Name: xylem water distribution in woody plants visualized with a cryo-scanning electron microscope
Uploaded: 2019-06-20T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door JSPS KAKENHI (nr. 20120009, 20120010, 19780129, 25292110, 23780190, 23248022, 15H02450, 16H04936, 16H04948, 17H03825, 18H02258)

Opmerking: een schematisch overzicht van dit protocol wordt weergegeven in Figuur 1.
1. bemonstering: spanning ontspanning binnen de kolom van het water van Xylem leidingen
Opmerking: de volgende spanning ontspanning behandeling wordt aanbevolen voor de LN2 aanvraag om zowel bevriezing en spanning te voorkomen-geïnduceerde artefacten in de Xylem waterdistributie.
<ol><li>Plaats een tak en laat voor bemonstering met een zwa...

De Cryo-SEM observatiemethodes die in dit document worden geïntroduceerd zijn praktisch voor duidelijk het visualiseren van waterdistributie op een cellulaire schaal. Door middel van deze methode, het verkennen van de veranderingen in de verdeling van het water binnen Xylem kan potentieel helpen verduidelijken het mechanisme van boomsoorten tolerantie voor abiotische stress (watertekort of bevriezing) of biotische stress (boom ziekte).
De meest cruciale stap in deze methode is het behoud van ...

Beschikbaarheid van watervoorraden (dat wil zeggen, neerslag, bodem waterinhoud) bepaalt strikt de sterfte en de geografische spreiding van plantensoorten, omdat ze nodig hebben om water te absorberen uit de bodem en het vervoer naar de bladeren voor fotosynthetische productie. De installaties moeten hun systeem van het watervervoer onder fluctuerende watervoorraden handhaven. In het bijzonder, bosrijke planten genereren hoge spanningen in hun leidingen langs de transpiratie stromen als, in sommige gevallen, ze nodig hebben om hun kroon te houden meer dan ~ 100 m boven de grond. Om water kolommen onder zulk hoge negatieve druk te handhaven, bestaan de Xylem leidingen uit een continuüm van tubulaire cellen met stijve en hydrofobe-lignified celwanden1. De kwetsbaarheid voor Xylem dysfunctie van Xylem leidingen in elke soort is een goede determinant van de soorten overleving onder fluctuerende watervoorziening2. Bovendien is het bestuderen van de water status van Xylem leidingen belangrijk voor de evaluatie van de gezondheidstoestand van individuele bomen die aan abiotische of biotische spanningen worden onderworpen. Het meten van SAP flow of water potentiaal kan schattingen geven van de water status van een bosrijke plant door de geïntegreerde hydraulische functie van Xylem leidingen. Bovendien kan het visualiseren van de distributie van water in Xylem cellen de conditie van individuele componenten van het Xylem hydraulisch systeem verduidelijken.
Verscheidene technieken om de water status van Xylem leidingen te visualiseren bestaan3. De klassieke en nuttige methoden voor het observeren van waterwegen in woody weefsel te betrekken kleuring de waterkolom door het onderdompelen van de uiteinden van de gesneden takken in een kleurstof of door het injecteren van een kleurstof in staande boom stengels4. Zachte x-ray fotografie maakt het ook mogelijk de visualisatie van het waterdistributie van gesneden hout schijven als gevolg van de differentiële x-ray absorptie intensiteit van het vocht in Xylem5,6. Deze methodes, echter, verstrekken slechts sporen van water beweging of tonen macroscopische distributies van water aan. Onlangs, niet-destructieve observatietechnieken, zoals MicroFocus X-Ray computertomografie (µ CT)7, 8,9,10en Magnetic Resonance Imaging (MRI)11, 12, zijn significant verbeterd om observatie van water in Xylem leidingen binnen intacte jonge boompjes toe te staan. Deze niet-destructieve methoden hebben grote voordelen in dat we de water status van de Xylem kunnen observeren zonder kunstmatige snij effecten, en we kunnen water Stromingsdynamica volgen door sequentiële beeldvorming of een contrast agent10. Echter, we moeten gebruik maken van een aangepaste MRI voor plant Imaging of een gespecialiseerde faciliteit voor synchotron-based µ CT om de beelden die kunnen identificeren cellulaire niveau waterinhoud te verkrijgen. Bovendien, hoewel het synchotron-based µ CT-systeem in staat om fijne beelden te verkrijgen met een hoge ruimtelijke resolutie, die vergelijkbaar is met de Lichtmicroscopie7,8,9, levende cellen kunnen worden verwond door de straling van hoge energie röntgenstraal13,14. Gebruik maken van een Scanning elektronenmicroscoop waarin Cryo-units zijn geïnstalleerd (Cryo-SEM) is een zeer nuttige methode voor het nauwkeurig lokaliseren van het water in Xylem op een cellulair niveau, hoewel dit vereist destructief oogsten van de steekproef voor observatie. Om het water in Xylem leidingen vast te stellen, wordt een deel van de stengels (d.w.z. twijgen, takken of stengels) in situ bevroren door vloeibare stikstof (LN2). Observaties van het oppervlak van getrimd, bevroren specimens door Cryo-SEM bieden sterk vergrote beelden van de Xylem structuur van waaruit we kunnen het water in Xylem leidingen als ijs te identificeren. Een significante beperking van deze methode is dat de opeenvolgende observatie van water beweeglijkheid binnen de zelfde steekproef onmogelijk is. Nochtans, is de toepassing van µ CT of MRI voor opeenvolgende observatie van bomen die in een gebied leven uiterst uitdagend omdat deze instrumenten niet draagbaar zijn. In tegenstelling, Cryo-SEM heeft een potentieel voor het gebruik van deze techniek op grote bomen in veldexperimenten om duidelijk te visualiseren waterinhoud op niet alleen het cellulaire niveau, maar ook op een fijnere structuur niveau, bijvoorbeeld, water in intervasculaire pits15, water in intercellulaire ruimten16, of bellen in waterkolom17.
Veel studies observeren Xylem water door Cryo-SEM zijn gemeld 5,12,18,19,20,21,23. Utsumi et al. (1996) vestigde aanvankelijk het protocol voor observatie van Xylem in situ door bevriezen-bevestiging van een het leven boomstam via het vullen van LN2 in een container die op de steel wordt geplaatst21. De temperatuur van de steekproef werd gehandhaafd onder-20 °C tijdens steekproef inzameling en tijdens Cryo-SEM voorbereiding om het smelten van het ijs binnen Xylem leidingen te vermijden. Deze methode is gebruikt om het water in Xylem te observeren om de waterverdeling te verduidelijken onder een ander waterregime11,12,24,25,26, 27,28, de seizoensgebonden variatie van waterverdeling21,29,30, het effect van Freeze-ontdooicycli17,31, 32, de verdeling van water in nat hout5, veranderingen in de waterverdeling tijdens de overgang van spint naar heartwood20, seizoengebonden tijdsverloop van cambial activiteit en differentiatie van schepen33, en cavitatie geïnduceerd door bepaalde biotische beklemtoont23,34. Hydraulische geleidbaarheid en leidingen kwetsbaarheid voor cavitatie zijn ook geverifieerd met behulp van Cryo-SEM35,36. Cryo-SEM uitgerust met energie dispersieve röntgenstraal spectrometrie (EDX of EDS) is gebruikt om elementdistributie over de oppervlakte van een specimen te bestuderen dat water37bevat.
Freeze-fixatie van een levende stam die leidingen bevat onder hoge hydraulische spanning veroorzaakt soms kunstmatige cavitatie die worden waargenomen door Cryo-SEM als gebroken ijs kristallen in het lumen van de leidingen38,39. In het bijzonder, loof soorten met langere en bredere leidingen zijn kwetsbaar voor spanning-geïnduceerde artefacten, zoals cavitatie veroorzaakt doorsteek proef snijden, zelfs indien uitgevoerd onder water3,40. De artefacten van de cavitatie worden opvallend na bemonstering van een het transpireren boom (d.w.z., bemonstering tijdens de dag tijd) of onder strenge droogte voorwaarden en zij kunnen aan een overschatting van cavitatie voorkomen misleiden3,38, 39. Daarom moet de spanning die in de leidingen werkt worden vrijgegeven om de artefactuele cavitatie3,12,39te vermijden.
De Freeze-fractuur techniek met behulp van een mes geïnstalleerd in een specimen kamer wordt vaak gebruikt om het monster oppervlak bloot voor Cryo-SEM observatie. Nochtans, zijn de bevriezen-gebroken vliegtuigen van bosrijke installatie weefsels, vooral transversale secties van secundaire Xylem, te ruw om de anatomische eigenschappen en het water in het weefsel6duidelijk waar te nemen. De toepassing van een cryostat voor het trimmen van een specimen maakt een snelle en kwalitatief hoogwaardige voorbereiding van monster oppervlakken20,23mogelijk. Het algemene doel van deze methode is het verstrekken van bewijsmateriaal met elektronenmicroscopie resolutie van de waterverdeling in verschillende soorten Xylem cellen in situ zonder het voorkomen van bemonsterings artefacten. We introduceren onze geactualiseerde procedure, die gestaag is verbeterd sinds we voor het eerst aangenomen, met betrekking tot de bemonstering, trimmen en reinigen van het specimen oppervlak voor het verkrijgen van kwalitatief hoogwaardige elektronen micrografen van Cryo-vaste monsters van Xylem.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:904px;" width="904">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:249px;">coating material</td>
			<td style="width:179px;">JOEL Ltd., Japan</td>
			<td style="width:284px;">Gold wire, 0.50 &#215; 1000 mm, 99.99 %, Parts No. 125000499&#160;</td>
			<td style="width:192px;"></td>
		</tr>
		<tr height="58">
			<td height="58" style="height:59px;width:249px;">cryo scanning electron microscope</td>
			<td style="width:179px;">JOEL Ltd., Japan</td>
			<td style="width:284px;">JSM-6510 installed with MP-Z09085T / MP-51020ALS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:48px;width:249px;">cryostat</td>
			<td style="width:179px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:284px;">CryoStar NX70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:249px;">microtome blade</td>
			<td style="width:179px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:284px;">HP35 ULTRA Disposable Microtome Blades, 3153735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:249px;">tissue freezing embedding medium</td>
			<td style="width:179px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:284px;">Shandon Cryomatrix embedding resin, 6769006</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

xylem water distribution in woody plants visualized with a cryo-scanning electron microscope

Een Scanning elektronenmicroscoop geïnstalleerd Cryo-Unit (Cryo-SEM) maakt specimen observatie op subzero temperaturen en is gebruikt voor het verkennen van waterdistributie in plantaardige weefsels in combinatie met Freeze fixatie technieken met behulp van vloeibare stikstof (LN 2). voor houtachtige soorten, echter, de voorbereidingen voor het observeren van de Xylem transversale-cut oppervlak te betrekken sommige problemen als gevolg van de oriëntatie van houtvezels. Bovendien, hogere spanning in de waterkolom in Xylem leidingen kan soms leiden tot artefactuele veranderingen in de waterdistributie, vooral tijdens de steekproef fixatie en collectie. In deze studie demonstreren we een efficiënte procedure om de waterverdeling binnen de Xylem van bosrijke planten in situ te observeren met behulp van een cryostat en Cryo-SEM. Op het eerste, tijdens de monsterverzameling, het meten van de Xylem water potentiaal moet bepalen of hoge spanning aanwezig is in de Xylem leidingen. Wanneer het Xylem water potentieel laag is (< ca. − 0,5 MPa), is een spannings ontspannings procedure nodig om een betere bewaring van de watertoestand in Xylem leidingen te vergemakkelijken tijdens steekproef bevriezen fixatie. Vervolgens is een waterdichte kraag bevestigd rond de boomstam en gevuld met LN2 voor het bevriezen van de fixatie van de watertoestand van Xylem. Na het oogsten moet ervoor worden gezorgd dat het monster bevroren blijft, terwijl de procedures voor de monstervoorbereiding voor observatie worden voltooid. Een cryostat wordt gebruikt om het Xylem transversale-besnoeiings oppervlak duidelijk bloot te stellen. In Cryo-SEM observaties, is de tijd aanpassing voor vorst-etsen vereist om vorst stof te verwijderen en de rand van de celwanden op de het bekijken oppervlakte te accentueren. Onze resultaten tonen de toepasbaarheid van Cryo-SEM technieken voor de observatie van de waterdistributie binnen Xylem op cellulaire en subcellulaire niveaus. De combinatie van Cryo-SEM met niet-destructieve in situ observatietechnieken zal de exploratie van de hout Stromingsdynamica van de plantaardige water diep verbeteren.

Representatieve beelden van dwars-gesneden oppervlakken van naald-en loofboom Xylem, waargenomen door Cryo-SEM, zijn weergegeven in Figuur 2. Bij lage vergroting, het zwarte gebied in de beelden geeft de holten van waaruit het water geheel of gedeeltelijk verdwijnt, en het grijze gebied geeft Xylem celwanden, cytoplasma, en water (Figuur 2a). Bij hoge vergroting is het duidelijk dat het water niet volledig verlor...

Watch this Scientific Journal Video about Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope at JoVE.com

Xylem Water Distribution in Woody Plants Visualized with a Cryo-scanning Electron Microscope

Het observeren van de waterdistributie binnen de Xylem geeft belangrijke informatie over de Water stromings dynamiek in bosrijke planten. In deze studie demonstreren we de praktische aanpak om Xylem waterdistributie in situ te observeren met behulp van een cryostat en Cryo-SEM, die artefactuele veranderingen in de water status elimineert tijdens de monstervoorbereiding.

Xylem water distributie in houtachtige planten gevisualiseerd met een Cryo-Scanning elektronenmicroscoop

A scanning electron microscope installed cryo-unit (cryo-SEM) allows specimen observation at subzero temperatures and has been used for exploring water ...

Het algemene doel van dit protocol is ons te voorzien van elektromicroscopie resolutie van de waterverdeling in verschillende soorten xylem cellen in situ. Deze methode is gebruikt om het water in xylem te observeren om de waterverdeling en de veranderende waterregimes, de seizoensgebonden variatie van de waterverdeling, het effect van vries-/dooicycli, de verdeling van water in nat hout en cavitatie veroorzaakt door bepaalde biotische spanningen te verduidelijken. Freeze-fixatie van een levende stam onder hoge hydraulische spanningen veroorzaakt soms kunstmatige cavitaties, die door cryo-SEM worden waargenomen als gescheurde ijskristallen in het lumen van leiding.Deze bijgewerkte procedure richt zich op het verkrijgen van hoogwaardige aerotome micrografen van xylem zonder het artefact in de bemonsteringsprocedure. Levensvatbare demonstratie is van cruciaal belang omdat er een aantal belangrijke details zijn die niet gemakkelijk kunnen worden uitgelegd. Tegelijkertijd is het verkrijgen van training niet eenvoudig omdat slechts een paar laboratoria over de hele wereld deze methode beoefenen.Om deze procedure te beginnen, omsluit een tak en vertrekt voor bemonstering met een zwarte plastic zak om het waterpotentieel tussen xylem en bladeren meer dan twee uur vóór bemonstering te equilibrate. Met behulp van een drukkamer, bepalen het waterpotentieel van ten minste twee bladeren uit het monster. Wanneer het waterpotentieel hoger is dan ongeveer min 0,5 megapascals, kan een monster worden geoogst na het bevriezen.Wanneer het waterpotentieel lager is dan min 0,5 megapascals, gaat u verder met de behandeling voor ontspanning. Bevestig een waterdichte kraag rond de steel, die zal worden gevuld met water. Snijd met snoeischaar of een zaag de steel onder het wateroppervlak en houd het snijeinde van het monster onder water.Breng het monster zo snel mogelijk over naar een andere container met water om het einde van de snede aan de lucht zo min mogelijk bloot te stellen. Voor breedbladige soorten moet u ervoor zorgen dat de lengte van de plek waar cryomonster voor SEM zal worden verkregen tot de snijkant van de geoogste stengel langer is dan de maximale vatlengte van het monster om door spanning veroorzaakte artefacten in het crysoample te voorkomen. Bedek vervolgens het monster met een zwarte plastic zak om transpiratie te verminderen.Houd het gesneden uiteinde van het monster in het water en houd deze toestand ongeveer 30 minuten om de xylemspanning te ontspannen. Meet hierna het waterpotentieel opnieuw om de ontspanning van de xylemspanning te bevestigen. Gebruik eerst een schaar of een mes om een kant van een waterdichte kraag te snijden en te openen.Bevestig de kraag stevig rond de steel met plakband terwijl het diafragma horizontaal wordt gehouden. Trek isolerende handschoenen aan en houd het vat vloeibare stikstof veilig vast. Run vloeibare stikstof in de kraag totdat het vol is en houd het gevuld door gestaag extra vloeibare stikstof toe te voegen om het water in de xylem volledig te bevriezen.Na voldoende vriestijd moet u de kraag losmaken van het bevroren gedeelte van de monsterstam om de vloeibare stikstof te verwijderen. Gebruik onmiddellijk een fijne handzaag om het monster te oogsten. Bedek vervolgens het bevroren monster met een stuk aluminiumfolie of stop het terug in een monsterbuis.Plaats het geoogste monster snel in een container gevuld met vloeibare stikstof. Bewaar de monsters op min 80 graden Celsius tot klaar om de observatie uit te voeren. Om te beginnen stelt u de temperatuur van de monsterkamer van de cryostat in op min 30 graden Celsius, wat meestal koud genoeg is om het xylem sap van de meeste planten in bevroren toestand te houden.Gebruik een scherp mes of een fijngetande zaag om het monster te trimmen in een klein stukje dat kan worden aangepast voor de monsterhouder van een cryo-SEM. Monteer het bijgesneden stuk op een chuck, een houder voor een cryostat, met weefselbevriezingsmedium voor cryo-sectioning. Bevestig de klem aan een monsterhouder van een microtome van de cryostat.Trim het oppervlak door herhaaldelijk scheren uit vijf tot zeven micrometer dikke secties. Het wegsnijden van meer dan 1.000 tot 2.000 micrometer in totale diepte tot het oorspronkelijke oppervlak is nuttig voor het wegsnijden van het beschadigde gedeelte van het monster veroorzaakt door voorsnijden. Na het ruwlopen van een oppervlak van het monster, past u een ongebruikt gedeelte van het microtomeblad boven het oppervlak van het monster.Verbreed de afstand tussen het oppervlak van het monster en het blad iets. En snijd het oppervlak slechts een of twee keer. Schuif het blad vervolgens opnieuw en plaats een ongebruikt gedeelte van het blad op het oppervlak van het monster.Herhaal deze snijverwerking drie tot vier keer om een duidelijk oppervlak zonder messporen te verkrijgen. Stel na de laatste snede de positie van het blad ver van het monster in om te voorkomen dat er stof op het monster blijft plakken. En maak de chuck los van de microtome.Bevestig het monster vervolgens aan een cryo-SEM monsterhouder met weefselbevriezingsmedium in de cryostatkamer. Gebruik eerst vloeibare stikstof om een temperatuur onder min 120 Celsius te houden in de cryo-SEM-monsterkamer volgens de handleiding van de gebruiker van de apparatuur. Plaats vervolgens de monsterhouder met het geprepareerde exemplaar in een isolerende container gevuld met vloeibare stikstof in de cryostatkamer.Gebruik een monster wisselen staaf om het monster houder te houden onder de vloeibare stikstof. Breng de monsterhouder snel over naar de pre-evacuatiekamer van de cryo-SEM monsterkamer zodra de evacuatie van de pre-evacuatiekamer begint. Om te beginnen, zet de versnellingsspanning van het elektrische pistool.Verhoog vervolgens de temperatuur van het monster stadium tot min 100 graden Celsius. Wacht enkele minuten tot het vorststof is verwijderd en dat het oppervlak van het ijs in de xylemcellen iets is afgenomen ten opzichte van de celwanden. Dan, lager de temperatuur van de speiumen stadium tot min 120 graden Celsius.In deze studie worden cryo-SEM observatiemethoden gebruikt om de waterverdeling op cellulaire schaal duidelijk te visualiseren. Bij een lage vergroting geeft het zwarte gebied in de beelden de holtes aan waaruit water geheel of gedeeltelijk verdwijnt, terwijl het grijze gebied xylem celwanden, cytoplasma en water aangeeft. Bij hoge vergroting wordt het duidelijk dat het water niet volledig verloren gaat van de lumina van drie tracheids, wat wijst op het optreden van macrobellen in het xylem sap in situ.Met betrekking tot breedbladige soorten, cavitatie voorkomen is gemakkelijk gedetecteerd in vaten, terwijl het water bestaan is moeilijk te onderscheiden binnen vezels, vooral bij een lage vergroting. Cytoplasma en parenchyma cellen kunnen worden onderscheiden van water in tracheids of vaten door middel van ijsvlak texturen. Analyse van het effect van temperatuur op het vriesetsproces laat zien dat vorststof geleidelijk wordt gesublimeerd en en endotracehid pitmembranen duidelijker worden door de progressie van sublimatie met stijgende temperatuur.De resterende grote vorststofdeeltjes kunnen door verdere vries-etsen worden geëlimineerd. Maar dit kan problematisch zijn omdat het onnodig vermindert het oppervlak van ijs in xylem leidingen. De hoge kwaliteit van de waarneming wordt grotendeels bereikt door nauwkeurige specimenvoorbereiding.Vooral het gladstrijken van het oppervlak met het scherpe blad van de microtome is belangrijk. Onvoldoende gladstrijken door een gebruikt mes kan soms leiden tot een ruw oppervlak dat lijkt op mes merken, of kan leiden tot tal van gevallen van stof van de bezuinigingen. Monster bevriezing zonder de ontspanning van negatieve waterkolom druk zal leiden tot artefactuele inductie van cavitatie in xylem leidingen.Geclusterde ijskristallen worden waargenomen in vaten van specimens waar het monster niet was ontspannen. In tegenstelling tot contrasterend worden geen geclusterde ijskristallen waargenomen in de ontspannen monstermonsters met een vergelijkbaar waterpotentieel. De toepassing van vriesfixatie op transpirerende levende planten die lijden aan droogte kan leiden tot resultaat-gebaseerde artefacten zoals geclusterde ijskristallen.Die artefacten leiden tot verkeerde interpretaties van de watertoestand in xylem leiding. Het is dus belangrijk om eerst het waterpotentieel van monsters te bevestigen voordat de vriesfixatie wordt bevestigd. Hoewel deze procedure voorziet in een beeld van welke status in xylem leiding, een levende boom moet worden vernietigd voor de observatie.Het combineren van andere niet-invasieve observatiemethoden zoals MRI of micro-CT met dochteronderneming niveau beeldobservatie zal ons begrip van de aard tussen watertransport en gebruik verdiepen. De observatie van de watertoestand die door dit document wordt geïntroduceerd, zal ook een methode bieden voor de verduidelijking van de relatie van water dat wordt gemengd in cellen en andere anatomische reacties op abiotische of biotische stress. Cryo-SEM uitgerust met energiedispersieve x-ray spectroscopie of top sim zijn gebruikt om elementverdeling over het oppervlak van een monster met water te bestuderen.Het combineren van elementaire analyse en deze procedure in dat soortgelijke frame kan ons diepgaande kennis van de xylem cel gedrag in verband met water status. Bij het gebruik van vloeibare stikstof voor vriesfixatie van monsters in een kamer, vergeet dan niet om de kamer te ventileren om zuurstoftekort te voorkomen.

Research

JoVE Journal

Environment

Laboratory-determined Phosphorus Flux from Lake Sediments as a Measure of Internal Phosphorus Loading

-Laboratorium bepaald Fosfor Flux van het meer van sedimenten als een interne maatregel Fosfor Laden

Eutrophication is a water quality issue in lakes worldwide, and there is a critical need to identify and control nutrient sources. Internal phosphorus (P) ...

Measuring Fluxes of Mineral Nutrients and Toxicants in Plants with Radioactive Tracers

Het meten van stromen van minerale nutriënten en toxische stoffen in planten met radioactieve tracers

Unidirectional influx and efflux of nutrients and toxicants, and their resultant net fluxes, are central to the nutrition and toxicology of plants. ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. I. Collection of Virus Samples

EPA Method 1615. Meting van Enterovirus en Norovirus Voorkomen in water per cultuur en RT-qPCR. I. Het verzamelen van Virus Samples

EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

EPA Method 1615. Meting van Enterovirus en Norovirus Voorkomen in water per cultuur en RT-qPCR. Deel III. Virus Detectie door RT-qPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

How to Create Conditioned Taste Aversion for Grazing Ground Covers in Woody Crops with Small Ruminants

Hoe te Geconditioneerd Taste Afkeer Maak voor beweiding Hoezen in houtgewassen met kleine herkauwers

Conditioned taste aversion (CTA) is a learning behavior process where animals are trained to reject certain feed after gastrointestinal discomfort has ...

Soil Lysimeter Excavation for Coupled Hydrological, Geochemical, and Microbiological Investigations

Soil Lysimeteronderzoek Opgraving voor Gekoppeld Hydrologisch, geochemische en microbiologische Onderzoeken

Studying co-evolution of hydrological and biogeochemical processes in the subsurface of natural landscapes can enhance the understanding of coupled ...

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening op hormonale activiteit in water met behulp van de handel verkrijgbare<em&gt; In Vitro</em&gt; Transactivering Bioassays

In vitro transactivation bioassays have shown promise as water quality monitoring tools, however their adoption and widespread application has been ...

A Lipid Extraction and Analysis Method for Characterizing Soil Microbes in Experiments with Many Samples

Een methode voor de extractie en analyse van lipiden voor het karakteriseren van bodemmicrobollen in experimenten met veel monsters

Microbial communities are important drivers and regulators of ecosystem processes. To understand how management of ecosystems may affect microbial ...

A Simple Planting Technique for Re-establishing Trees Where Frequent Inundation Occurs

Een eenvoudige aanplant techniek voor het opnieuw vaststellen van bomen waar frequente inundatie treedt op

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with ...

Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

Monster voorbereiding methode van scannen en transmissie elektronenmicroscoop voor de aanhangsels van woodboring Kever

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...