Name: preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr
Uploaded: 2019-02-12T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

Bu eser NSF OIA-1833040 Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir. Ulusal yüksek manyetik alan Laboratuarı (NHMFL) DMR-1157490 ve Florida eyaletinde Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenmektedir. MAS-DNP sistem NHMFL, kısmen NIH S10 OD018519 ve NSF CHE-1229170 tarafından finanse edilmektedir.

1. büyüme 13C, 15N etiketli Aspergillus fumigatus sıvı orta
<ol><li>Etiketlenmemiş hazırlanması ve 13C, 15N etiketli büyüme orta Not: Her ikisi de Maya Extract pepton dekstroz Orta (YPD) ve geliştirilmiş en az orta43 mantar kültür bakımı için kullanılmıştır. Isıyla sonra tüm adımlar bir laminar akış hood kontaminasyon en aza indirmek için gerçekleştirilir.<ol>
<li>Etiketlenmemiş sıvı orta hazırlanması: 6.5 g...

Biyokimyasal yöntemlerle karşılaştırıldığında, solid-state NMR bir non-yıkıcı ve yüksek çözünürlüklü Teknik olarak avantajları vardır. NMR da kompozisyon analizde nicel ve çoğu diğer analitik yöntemler aksine, değil belirsizlikler tanıttı biyopolimer sınırlı çözünürlük tarafından. Geçerli protokol kurulması karbonhidrat açısından zengin Biyomalzeme ve functionalized polimerler gelecek çalışmalar kolaylaştırır. Ancak, rezonans atama ve veri analizi zaman alıcı olması ve g...

Karbonhidratlar enerji depolama, yapısal bina ve hücresel tanıma ve yapışma gibi çeşitli biyolojik süreçlerin merkezi bir rol oynamaktadır. Onlar hücre duvarı zenginleştirilmiş olan bitkiler, mantarlar, algler ve bakteri1,2,3temel bir bileşenidir. Hücre duvarı biyoyakıt ve biyomalzeme üretiminde için merkezi bir kaynak yanı sıra antimikrobiyal tedaviler4,5,6,7,8 için umut verici bir hedef olarak hizmet vermektedir , 9.
Bu karmaşık malzemelerin çağdaş anlayış önemli ölçüde dört önemli biyokimyasal veya genetik yöntemlerle yapısal karakterizasyon adamış çabaları onlarca tarafından ileri. İlk büyük Yöntem sıralı tedavileri farklı bölümleri, içine hücre duvarları yıkmak için kuvvetli kimyasallar veya enzimler kullanarak kompozisyon tarafından takip kullanır ve bağlantı analizi her Kesir10şekerler. Bu yöntem polimerlerin etki alanı dağıtım ışık tutuyor ama yorumu biomolecules kimyasal ve fiziksel özellikleri nedeniyle yanıltıcı olabilir. Örneğin, alkali ekstrakte kesir daha az yapılandırılmış moleküllerin tek bir etki alanı veya dağınık şekilde ayrılmış molekülleri ile karşılaştırılabilir çözünürlük gelmektedir olup olmadığını belirlemek zordur. İkinci olarak, ayıklanan bölümleri veya tüm hücre duvarları da farklı molekül11,12,13, arasında çapraz olarak da adlandırılan kovalent bağları belirlemek için çözüm NMR kullanarak ölçülebilir 14,15. Bu şekilde ayrıntılı yapısı, kovalent çapa probed ancak sınırlamaları nedeniyle polisakkaritler, crosslinking sitelerin nispeten az sayıda ve stabilize kovalent olmayan etkileri cehalet çözünürlük düşük var olabilir polisakkarit ambalaj, hidrojen bağı, van der Waals kuvvetleri, elektrostatik etkileşim ve polimer dolanması gibi. Üçüncü olarak, bağlama benzeşme kararlı vitro izole polisakkaritler16,17,18,19ama yordamlar önemli ölçüde değiştirebilir arıtma kullanarak oldu yapısı ve özellikleri bu biomolecules. Bu yöntem aynı zamanda karmaşık ifade ve oluştururlar Meclisi biyosentezi sonra çoğaltmak başarısız olur. Son olarak, fenotip, hücre morfolojisi ve genetik mutantlar mekanik özellikleri belirli hücre duvarı bileşeni zayıflatılmış üretimi ile polisakkaritler yapısal işlevleri ışıkları döken, ama daha moleküler kanıtlar bunlar köprü için gereklidir protein makineleri20makroskopik gözlemleri ile mühendislik görev.
Geliştirilmesi ve çok boyutlu solid-state NMR spektroskopisi son gelişmeler bu yapısal bulmaca çözme için eşsiz bir fırsat girmiştik. 2D/3D solid-state NMR deneyler kompozisyon yüksek çözünürlüklü incelenmesi ve karbonhidrat açısından zengin malzemeler büyük pertürbasyon olmadan yerel devlet mimarisini etkinleştirin. Yapısal başarıyla yürütülen çalışmalar hem birincil hem de ikincil hücre duvarları bitkiler, catalytically tedavi biyokütle bakteriyel biyofilm, pigment hayaletler mantar ve son zamanlarda yazarların, patojenik bir mantar sağlam hücre duvarları Aspergillus fumigatus 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31. dinamik nükleer polarizasyon (DNP)32,33,34,35,36,37,38 gelişimi , 39 , 40 , 41 , DNP tarafından duyarlılık geliştirme belirgin bu karmaşık Biyomalzeme deneysel zamanı kısaltır gibi 42 NMR yapısal aydınlatma önemli ölçüde kolaylaştırır. Burada açıklanan protokol için izotop etiketleme-mantar A. fumigatus ve mantar hazırlama yordamları ve bitki örnekleri solid-state NMR ve DNP karakterizasyonu için ayrıntıları. Benzer etiketleme yordamlar değişmiş orta ile diğer mantarlar için geçerli olmalı ve örnek hazırlama yordamları genellikle diğer karbonhidrat açısından zengin Biyomalzeme uygulanabilir olmalıdır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ammonium Molybdate Tetrahydrate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>12054-85-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMUPol</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>C010P002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical weighing balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>B730439218</td>
			<td>Model PA84C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioclave 16 L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470230-598</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety Cabinet</td>
			<td>Labconco corporation</td>
			<td>302319100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9222</td>
			<td>store at 15-30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) Chloride Hexahydrate</td>
			<td>Honeywell|Fluka</td>
			<td>60820</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper(II) Sulfate Pentahydrate</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9312</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning LSE shaking incubator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>7202152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151882</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d6-DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>151874</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d8-glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>447498</td>
			<td>&#8805;99 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing 3.2 kDa</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2272</td>
			<td>132724</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dipotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9266</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5516</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraus Megafuge 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>750004271</td>
			<td>Maximum RCF 25,830 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HR-MAS Disposable Insert Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B4493</td>
			<td>Kel-F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(II) Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>14498</td>
			<td>&#8805;99+ %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10034998</td>
			<td>store at 18-26 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese(II) Chloride Tetrahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>11563</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monopotassium Phosphate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470302-254</td>
			<td>&#8805;99 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH Meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>B706689216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrasodium Ethylenediaminetetraacetate</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>13235-36-9</td>
			<td>&#8805;99.5 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Sulfate Heptahydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>33399</td>
			<td>&#8805;98 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12C3, d8-glycerol</td>
			<td>Cambridge Isotope Laboratory</td>
			<td>CDLM-8660</td>
			<td>12C3, 99.95%; D8, 98%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>13C6-glucose</td>
			<td>Sigma Alrdrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;99 % (CP)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15N-sodium nitrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>364606</td>
			<td>&#8805;98 % 15N, &#8805;99 (cp)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm sapphire NMR rotor</td>
			<td>Cortecnet</td>
			<td>B6939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.2 mm Silicone plug</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>B7089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm MAS Rotor Kit</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>H14355</td>
			<td>Zirconia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of fungal and plant materials for structural elucidation using dynamic nuclear polarization solid-state nmr

Bu protokolü nasıl düzgün 13C, 15N etiketli mantar malzemeleri gösterir üretilen ve deneyler nasıl bu yumuşak malzeme solid-state NMR ve duyarlılık gelişmiş DNP için devam. Örnek işleme yordamı bitki biyolojik kütle Ayrıca ayrıntılı. Bu yöntem, bir dizi 1 D ve 2D 13C -13C ölçüm sağlar / yerli onların durumunda, en az pertürbasyon ile karmaşık Biyomalzeme yüksek çözünürlüklü yapısal aydınlatma sağlar15N korelasyon spectra. İzotop etiketleme 1 D spectra şiddeti ve 2D korelasyon spectra polarizasyon transfer verimi miktarının tarafından incelenebilir. Dinamik nükleer polarizasyon (DNP) numune hazırlama başarısı duyarlılık geliştirme faktörüyle değerlendirilebilir. Daha fazla deney polisakkaritler ve proteinler yapısal açılardan incelenmesi üç boyutlu mimari modeli için yol açacaktır. Bu yöntemler değiştirilebilir ve karbonhidrat açısından zengin malzemeler, bitkiler, mantarlar, algler ve bakteri, doğal hücre duvarları da dahil olmak üzere hem de sentez veya karbonhidrat polimerler ve onların karmaşık diğer tasarlanmış bir yelpazede araştırmak için uyarlanmış molekülleri.

İzotop etiketleme önemli ölçüde NMR hassasiyeti artırır ve bir dizi 2D 13C -13C ve 13C -15N kompozisyon, hidrasyon, hareketlilik analiz etmek için korelasyon spectra ölçme ve ambalaj için mümkün kılar Polimerler, hücre duvarı mimarisi (Şekil 1) üç boyutlu bir model oluşturmak için entegre edilecek. Tek tip etiketleme işlemi başarılı olursa, 1D 13C ve 15N spectra tam bir...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR at JoVE.com

Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR

Yapısal aydınlatma kullanarak dinamik nükleer polarizasyon Solid-State NMR için bitki malzeme ve mantar hazırlanması

13C,15N etiketli mantar ve bitki örnekleri çok boyutlu solid-state NMR spektroskopisi ve dinamik nükleer polarizasyon (DNP) araştırmalar için hazırlanması için bir protokol sunulmuştur.

This protocol shows how uniformly 13C, 15N-labeled fungal materials can be produced and how these soft materials should be proceeded for solid-state NMR ...

Bu protokol katı hal nükleer manyetik rezonans, veya NMR ve dinamik nükleer polarizasyon, ya da DNP, karmaşık biyosistem karakterizasyonu için deneyler için mantar ve bitki malzemeleri hazırlamak için kullanılabilir. Bu teknik, biyomateryalleri ana ortamlarında, örneğin tüm hücrelerde atomik çözünürlük düzeyine kadar araştırmamıza olanak sağlar. Mantar malzemeleri hakkında yüksek çözünürlüklü yapısal bilgilerin edinimi antifungal ilaçların geliştirilmesine yardımcı olacaktır.Yöntem, mantar hücre duvarlarındaki kompleks karbonhidratların bileşimi ve yapısı hakkında bilgi sağlar ve bitkiler, mantarlar, yosunlar ve bakteriler de dahil olmak üzere birçok karbonhidrat açısından zengin organizmaya uygulanabilir. Bazı araştırmacılar kendi hücresel kültürlerde mantar kontaminasyonu ile mücadele edebilir. Benim tavsiyem bu kontaminasyonu önlemek için kullanmadan önce orta ve ekipman iyice sterilize etmektir.Bu gösteri, NMR veya hücre kültüründe çok az deneyime sahip araştırmacıların bu teknikleri mantar ve bitki sistemlerinde nasıl uygulayacaklarını öğrenmelerine yardımcı olacaktır. Etiketsiz sıvı büyüme ortamı hazırlamak için, 6,5 gram maya özü peptone dekstroz veya YPD tozunu 100 mililitre distile suda çözün ve elde edilen çözeltiyi 134 santigrat derecede 25 dakika otoklavlayın. Etiketsiz katı büyüme ortamı hazırlamak için, 100 mililitre distile suya 6,5 gram YPD agar tozu ekleyin ve ortayı yaklaşık 50 santigrat dereceye kadar soğutmadan önce 121 santigrat derecede 25 dakika otoklavlayın.Daha sonra, eritilmiş katı büyüme ortamının 13 ila 15 mililitresini tek tek steril plastik Petri kaplarına aktarın ve kapakları hemen tabakların üzerine yerleştirin. Karbon-13, azot-15 etiketli sıvı büyüme ortamı hazırlamak için, gerektiğinde asit veya baz ile 6,6 pH'a kadar izotop içeren 100 mililitrelik bir izotop hacmini ayarlayın. Daha sonra, distile su 100 mililitre tabloda listelenen tuzları eritin, karbon-13, azot-15 etiketli sıvı büyüme ortamı ekleyin ve 121 santigrat derece 25 dakika için ortaya çıkan çözelti autoclave.Çözelti oda sıcaklığına soğuduğunda, karbon-13, azot-15 etiketli minimum ortam tüm hacmine 100 mikrolitre eser element çözeltisi ekleyin. Mantar malzemelerini yetiştirmek için, depolamadan küçük miktarda mantarı YPD plakasına aktarmak için aşılayıcı bir döngü kullanın ve mantarı 30 derecelik bir kuluçka makinesinde iki gün boyunca kültüre aktarın. Kuluçka sonunda, aktif büyüyen bir mantar kenarını karbon-13'e, azot-15 etiketli sıvı büyüme ortamına aktarmak için yeni bir aşılama döngüsü kullanın ve kültürü sallayarak bir kuluçka makinesinde üç ila beş gün boyunca dakikada 30 santigrat derece ve 220 dönüşe yerleştirin.Mantar büyük miktarlarda şişe alt kapak ve sıvı içinde yüzen, santrifüj ile mantar toplamak ve supernatant atın. Peleti uygun bir çözeltiyle nemlendirin ve NMR ve DNP analizleri için yaklaşık 0,5 gram iyi sulu pelet toplamak için forseps kullanın. Daha sonra, konik bir tüp te %20 gliserol çözeltisi ile kalan malzemeyi karıştırın ve mantar örneğini uzun süreli depolama için eksi 80 santigrat derecede yerleştirin.Katı hal NMR analizi için A.fumigatus hazırlamak için, ilk olarak 0.5-gram karbon-13 diyaliz 3.5-kilodalton moleküler ağırlık kesme ile bir diyaliz torbası kullanmak, azot etiketli mantar örneği bir litre karşı 10-milimolar fosfat tampon dört derece santigrat üç gün boyunca büyüme ortamı küçük molekülleri kaldırmak için. Diyaliz sonunda, santrifüj için 15 mililitrelik bir tüp içine örnek aktarın ve dört milimetrezirkonyum dioksit rotor içine düzgün karbon-13 etiketli ve iyi sulu örnek macun 70 ila 80 miligram paketi. Aşırı suyu emmek için kağıt kullanarak numuneyi hafifçe ve tekrartekrar sıkmak için metal bir çubuk kullanın.Daha sonra, rotorsıkıca kapve katı hal NMR karakterizasyonu için spektrometre içine örnek ekleyin. A.fumigatus'u DNP analizi için hazırlamak için, karbon-13 başına 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne 100 mikrolitre DNP matrisi ekleyin, karbon-15 etiketli mantar numunesi ve 10 milimolar radikal stok çözeltisi oluşturmak için her tüpe 0,7 miligram polarize etkeni çözün. Radikallerin çözeltide tamamen çözünmesini sağlamak için iki ila üç dakika girdap yaptıktan sonra, 10 miligram arabozkarbon-13, polarize ajan çözeltisinin 50 mikrolitresinde azot-15 etiketli mantar numunesi ıslatın ve radikallerin gözenekli hücre duvarlarına nüfuz etmesini sağlamak için karışımı hafifçe öğütmek için bir havaneli ve harç kullanın.Mantar örneğini daha fazla nemlendirmek için zemin peletine 30 mikrolitre daha radikal çözelti ekleyin ve peleti 3,2 milimetrelik safir rotora sığdırın. Hafifçe sıkın ve gösterildiği gibi aşırı DNP çözücü kaldırın ve hidrasyon kaybını önlemek için 3.2 milimetrelik silikon fişi ekleyin. Daha sonra, rotoru rutin deney için bir NMR spektrometresine veya mikrodalga ışınlama altında DNP ile geliştirilmiş spektrumun ölçümü için bir DNP spektrometresine ekleyin.DNP çalışmaları için tesis malzemeleri hazırlamak için, düzgün karbon-13 etiketli bitki malzemesini bir ila iki milimetrelik parçalarhalinde kesmek için bir jilet kullanın. Son toz homojen bir görünüme sahip olana kadar küçük parçacıklar halinde parçaları öğütmek için bir harç ve havaneli kullanın. Bitki materyaline 40 mikrolitre 10 milimolar radikal stok çözeltisi ekleyin ve radikal ile homojen karıştırma sağlamak için numuneyi beş dakika daha hafifçe öğütün.Zemin örneğini 20 mikrolitre daha radikal stok çözeltisi ile nemlendirin ve dnp analizi için dengelenmiş bitki örneğini 3,2 milimetrelik safir rotora sığdırın. Ardından, hidrasyon kaybını önlemek için silikon fişi takın ve numuneyi DNP spektrofotometresine yükleyin. İzotop etiketleme önemli ölçüde NMR duyarlılığını artırır ve iki boyutlu karbon-13-karbon-13 ve karbon-13-azot-15 korelasyon spektrumları bir dizi ölçmek için mümkün hale getirir kompozisyon analiz etmek, hidrasyon, hareketlilik, ve hücre duvarı mimarisinin üç boyutlu bir model ininşaat için polimerlerin entegrasyonu için polimerlerin ambalaj.2B karbon-13-karbon-13 spektrumunda çapraz dışı sinyallerin elde edilmesi zorsa, istatistiksel etiketleme meydana gelmiş olabilir. İki karbon-13 zirvesi 96 ve milyonda 92 parça glikoz imzası karbon-1 sinyalleri vardır. Bu nedenle, 35 saniye uzun geri dönüşüm gecikmeleri ile ölçülen kantitatif karbon-13 doğrudan polarizasyon spektrumlarındaki güçlü yoğunlukları genellikle eksik diyaliz veya yıkama nedeniyle küçük moleküllerin hakimiyetini gösterir.İyi etiketlenmiş numunelerle, biyomoleküllerin mekansal yakınlıklarını tespit etmek ve bozulmamış hücre duvarlarının yapısal bir modelini oluşturmak için uzun menzilli korelasyonlar daha da ölçülebilir. Bu teknik, karbonhidrat açısından zengin biyomalzemeler ve işlevsel polimerler üzerinde gelecekteki çalışmaları kolaylaştırarak, birçok doğal olarak meydana gelen ve tasarlanmış malzemelerin yapı işlevinin araştırılmasını sağlar. Bazı mantarlar insanlarda enfeksiyona veya sistematik hastalıklara neden olabileceğinden, mantar malzemelerini korunmak ve maruziyeti en aza indirmek için laminar akış kaputunda ele aldığından emin olun.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography

Hazırlık ve Seri Femtosecond Kristalografi için lipidik Cubic Faz Protein mikro kristallerinin teslimi

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

LC-MS / MS Analizi Nükleer kofaktör ile etkileşimde proteinlerin yüksek verimli belirlenmesi için bir protein Hazırlama Yöntemi

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

Atomic Scale Structural Studies of Macromolecular Assemblies by Solid-state Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

Atomik yapısal çalışmaların makromoleküllerin meclisleri tarafından katı hal Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi

Supramolecular protein assemblies play fundamental roles in biological processes ranging from host-pathogen interaction, viral infection to the ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Situ dinamik ışık saçılma ile birleştiğinde kristalizasyon büyüyen Protein kristalleri kullanarak farklı boyutları ile otomatik

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Kalibrasyon-Alerjik Vitro miktar Protein Homo-Oligomerizasyonda ticari araçları ve ücretsiz, açık kaynak parlaklık analiz yazılımı kullanarak

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

Bitki proteinleri böcek hücrelerinde salgılanan Baculovirus ifade vektörel çizimler oluşturmak için değiştirme

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) and Microscale Thermophoresis (MST)

Measuring Interactions of Globular and Filamentous Proteins by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy NMR and Microscale Thermophoresis MST

Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi (NMR) ve Microscale Thermophoresis (MST) tarafından küresel ve ipliksi protein etkileşimleri ölçme

Filamentous proteins such as vimentin provide organization within cells by providing a structural scaffold with sites that bind proteins containing plakin ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Zaman Çözümlü Cryo-Elektron Mikroskopisi için Hızlı Şebeke Hazırlığı

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Preparation of Sample Support Films in Transmission Electron Microscopy using a Support Floatation Block

Destek Yüzdürme Bloğu Kullanılarak İletim Elektron Mikroskopisinde Numune Destek Filmlerinin Hazırlanması

Structure determination by cryo-electron microscopy (cryo-EM) has rapidly grown in the last decade; however, sample preparation remains a significant ...

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies (Mo-GWAS): Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Large-Scale Multi-Omics Genome-Wide Association Studies Mo-GWAS: Guidelines for Sample Preparation and Normalization

Büyük Ölçekli Multi-omik Genom Çapında İlişkilendirme Çalışmaları (Mo-GWAS): Numune Hazırlama ve Normalleştirme Kılavuzları

Both gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) are widely used metabolomics approaches to detect ...