fortsat nøjagtigheden af ukendt identifikation vil stige med en ledsagende fald i den tid investeringer og ekspertise nødvendigt at analysere det flerdimensionelle data genereret af dette tilgang. Data, der genereres i øjeblikket er dog af betydelig fremtidig værdi fordi data bank giver mulighed for post-hoc analyse med nyudviklede software og giver mulighed for sammenligning på tværs af tid selvom identiteten af en registreret stof er i øjeblikket ukendt.

Klasse af pr- og polyfluoroalkyl stoffer (PFASs) er persistente organiske miljøgifte med væsentligt folkesundhedsproblem. Særlige forbindelser perfluorooctanoic acid (PFOA) og perfluorooctanesulfonate (PFOS) har drikkevand sundhed rådgivende niveauer af EPA1,2 og deres store amerikanske produktion ophørte i 2000s3,4 . For at opnå en betydelig forståelse for egenskaberne for PFAS er materialer i tekstil og forbruger produkt fremstilling kugler, hundredvis, hvis ikke tusinder, af alternative PFAS kemi blevet udviklet for at udfylde produkt nicher, herunder erstatninger for den forældede forbindelser5,6,7,8. Der er en igangværende skal overvåge de miljømæssige niveauer af straight kæde perfluorinated carboxylsyrer og perfluoroktansulfonater sådan PFOS, PFOA og deres homologe serier, men nye kemiske forbindelser er ikke omfattet af etablerede metoder såsom EPA Metode 5379 og ofte manglende analysestandarder for traditionelle målrettet analyse. Hensigten med denne protokol er således to gange. Det giver en sti til den målrettede LC-MS/MS analyse af fluorochemical arter i vand hvor analysestandarder er tilgængelige og detaljer problemfri integration af en ikke-øremærket, høj opløsning massespektrometri-baseret tilgang til analyse af data der giver mulighed for påvisning af ukendt eller uventet forbindelser i de samme prøver.
Fast-fase ekstraktion (SPE) er en etableret teknik til at prøve oprydning og koncentration med programmer til mange analysander og prøve matricer10,11. For PFAS analyse, flere solid retentive faser herunder ikke-polære, functionalized polar og ionbytning kolonner har været anvendt i varierende omfang til underklasser af fluorholdige arter i en bred vifte af matricer9,12, 13,14,15,16. Fremskridt i SPE prøve analyse ved hjælp af on-line opsætninger høj grad øge gennemløbet af tilgangen og forbedre reproducerbarhed af prøven håndtering, men den grundlæggende proces forbliver konsistent17. Nogle indsats for at fjerne offline koncentrationen af SPE-selskabet ved hjælp af store volumen injektioner er også blevet gennemført, men disse kræver ændringer til kromatografien, der placerer dem uden for realm af casual analyse18,19 . Vores prøve analyse bruger et polymert svage anion exchange (voks) retentive fase at grundigt adskille sure PFAS materialer fra de traditionelle organiske forurenende stoffer samtidig opnå betydelige prøve koncentration faktorer. Denne voks fase er vigtig at fange de kortkædede perfluorinated syrer som perfluorobutane sulfonat (PFBS) eller perfluorinated ethere såsom hexafluoropropylene oxid dimer syre (HFPO-DA), som er mere polære end den længere kæde arv perfluorinated art20,21. Da der har været et betydeligt skift i retning af kortere fluorholdige kæder og ether integration i de seneste PFAS kemi5, kan denne fase mere grundig genoprettelse af roman forbindelser til MS analyse.
Målrettet LC-MS/MS kvantitering bruger godkendte standarder og stabil isotop mærket interne standarder giver en uovertruffen grad af specificitet og sensitivitet til kvantitativ analyse. Denne tilgang er ønskeligt i mange situationer, men det er upraktisk for alt for almindelige situationer i analyse. Målrettede strategier virker kun til arter, der er forventet i prøven, og hvilke metoder har tidligere været etableret. For nye og kommende forbindelser med denne tilgang er i stand til selv opdage arter, som kan være af interesse, uanset deres kemi eller koncentration, og lav opløsning massespektrometre er næsten i stand til at levere tilstrækkelige oplysninger til at gøre utvetydig kemiske tildelinger af ukendt forbindelser. Derfor opstået inden for ikke-målrettet analyse, udnytte kraften i høj opløsning moderne massespektrometre at analysere prøver uden en forudsatte hypotese og med tilbagevirkende kraft tildele kemikalier til påviselige funktioner i prøven. Denne tilgang har været udbredt inden for biologi22,23,24 og miljøvidenskab25,26,27 på mange klasser af kemikalier. Perfluorerede kemikalier er særligt ligetil at identificere i denne metode på grund af deres unikke masse spektrale mønstre, og hundredvis af forbindelser er blevet beskrevet i blot de sidste par år5,28.
Protokollen drøftet her er beregnet til at justere målrettede LC-MS/MS PFAS kvantitering med behovet for at identificere og semi-kvantitativt overvåge nye forbindelser af interesse. SPE fase udvælgelse og prøve forberedelse teknikker er beregnet til at sikre erobringen af mere hydrofile nye PFAS syrer fra vand og kan være mindre egnet til længere kæde polymere arter og ikke-ionisk. Yderligere, de data, der genereres af ikke-målrettet analyse er tætte og af høj dimensionalitet, som nødvendiggør brug af data analyse software. Disse softwarepakker er ofte leverandør specifikke og kræver ændring at operere mellem instrument platforme. Om muligt, analyse proces er blevet beskrevet i en generisk mode og open source/freeware alternativer der refereres til, men effektiviteten og nøjagtigheden af nogen software tilgang skal vurderes på et individuelt grundlag.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1567px;" width="1568">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Acqity ultra-high performance liquid chromatography system&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:927px;">Modified with PFCs analysis kit (176001744); equivalent UPLC system is acceptible if PFAS background is checked and confirmed to be low</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Ammonium acetate</td>
			<td style="width:131px;">Fluka</td>
			<td>17836</td>
			<td>Mass spectrometry grade &#62;99% pure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Ammonium Hydroxide</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>338818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Balance</td>
			<td>Mettler</td>
			<td>AB204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">BEH C18 reverse phase UPLC column, 2.1&#215;50&#160;mm, 1.7&#160;&#956;m&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td>186002350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Dual piston syringe pump&#160;</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>SPC10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Glacial Acetic Acid</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>ARK2183&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Glass Microfiber Filters</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1820-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">High density polyethelye sample bottle&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Nalgene</td>
			<td>2189-0032&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">High Resolution Mass Spectrometer</td>
			<td style="width:131px;">Various</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Mass Spectrometer should be capable of providing accurate mass to &#60;10ppm and collecting MS/MS data.&#160; Agilent 6530 qTOF and Thermo Fisher Orbitrap Fusion were used in this work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Methanol</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Nitric Acid (35% w/w)</td>
			<td style="width:131px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>SVCN-5-1</td>
			<td>Can be prepared in house using concentrated nitric acid and reagent water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Polypropylene Buchner funnel</td>
			<td>ACE Glass</td>
			<td>12557-09&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Polypropylene cenitrfuge tube and cap</td>
			<td style="width:131px;">BD Falcon</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Polypropylene Vacuum Flask (1 L)</td>
			<td style="width:131px;">Nalgene</td>
			<td>DS4101-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Quattro Premier XE triple quadrupole mass spectrometer&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Equivalent triple-quadrupole or better system can be used instead, should provide high sensitivity and stability for targeted analysis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Reagent Water</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
			<td>Any source determined to be PFAS free</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Sodium Acetate</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>W302406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">TurboVap nitrogen evaporator&#160;</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td>103198</td>
			<td>Equivalent systems or rotary vacuum evaporator may be used instead</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Weak anion exchange SPE cartridge (Oasis WAX Plus)</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td>186003519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Standard Solutions</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">2,3,3,3-Tetrafluoro-2-(1,1,2,2,3,3,3-heptafluoropropoxy)propanoic acid (HFPO-DA)</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>HFPO-DA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Additional targeted compound standards of interest</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
			<td>to be determined based on preliminary analysis and standard availability</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Mass labeled HFPO-DA</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>M2HFPO-DA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Native PFCA/PFAS Mixture (2 ug/mL)</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>PFAC-MXA</td>
			<td>or PFAC-MXB; or individually prepared mixture containing compounds of interest</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Stable Isotope Labeled PFCA/PFAS Mixture (2 ug/mL)</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>MPFAC-MXA</td>
			<td>or MPFAC-MXB; or individually prepared mixture containing compounds of interest as appropriate for Native PFASs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Software</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Mass Profiler Professional</td>
			<td style="width:131px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Or open source software packages</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Profinder</td>
			<td style="width:131px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Or open source software packages</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying per- and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow

Historiske og nye per- og polyfluoroalkyl stoffer (PFASs) har vundet betydelig interesse fra de offentlige og offentlige institutioner fra lokalt til føderale niveauer. Den fortsatte udvikling af PFAS kemi er en udfordring til miljøovervågning, hvor igangværende udvikling af målrettede metoder nødvendigvis halter opdagelsen af nye kemiske forbindelser. Der er behov for, derfor har fremadrettede metoder, der kan opdage nye og uventede forbindelser, overvåge disse arter over tid og løse detaljer af deres kemiske struktur til at aktivere fremtidige arbejde i menneskers sundhed. Med henblik herpå, ikke-målrettet analyse af høj opløsning massespektrometri tilbyder en bred base påvisning tilgang, der kan kombineres med næsten alle stikprøveprogram forberedelse og giver betydelige muligheder for sammensatte identifikation efter detektering. Heri, vi beskriver en solid-fase ekstraktion (SPE) baseret prøve koncentration metode tunet til kortere kæde og mere hydrofile PFAS kemi, som per fluorholdige ether syrer og sulfonater, og beskrive analyse af prøver forberedt på denne måde i både målrettede og ikke-øremærket tilstande. Målrettede metoder til at give overlegen kvantificering når referencestandarder findes men er uløseligt begrænset til forventede forbindelser, når du udfører analyse. I modsætning hertil er kan en ikke-målrettet tilgang identificere tilstedeværelsen af uventede forbindelser og give nogle oplysninger om deres kemiske struktur. Oplysninger om kemiske funktioner kan bruges til at korrelere forbindelser på tværs af prøven steder og spore overflod og forekomsten over tid.

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow at JoVE.c

Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow

Identifikation af pr- og stofferne kemisk arter med en kombineret målrettet og ikke-målrettet-Screening høj opløsning massespektrometri arbejdsproces

Vi præsenterer her, en protokol for fortløbende målrettede kvantificering og ikke-målrettet analyse af fluorholdige forbindelser i vand ved massespektrometri. Denne metode giver kvantitative niveauer af kendte fluorochemical forbindelser og identificerer ukendte kemikalier i beslægtede prøver med semi-kvantitative skøn over deres overflod.

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the ...

Denne tilgang giver mulighed for kvantisering af kendte PFAS og opdagelsen af nye stoffer i de samme prøver, sammenlignet med målrettede tilgange alene, der ikke nye forbindelser af bekymring. Denne protokol er rettet mod en bredere vifte af PFAS-forbindelser, som er repræsentative for de nyeste nye kemikalier. Hvis koncentrationstrinnet tilpasses for forbindelserne, kan de målemetoder, der anvendes her, anvendes på enhver kemikalieklasse.For at indsamle en prøve fra marken skal du bære nitrilhandsker og indsamle 500 til 1.000 milliliter vand fra marken på et rent polyethylenindhold med høj densitet, HDPE eller polypropylenflaske. Der tilsættes fem milliliter 35 % salpetersyrekonserveringsmiddel til prøveflasken og til et feltskinne, og prøverne transporteres tilbage til laboratoriet. Hæld hver prøve i individuelle, forrensede, en-liters, high-density polypropylen graduerede cylindre, og registrere den nøjagtige mængde af prøverne.Der tilsættes 10 milliliter methanol til hver tømt prøveflaske, før der fyldes ud og omrysses kraftigt for at skylle absorberede stoffer pr. og polyfluoroalkyl eller PFAS fra flaskeinteriøret. Derefter returneres den målte vandprøve til den skyllede flaske med den methanolic skylning. For at opnå en standardkurve for kvantisering skal du fylde otte tomme prøveflasker på en liter med PFAS-frit deioniseret vand og mærke flaskerne med otte jævnt fordelte koncentrationer, der dækker det ønskede kvantiseringsområde.Dernæst tilsættes en mængde indbygget PFAS-blanding til hver flaske for at give de relevante PFAS-koncentrationer, og den interne standard PFAS-blanding tilsættes til hver prøve ved en koncentration, der tilnærmer kalibreringskurvens midtpunkt. Derefter filtrere prøverne gennem glasfiber A filtre under blid vakuum i individuelle, forrensede, en-liters high-density polypropylen vakuum kolber. Hvis der stadig er partikler i flasken, skylles det ekstra deioniserede vand, og vasken filtreres ind i kolben.Ved ekstraktion i fast fase skal det filtrerede vand returneres til prøveflasken, og der skal være en svag anionbytte eller VOKS, patron med 25 milliliter methanol og yderligere 25 milliliter deioniseret vand. Anlænde pumpens trækslang i de filtrerede prøveflasker, og mærk patroner med de relevante prøvenavne mærkes til udvinding i fast fase eller SPE. Pump 500 milliliter af hver prøve gennem hver patron med en konstant strømningshastighed på 10 milliliter i minuttet, hvor flowet kasseres.Fjern WAX SPE patronerne fra stempelpumperne, og overfør SPE-patronen til en vakuummanifold, der er udstyret med eksterne glasbeholdere. Hver SPE-patron skylles med fire milliliter 25 millimolar, pH fire natriumacetatbuffer under skånsomt vakuum efterfulgt af en fire milliliterneutral methanolvask. Ved vaskens afslutning anbringes et 15 milliliter polypropylencentrifugerør under hver SPE-patron for at opsamle elueringsemballet, og prøverne skal anbringes med fire milliliter 0,1 % ammoniumhydroxid i methanol.Fjern derefter elueringsrørene, og reducer eluatvolumenet til 500 til 1.000 mikroliter ved fordampning under tør nitrogenstrøm i et vandbad ved 40 grader Celsius. For målrettet flydende kromatografi med tandemmassespektrometri fortyndes 100 mikroliter af prøveekstrakt med 300 mikroliter af to millimolar ammoniumacetatbuffer i et højtryksvæskekromatografiglas, og der udarbejdes en analytisk arbejdsliste bestående af standardkurven, prøverne og en yderligere replikat af standardkurven til vurdering af instrumental drift på tværs af kørslen. Analyser prøverne ved hjælp af standard flydende kromatografi og massespektrometri metoder etableret for de målrettede forbindelser af interesse.Ved analysens afslutning genereres der en standardkurve fra standardprøverne ved hjælp af analysandens toparealforhold til den interne standard i forhold til koncentrationen af analysand, og der genereres en kvadratisk regressionsformel med en over x-vægtning til koncentrationsforudsigelse. De målrettede analyster i hver prøve mængdeansat ved hjælp af de forberedte standardkurver og arealforhold for hver måling. Hvis koncentrationen overstiger kalibreringsområdet, fortyndes den oprindelige prøve med deioniseret vand, der er tilsat den relevante interne standardkoncentration, og ekstrakt til igen bringes ind i det relevante område.For ikke-målrettet flydende kromatografi med tandemmassespektrometri fortyndes 100 mikroliter af prøveekstrakt med 300 mikroliter af to millimolar ammoniumacetatbuffer i et højtryksvæskekromatografiprøveglas. Når du har indstillet en arbejdsliste som påvist, skal du bruge instrumentsoftwaren til at indsamle flydende kromatografimassespektrometridata med en bred scanning i dataafhængig tilstand. For ikke-målrettet databehandling skal du åbne den relevante softwarepakke til udvinding af molekylær funktioner og vælge Tilføj/fjern eksempelfiler og tilføj filer og vælge de rå data fra det ikke-målrettede eksperiment.Klik på OK, og vælg Batchrekursiv funktionsudtræk og Åbn metode for at indlæse en foruddefineret metode eller for manuelt at redigere softwareindstillingerne. For hver funktion, der er tilbage efter filtrering, generere forudsagte kemiske formler fra den nøjagtige masse og komposit massespektrum, og åbne Environmental Protection Agency CompTox Chemicals Dashboard Batch Search værktøj. Hvis du vil søge i de forudsagte kemiske formler eller neutrale masser mod, skal du vælge identifikatortypen for at returnere potentielle kemiske strukturer og indsætte listen over identifikatorer i identifikatorfeltet.Vælg Download kemiske data og eventuelle fysiske, kemiske eller toksikologiske data, der ønskes for potentielle matches, i rullemenuen. Bekræft derefter strukturerne ved hjælp af de tilgængelige standarder og/eller målrettet tandemmassespektrometrimatchning med høj opløsning af fragmenterne i forhold til spektrene fra databaserne, i silicoteoretiske spektre eller manuel kurering. Kvantitativ flydende kromatografi med tandemmassespektrometriresultater præsenteres i form af ionkromatogrammer for det samlede ionkromatogram og de ekstraherede ionkromatogrammer af specifikke kemiske overgange for målte kemikalier.Det integrerede topområde i en kemisk overgang er relateret til den sammensatte tæthed og kan bruges til at beregne den nøjagtige koncentration ved hjælp af en kalibreringskurve normaliseret til en intern standard. Ikke-målrettet analyse ved hjælp af en fuld MS-scanning giver et samlet ionkromatogram til prøver, som giver mulighed for ad hoc-generering af udvundet ionkromatogram for individuelle ioner. PFAS-forbindelser har negative massedefekter på grund af deres overvægt af fluoratomer, og polyfluorerede forbindelser har positive, men væsentligt mindre massedefekter end homologe organiske materialer.En anden metode filtrering skridt er at identificere homologe serier, der indeholder gentagne enheder fælles for PFAS arter ved hjælp af en passende softwarepakke. Fra højopløsnings-MS-data kan en eller flere formodede kemiske formler matches mod massespektrets isotopiske fingeraftryk og scorede. Kemiske formler kan yderligere bekræftes, og nogle strukturelle oplysninger kan høstes fra tandem massespektrometri data.Yderligere massespektrometriforsøg kan bruges til at bekræfte identiteten af nye forbindelser, og stikprøvesammenligninger kan give oplysninger om forekomsten og den relative mængde af kemikalier. Det er meget vigtigt at have passende emner og kvalitetskontrolprøver til matrixen for at validere de kvantitative og ikke-målrettede målinger. De viste strategier er blevet den nye tilgang til miljøscreening for PFAS ved at tillade opdagelsen af ubekendte og forudsigelse af deres identitet.

Research

JoVE Journal

Environment

Physical, Chemical and Biological Characterization of Six Biochars Produced for the Remediation of Contaminated Sites

Fysisk, kemisk og biologisk karakterisering af Six Biochars produceret til rensning af forurenede industrigrunde

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Anvendelsen af ​​høj opløsning Infrarød termografi (HRIT) for Studiet af isnukleering og Ice Formering i Plants

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

An Aquatic Microbial Metaproteomics Workflow: From Cells to Tryptic Peptides Suitable for Tandem Mass Spectrometry-based Analysis

En Aquatic Mikrobiel Metaproteomics Workflow: Fra celler til Tryptic Peptider Egnet til Tandem-massespektrometri-baseret analyse

Meta-omic technologies such as metagenomics, metatranscriptomics and metaproteomics can aid in the understanding of microbial community structure and ...

Spotting Cheetahs: Identifying Individuals by Their Footprints

Spotting Geparder: Identifikation Personer ved deres fodspor

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges ...

Automated, High-resolution Mobile Collection System for the Nitrogen Isotopic Analysis of NOx

Automated, High-resolution Mobile Collection System for the Nitrogen Isotopic Analysis of NOx

Automatiseret, høj opløsning Mobile Collection System for Nitrogen isotopanalysen af ​​NO<sub&gt; x</sub

Nitrogen oxides (NOx = NO + NO2) are a family of atmospheric trace gases that have great impact on the environment. NOx concentrations directly influence ...

Measurement of the Rheology of Crude Oil in Equilibrium with CO2 at Reservoir Conditions

Measurement of the Rheology of Crude Oil in Equilibrium with CO2 at Reservoir Conditions

Måling af rheologi af råolie i ligevægt med CO<sub&gt; 2</sub&gt; Ved reservoir betingelser

A rheometer system to measure the rheology of crude oil in equilibrium with carbon dioxide (CO2) at high temperatures and pressures is described. The ...

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

Barnacle Balanus improvisus som en Marine Model - dyrkning og genekspression

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...

Single-throughput Complementary High-resolution Analytical Techniques for Characterizing Complex Natural Organic Matter Mixtures

Single-overførselshastighed supplerende høj opløsning analytiske teknikker til kendetegner komplekse naturlig organisk materiale blandinger

Natural organic matter (NOM) is composed of a highly complex mixture of thousands of organic compounds which, historically, proved difficult to ...

Removal of Arsenic Using a Cationic Polymer Gel Impregnated with Iron Hydroxide

Fjernelse af arsen ved hjælp af en kationisk polymer gel imprægneret med jern hydroxid

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from ...

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Prøveudtagning til estimering af Frankliniella arter blomst Thrips og Orius arter rovdyr i felt eksperimenter

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...