Name: preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr
Uploaded: 2019-02-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von der National Science Foundation durch NSF OIA-1833040 unterstützt. Die nationale hohe magnetische Feld Labor (NHMFL) wird vom Nationalfonds durch DMR-1157490 und der Zustand von Florida unterstützt. Das MAS-DNP-System bei NHMFL wird teilweise von NIH S10 OD018519 und NSF-CHE-1229170 finanziert.

1. Wachstum von 13C, 15N beschriftet Aspergillus Fumigatus Flüssigmedium
<ol><li>Vorbereitung der unbeschrifteten und 13C, 15N beschriftet Wachstumsmedium Hinweis: Beide Hefe Extrakt Pepton Traubenzucker Medium (YPD) und der verbesserten minimale mittlere43 dienten für die Erhaltung der pilzartige Kultur. Alle Schritte nach dem Autoklavieren erfolgt in einer Laminar-Flow-Haube um Kontamination zu minimieren.<ol>
<li>Vorbereitung der unbes...

Im Vergleich mit den biochemischen Methoden, hat Festkörper-NMR Vorteile als eine nicht-destruktive und hochauflösende Technik. NMR ist auch im kompositorischen Analyse quantitativer und im Gegensatz zu den meisten anderen Analysemethoden, tut nicht haben die Unsicherheiten eingeführt durch die begrenzte Löslichkeit von Biopolymeren. Errichtung des derzeitigen Protokolls ermöglicht zukünftige Studien auf kohlenhydratreiche Biomaterialien und funktionalisierten Polymere. Allerdings sollte angemerkt werden, dass die ...

Kohlenhydrate spielen eine zentrale Rolle in verschiedenen biologischen Prozessen wie Energiespeicher, strukturelle Gebäude und zelluläre Anerkennung und Haftung. Sie sind in der Zellwand, bereichert die ist ein elementarer Bestandteil in Pflanzen, Pilze, Algen und Bakterien1,2,3. Die Zellwand dient als zentrale Quelle für die Produktion von Biokraftstoffen und Biomaterialien sowie ein viel versprechendes Ziel für antimikrobielle Therapien4,5,6,7,8 , 9.
Das gegenwärtige Verständnis dieser komplexen Materialien wurde im Wesentlichen durch jahrzehntelange Bemühungen vorgebracht worden, die die strukturelle Charakterisierung mit vier wichtigen biochemischen und genetischen Methoden gewidmet waren. Die erste wichtige Methode stützt sich auf sequenzielle Behandlungen mit ätzenden Chemikalien oder Enzyme um zu brechen die Zellwände in verschiedenen Portionen, gefolgt von kompositorischen und Kopplungsanalyse von Zucker in jedem Bruchteil10. Diese Methode gibt Aufschluss über die Domäne Verteilung von Polymeren kann, die Auslegung jedoch aufgrund der chemischen und physikalischen Eigenschaften von Biomolekülen irreführend. Zum Beispiel ist es schwierig, festzustellen, ob der Alkali-extrahierbare Anteil aus einer einzelnen Domäne weniger strukturierten Moleküle oder räumlich voneinander getrennten Moleküle mit vergleichbaren Löslichkeit stammt. Zweitens die entnommenen Teile oder ganze Zellwände auch gemessen werden mit NMR-Lösung um zu bestimmen, die kovalenten Verbindungen, auch bezeichnet als Vernetzung zwischen verschiedenen Molekülen11,12,13, 14,15. Auf diese Weise könnte die detaillierte Struktur der kovalente Anker sondiert werden, aber Einschränkungen möglicherweise vorhanden, durch die geringe Löslichkeit von Polysacchariden, die relativ kleine Anzahl von Standorten Vernetzung und die Unkenntnis der nicht-kovalente Effekte, die stabilisiert Polysaccharid-Verpackung, einschließlich Wasserstoff-Bindung, Van-Der-Waals-Kraft, elektrostatische Wechselwirkung und Polymer Verschränkung. Drittens wurde die Bindungsaffinität entschlossen in Vitro mit isolierten Polysaccharide16,17,18,19, aber die Reinigung, das Verfahren erheblich verändern kann die Struktur und die Eigenschaften dieser Biomoleküle. Diese Methode wird auch nicht die anspruchsvolle Anlagerung und Montage von Makromolekülen nach Biosynthese zu replizieren. Schließlich den Phänotyp, Zellmorphologie und mechanischen Eigenschaften von genetische Mutanten mit attenuierten Produktion bestimmten Zellwand-Komponente vergossen Lichter auf die strukturellen Funktionen von Polysacchariden, aber mehr molekularen Nachweis ist erforderlich, um diese zu überbrücken makroskopische Beobachtungen mit der technischen Funktion des Proteins Maschinen20.
Jüngste Fortschritte in der Entwicklung und Anwendung der multidimensionalen Festkörper-NMR-Spektroskopie haben eine einzigartige Gelegenheit für diese strukturellen Rätsel eingeführt. 2D/3D Festkörper-NMR-Experimente ermöglichen hochauflösenden Untersuchung der Zusammensetzung und Architektur der Kohlenhydrat-reiche Materialien im nativen Zustand ohne große Störung. Strukturelle Studien wurden erfolgreich durchgeführt, auf primären und sekundären Zellwände von Pflanzen, die katalytisch behandelten Biomasse bakterielle Biofilm, das Pigment Geister in Pilzen und vor kurzem von den Autoren, die intakte Zellwände in ein pathogener Pilz Aspergillus fumigatus 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31. die Entwicklung der dynamischen atomare Polarisation (DNP)32,33,34,35,36,37,38 , 39 , 40 , 41 , 42 erleichtert wesentlich NMR strukturelle Aufklärung, wie die Verbesserung der Empfindlichkeit von DNP deutlich verkürzt sich die experimentelle Zeit auf diese komplexen Biomaterialien. Das hier beschriebene Protokoll beschreibt die Verfahren für die Isotopen-Kennzeichnung des Pilzes A. Fumigatus und Vorbereitung Pilz und Pflanzenproben für Festkörper-NMR und DNP Charakterisierung. Ähnliche Kennzeichnung Verfahren auf andere Pilze mit veränderten Mediums anwendbar sein sollte, und die Probenaufbereitungsverfahren sollte generell für andere Kohlenhydrat-reiche Biomaterialien.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Molybdate Tetrahydrate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>12054-85-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMUPol</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>C010P002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical weighing balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>B730439218</td>
			<td>Model PA84C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioclave 16 L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470230-598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet</td>
			<td>Labconco corporation</td>
			<td>302319100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9222</td>
			<td>store at 15-30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) Chloride Hexahydrate</td>
			<td>Honeywell|Fluka</td>
			<td>60820</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper(II) Sulfate Pentahydrate</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9312</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning LSE shaking incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7202152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151882</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d6-DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151874</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d8-glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>447498</td>
			<td>&#8805;99 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing 3.2 kDa</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2272</td>
			<td>132724</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dipotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9266</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraus Megafuge 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>750004271</td>
			<td>Maximum RCF 25,830 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR-MAS Disposable Insert Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B4493</td>
			<td>Kel-F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(II) Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>14498</td>
			<td>&#8805;99+ %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10034998</td>
			<td>store at 18-26 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese(II) Chloride Tetrahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>11563</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monopotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470302-254</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>B706689216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrasodium Ethylenediaminetetraacetate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>13235-36-9</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>33399</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12C3, d8-glycerol</td>
			<td>Cambridge Isotope Laboratory</td>
			<td>CDLM-8660</td>
			<td>12C3, 99.95%; D8, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>13C6-glucose</td>
			<td>Sigma Alrdrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;99 % (CP)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15N-sodium nitrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;98 % 15N, &#8805;99 (cp)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm sapphire NMR rotor</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>B6939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm Silicone plug</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B7089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm MAS Rotor Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>H14355</td>
			<td>Zirconia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr

Dieses Protokoll zeigt, wie einheitlich 13C, 15N-Label Pilz Materialien können produziert und Experimente wie diese weichen Materialien für Festkörper-NMR und erhöhter Empfindlichkeit DNP vorgegangen werden sollte. Die Probenverarbeitung Verfahren der pflanzlichen Biomasse wird auch genau beschrieben. Diese Methode ermöglicht die Messung von einer Reihe von 1D und 2D 13C -13C /15N Korrelationen Spektren, die hochauflösende strukturelle Aufklärung von komplexen Biomaterialien in ihrem nativen Zustand mit minimaler Störung ermöglicht. Die Isotopen-Kennzeichnung kann durch Quantifizierung der Intensität in 1D-Spektren und die Polarisation Auftragswirkungsgrad in 2D Korrelation Spektren untersucht werden. Der Erfolg der Probenvorbereitung dynamische atomare Polarisation (DNP) kann von der Empfindlichkeit Verstärkung Faktor ausgewertet werden. Weitere Experimente untersuchen die strukturellen Aspekte der Polysaccharide und Proteine führt zu einem Modell für die dreidimensionale Architektur. Diese Methoden können geändert und angepasst, um eine Vielzahl von Kohlenhydrat-reiche Materialien, einschließlich der natürlichen Zellwände von Pflanzen, Pilzen, Algen und Bakterien, sowie synthetisiert oder konzipiert Kohlenhydrat-Polymere und ihre komplex miteinander zu nehmen Moleküle.

Das Isotop Kennzeichnung erheblich erhöht die Empfindlichkeit der NMR und macht es möglich für die Messung eine Reihe von 2D 13C -13C und 13C -15N Korrelation Spektren, die Zusammensetzung, die Hydratation, die Mobilität zu analysieren und Verpackung von Polymere, die integriert werden, um ein dreidimensionales Modell der Zellwand Architektur (Abbildung 1) zu konstruieren. Gelingt es die einheitliche Kennzeichnu...

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Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR

Vorbereitung von Pilz und Pflanze-Materialien für strukturelle Aufklärung mittels dynamischen atomare Polarisation Festkörper-NMR

Ein Protokoll für die Probenvorbereitung 13C,15N-Label Pilz und Pflanze für multidimensionale Festkörper-NMR-Spektroskopie und dynamische atomare Polarisation (DNP) Untersuchungen wird vorgestellt.

This protocol shows how uniformly 13C, 15N-labeled fungal materials can be produced and how these soft materials should be proceeded for solid-state NMR ...

Dieses Protokoll kann verwendet werden, um Pilz- und Pflanzenmaterialien für Festkörper-Kernspinresonanz oder NMR und dynamische Kernpolarisation (DNP) experimentefür komplexe Biosystemcharakterisierung vorzubereiten. Diese Technik ermöglicht es uns, Biomaterialien auf einer atomaren Auflösungsebene in ihrer heimischen Umgebung zu untersuchen, zum Beispiel in ganzen Zellen. Der Erwerb von hochauflösenden Strukturinformationen über Pilzmaterialien wird bei der Entwicklung von Antimykotika helfen.Die Methode bietet Einblick in Zusammensetzung und Struktur komplexer Kohlenhydrate in Pilzzellwänden und kann auf viele kohlenhydratreiche Organismen angewendet werden, darunter Pflanzen, Pilze, Algen und Bakterien. Einige Forscher können mit Pilzkontamination in ihren zellulären Kulturen zu kämpfen. Mein Rat ist, das Medium und die Ausrüstung vor dem Gebrauch gründlich zu sterilisieren, um diese Kontamination zu verhindern.Diese Demonstration wird Forschern mit wenig Erfahrung in NMR oder Zellkultur helfen, zu lernen, wie diese Techniken in Pilz- und Pflanzensystemen implementiert werden. Um unbeschriftetes flüssiges Wachstumsmedium vorzubereiten, lösen Sie 6,5 Gramm Hefeextrakt Pepton-Dextrose oder YPD-Pulver in 100 Milliliter destilliertem Wasser auf und autoklavieren Sie dann die resultierende Lösung für 25 Minuten bei 134 Grad Celsius. Um unbeschriftetes festes Wachstumsmedium vorzubereiten, fügen Sie 6,5 Gramm YPD-Agarpulver zu 100 Milliliter destilliertem Wasser hinzu und autoklavieren Sie das Medium 25 Minuten lang bei 121 Grad Celsius, bevor Sie das Medium auf etwa 50 Grad Celsius abkühlen.Dann 13 bis 15 Milliliter des geschmolzenen festgewachsenen Mediums in einzelne sterile Kunststoff-Petrischalen geben und sofort die Deckel auf das Geschirr legen. Um Kohlenstoff-13, Stickstoff-15-markiertes flüssiges Wachstumsmedium vorzubereiten, stellen Sie ein 100-Milliliter-Volumen des isotophaltigen Minimalmediums auf einen pH-Wert von 6,6 mit Säure oder Base bei Bedarf ein. Als nächstes lösen Sie die in der Tabelle aufgeführten Salze in 100 Milliliter destilliertem Wasser auf, fügen Sie dem Kohlenstoff-13, Stickstoff-15-markierten flüssigen Wachstumsmedium, und autoklavieren Sie die resultierende Lösung für 25 Minuten bei 121 Grad Celsius.Wenn die Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt ist, fügen Sie 100 Mikroliter Spurenelemente Lösung auf das gesamte Volumen von Kohlenstoff-13, Stickstoff-15-markierte mandmittel. Um die Pilzmaterialien anzubauen, verwenden Sie eine Impfschleife, um eine kleine Menge Pilze aus der Lagerung auf eine YPD-Platte zu übertragen, und kultivieren Sie den Pilz für zwei Tage in einem 30-Grad-Celsius-Inkubator. Verwenden Sie am Ende der Inkubation eine neue Impfschleife, um eine aktive wachsende Pilzkante auf das Kohlenstoff-13-, Stickstoff-15-markierte flüssige Wachstumsmedium zu übertragen, und platzieren Sie die Kultur drei bis fünf Tage lang bei 30 Grad Celsius und 220 Umdrehungen pro Minute in einem Schüttelinkubator.Wenn große Mengen des Pilzes den Kolbenboden bedecken und in der Flüssigkeit schwimmen, die Pilze durch Zentrifugation sammeln und den Überstand entsorgen. Hydratisieren Sie das Pellet mit einer geeigneten Lösung, und verwenden Sie Zangen, um etwa 0,5 Gramm des gut hydratisierten Pellets für NMR- und DNP-Analysen zu sammeln. Dann mischen Sie das restliche Material mit einer 20%glyzerinLösung in einem konischen Rohr, und legen Sie die Pilzprobe bei minus 80 Grad Celsius für die langfristige Lagerung.Um den A.fumigatus für die Festkörper-NMR-Analyse vorzubereiten, verwenden Sie zunächst einen Dialysebeutel mit einem 3,5-Kilodalton-Molekulargewichts-Cutoff, um die 0,5-Gramm-Kohlenstoff-13, Stickstoff-15-beschriftete Pilzprobe gegen einen Liter 10-Millimolar-Phosphatpuffer bei vier Grad Celsius drei Tage lang zu dialysieren, um kleine Moleküle aus dem Wachstumsmedium zu entfernen. Am Ende der Dialyse die Probe zur Zentrifugation in ein 15-Milliliter-Rohr geben und 70 bis 80 Milligramm der gleichmäßig kohlenstoff-13-markierten und gut hydratisierten Probenpaste in einen Vier-Millimeter-Zirkondioxidrotor packen. Verwenden Sie eine Metallstange, um die Probe sanft und wiederholt zu drücken, indem Sie Papier verwenden, um das überschüssige Wasser zu absorbieren.Dann den Rotor fest verschließen und die Probe in das Spektrometer für die Charakterisierung des Festkörper-NMR einfügen. Um den A.fumigatus für die DNP-Analyse vorzubereiten, fügen Sie 100 Mikroliter DNP-Matrix in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenrohr pro Kohlenstoff-13, Kohlenstoff-15-beschriftete Pilzprobe, und lösen Sie 0,7 Milligramm Polarisationsmittel in jedes Rohr, um eine 10-Millimolar-Radikal-Stammlösung zu bilden. Nach zwei bis drei Minuten Wirbel, um sicherzustellen, dass die Radikale vollständig in der Lösung gelöst werden, tränken Sie 10 Milligramm dialysierte kohlenstoff-13, Stickstoff-15-markierte Pilzprobe in 50 Mikroliter der Polarisationsmittellösung, und verwenden Sie einen Stößel und einen Mörtel, um das Gemisch mild zu mahlen, um das Eindringen der Radikale in die porösen Zellwände zu gewährleisten.Fügen Sie dem gemahlenen Pellet weitere 30 Mikroliter der Radikallösung hinzu, um die Pilzprobe weiter zu hydratisieren, und packen Sie das Pellet in einen 3,2-Millimeter-Saphirrotor. Drücken Sie leicht und entfernen Sie das überschüssige DNP-Lösungsmittel, wie gezeigt, und fügen Sie einen 3,2-Millimeter-Silikonstecker hinzu, um den Verlust der Hydratation zu verhindern. Fügen Sie dann den Rotor zu einem NMR-Spektrometer für Routineexperimente oder einem DNP-Spektrometer zur Messung des DNP-verstärkten Spektrums unter Mikrowellenbestrahlung hinzu.Um Pflanzenmaterialien für DNP-Studien vorzubereiten, schneiden Sie das gleichmäßig kohlenstoff-13-markierte Pflanzenmaterial mit einer Rasierklinge in Ein- bis Zweimillimeterstücke. Verwenden Sie einen Mörtel und Stößel, um die Stücke zu kleineren Partikeln zu mahlen, bis das endgültige Pulver ein homogenes Aussehen hat. 40 Mikroliter 10-Millimolar-Radikalstoff-Stammlösung in das Pflanzenmaterial geben und die Probe zusätzlich fünf Minuten leicht mahlen, um eine homogene Vermischung mit dem Radikal zu gewährleisten.Hydratisieren Sie die Bodenprobe mit weiteren 20 Mikrolitern radikaler Stammlösung, und verpacken Sie die ausgelagerte Pflanzenprobe in einen 3,2-Millimeter-Saphirrotor für die DNP-Analyse. Legen Sie dann einen Silikonstecker ein, um den Verlust der Hydratation zu vermeiden, und laden Sie die Probe auf das DNP-Spektralphotometer. Die Isotop-Etikettierung erhöht die NMR-Empfindlichkeit erheblich und ermöglicht die Messung einer Reihe von zweidimensionalen Kohlenstoff-13-Kohlenstoff-13- und Kohlenstoff-13-Stickstoff-15-Korrelationsspektren, um die Zusammensetzung, Hydratation, Mobilität und Verpackung der Polymere für ihre Integration für die Konstruktion eines dreidimensionalen Modells der Zellwandarchitektur zu analysieren.Wenn off-diagonale Signale im 2D-Kohlenstoff-13-Kohlenstoff-13-Spektrum schwer zu erhalten sind, könnte eine statistische Kennzeichnung stattgefunden haben. Die beiden Kohlenstoff-13-Spitzen mit 96 und 92 Teilen pro Million sind Signatur-Kohlenstoff-1-Signale von Glukose. Daher deuten ihre starken Intensitäten in den quantitativen Kohlenstoff-13-Spektren der direkten Polarisation, die mit langen Recyclingverzögerungen von 35 Sekunden gemessen werden, typischerweise auf die Dominanz kleiner Moleküle aufgrund unvollständiger Dialyse oder Waschen hin.Mit gut markierten Proben können weiträumige Korrelationen weiter vermessen werden, um die räumlichen Wahrscheinlichkeiten von Biomolekülen zu erkennen und ein Strukturmodell der intakten Zellwände zu konstruieren. Diese Technik ermöglicht die Erforschung der Strukturfunktion in vielen natürlich vorkommenden und technischen Materialien, was zukünftige Studien zu kohlenhydratreichen Biomaterialien und funktionalisierten Polymeren ermöglicht. Da einige Pilze Infektionen oder systematische Krankheiten beim Menschen verursachen können, achten Sie darauf, Pilzmaterialien in einer laminaren Strömungshaube zum Schutz und zur Minimierung der Exposition zu behandeln.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography

Herstellung und Lieferung von Protein Microcrystals in Lipidische Cubic Phase für Serial Femtosekunden Kristallographie

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural ...

Forschung

Biochemie

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

Ein Protein Herstellungsverfahren für die Hochdurchsatz-Identifizierung von Proteinen Interagieren mit nuklearen Cofaktor LC-MS / MS-Analyse

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Atomic Scale Structural Studies of Macromolecular Assemblies by Solid-state Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

Atomarer Skala strukturelle Studien der makromolekularen Versammlungen von Festkörper-NMR-Spektroskopie

Supramolecular protein assemblies play fundamental roles in biological processes ranging from host-pathogen interaction, viral infection to the ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Wachsende Proteinkristallen mit unterschiedlichen Abmessungen mit automatisierten Kristallisation gepaart mit In Situ dynamische Lichtstreuung

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibrierung-kostenlose In-vitro- Quantifizierung von Protein Homo-Oligomerisierung mit kommerziellen Instrumentierung und kostenlose Open Source-Helligkeit-Analyse-Software

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

Pflanzliche Proteine in Insektenzellen abgesondert ändern Baculovirus Expressionsvektoren herstellen

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) and Microscale Thermophoresis (MST)

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy NMR and Microscale Thermophoresis MST

Messung der Interaktionen von Kugelsternhaufen und filamentösen Proteinen Kernresonanzspektroskopie (NMR) und Microscale Thermophorese (MST)

Filamentous proteins such as vimentin provide organization within cells by providing a structural scaffold with sites that bind proteins containing plakin ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Schnelle Gittervorbereitung für zeitaufgelöste Kryo-Elektronenmikroskopie

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

Herstellung von Probenträgerfilmen in der Transmissionselektronenmikroskopie mit einem Stütz-Floatationsblock

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies (Mo-GWAS): Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies Mo-GWAS: Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Large-scale Multi-omics Genome-wide Association Studies (Mo-GWAS): Richtlinien für die Probenvorbereitung und Normalisierung

Both gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) are widely used metabolomics approaches to detect ...