Name: identifying per- and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow
Uploaded: 2019-04-18T14:00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow at JoVE.c

US Environmental Protection Agency, gjennom Office for forskning og utvikling, finansiert og klarte forskning beskrevet her. Dette dokumentet har blitt vurdert av US Environmental Protection Agency, Office for forskning og utvikling, og godkjent for publisering. Synspunktene til uttrykk i denne artikkelen er de av forfatterne, og nødvendigvis representerer ikke synspunkter eller politikken av det amerikanske Environmental Protection Agency. Denne forskningen var støttes delvis av en avtale i postdoktor forskning programmet ved det nasjonale eksponering forskningslaboratorium administrert av Oak Ridge Institutt for vitenskap og utdanning gjennom Interagency avtalen DW89992431601 mellom det US Department of Energy og US Environmental Protection Agency.

1. innsamling av vannprøver
<ol><li>Utarbeidelse av PFAS Standard aksjer<ol>
<li>Forbered en PFAS standard blanding i metanol som inneholder noen målrettet forbindelser av interesse (f.eks PFOA, PFOS, HFPO-DA) på 1 ng/µL. Dette er innfødt PFAS blandingen. Kommersielt forberedt blandinger er også tilgjengelig (dvs. PFAC Mix A og blanding B).</li>
		<li>Forbered en standard blanding som inneholder samsvarende stabil isotop merket (SIL) PFAS forbindelser (f.eks 13C4- PFOA, 13C8- PFOS, 13C3- HFPO-DA) på 1 ng/µL. Dette er er PFAS blandingen. Kommersielt forberedt blandinger er også tilgjengelig (dvs. MPAFC Mix A og blanding B). Merk: Hvis en SIL versjon av de målrettede PFAS er tilgjengelig, et surrogat med lignende struktur og kjede lengde kan brukes (f.eks 13C2- PFHxA for HFPO-DA)</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utarbeidelse av feltet tomt (FB), Spike tom (SB) prøver<ol>
<li>Fylle to, ren høy tetthet polypropylen (HDPE) eller polypropylen (PP) flasker med 1000 mL laboratorium vaskebuffer (DI) vann, kjent for å være PFAS gratis. FORSIKTIG: PFAS materiale ofte har udefinert toksisitet og/eller kreftfremkallende. Forsiktighet bør utvises å unngå muntlig eller hud eksponering for standarder eller lager løsninger.</li>
		<li>Legge til et antall PFAS standard blanding i ett flaskene på en siste konsentrasjon tilsvarer forventede eksempel konsentrasjonen (f.eks 100 ng/L). Dette er topp tom (SB).</li>
		<li>Legge til 5 mL av 35% salpetersyre konserveringsmiddel Spike tomt.</li>
		<li>Utføre både SB eksempel og det unspiked felt tomt på prøvetaking sted som kontroller.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Feltet prøvetaking Merk: Utvalg samler skal bruke nitrilhansker og prøve fra flytende systemer der det er mulig. Trykk prøver skal tillates å flyte og equilibrate før prøvetaking (2-3 min).<ol>
<li>Samle 500-1000 mL vann fra feltet plassering i en ren HDPE eller PP flaske.</li>
		<li>Legge til 5 mL av 35% salpetersyre konserveringsmiddel eksempel flasker og feltet stå tomt. FORSIKTIG: salpetersyre er etsende og en sterk oxidizer</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. prøven utvinning
Merk: PFAS er allestedsnærværende og vedvarende. Kontroller at alle løsemidler er den høyeste karakteren og har blitt analysert for lavt nivå PFAS forurensning. Rense alle laboratorieutstyr for tilberedning standarder før forberede tomme og eksempler.
<ol><li>Eksempel forbehandling<ol>
<li>Hell hvert utvalg i en egen, pre rengjøres 1 L HDPE uteksaminert sylinder og posten nøyaktig volumet.</li>
		<li>Legge til 10 mL av metanol tomme prøven flasken, cap det og rist godt for å skylle adsorbert PFAS fra flaske interiør.</li>
		<li>Tilbake målte vann utvalget til skylles flasken med methanolic skylling.</li>
	</ol></li>
	<li>Standardkurven for kvantifisering<ol>
<li>Fylle åtte, 1 L HDPE/PP flasker med PFAS-gratis DI vann.</li>
		<li>Velg åtte avstand konsentrasjoner dekker området ønsket kvantifisering. For eksempel: 10, 25, 50, 100, 250, 500, 750 og 1.000 ng/L for en rekke 10-1000 ng/L.</li>
		<li>Legge til et antall av opprinnelige PFAS i hver flaske å gi de siste PFAS konsentrasjonene i 2.2.2 (f.eks 100 µL PFAS Mix A til 1L DI vann = 100 ng/L).</li>
	</ol></li>
	<li>Intern standard tillegg Merk: Tillegg av stabil isotop merket interne standard (IS) er bare nødvendig hvis kvantitative resultater er ønsket i tillegg til ikke-målrettede analyse.<ol>
<li>Tilsett er PFAS blandingen til hvert utvalg i en konsentrasjon tilnærmelsesvis midtpunktet i kalibreringskurven (f.eks 250 µL av er PFAS = 250 ng/L)</li>
	</ol></li>
	<li>Filtrering<ol>
<li>Filtrere prøver gjennom GF/A glass fiber filtre (47 mm, 1.6 µm porestørrelse) under mild vakuum i en pre rengjøres 1 L HDPE vakuum kolbe.</li>
		<li>Hvis svevestøv forblir i flasken, skyll med deionisert vann i filteret. Returner det filtrert vannet prøven flasken eller en ny container for solid fase utvinning.</li>
	</ol></li>
	<li>Solid fase utvinning (SPE) Merk: Patron konsentrasjon beskrevet her bruker en konstant flyt stempelpumpe. Alternative metoder for konsentrasjon bruke en vakuum manifold20 eller en on-line SPE-LC-MULTIPLE Sclerosis17 oppsett er mulig men ikke diskutert.<ol>
<li>Tilstand en svak anion exchange (voks) patron med 25 mL av metanol.</li>
		<li>Tilstand voks kassetten med en ekstra 25 mL deionisert vann.</li>
		<li>Posisjon pumpen trekke slangen i filtrert eksempel flasker og etiketten SPE patroner med tilsvarende eksempel navn.</li>
		<li>Pumpe 500 mL utvalg vann gjennom kassetten frekvensen jevn flyt av 10 mL/min (500 mL totalt), forkaster gjennomflytsenhet væske til avfall. Merk: Større eller mindre volumer kan være konsentrert avhengig av forventet eksempel konsentrasjoner.</li>
		<li>Fjerne patronen fra stempelpumpe for elueringsrør. Merk: Hvis konsentrere Tapp bruker samme pumpen, stempelet pumpen skal tømmes med 25 mL av metanol før du installerer neste patronen for balanse.</li>
		<li>Overføre SPE kassett til en vakuum manifold og utstyre med eksterne glass reservoaret.</li>
		<li>Tømme SPE kassetten med 4 mL 25 mM, pH 4.0 natrium acetate buffer under mild vakuum. Kast strømme gjennom. Vask SPE kassett med 4 mL nøytral metanol. Merk: Nøytral vaske brøkdel kan samles om spesifikke ikke-ionisert polar analytter forventes. Ellers forkaste å kaste bort</li>
		<li>Plass en 15 mL polypropylen sentrifuge rør under hver SPE patron å samle eluent. Elute prøven med 4 mL 0,1% ammonium hydroxide i metanol.</li>
		<li>Fjerne elueringsrør og redusere eluate volum til 500-1000 µL av fordampning under tørre nitrogen strømmen i et vannbad litt forhøyet temperatur (40 ° C).</li>
		<li>Konsentrert utvalg ekstrakter kan lagres før analyse ved romtemperatur.</li>
	</ol></li>
	<li>Målrettet LC--MS-/ MS kvantifisering<ol>
<li>Fortynne 100 µL av prøve Pakk ut med 300 µL 2 mM ammonium acetate bufferen i en såkalt HPLC eksempel hetteglass.</li>
		<li>Kalibrer og equilibrate en såkalt HPLC og MS systemer i henhold til produsentens instruksjoner. Merk: Bakgrunn PFAS oppdages vanligvis skyldes bruk av fluoropolymer komponenter til de fleste LC og prøve flaske septa. Bekrefte at Detektbart nivåer i tomme er ubetydelig før bruk. Endring av LC systemet å erstatte Teflon komponenter er foreslått der det er mulig. Bruk av en analytisk "holde opp" kolonne ved LC shuntventilen er også foreslått29.</li>
		<li>Forberede en analytisk worklist bestående av standardkurven, eksempler og en ekstra duplisere av standardkurve å vurdere instrumental drift over kjøre. Et eksempel worklist er vist i tabell 1.</li>
		<li>Analysere prøvene bruke LC- og MS etablert for målrettet compound(s) rundt. Eksempel LC graderingen er vist i tabell 2 og MS metodeparametere vises i tabell 3 og Tabell 4. Mer finnes detaljert informasjon i McCord et al.21.</li>
		<li>Generere en standardkurve fra standard eksemplene bruker peak området forholdet mellom analytt interne standarden versus konsentrasjonen av analytt. Generere en kvadratisk regresjon formel med 1 / x vekting for konsentrasjon prediksjon9.</li>
		<li>Quantitate målrettet analytter i hvert utvalg bruker forberedt standard kurver og området forholdet (standard området / område) for hver måling.</li>
		<li>Hvis konsentrasjonen overskrider kalibrering området, fortynne den opprinnelige prøven med DI vann tilsatt riktig er konsentrasjonen og Pakk å bringe konsentrasjonen i det aktuelle området.</li>
	</ol></li>
	<li>Ikke-målrettede LC--MS-/ MS datainnsamling<ol>
<li>Fortynne 100 µL av prøve Pakk ut med 300 µL 2 mM ammonium acetate bufferen i en såkalt HPLC eksempel hetteglass.</li>
		<li>Kalibrer og equilibrate en såkalt HPLC og høy oppløsning MS i henhold til produsentens instruksjoner.</li>
		<li>Forberede en analytisk worklist som 2.6.2.</li>
		<li>Bruker apparatet programvaren, samle LC-MS data med et bredt søk MS1 i data-avhengige for å samle MS/MS. eksempel LC forløpningen i tabell 5. Du finner nærmere drøfting av instrument-innstillingene i Strynar et al.30 og Newton et al.31. Merk: For bedre MS-/ MS kvalitet data-avhengige analyse kan utføres med en foretrukket ion liste med et delsett av funksjoner igjen etter behandling i 2.8.1-2.8.8.</li>
	</ol></li>
	<li>Ikke-målrettet behandling Merk: Dataanalyse kan utføres med et bredt utvalg av programvare og metodene reflekterer ikke den eneste eller beste metoden for et vilkårlig datasett. Der det er mulig gir trinnene en generell beskrivelse som kan utføres i alternativ programvare. Behandling av eksempeldataene i dette manuskriptet ble utført med bestemte programmer (programvare 1 og programvare 2) som beskrevet i Newton et al.31.<ol><li>Utføre molekylær egenskapsuttrekking av kjemiske egenskaper ved hjelp av ett av flere åpen kildekode programvare pakker32,33 eller leverandør programvare for å identifisere monoisotopic massene, tid og integrert topp områder av kjemiske funksjoner.<ol>
<li>Programvare 1, velg Legg til/fjern eksempelfiler > Legg til filer Velg rådata fra ikke-målrettede eksperimentet, og klikk OK.</li>
			<li>I programvare 1 Velg satsvise rekursiv egenskapsuttrekking > Åpne metoden... laste en preestablished metode eller manuelt redigere programvareinnstillinger. Profinder innstillinger for egenskapsuttrekking finnes i tabell 6.</li>
			<li>Programvare 1, etter egenskapsuttrekking, velg Fil > Eksporter som CSV-fil, fil > Eksporter som CEF, eller Fil > Eksporter som PFA for videre behandling. CEF filer antas for resten av beskrivelsen.</li>
			<li>I programvare 2 (MPP) Opprett et nytt eksperiment med Type uidentifisert og arbeidsflyttypen Veiviseren for Import og klikk OK.</li>
			<li>MPP Velg datafiler og Finn de eksporterte programvare 1 resultatene (CEF eller PFA) kan importeres. deretter velger du neste til Justering parameteren vises.</li>
			<li>MPP, setter du sammensatte justering verdiene til 0,0 (justering var allerede utføres i funksjonen utvinning programvare 1, trinn 2.8.1.2) og klikk deretter neste gjennom trinnene til slutt er tilgjengelig.</li>
		</ol></li>
		<li>Filtrere identifikasjoner basert på analytisk reproduserbarhet. Der flere Repliker prøvene er tilgjengelig, funksjoner skal være tilstede i > 80% av enkelte replikerer og har en analytisk variasjonskoeffisienten (CV) < 30%<ol>
<li>MPP velger eksperimentelle Oppsett > eksperiment grupperings og tilordne hver raw-filen en gruppe utgjør dens opprinnelse utvalg (dvs. gjentak fra samme kilde bør være i samme gruppe). Du kan opprette flere grupper tilsvarer nestede variabler (f.eks instrumental vs tekniske gjentak).</li>
			<li>MPP velger eksperimentelle Oppsett > opprette tolkning Velg parameteren eksperimentet (dvs. gruppere) og klikk neste til slutt er tilgjengelig. Dette vil opprette en kategori som fremtidige filtrering kan operere på.</li>
			<li>MPP velger kvalitetskontroll > Filter med frekvensen. Angi enhetslisten til Alle enheter og tolkningen til prøven Group(non-averaged) opprettet i 2.8.2.2, og trykk deretter neste.</li>
			<li>For inndataparametere, angi enhet oppbevaring på 80% av samplet i minst én betingelse deretter neste til slutt er tilgjengelig. Navngi listen frekvens filtrert funksjoner</li>
			<li>MPP velger kvalitetskontroll > Filter på prøve variasjon. Angi enhetslisten til frekvens filtrert funksjoner fra 2.8.2.4 og tolkning til Group(non-averaged), så finne neste.</li>
			<li>Velg alternativknappen for Rådata og området av interesse å koeffisient av variant < 30%. Klikk Neste > Fullfør og lagre listen som CV filtrert funksjoner.</li>
		</ol></li>
		<li>Fjerne funksjoner hvor ikke prøver har betydelig høyere (> 3 brett) overflod enn feltet tomt (FB) prøven.<ol>
<li>MPP velger Analyse > brett endre. Angi enhetslisten CV filtrert funksjoner og tolkningen til prøven gruppen så finne neste. Velg alternativet fold endre alle mot én betingelse og Velg betingelsen FB eller hva navnet på gruppen for tom behandlet prøven var.</li>
			<li>På følgende skjermbilde, angi Fold-endring cut-off 3.0 og klikk gjennom til slutten av spørsmål. Lagre listen som FC filtrert liste.</li>
		</ol></li>
		<li>Utføre binære sammenligninger av personlige prøver av interesse mot en passende bakgrunn prøve (f.eks oppstrøms og nedstrøms et punkt kilde) å finne fold-endringer for kjemiske enkeltfunksjoner.<ol>
<li>MPP velger Analyse > Filter på vulkanen Plot. Angi enhetslisten til FC filtrert liste og tolkningen til gruppen.</li>
			<li>Brett-endre betingelsen par velger to prøvene for sammenligning (f.eks en sammenkoblet oppstrøms og nedstrøms-eksempel) og velg test Mann-Whitney hender.</li>
			<li>For foreløpig analyse, ikke velge en verdi for flere test korreksjon på denne skjermen, klikke deg frem til resultatet tomten.</li>
			<li>Velg en fold-endring cut-off av 3.0 og en p-verdien cutoff til 0.1 resultatene skjermen. Deretter ferdig og eksport listen som Prelim resultatene.</li>
		</ol></li>
		<li>For hver funksjon igjen etter filtrering, generere spådd kjemiske formula(s) fra nøyaktig massen og sammensatt mass spekteret.<ol>
<li>MPP, velg resultater tolkning > IDBrowser ID og enhetslisten Prelim resultatene .</li>
			<li>I IDBrowser velger du identifisere alle forbindelser med molekylære formel generator (MFG) som metoden identifikasjon.</li>
			<li>I formelen genererer alternativer legge F til kolonnen elementer og angi maksimal til 50, så velge Fullfør. Velg Lagre og gå tilbake forågåtilbaketil MPP følgende formel generasjon.</li>
			<li>MPP, høyreklikke det filtrerte og MFG matchet enhetslisten og velg Eksporter. Lagre resultatene.</li>
		</ol></li>
		<li>Undersøke monoisotopic masse arter i funksjonslisten redusert betydelig kjemiske for de som inneholder masse feil tegn på fluorination; se type og Fiehn34.</li>
		<li>Merk kjemiske serien inneholder vanlige polyfluorination motiver (CF2 (m/z 49.9968), CF2O (m/z 65.9917), lm2CF2O (m/z 80.0074), etc.) benytter en masse feil tomten eller programvare algoritmen; se drøftingen, Liu et al.17, Loos et al.35 og Dimzon et al.36.</li>
		<li>Søke spådd kjemiske formler eller nøytral massene mot EPA kjemi Dashboard databasen og/eller andre databaser å returnere potensielle kjemiske strukturer.<ol>
<li>Åpne EPA Comptox kjemikalier Dashboard Batch Søk verktøyet (https://comptox.epa.gov/dashboard/dsstoxdb/batch_search) og lim inn listen over identifikatorer (formler eller massene) i boksen identifikator etter å velge identifikator (dvs. MS-klar Formelen eller Monoisotopic masse).</li>
			<li>Velg Last ned kjemiske Data... og også velge fysisk/kjemiske/toksikologi data ønsket for mulige treff fra rullegardinlisten.</li>
		</ol></li>
		<li>Bruke kjemiske intuisjon og referansedata, fjerne usannsynlig kamper fra listen for potensielle kjemiske struktur for hver formel basert på muligheten på grunn av kjemisk stabilitet, fysiske egenskaper som ionizability eller hydrophobicity, tilstedeværelse produksjon kjemikalier fra nærliggende kilder, etc. I fravær av flere data, kan spectral gjennomførbarhet rangeres rent basert på litteratur prevalens; se McEachran et al.37.</li>
		<li>Bekrefte strukturer ved hjelp av tilgjengelig standarder og/eller målrettet høyoppløselig MS/MS matching av fragmenter mot spectra databaser, i sili teoretisk spectra eller manuell konservering.</li>
	</ol></li>
</ol>

Forfatterne ikke avsløre.

Eksempel håndtering og forberedelse Inkludering av referanse/pigg standarder er av overordnet betydning for noen målrettede analyse, som de gir en backstop for avmerker analytisk gyldighet. Mangel på QC prøver hindrer vurdere nøyaktigheten av resultatene; allestedsnærværende natur fluorochemicals betyr at sjansen forurensning av feltet prøver, behandling materialer eller LC-MS systemet er ikke uvanlig og må regnskapsføres. Videre det gir mulighet for validering av protokollen uansett variasjon i daglige prøven behandling, som mange av disse trinnene kan være svært variabel, spesielt SPE og prøve konsentrasjon skritt. Utvinning av både eldre og romanen perfluorinated kjemikalier kan være sterkt påvirket av valg av stasjonære fase for konsentrasjon og komponenter i kilde utvalgene, for eksempel pH og saltholdighet46. Påvirkning av prøven forholdene anses Hvis bestemte klasser av pefluorinated kjemikalier av interesse. Alternative eksempel forberedelse ordninger for vann ekstrakter kan brukes hvis laboratorium er tilgjengelig og nedstrøms dataanalyse forblir lignende.
Målrettet dataanalyse For forbindelser med tilgjengelig standarder og matchet, stabil isotop merket interne standarder, de primære sakene for dataanalyse er instrumental og fastsetting av metoden oppdagelsen grenser og passende rapportering områder kan bestemmes på en laboratoriet-av-laboratoriet basis benytter standard tilnærminger, som signal til støyforhold fra lavnivå standard toppene47. I fravær av matchet interne standarder feil fra matrix effekter kan oppstå, og nøyaktig tilbake-anslag av piggete prøver kan brukes til å anslå nøyaktigheten av målene. Når mangler standarder for å forberede en kurve, et kvantitativt overslag av en ukjent kan gjøres ved å behandle det likt til en jevn standard sammensatte, men feil i estimatet er på 10 + brett med begrenset evne å kvantifisere usikkerheten, se McCord og Newton Strynar21. I disse tilfellene trenddata kan fortsatt bli samlet, men konsentrasjon er svært lite troverdige.
Ikke-målrettede dataanalyse Topp plukke innstillinger har en betydelig innvirkning på antall kjemiske funksjoner identifisert, men kvaliteten på funksjonen utvalget er også sterkt påvirket. Vedtak interessepunkter i topp plukke er 1) intensiteten av personlige massene skal inkluderes i spectra, ion overflod terskelen 2) intensiteten av utdraget chromatogram topper vurderes funksjoner, funksjon overflod terskelen 3) funksjonen gjenkjenning frekvens, Repliker terskelen og 4) analytisk variasjon, CV terskelen (Figur 10).
Setter urealistisk lave terskler for topp plukke resultater i en eksponentielle økning i testtiden løse tilleggsfunksjoner stadig lav overflod (Tabell 7). Ion-overflod terskelen filtrene masse spectral funksjoner hvor nok av personlige isotop krillens ikke passerer terskelen. Ideelt velger bare for funksjoner med kvalitet MS spectra, de er virkelig kjemiske funksjoner i stedet for instrumental støy, og tillate formel prediksjon nedstrøms behandling. En riktig terskelen basert på instrumental støy, ideelt minst 3 x støy terskelen for MS1 skanner. Funksjon overflod terskelen filtrerer kjemiske funksjoner basert på intensitet eller området av funksjonen brukt kromatografiske utdraget. Dette trinnet kan avvisning av lav overflod topper, som er vanligvis brukt kromatografiske kvalitet, har høy avvik eller er et resultat av andre dårlig programvare extraction. En riktig terskelen må bestemmes per eksperimentet, og matrise basert på et akseptabelt nivå av dårlig funksjonen generasjon (f.eks funksjoner under terskelen utstillingen uakseptabelt dårlig kromatografi). Videre kan analytisk QC brukes å avvise funksjoner på brukt kromatografiske basert på inkonsekvent identifikasjon i analytisk og/eller forberedende replikat (Repliker terskel) eller basert på dårlig reproduserbarhet replikat (CV terskel). Riktig nivå, avhenger av kvaliteten på topp integrering programvaren brukes og kjemiske enhetene under etterforskning. Vannløselige perfluorinated forbindelser og lett optimalisert integrering protokoller, funksjoner bør identifiseres i 80 + % av analytiske replikerer og CVs forventes å falle under 30%, som beskrevet i avsnittet metoder.
Toppene oppdaget fra ikke-målrettede analyse gir ikke kvantitative beregninger av konsentrasjonen av materialene oppdaget. Videre identiteten til sann ukjente kan være vanskelig å bekrefte fordi romanen forbindelser er fraværende fra offentlig tilgjengelige databaser. Romanen strukturelle besluttsomhet krever omfattende analyse med flere metoder og krever kompetanse i både massespektrometri og kjemi. Normalisere peak områdene kjemiske funksjoner kan imidlertid gi semi kvantitative beregninger av konsentrasjoner av ukjente fra kjente arter21. Hvis konsekvent prøvetaking og forberedelsene er ansatt, kan trend tidsinformasjon for individuelle arter genereres for å overvåke utholdenhet av en kjemisk i fremtiden som svaret for en individuelle arter skal være konsekvent sperring store variasjoner i matrix21.
Hovedfordelen ved denne metoden er utvidelsesmuligheter for prøve behandling å tillate både målrettet og nontargeted. Mens målrettede analyse gir tilsvarende eller bedre kvantitativ informasjon, mangler det sterkt bredden av analyse ønsket når du arbeider med nye og kommende materialer, samt deres forhold til matrix materialer. Bruke en målrettet metodikk, eller selv en mistenkt screening metode basert på kjente materialer og begrenset databaser er helt blind for tidligere ubemerket arter, selv om de har vesentlige helseeffekter. Programvaren forbedrer og databaser blir mer robust, vil nøyaktigheten av ukjent ID fortsette å øke, med en samtidig nedgang i gang investering og kompetanse nødvendig å analysere flerdimensjonale dataene denne tilnærming. Data som er generert for tiden er likevel betydelig fremtidig verdi fordi data bank gir innlegg-hoc analyse med nyutviklede programvaren og muliggjør sammenlikning på tvers tid selv om identiteten til en oppdaget sammensatte er foreløpig ukjent.

Klasse per- og polyfluoroalkyl stoffer (PFASs) er Persistente organiske miljøgifter med betydelig folkehelseproblem. Den spesifikke forbindelser perfluorooctanoic acid (PFOA) og perfluorooctanesulfonate (PFOS) har drikkevann helse rådgivende nivåer satt av EPA1,2 og store amerikanske produksjonen opphørte i 2000-tallet3,4 . Blitt for å få en betydelig forståelse for egenskapene til PFAS i tekstil og forbruker produktet produksjon kuler, hundrevis, om ikke tusenvis, av alternative PFAS kjemikalier har utviklet materiale for å fylle produktet nisjer, inkludert erstatning for Avskrevne forbindelser5,6,7,8. Det er en pågående må overvåke miljø nivåer av rett kjeden perfluorinated karboksylsyre og sulfonates slike PFOS, PFOA og deres relaterte homologe serien, men nye kjemiske forbindelser dekkes ikke av etablerte metoder som EPA Metoden 5379 og ofte mangel analytisk standarder for tradisjonelle målrettet analyse. Hensikten med denne protokollen er todelt. Det gir en sti for målrettet LC--MS-/ MS analyse av fluorochemical Art i vann der analytisk standarder er tilgjengelige og detaljer sømløs integrering av en ikke-målrettede, høyoppløselige masse massespektrometri tilnærming for dataanalyse som gjør det mulig for gjenkjenning av ukjente eller uventede forbindelser i samme prøvene.
Solid-fase utvinning (SPE) er en etablert teknikk for eksempel opprydding og konsentrasjon med programmer og mange matriser10,11-med analytter og utvalg. For PFAS analyse, flere solid retentive faser inkludert ikke-polar functionalized polar og ionebytte kolonner er brukt forskjellig grad for underklasser av fluorholdige arter i en rekke matriser9,12, 13,14,15,16. Fremskritt innen SPE eksempel analyse med on-line oppsett sterkt øker gjennomstrømningen av tilnærming og forbedre reproduserbarhet eksempel håndtering, men den grunnleggende prosessen forblir konsekvent17. Noen innsats for å fjerne frakoblede konsentrasjonen av SPE med stort volum injeksjoner har også gjort, men dette krever endringer i kromatografi som plasserer dem utenfor riket av casual analysen18,19 . Vår eksempel analyse bruker en polymere svak anion exchange (voks) retentive fase grundig skille Sure PFAS materialer fra tradisjonelle organiske forurensninger mens de oppnår betydelige eksempel konsentrasjon faktorer. Dette voks er viktig å ta den korte kjede perfluorinated syren som perfluorobutane sulfonate (PFBS) eller perfluorinated etere som hexafluoropropylene oksid dimer syre (HFPO-DA) som er mer polar enn den lengre kjede eldre perfluorinated arter20,21. Som det har vært en betydelig omlegging mot kortere fluorholdige kjeder og Eter inkludering i siste PFAS kjemi5, kan denne fasen utvalget grundigere utvinning av romanen forbindelser for MS analyse.
Målrettet LC--MS-/ MS kvantifisering bruke godkjente standarder og stabil isotop merket interne standarder gir en enestående grad av spesifisitet og følsomhet for kvantitativ analyse. Mens dette er ønskelig i mange situasjoner, er det upraktisk for alle-også-felles situasjoner i analysen. Målrettede tilnærminger fungerer bare for arter som forventes i utvalget og hvilke metoder har tidligere blitt etablert. For nye og kommende forbindelser, denne tilnærmingen er i stand til å oppdage selv arter som kan være av interesse, uansett deres kjemi eller konsentrasjon, og lav masse spektrometre er nesten i stand til å gi nok informasjon til å gjøre utvetydig kjemiske tildelinger av ukjent forbindelser. Følgelig har feltet ikke-målrettede analyse oppstått, leveraging makten av høyoppløselige moderne masse spektrometre å analysere prøver uten en forutsatte hypotese og tilbakevirkende kraft tilordne kjemikalier til synlig funksjoner i utvalget. Denne tilnærmingen er brukt mye i biologi22,23,24 og miljølære25,26,27 på mange klasser av kjemikalier. Perfluorinated kjemikalier er spesielt enkelt å identifisere i denne metoden på grunn av sin unike masse spectral mønstre, og hundrevis av forbindelser er beskrevet i bare de siste par år5,28.
Protokollen diskutert her er ment å justere målrettet LC--MS-/ MS PFAS kvantifisering med behovet for å identifisere og semi kvantitativt overvåke nye forbindelser av interesse. SPE fasen utvalget og prøve matlaging teknikker er ment å sikre erobringen av mer hydrofile nye PFAS syrer fra vann og kan være mindre egnet for lengre kjede polymere arter og ikke-ioniske arter. Videre dataene som genereres ved ikke-målrettede analyse er tett og av høy dimensionality, som nødvendiggjør bruk av dataanalyse programvare. Slike programvarepakker er ofte forhandlerspesifikke og kreve endring opererer mellom instrument plattformer. Der det er mulig analyseprosessen har blitt beskrevet i en generisk måte og åpen kilde/freeware alternativer refererer til, men effektiviteten og nøyaktigheten av enhver programvare tilnærming må vurderes enkeltvis.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1567px;" width="1568">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Acqity ultra-high performance liquid chromatography system&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:927px;">Modified with PFCs analysis kit (176001744); equivalent UPLC system is acceptible if PFAS background is checked and confirmed to be low</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Ammonium acetate</td>
			<td style="width:131px;">Fluka</td>
			<td>17836</td>
			<td>Mass spectrometry grade &#62;99% pure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Ammonium Hydroxide</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>338818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Balance</td>
			<td>Mettler</td>
			<td>AB204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">BEH C18 reverse phase UPLC column, 2.1&#215;50&#160;mm, 1.7&#160;&#956;m&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td>186002350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Dual piston syringe pump&#160;</td>
			<td>Waters Corporation</td>
			<td>SPC10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Glacial Acetic Acid</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>ARK2183&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Glass Microfiber Filters</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>1820-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">High density polyethelye sample bottle&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Nalgene</td>
			<td>2189-0032&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">High Resolution Mass Spectrometer</td>
			<td style="width:131px;">Various</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Mass Spectrometer should be capable of providing accurate mass to &#60;10ppm and collecting MS/MS data.&#160; Agilent 6530 qTOF and Thermo Fisher Orbitrap Fusion were used in this work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Methanol</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Nitric Acid (35% w/w)</td>
			<td style="width:131px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>SVCN-5-1</td>
			<td>Can be prepared in house using concentrated nitric acid and reagent water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Polypropylene Buchner funnel</td>
			<td>ACE Glass</td>
			<td>12557-09&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Polypropylene cenitrfuge tube and cap</td>
			<td style="width:131px;">BD Falcon</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Polypropylene Vacuum Flask (1 L)</td>
			<td style="width:131px;">Nalgene</td>
			<td>DS4101-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Quattro Premier XE triple quadrupole mass spectrometer&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Equivalent triple-quadrupole or better system can be used instead, should provide high sensitivity and stability for targeted analysis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Reagent Water</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
			<td>Any source determined to be PFAS free</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Sodium Acetate</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>W302406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">TurboVap nitrogen evaporator&#160;</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td>103198</td>
			<td>Equivalent systems or rotary vacuum evaporator may be used instead</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">Weak anion exchange SPE cartridge (Oasis WAX Plus)</td>
			<td style="width:131px;">Waters Corporation</td>
			<td>186003519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Standard Solutions</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:391px;">2,3,3,3-Tetrafluoro-2-(1,1,2,2,3,3,3-heptafluoropropoxy)propanoic acid (HFPO-DA)</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>HFPO-DA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Additional targeted compound standards of interest</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td></td>
			<td>to be determined based on preliminary analysis and standard availability</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Mass labeled HFPO-DA</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>M2HFPO-DA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Native PFCA/PFAS Mixture (2 ug/mL)</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>PFAC-MXA</td>
			<td>or PFAC-MXB; or individually prepared mixture containing compounds of interest</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Stable Isotope Labeled PFCA/PFAS Mixture (2 ug/mL)</td>
			<td style="width:131px;">Wellington</td>
			<td>MPFAC-MXA</td>
			<td>or MPFAC-MXB; or individually prepared mixture containing compounds of interest as appropriate for Native PFASs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Software</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Mass Profiler Professional</td>
			<td style="width:131px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Or open source software packages</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:391px;">Profinder</td>
			<td style="width:131px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Or open source software packages</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identifying per- and polyfluorinated chemical species with a combined targeted and non-targeted-screening high-resolution mass spectrometry workflow

Historiske og nye per- og polyfluoroalkyl stoffer (PFASs) har fått betydelig interesse fra de offentlige og offentlige organer fra lokale til føderale nivåer. Fortsetter utviklingen av PFAS kjemikalier presenterer en utfordring å miljøovervåking, der pågående utvikling av målrettede metoder nødvendigvis etterslep oppdagelsen av nye kjemiske forbindelser. Det er behov, derfor har fremtidsrettede metoder som kan oppdage nye og uventede forbindelser, overvåker disse arter over tid og løse detaljer om sin kjemiske struktur for å muliggjøre fremtidig arbeid i helse. Dette ikke-målrettede analyse av høyoppløselige massespektrometri tilbyr en bred base oppdagelsen tilnærming som kan kombineres med nesten alle prøve forberedelse ordningen og gir betydelige muligheter for sammensatte identifikasjon etter. Her, vi beskriver en solid-fase utvinning (SPE) basert eksempel konsentrasjon metode innstilt for kortere kjede og mer hydrofile PFAS kjemikalier, som per fluorholdige Eter syrer og sulfonates, og beskriver analyse av prøver forberedt på denne måten i både målrettet og ikke-målrettede moduser. Målrettede metoder gir overlegen kvantifisering når referanse standarder er tilgjengelig, men er egentlig begrenset til forventet forbindelser når utføre analyse. I kontrast, kan en ikke-målrettede tilnærming identifisere tilstedeværelsen av uventede forbindelser og gi litt informasjon om sin kjemiske struktur. Informasjon om kjemisk funksjoner kan brukes til å koordinere forbindelser over eksempel steder og spore overflod og forekomst over tid.

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow at JoVE.c

Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow

Identifisere- og Polyfluorinated kjemisk arter med en kombinert målrettet og ikke-målrettede-Screening høyoppløselig massespektrometri arbeidsflyt

Her presenterer vi en protokoll for sekvensiell målrettet kvantifisering og ikke-målrettede analyse av fluorholdige forbindelser i vannet ved massespektrometri. Denne metoden gir kvantitative kjent fluorochemical forbindelser og identifiserer ukjente kjemikalier i relaterte prøver med semi kvantitative beregninger av sin overflod.

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the ...

Denne tilnærmingen gjør det mulig å kvantitet av kjente PFAS og oppdagelsen av nye stoffer i de samme prøvene, sammenlignet med målrettede tilnærminger alene som savner nye forbindelser av bekymring. Denne protokollen retter seg mot et bredere utvalg av PFAS-forbindelser, som er representative for de nyeste nye kjemikaliene. Hvis konsentrasjonstrinnet er tilpasset forbindelsene, kan målemetodene som brukes her, brukes på en hvilken som helst klasse kjemikalier.For å samle en prøve fra feltet, bruk nitrilhansker og samle 500 til 1000 milliliter vann fra feltstedet i en ren, polyetylenflaske med høy tetthet, HDPE eller polypropylen. Tilsett fem milliliter med 35% salpetersyre konserveringsmiddel til prøveflasken og til et felt tomt, og transport prøvene tilbake til laboratoriet. Hell hver prøve i individuelle, forhåndsrengjorte, en-liters, polypropylen graderte sylindere med høy tetthet, og registrer det nøyaktige volumet av prøvene.Tilsett 10 milliliter metanol til hver tømte prøveflaske før du kapper og rister kraftig for å skylle absorberte per- og polyfluoroalkylstoffer, eller PFAS, fra flaskeinteriøret. Deretter returnerer du den målte vannprøven til den skyllede flasken med metanolic skylling. For å få en standardkurve for kvantitet, fyll åtte tomme, en-liters prøveflasker med PFAS-fritt deionisert vann, og merk flaskene med åtte jevnt fordelte konsentrasjoner som dekker ønsket mengdeområde.Deretter legger du til en mengde innebygd PFAS-blanding i hver flaske for å gi de riktige PFAS-konsentrasjonene, og legger til den interne standard PFAS-blandingen til hver prøve ved en konsentrasjon som tilnærmer midtpunktet i kalibreringskurven. Deretter filtrerer prøvene gjennom glassfiber A filtre under skånsom vakuum i individuelle, forhåndsrensede, en-liters polypropylenvakuumflasker med høy tetthet. Hvis det forblir svevestøv i flasken, skyll det ekstra deioniserte vannet og filtrer vasken i kolben.For solidfaseekstraksjon, returner det filtrerte vannet til prøveflasken, og beting en svak anionutveksling, eller WAX, patron med 25 milliliter metanol og ytterligere 25 milliliter av deionisert vann. Plasser pumpetrekksslangen i de filtrerte prøveflaskene, og merk av for massivfaseavsug, eller SPE, patroner med de riktige prøvenavnene. Pump 500 milliliter av hver prøve gjennom hver sylinderampulle med en jevn strømningshastighet på 10 milliliter per minutt, og kast gjennomstrømningen.Fjern WAX SPE-patronene fra stempelpumpene, og overfør SPE-kassetten til en vakuummanifold, utstyrt med eksterne glassreservoarer. Skyll hver SPE-kassett med fire milliliter 25 millimolar, pH fire natriumacetatbuffer under mildt vakuum, etterfulgt av en fire milliliter nøytral metanolvask. På slutten av vasken, plasser en 15-milliliter polypropylen sentrifuge rør under hver SPE patron for å samle eluent, og elute prøvene med fire milliliter på 0,1% ammoniumhydroksid i metanol.Deretter fjerner du elutionrørene, og reduserer eluatevolumet til 500 til 1000 mikroliter ved fordampning under tørr nitrogenstrøm i et vannbad ved 40 grader Celsius. For målrettet flytende kromatografi med tandemmassespektrometri, fortynne 100 mikroliter prøveekstrakt med 300 mikroliter med to millimolar ammoniumacetatbuffer i et høytrykks flytende kromatografiprøveglass, og lag en analytisk arbeidsliste bestående av standardkurve, prøver og en ekstra replikering av standardkurven for å vurdere instrumental drift over løpet. Analyser prøvene ved hjelp av standard flytende kromatografi og massespektrometrimetoder etablert for de målrettede forbindelser av interesse.På slutten av analysen, generere en standard kurve fra standard prøver ved hjelp av toppområdet forholdet mellom analytten til den interne standarden versus konsentrasjonen av analytt, og generere en kvadratisk regresjon formel med en over x vekting for konsentrasjon prediksjon. Kvanter de målrettede analyttene i hver prøve ved hjelp av de forberedte standardkurvene og områdeforholdet for hver måling. Hvis konsentrasjonen overskrider kalibreringsområdet, fortynner du den opprinnelige prøven med deionisert vann med riktig intern standardkonsentrasjon, og re-ekstrakt for å bringe konsentrasjonen inn i riktig område.For ikke-målrettet flytende kromatografi med tandemmassespektrometri, fortynne 100 mikroliter prøveekstrakt med 300 mikroliter to millimolar ammoniumacetatbuffer til et høytrykks flytende kromatografiprøve hetteglass. Etter å ha satt en arbeidsliste som demonstrert, bruk instrumentprogramvaren til å samle inn flytende kromatografi-massespektrometridata med en bred skanning i dataavhengig modus. For ikke-målrettet databehandling åpner du den aktuelle programvarepakken for molekylær funksjonsutvinning og velger Legg til / fjern eksempelfiler og Legg til filer, og velger rådata fra det ikke-målrettede eksperimentet.Klikk OK, og velg Batch Rekursive Feature Extraction og Open Method for å laste inn en forhåndsopprettet metode eller redigere programvareinnstillingene manuelt. For hver funksjon som gjenstår etter filtrering, generere spådde kjemiske formler fra nøyaktig masse og sammensatt massespektrum, og åpne Environmental Protection Agency CompTox Chemicals Dashboard Batch Search-verktøyet. Hvis du vil søke i de forventede kjemiske formlene eller nøytrale massene mot, velger du identifikatortypen og limer inn listen over identifikatorer i identifikatorboksen for å returnere potensielle kjemiske strukturer.Velg Last ned kjemiske data og eventuelle fysiske, kjemiske eller toksikologidata som ønskes etter potensielle treff fra rullegardinmenyen. Deretter bekrefter du strukturene ved hjelp av tilgjengelige standarder og / eller målrettet høyoppløselig tandem massespektrometri matching av fragmentene mot spektra fra databasene, i silico teoretiske spektra, eller manuell kurering. Kvantitativ flytende kromatografi med tandemmassespektrometriresultater presenteres i form av ionkromatrammer for det totale ionkromatrammet og de ekstraherte ionkromatrammene av spesifikke kjemiske overganger for målte kjemikalier.Det integrerte toppområdet for en kjemisk overgang er relatert til den sammensatte overfloden og kan brukes til å beregne den nøyaktige konsentrasjonen ved hjelp av en kalibreringskurve normalisert til en intern standard. Ikke-målrettet analyse ved hjelp av en full MS-skanning gir et totalt ionkromatrammet for prøver, noe som gjør det mulig for ad hoc-generering av ekstraherte ionkromatrammer for individuelle ioner. PFAS forbindelser har negative massedefekter på grunn av deres overvekt av fluoratomer, og polyfluorerte forbindelser har positive, men vesentlig mindre massedefekter enn homologe organiske materialer.Et annet metodefiltreringstrinn er å identifisere homologe serier som inneholder gjentatte enheter som er felles for PFAS-arter ved hjelp av en passende programvarepakke. Fra høyoppløselige MS-data kan en eller flere antatte kjemiske formler matches mot det isotopiske fingeravtrykket til massespekteret og scoret. Kjemiske formler kan bekreftes ytterligere, og noe strukturell informasjon kan fås fra tandem massespektrometridata.Ytterligere massespektrometrieksperimenter kan brukes til å bekrefte identiteten til nye forbindelser, og prøvesammenligninger kan gi informasjon om utbredelsen og relativ mengde kjemikalier. Det er svært viktig å ha passende blanks og kvalitetskontrollprøver for matrisen for å validere kvantitative og ikke-målrettede målinger. Strategiene som vises har blitt den nye tilnærmingen til miljøscreening for PFAS ved å tillate oppdagelsen av ukjente og prediksjon av deres identiteter.

Research

JoVE Journal

Environment

Physical, Chemical and Biological Characterization of Six Biochars Produced for the Remediation of Contaminated Sites

Fysisk, kjemisk og biologisk karakterisering av Seks Biochars Produserte for opprydding av forurenset nettsteder

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Bruk av høy oppløsning Infrarød termografi (HRIT) for studier av iskimdannende og Ice Formering hos planter

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

An Aquatic Microbial Metaproteomics Workflow: From Cells to Tryptic Peptides Suitable for Tandem Mass Spectrometry-based Analysis

En Aquatic Microbial Metaproteomics Arbeidsflyt: Fra celler til Tryptic Peptider Passer for Tandem massespektrometri basert analyse

Meta-omic technologies such as metagenomics, metatranscriptomics and metaproteomics can aid in the understanding of microbial community structure and ...

Spotting Cheetahs: Identifying Individuals by Their Footprints

Spotting Dynamo Kiev: Identifisere enkeltpersoner med sine Footprints

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges ...

Automated, High-resolution Mobile Collection System for the Nitrogen Isotopic Analysis of NOx

Automated, High-resolution Mobile Collection System for the Nitrogen Isotopic Analysis of NOx

Automatisert, høy oppløsning Mobile Collection System for Nitrogen Isotop Analyse av NO<sub&gt; x</sub

Nitrogen oxides (NOx = NO + NO2) are a family of atmospheric trace gases that have great impact on the environment. NOx concentrations directly influence ...

Measurement of the Rheology of Crude Oil in Equilibrium with CO2 at Reservoir Conditions

Measurement of the Rheology of Crude Oil in Equilibrium with CO2 at Reservoir Conditions

Måling av rheologi av råolje i likevekt med CO<sub&gt; 2</sub&gt; Ved reservoarforholdene

A rheometer system to measure the rheology of crude oil in equilibrium with carbon dioxide (CO2) at high temperatures and pressures is described. The ...

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

Barnacle Balanus improvisus som Marine modell - dyrking og genuttrykk

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...

Single-throughput Complementary High-resolution Analytical Techniques for Characterizing Complex Natural Organic Matter Mixtures

Enkelt gjennomstrømming komplementære høyoppløselig analytiske teknikker for å karakterisere komplekse naturlig organisk materiale blandinger

Natural organic matter (NOM) is composed of a highly complex mixture of thousands of organic compounds which, historically, proved difficult to ...

Removal of Arsenic Using a Cationic Polymer Gel Impregnated with Iron Hydroxide

Fjerning av arsen bruke en kationiske polymer gel impregnert med jern natriumhydroksid

In this work, we prepared an adsorbent composed of a cationic polymer gel containing iron hydroxide in its structure designed to adsorb arsenic from ...

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Sampling for Estimating Frankliniella Species Flower Thrips and Orius Species Predators in Field Experiments

Prøvetaking for estimering Frankliniella arter Flower thrips og Orius arter rovdyr i Field eksperimenter

The western flower thrips, Frankliniella occidentalis (Pergande), is a polyphagous pest that has been spread worldwide. The extensive use of insecticides ...