Name: preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr
Uploaded: 2019-02-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע דרך ה-NSF אויה-1833040. נבחרת גבוהה השדה המגנטי מעבדה (NHMFL) נתמך על ידי הקרן הלאומית למדע דרך DMR-1157490, פלורידה. מערכת MAS-DNP-NHMFL הוא מומן בחלקו על ידי NIH S10 OD018519 ואת ה-NSF צ'ה-1229170.

1. גידול של 13ג', 15התווית על-ידי N אספרגילוס fumigatus בינוני נוזלי
<ol><li>הכנת ללא תווית ו- 13C, מדיום הגידול התווית על-ידי N 15 הערה: שניהם דקסטרוז Peptone לחלץ שמרים בינונית (YPD), את שיפור בינונית מזערי43 שימשו לשם קיום תרבות פטרייתי. כל השלבים לאחר autoclaving מבוצעות ...

לעומת שיטות ביוכימיות, NMR של מצב מוצק יש יתרונות כמו טכניקה הרסניות ו ברזולוציה גבוהה. NMR גם כמותיים בניתוח ההלחנה, בניגוד לרוב שיטות אנליטיות אחרות, לא צריך אי הוודאויות שהוצגו על ידי המסיסות מוגבל biopolymers. הקמת בפרוטוקול הנוכחי מקלה על מחקרים עתידיים על פחמימות-עשיר biomaterials, פולימרים functionaliz...

פחמימות תפקיד מרכזי בתהליכים ביולוגיים שונים כגון אחסון אנרגיה, בניין מבניים, ועל זיהוי הסלולר אדהזיה. הם מועשרים בקיר התא, אשר היא מרכיב מהותי צמחים, פטריות, אצות, חיידקים1,2,3. קיר התא מהווה מקור מרכזי הייצור של דלק ביולוגי, biomaterials, כמו גם מטרה מבטיחים טיפולים מיקרוביאלית4,5,6,7,8 , 9.
ההבנה העכשווית של חומרים מורכבים אלה כבר מתקדם באופן משמעותי על ידי עשורים של המאמצים הוקדשו אפיון מבניים בשיטות ארבע הגדולות ביוכימי או גנטי. השיטה הראשונה הגדולות מסתמך על טיפולים רציפים באמצעות כימיקלים קשים או אנזימים כדי לשבור את קירות התא לחלקים שונים, שבעקבותיה באה ההלחנה וניתוח הצמדה של סוכרים כל שבר10. שיטה זו שופך אור על התפלגות התחום של פולימרים, אך הפרשנות עלולה להטעות בשל המאפיינים הכימי והפיזי של מולקולות. לדוגמה, קשה לקבוע אם השבר אלקלי-לחילוץ מקורו מחשבים בודדת של מולקולות פחות מובנים או מולקולות נפרדות עם מסיסות דומות. שנית, חילוץ חלקים או את כל קירות התא ניתן גם למדוד באמצעות פתרון NMR כדי לקבוע את קישורים קוולנטיות, גם כינה crosslinking, בין מולקולות שונות11,12,13, 14,15. בדרך זו, יכול להיות ובחן את מבנה נתונים היסטוריים של עוגנים קוולנטיות, אך מגבלות יכולה להתקיים בשל המסיסות נמוכה של סוכרים, מספר קטן יחסית של אתרים crosslinking הבורות של תופעות שאינן קוולנטיות זה מייצבת אריזה רב-סוכר, כולל שטני של מימן, ואן דר Waals כוח, אינטראקציה אלקטרוסטטית, שזירה פולימר. שלישית, זיקה מחייבת היה נחוש במבחנה באמצעות פוליסכרידים מבודד16,17,18,19, אבל הטיהור הליכים עשוי לשנות באופן משמעותי מבנה ותכונות של מולקולות אלה. שיטה זו נכשלת גם לשכפל את התצהיר מתוחכמים והרכבה של מקרומולקולות לאחר ביוסינטזה. לבסוף, פנוטיפ, מורפולוגיה תאים, תכונות מכניות של מוטציות גנטיות עם ייצור הקלוש של רכיב מסוים דופן התא לשפוך אורות על התפקידים המבניים של סוכרים, אבל הראיות מולקולריות יותר יש צורך לגשר על אלה תצפיות מאקרוסקופית עם הפונקציה שעברו הנדסה לאחור של חלבון machineries20.
התפתחויות אחרונות פיתוח ויישום של רב-ממדי ספקטרוסקופיה NMR של מצב מוצק הציגו הזדמנות ייחודית לפתרון חידות מבניים אלה. ניסויים NMR של מצב מוצק דו-ממדי/תלת-ממדי לאפשר חקירה ברזולוציה גבוהה של הרכב, ארכיטקטורה של חומרים עתירי פחמימות במצב מקורי ללא ההפרעות הגדולות. מבניים מחקרים נערכו בהצלחה על ראשי והן קירות התא משני של צמחים, ביומסה שטופלו catalytically, biofilm חיידקי, הפיגמנט רוחות פטריות ו, לאחרונה על-ידי המחברים, קירות התא שלם בפטריה פתוגניים אספרגילוס fumigatus 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31. ההתפתחות של קיטוב גרעיני דינמי (DNP)32,33,34,35,36,37,38 , 39 , 40 , 41 , 42 מקלה באופן משמעותי על הבהרה מבניים NMR כמו שיפור הרגישות מאת DNP מקצר במידה ניכרת הזמן ניסיוני על biomaterials מורכבים אלה. הפרוטוקול המתואר כאן מפרט את נהלי איזוטופ-תיוג הפטריה fumigatus א והכנת פטרייתי ודוגמאות צמח על אפיון NMR, DNP של מצב מוצק. נהלים תיוג דומים צריך להיות רלוונטי פטריות אחרות שינו בינונית, ההליכים הכנת המדגם צריך להיות בדרך כלל החלים biomaterials עתירי פחמימות אחרות.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Molybdate Tetrahydrate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>12054-85-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMUPol</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>C010P002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical weighing balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>B730439218</td>
			<td>Model PA84C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioclave 16 L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470230-598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet</td>
			<td>Labconco corporation</td>
			<td>302319100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9222</td>
			<td>store at 15-30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) Chloride Hexahydrate</td>
			<td>Honeywell|Fluka</td>
			<td>60820</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper(II) Sulfate Pentahydrate</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9312</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning LSE shaking incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7202152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151882</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d6-DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151874</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d8-glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>447498</td>
			<td>&#8805;99 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing 3.2 kDa</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2272</td>
			<td>132724</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dipotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9266</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraus Megafuge 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>750004271</td>
			<td>Maximum RCF 25,830 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR-MAS Disposable Insert Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B4493</td>
			<td>Kel-F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(II) Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>14498</td>
			<td>&#8805;99+ %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10034998</td>
			<td>store at 18-26 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese(II) Chloride Tetrahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>11563</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monopotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470302-254</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>B706689216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrasodium Ethylenediaminetetraacetate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>13235-36-9</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>33399</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12C3, d8-glycerol</td>
			<td>Cambridge Isotope Laboratory</td>
			<td>CDLM-8660</td>
			<td>12C3, 99.95%; D8, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>13C6-glucose</td>
			<td>Sigma Alrdrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;99 % (CP)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15N-sodium nitrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;98 % 15N, &#8805;99 (cp)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm sapphire NMR rotor</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>B6939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm Silicone plug</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B7089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm MAS Rotor Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>H14355</td>
			<td>Zirconia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr

פרוטוקול זה מראה איך בצורה אחידה 13ג, 15התווית על-ידי N חומרים פטרייתי יכול להיות והופק כמה חומרים רכים אלה צריך להיות המשיך NMR של מצב מוצק, רגישות משופרת DNP ניסויים. ההליך דוגמת עיבוד של הצמח ביומסה גם מפורט. שיטה זו מאפשרת את המדידה של סדרת 1D ו- 2D 13C -13C /15N מתאמים ספקטרה, המאפשר הבהרה מבניים ברזולוציה גבוהה של מורכבות biomaterials במצב מקורי, עם ההפרעות מינימלי. האיזוטופ-תיוג יכולים להיבדק על ידי לכימות את עוצמת ב 1 י ספקטרה ואת יעילות העברת קיטוב ב- 2D המתאם ספקטרה. ניתן להעריך את ההצלחה של הכנת הדוגמא קיטוב גרעיני דינמי (DNP) על ידי הגורם שיפור הרגישות. לניסויים נוספים לבחון את ההיבטים המבניים של סוכרים, חלבונים יוביל מודל של הארכיטקטורה תלת מימדי. שיטות אלה ניתן לשנותם ולאחר הותאם לחקור מגוון רחב של חומרים עתירי פחמימות, כולל קירות התא הטבעי של צמחים, פטריות, אצות, חיידקים, וכן מסונתז או תוכנן פחמימות פולימרים ומורכב שלהם עם השני מולקולות.

איזוטופ תיוג באופן משמעותי משפר את הרגישות NMR, מאפשרת מדידה של סדרת 2D 13C -13C ו 13C -15N מתאם ספקטרה כדי לנתח את הרכב, לחות, ניידות, אריזה של פולימרים, אשר ניתן לשלב בניית מודל תלת מימדי של דופן התא אדריכלות (איור 1). אם תיוג אחיד מצליחה, ערכה ?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR

הכנת פטרייתי, צמח חומרי הבהרה מבניים באמצעות NMR של מצב מוצק קיטוב גרעיני דינמי

פרוטוקול להכנת 13ג,15דוגמאות פטרייתי וצמח התווית על-ידי N רב-ממדי ספקטרוסקופיה NMR של מצב מוצק וחקירות קיטוב גרעיני דינמי (DNP) מוצג.

This protocol shows how uniformly 13C, 15N-labeled fungal materials can be produced and how these soft materials should be proceeded for solid-state NMR ...

פרוטוקול זה יכול לשמש להכנת חומרים פטרייתיים וצמחים עבור תהודה מגנטית גרעינית מצב מוצק, או NMR, וקיטוב גרעיני דינמי, או DNP, ניסויים לאפיון מערכת ביולוגית מורכבת. טכניקה זו מאפשרת לנו לחקור ביו-חומרים לרמה של רזולוציה אטומית בסביבתם הטבעית, למשל, בתאים שלמים. רכישת מידע מבני ברזולוציה גבוהה על חומרים פטרייתיים יסייע בפיתוח תרופות נגד פטריות.השיטה מספקת תובנה על הרכב ומבנה של פחמימות מורכבות בקירות תאים פטרייתיים ו ניתן ליישם אותה על אורגניזמים עשירים בפחמימות רבים, כולל צמחים, פטריות, אצות וחיידקים. חלק מהחוקרים עשויים להיאבק עם זיהום פטרייתי בתרבויות התאים שלהם. העצה שלי היא לעקר את המדיום ואת הציוד ביסודיות לפני השימוש כדי למנוע זיהום זה.הדגמה זו תסייע לחוקרים עם ניסיון מועט ב- NMR או בתרבות התאים ללמוד כיצד ליישם טכניקות אלה במערכות פטרייתיות וצמחים. כדי להכין בינוני צמיחה נוזלית ללא תריס, להמיס 6.5 גרם של שמרים לחלץ פפטון דקסטרוז או אבקת YPD ב 100 מיליליטר של מים מזוקקים, ולאחר מכן autoclave הפתרון וכתוצאה מכך במשך 25 דקות ב 134 מעלות צלזיוס. כדי להכין מדיום צמיחה מוצק ללא תריס, להוסיף 6.5 גרם של אבקת אגר YPD ל 100 מיליליטר של מים מזוקקים, ו autoclave את המדיום במשך 25 דקות ב 121 מעלות צלזיוס, לפני קירור המדיום כ 50 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להעביר 13 עד 15 מיליליטר של מדיום צמיחה מוצק נמס לתוך צלחות פטרי פלסטיק סטרילי בודדים, ומיד מניחים את המכסים על הכלים. כדי להכין פחמן-13, חנקן-15 שכותרתו צמיחה נוזלית בינונית, להתאים נפח 100 מיליליטר של איזוטופ המכיל מדיום מינימלי ל- pH של 6.6 עם חומצה או בסיס לפי הצורך. לאחר מכן, להמיס את המלחים המפורטים בטבלה 100 מיליליטר של מים מזוקקים, להוסיף פחמן-13, חנקן-15 שכותרתו צמיחה נוזלית בינונית, ו autoclave הפתרון וכתוצאה מכך במשך 25 דקות ב 121 מעלות צלזיוס.כאשר הפתרון התקרר לטמפרטורת החדר, להוסיף 100 microliters של פתרון יסודות קורט לנפח כולו של פחמן-13, חנקן-15 שכותרתו בינוני מינימלי. כדי לגדל את החומרים הפטרייתיים, השתמש בלולאה מאמץ להעביר כמות קטנה של פטריות מאחסון לצלחת YPD, ולתרבת את הפטרייה במשך יומיים באינקובטור של 30 מעלות צלזיוס. בסוף הדגירה, השתמש בלולאת חינוך חדשה כדי להעביר יתרון פטרייתי פעיל גדל פחמן-13, חנקן-15 שכותרתו מדיום צמיחה נוזלית, ולמקום את התרבות ב 30 מעלות צלזיוס ו 220 סיבובים לדקה במשך שלושה עד חמישה ימים באינקובטור רועד.כאשר כמויות גדולות של הפטרייה לכסות את תחתית הבקבוק ולצוף בנוזל, לאסוף את הפטריות על ידי צנטריפוגה להשליך את supernatant. לחות את גלולה עם פתרון מתאים, ולהשתמש מטסות כדי לאסוף על 0.5 גרם של גלולה hydrated היטב עבור NMR ו DNP ניתוחים. לאחר מכן, מערבבים את החומר הנותר עם תסכול 20% גליצרול בצינור חרוטי, ומניחים את המדגם הפטרייתי במינוס 80 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך.כדי להכין את A.fumigatus לניתוח NMR מצב מוצק, תחילה להשתמש בשקית דיאליזה עם 3.5 קילודלטון ניתוק משקל מולקולרי כדי דיאליזה 0.5 גרם פחמן-13, חנקן-15 שכותרתו דגימה פטרייתית נגד ליטר אחד של חיץ פוספט 10 מילימולרית בארבע מעלות צלזיוס במשך שלושה ימים כדי להסיר מולקולות קטנות מהצמיחה הבינונית. בסוף הדיאליזה, להעביר את המדגם לתוך צינור 15 מיליליטר עבור צנטריפוגה, ולארוז 70 עד 80 מיליגרם של הדבק מדגם פחמן-13 תווית אחידה hydrated היטב לתוך רוטור זירקוניום דו חמצני ארבעה מילימטר. השתמש מוט מתכת בעדינות וחוזר על עצמו לסחוט את המדגם, באמצעות נייר לספוג את המים העודפים.לאחר מכן, תכניסו בחוזקה את הרוטור, והכניסו את הדגימה לספקטרומטר לאפיון NMR במצב מוצק. כדי להכין את A.fumigatus לניתוח DNP, להוסיף 100 microliters של מטריצת DNP לתוך צינור אחד 1.5 מיליליטר microcentrifuge לכל פחמן-13, פחמן-15 שכותרתו מדגם פטרייתי, ולהמיס 0.7 מיליגרם של סוכן קיטוב לכל צינור כדי ליצור פתרון מלאי רדיקלי 10 מילימולר. לאחר מערבולת במשך שתיים עד שלוש דקות כדי להבטיח כי רדיקלים מומסים באופן מלא בתמיסה, להשרות 10 מיליגרם של פחמן-13 דיאליזה, חנקן-15 שכותרתו דגימה פטרייתית ב 50 microliters של פתרון הסוכן הקיטוב, ולהשתמש עלה וטיט לטחון קלות את התערובת כדי להבטיח חדירה של הרדיקלים לתוך קירות התא הנקבובי.הוסף עוד 30 microliters של הפתרון הרדיקלי גלולה הקרקע כדי לחות עוד יותר את המדגם פטרייתי, ולארוז את גלולה לתוך רוטור ספיר 3.2 מ"מ. לסחוט במתינות ולהסיר את ממס DNP עודף כפי שהוכח, ולהוסיף תקע סיליקון 3.2 מ"מ כדי למנוע אובדן הידרציה. לאחר מכן, הוסף את הרוטור לספקטרומטר NMR לניסוי שגרתי או ספקטרומטר DNP למדידת הספקטרום המשופר של DNP תחת הקרנה במיקרוגל.כדי להכין חומרים צמחיים למחקרי DNP, השתמש בסכין גילוח כדי לחתוך את החומר הצמחי המסומן באופן אחיד בפחמן-13 לחתיכות של מילימטר אחד עד שניים. השתמש מרגמה ועלי לטחון את החלקים לחלקיקים קטנים יותר עד האבקה הסופית יש מראה הומוגני. הוסיפו 40 מיקרוליטרים של תסבומת מלאי רדיקלית של 10 מילימולרים לחומר הצמח, וטחנו קלות את הדגימה במשך חמש דקות נוספות כדי להבטיח ערבוב הומוגני עם הרדיקל.לחות את מדגם הקרקע עם עוד 20 microliters של פתרון מלאי רדיקלי, ולארוז את דגימת הצמח מצויד לתוך רוטור ספיר 3.2 מילימטר לניתוח DNP. לאחר מכן, הכנס תקע סיליקון כדי למנוע אובדן הידרציה, וטען את המדגם על ספקטרופוטומטר DNP. תיוג איזוטופ משפר באופן משמעותי את רגישות ה-NMR ומאפשר מדידת סדרה של פחמן-13-פחמן-13 דו-ממדי וספקטרום מתאם פחמן-13-חנקן-15 כדי לנתח את הרכב, הידרציה, ניידות ואריזה של הפולימרים לשילובם לבניית מודל תלת מימדי של ארכיטקטורת דופן התא.אם קשה להשיג אותות לא אלכסוניים בספקטרום פחמן-13-פחמן-13 דו-מימדי, ייתכן שהתרחש תיוג סטטיסטי. שתי פסגות הפחמן-13 ב-96 ו-92 חלקים למיליון הן אותות חתימה של גלוקוז פחמן-1. לכן, עוצמתם החזקה בספקטרום הקיטוב הישיר כמותי פחמן-13 הנמדדת בעיכובים ארוכים של מיחזור של 35 שניות מצביעה בדרך כלל על הדומיננטיות של מולקולות קטנות עקב דיאליזה או שטיפה לא שלמים.עם דגימות מסומנות היטב, מתאמים ארוכי טווח ניתן למדוד עוד יותר כדי לזהות את הקרבות המרחביות של biomolecules ולבנות מודל מבני של קירות התא שלמים. טכניקה זו מאפשרת לחקור את תפקוד המבנה בחומרים טבעיים ומהונדסים רבים, ומאפשרת מחקרים עתידיים של ביו-חומרים עשירים בפחמימות ופולימרים פונקציונליים. כמו פטריות מסוימות עלולות לגרום לזיהום או מחלות שיטתיות בבני אדם, הקפד לטפל בחומרים פטרייתיים במכסה המנוע לזרימת למינאר להגנה ולמזער את החשיפה.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography

הכנה והגשת microcrystals חלבון בשלב lipidic מעוקב עבור קריסטלוגרפיה Femtosecond סידורי

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

חלבון הכנת שיטה לזיהוי התפוקה הגבוהה של חלבוני אינטראקציה עם גורם-שותף גרעיני באמצעות LC-MS / MS ניתוח

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Atomic Scale Structural Studies of Macromolecular Assemblies by Solid-state Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

מחקרים מבניים אטומי בקנה מידה של הרכבות Macromolecular על ידי תהודה מגנטית גרעינית solid-state ספקטרוסקופיה

Supramolecular protein assemblies play fundamental roles in biological processes ranging from host-pathogen interaction, viral infection to the ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

גידול גבישים חלבון עם ממדים ברורים באמצעות כלים אוטומטיים התגבשות בשילוב עם בחיי עיר פיזור אור דינאמי

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

ללא כיול במבחנה כימות של חלבון ההומו-oligomerization באמצעות מכשור מסחרי ותוכנות אנליזה של בהירות חינם, קוד פתוח

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

שינוי Baculovirus וקטורים ביטוי לייצר מופרש צמח חלבונים בתאי חרקים

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) and Microscale Thermophoresis (MST)

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy NMR and Microscale Thermophoresis MST

מדידת אינטראקציות של חלבונים הכדוריים, Filamentous על ידי תהודה מגנטית גרעינית ספקטרוסקופיה (NMR) Microscale Thermophoresis (MST)

Filamentous proteins such as vimentin provide organization within cells by providing a structural scaffold with sites that bind proteins containing plakin ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

הכנת רשת מהירה למיקרוסקופיה קריו-אלקטרונית שנפתרה בזמן

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

הכנת סרטי תמיכה לדוגמה במיקרוסקופיית אלקטרונים שידור באמצעות בלוק הצפה תומך

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies (Mo-GWAS): Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies Mo-GWAS: Guidelines for Sample Preparation and Normalization

מחקרי אסוציאציה רב-גנומית בקנה מידה גדול (Mo-GWAS): קווים מנחים להכנת דגימות ונורמליזציה

Both gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) are widely used metabolomics approaches to detect ...