Name: preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr
Uploaded: 2019-02-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door de National Science Foundation via NSF OIA-1833040. Het nationale laboratorium voor hoog magnetisch veld (NHMFL) wordt ondersteund door de National Science Foundation via het DMR-1157490 en de staat Florida. Het systeem van de MAS-DNP bij NHMFL wordt gedeeltelijk gefinancierd door de NIH S10 OD018519 en NSF CHE-1229170.

1. groei van 13C, 15N-geëtiketteerden Aspergillus fumigatus opgietvloeistof
<ol><li>Voorbereiding van labelloze en 13C, 15N-geëtiketteerden groeimedium Opmerking: Beide gist Extract pepton Dextrose medium (YPD) en de verbeterde minimaal middellange43 werden gebruikt voor het onderhoud van schimmel cultuur. Alle stappen na autoclaaf zijn uitgevoerd in een laminaire flow kap tot een minimum beperken van verontreiniging.<ol>
<li>Bereiding va...

Vergeleken met de biochemische methoden, heeft Solid state NMR voordelen als een niet-destructieve en hoge resolutie techniek. NMR is ook kwantitatieve samenstelling analyse, en in tegenstelling tot de meeste andere analytische methoden, doet niet hebben de onzekerheden ingevoerd door de beperkte oplosbaarheid van biopolymeren. Oprichting van het huidige protocol vergemakkelijkt toekomstige studies op koolhydraat-rijke biomaterialen en matiemaatschappij polymeren. Echter moet worden opgemerkt dat de resonantie-toewijzing...

Koolhydraten spelen een centrale rol in verschillende biologische processen zoals energieopslag, structurele gebouw, en cellulaire erkenning en hechting. Ze zijn verrijkt in de celwand, die is een fundamentele component in planten, schimmels, algen en bacteriën1,2,3. De celwand fungeert als een centrale bron voor de productie van biobrandstof en biomaterialen, evenals een veelbelovende doelgroep voor antimicrobiële therapie4,5,6,7,8 , 9.
Het moderne begrip van deze complexe materialen heeft aanzienlijk door decennia van inspanningen die werden gewijd aan de structurele karakterisering met behulp van vier belangrijke biochemische of genetische methoden naar voren geschoven. De eerste belangrijke methode berust op opeenvolgende behandelingen met behulp van agressieve chemicaliën of enzymen te breken de celwanden in verschillende delen, die wordt gevolgd door de samenstelling en analyse van de koppeling van suikers in elke fractie10. Deze methode werpt licht op het domein distributie van polymeren kan, maar de interpretatie misleidend zijn als gevolg van de chemische en fysische eigenschappen van biomoleculen. Bijvoorbeeld, is het moeilijk om te bepalen of de alkali-extraheerbare fractie afkomstig uit één domein van minder strak gestructureerde moleculen of ruimtelijk gescheiden moleculen met vergelijkbare oplosbaarheid is. Ten tweede, de uitgepakte gedeelten of hele celwanden kan ook worden gemeten met behulp van oplossing NMR om te bepalen van de covalente verbanden, ook aangeduid als crosslinking, tussen verschillende moleculen11,12,13, 14,15. Op deze manier de gedetailleerde structuur van covalente ankers gesondeerd kon worden, maar beperkingen kunnen bestaan als gevolg van de lage oplosbaarheid van polysacchariden, het relatief kleine aantal crosslinking sites en de onwetendheid van de niet-covalente effecten die stabiliseert polysaccharide verpakking, met inbegrip van de waterstof-bonding, van der Waals force, elektrostatische interactie en polymeer entanglement. Ten derde, de bindende affiniteit is vastbesloten in vitro met behulp van geïsoleerde polysacchariden16,17,18,19, maar de reiniging procedures kunnen ingrijpend wordt gewijzigd de structuur en eigenschappen van deze biomoleculen. Deze methode mislukt ook de geavanceerde afzetting en assemblage van macromoleculen na biosynthese wilt repliceren. Ten slotte het fenotype, cel morfologie en mechanische eigenschappen van genetische mutanten met verzwakte productie van bepaalde celwand component werpen licht op de structurele functies van polysacchariden, maar meer moleculaire bewijs is nodig om deze brug macroscopische waarnemingen met de gemodificeerde functie van eiwit machineries20.
Recente vooruitgang in de ontwikkeling en toepassing van de multidimensionale Solid state NMR spectroscopie hebben ingevoerd een unieke gelegenheid om deze structurele puzzels op te lossen. 2D/3D solid state NMR experimenten inschakelen met een hoge resolutie onderzoek naar de samenstelling en architectuur van koolhydraat-rijke materialen in de geboortestaat zonder grote perturbation. Structurele studies zijn met succes uitgevoerd op zowel de primaire als de secundaire celwanden van planten, de catalytically behandelde biomassa, bacteriële biofilm, het pigment geesten in schimmels en, onlangs door de auteurs, de intact celwanden in een pathogene schimmel Aspergillus fumigatus 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31. de ontwikkeling van dynamische nucleaire polarisatie (DNP)32,33,34,35,,36,,37,38 , 39 , 40 , 41 , NMR structurele opheldering vergemakkelijkt 42 aanzienlijk als de verhoging van de gevoeligheid door DNP aanzienlijk de experimentele tijd op deze complexe biomaterialen verkort. Het protocol hier beschreven details over de procedures voor de schimmel A. fumigatus isotoop-labeling en voorbereiden van schimmel en plant monsters voor Solid state NMR en DNP karakterisering. Soortgelijke labeling procedures gelden andere schimmels met gewijzigde medium, en de monsterbereidingsprocedures gelden over het algemeen andere koolhydraatrijke biomaterialen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Molybdate Tetrahydrate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>12054-85-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMUPol</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>C010P002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical weighing balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>B730439218</td>
			<td>Model PA84C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioclave 16 L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470230-598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet</td>
			<td>Labconco corporation</td>
			<td>302319100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9222</td>
			<td>store at 15-30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) Chloride Hexahydrate</td>
			<td>Honeywell|Fluka</td>
			<td>60820</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper(II) Sulfate Pentahydrate</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9312</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning LSE shaking incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7202152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151882</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d6-DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151874</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d8-glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>447498</td>
			<td>&#8805;99 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing 3.2 kDa</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2272</td>
			<td>132724</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dipotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9266</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraus Megafuge 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>750004271</td>
			<td>Maximum RCF 25,830 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR-MAS Disposable Insert Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B4493</td>
			<td>Kel-F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(II) Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>14498</td>
			<td>&#8805;99+ %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10034998</td>
			<td>store at 18-26 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese(II) Chloride Tetrahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>11563</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monopotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470302-254</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>B706689216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrasodium Ethylenediaminetetraacetate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>13235-36-9</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>33399</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12C3, d8-glycerol</td>
			<td>Cambridge Isotope Laboratory</td>
			<td>CDLM-8660</td>
			<td>12C3, 99.95%; D8, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>13C6-glucose</td>
			<td>Sigma Alrdrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;99 % (CP)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15N-sodium nitrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;98 % 15N, &#8805;99 (cp)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm sapphire NMR rotor</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>B6939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm Silicone plug</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B7089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm MAS Rotor Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>H14355</td>
			<td>Zirconia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr

Dit protocol laat zien hoe uniform 13C, 15N-geëtiketteerden schimmel materialen kunnen worden geproduceerd en hoe deze zachte materialen moeten worden voorafgegaan voor Solid state NMR en gevoeligheid-enhanced DNP experimenten. De monster veredeling van plantaardige biomassa is ook gedetailleerd. Met deze methode kan de meting van een reeks van 1D en 2D 13C -13C /15N correlaties spectra, waarmee de hoge resolutie structurele opheldering van complexe biomaterialen in hun oorspronkelijke staat, met minimale verstoring. De isotoop-labeling kan door het kwantificeren van de intensiteit in 1D spectra en het spuitrendement polarisatie in 2D correlatie spectra worden onderzocht. Het succes van de bereiding van de monsters van de dynamische nucleaire polarisatie (DNP) kan worden geëvalueerd door de factor van de verhoging van de gevoeligheid. Verdere experimenten onderzoeken de structurele aspecten van de polysacchariden en eiwitten zal leiden tot een model van de driedimensionale architectuur. Deze methoden kunnen worden gewijzigd en aangepast om te onderzoeken van een breed scala van koolhydraat-rijke materialen, met inbegrip van de natuurlijke celwanden van planten, schimmels, algen en bacteriën, evenals gesynthetiseerd of ontworpen koolhydraten polymeren en hun complex met andere moleculen.

De isotoop labeling aanzienlijk verbetert de gevoeligheid van de NMR en maakt het mogelijk voor het meten van een reeks 2D 13C -13C en 13C -15N correlatie spectra voor het analyseren van de samenstelling, hydratatie, mobiliteit en verpakking van polymeren, die zal worden geïntegreerd om te bouwen van een driedimensionaal model van de celwand het platform (Figuur 1). Als de uniforme etikettering slaagt, moet een com...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR

Voorbereiding van schimmel en plantaardig materiaal voor structurele opheldering met behulp van dynamische nucleaire polarisatie Solid state NMR

Een protocol voor het voorbereiden van 13C,15N-geëtiketteerden schimmel en plant monsters voor multidimensionale Solid state NMR spectroscopie en dynamische nucleaire polarisatie (DNP) onderzoeken wordt gepresenteerd.

This protocol shows how uniformly 13C, 15N-labeled fungal materials can be produced and how these soft materials should be proceeded for solid-state NMR ...

Dit protocol kan worden gebruikt om schimmel- en plantenmaterialen voor te bereiden op vaste nucleaire magnetische resonantie, of NMR, en dynamische nucleaire polarisatie, of DNP, experimenten voor complexe biosysteemkarakterisering. Deze techniek stelt ons in staat om biomaterialen te onderzoeken tot een atomair resolutieniveau in hun eigen omgeving, bijvoorbeeld in hele cellen. De verwerving van structurele informatie over schimmelmaterialen met hoge resolutie zal helpen bij de ontwikkeling van schimmeldodende geneesmiddelen.De methode geeft inzicht in de samenstelling en structuur van complexe koolhydraten in schimmelcelwanden en kan worden toegepast op vele koolhydraatrijke organismen, waaronder planten, schimmels, algen en bacteriën. Sommige onderzoekers kunnen worstelen met schimmelverontreiniging in hun cellulaire culturen. Mijn advies is om het medium en de apparatuur grondig te steriliseren voor gebruik om deze besmetting te voorkomen.Deze demonstratie zal onderzoekers met weinig ervaring in NMR of celcultuur helpen om te leren hoe deze technieken in schimmel- en installatiesystemen te implementeren. Om ongelabeld vloeibaar groeimedium voor te bereiden, los 6,5 gram gistextract peptone dextrose of YPD-poeder op in 100 milliliter gedestilleerd water en vervolgens de resulterende oplossing gedurende 25 minuten bij 134 graden Celsius. Om ongelabeld vast groeimedium voor te bereiden, voeg 6,5 gram YPD agarpoeder toe aan 100 milliliter gedestilleerd water en autoclave het medium gedurende 25 minuten bij 121 graden Celsius, voordat het medium afkoelt tot ongeveer 50 graden Celsius.Breng vervolgens 13 tot 15 milliliter van het gesmolten vaste groeimedium over in individuele steriele plastic petrischaaltjes en plaats de deksels onmiddellijk op de borden. Voor de bereiding van koolstof-13, stikstof-15-gelabelde vloeibare groeimedium, past u een volume van 100 milliliter aan isotoopbevattend minimaal medium aan een pH van 6,6 met zuur of basis indien nodig. Los vervolgens de in de tabel vermelde zouten op in 100 milliliter gedestilleerd water, voeg toe aan het koolstof-13, stikstof-15-label vloeibare groeimedium en beklad de resulterende oplossing gedurende 25 minuten bij 121 graden Celsius.Wanneer de oplossing is afgekoeld tot kamertemperatuur, voeg 100 microliter spoorelementen oplossing aan het gehele volume van koolstof-13, stikstof-15-gelabelde minimale medium. Om de schimmelmaterialen te kweken, gebruikt u een inentrentlus om een kleine hoeveelheid schimmels uit opslag over te brengen op een YPD-plaat en de schimmel twee dagen lang te kweken in een couveuse van 30 graden Celsius. Gebruik aan het einde van de incubatie een nieuwe inentingslus om een actieve groeiende schimmelrand over te brengen naar het koolstof-13, stikstof-15-label vloeibare groeimedium, en plaats de cultuur op 30 graden Celsius en 220 rotaties per minuut gedurende drie tot vijf dagen in een schuddende incubator.Wanneer grote hoeveelheden van de schimmel de kolfbodem bedekken en in de vloeistof zweven, verzamel je de schimmels door centrifugatie en gooi je de supernatant weg. Hydrateer de pellet met een geschikte oplossing en gebruik tangen om ongeveer 0,5 gram van de goed gehydrateerde pellet te verzamelen voor NMR- en DNP-analyses. Meng vervolgens het resterende materiaal met een 20%glyceroloplossing in een conische buis en plaats het schimmelmonster op min 80 graden Celsius voor langdurige opslag.Om de A.fumigatus voor te bereiden op de NMR-analyse met vaste toestand, gebruikt u eerst een dialysezak met een 3,5 kilodalton moleculair gewichtsafsnede om de 0,5-gram koolstof-13, stikstof-15-gelabelde schimmelmonster te dialyseren tegen een liter fosfaatbuffer van 10 millimolar bij vier graden Celsius gedurende drie dagen om kleine moleculen uit het groeimedium te verwijderen. Breng het monster aan het einde van de dialyse over in een buis van 15 milliliter voor centrifugatie en verpak 70 tot 80 milligram van de gelijkmatig koolstof-13-gelabelde en goed gehydrateerde monsterpasta in een vier millimeter zirconiumdioxidetortor. Gebruik een metalen staaf om voorzichtig en herhaaldelijk knijp het monster, met behulp van papier om het overtollige water te absorberen.Sluit de rotor vervolgens stevig vast en plaats het monster in de spectrometer voor vaste NMR-karakterisering. Om de A.fumigatus voor te bereiden op DNP-analyse, voeg 100 microliters DNP-matrix toe in één 1,5-milliliter microcentrifugebuis per koolstof-13, koolstof-15-gelabeld schimmelmonster en los 0,7 milligram polarisatiemiddel op aan elke buis om een 10-millimolar radicale voorraadoplossing te vormen. Na twee tot drie minuten vortexen om ervoor te zorgen dat radicalen volledig zijn opgelost in de oplossing, weken 10 milligram gedialyseerde koolstof-13, stikstof-15-label schimmelmonster in 50 microliter van de polariserende agent oplossing, en gebruik een stamper en een mortel om het mengsel licht te malen om penetratie van de radicalen in de poreuze celwanden te garanderen.Voeg nog eens 30 microliters van de radicale oplossing toe aan de grondpellet om het schimmelmonster verder te hydrateren en pak de pellet in een saffierrotor van 3,2 millimeter. Knijp mild en verwijder het overtollige DNP-oplosmiddel zoals aangetoond, en voeg een siliconenplug van 3,2 millimeter toe om het verlies van hydratatie te voorkomen. Voeg vervolgens de rotor toe aan een NMR-spectrometer voor routine-experiment of een DNP-spectrometer voor het meten van het door DNP verbeterde spectrum onder microgolfbestraling.Om plantaardige materialen voor te bereiden op DNP-studies, gebruikt u een scheermesje om het gelijkmatige koolstof-13-gelabelde plantmateriaal in stukken van één tot twee millimeter te snijden. Gebruik een mortier en stamper om de stukken te malen in kleinere deeltjes tot het uiteindelijke poeder een homogene uitstraling heeft. Voeg 40 microliter van 10-millimolar radicale voorraad oplossing aan het plantmateriaal, en licht malen het monster voor een extra vijf minuten om homogene mengen met de radicale te garanderen.Hydrateer het grondmonster met nog eens 20 microliters radicale voorraadoplossing en verpak het geëquilibreerde plantenmonster in een saffierrotor van 3,2 millimeter voor DNP-analyse. Steek vervolgens een siliconenplug in om het verlies van hydratatie te voorkomen en laad het monster op de DNP-spectrofotometer. Isotopenetikettering verbetert de NMR-gevoeligheid aanzienlijk en maakt het mogelijk om een reeks tweedimensionale koolstof-13-koolstof-13 en koolstof-13-stikstof-15 correlatiespectra te meten om de samenstelling, hydratatie, mobiliteit en verpakking van de polymeren te analyseren voor hun integratie voor de bouw van een driedimensionaal model van celwandarchitectuur.Als off-diagonale signalen zijn moeilijk te verkrijgen in de 2D carbon-13-carbon-13 spectrum, statistische etikettering zou kunnen hebben plaatsgevonden. De twee koolstof-13 pieken op 96 en 92 delen per miljoen zijn handtekening koolstof-1 signalen van glucose. Daarom is hun sterke intensiteiten in de kwantitatieve koolstof-13 directe polarisatie spectra gemeten met lange recycle vertragingen van 35 seconden meestal wijzen op de dominantie van kleine moleculen als gevolg van onvolledige dialyse of wassen.Met goed gelabelde monsters kunnen correlaties over lange afstand verder worden gemeten om de ruimtelijke nabijheid van biomoleculen te detecteren en een structureel model van de intacte celwanden te construeren. Deze techniek maakt het mogelijk structuurfunctie in veel natuurlijk voorkomende en gemanipuleerde materialen te verkennen, waardoor toekomstige studies van koolhydraatrijke biomaterialen en gefunctionaliseerde polymeren worden vergemakkelijkt. Aangezien sommige schimmels infectie of systematische ziekten bij de mens kunnen veroorzaken, moet u schimmelmaterialen in een laminaire stroomkap behandelen voor bescherming en om blootstelling te minimaliseren.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography

Voorbereiding en Levering van Protein Microcrystals in lipidische Cubic fase voor Serial Femtoseconde Kristallografie

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

Een eiwit Bereidingswijze voor de High-throughput identificatie van eiwitten Interactie met een nucleair Cofactor Met behulp van LC-MS / MS Analysis

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Atomic Scale Structural Studies of Macromolecular Assemblies by Solid-state Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

Atoomschaal structurele Studies van macromoleculaire samenstellen door Solid-state nucleaire magnetische resonantie spectroscopie

Supramolecular protein assemblies play fundamental roles in biological processes ranging from host-pathogen interaction, viral infection to the ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Groeiende eiwit kristallen met verschillende afmetingen, met behulp van geautomatiseerde kristallisatie in combinatie met In Situ Dynamische lichtverstrooiing

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibratie-gratis In Vitro kwantificering van eiwit Homo-oligomerisatie met behulp van commerciële instrumentatie en Software van de analyse van de helderheid van gratis, Open Source

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

Wijzigen Baculovirus expressievectoren voor de productie van plantaardige eiwitten in Insect cellen uitgescheiden

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) and Microscale Thermophoresis (MST)

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy NMR and Microscale Thermophoresis MST

Meten van interacties van bolvormige en filamenteuze eiwitten door nucleaire magnetische resonantie spectroscopie (NMR) en Microscale Thermophoresis (MST)

Filamentous proteins such as vimentin provide organization within cells by providing a structural scaffold with sites that bind proteins containing plakin ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Snelle rastervoorbereiding voor tijd-opgeloste cryo-elektronenmicroscopie

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

Voorbereiding van sample support films in transmissie elektronenmicroscopie met behulp van een support floatation block

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies (Mo-GWAS): Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies Mo-GWAS: Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Grootschalige multi-omics Genome-wide Association Studies (Mo-GWAS): richtlijnen voor monstervoorbereiding en normalisatie

Both gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) are widely used metabolomics approaches to detect ...