Name: a high-throughput shigella-specific bactericidal assay
Uploaded: 2019-02-27T14:00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay at JoVE.com

Эта работа финансировалась за счет гранта от пути к M.H.N. Это исследование было проведено в качестве совместных исследований и разработке соглашения между Walter Reed Army Института исследований и Университет штата Алабама в Бирмингеме.

<ol>
	<li>Riddle, M. S., Sanders, J. W., Putnam, S. D., Tribble, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+etiology,+and+impact+of+diarrhea+among+long-term+travelers+(US+military+and+similar+populations):+a+systematic+review.">Incidence, etiology, and impact of diarrhea among long-term travelers (US military and similar populations): a systematic review.</a> The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 74 (5), 891-900 (2006).</li><li>Tickell, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+management+of+Shigella+infection+in+children+with+diarrhoea:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Identification and management of Shigella infection in children with diarrhoea: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Global Health. 5 (12), e1235-e1248 (2017).</li><li>Livio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shigella+isolates+from+the+global+enteric+multicenter+study+inform+vaccine+development.">Shigella isolates from the global enteric multicenter study inform vaccine development.</a> Clinical Infectious Diseases. 59 (7), 933-941 (2014).</li><li>Barry, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+pitfalls+in+Shigella+vaccine+research.">Progress and pitfalls in Shigella vaccine research.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 10 (4), 245-255 (2013).</li><li>Noriega, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+cross-protection+among+Shigella+flexneri+serotypes.">Strategy for cross-protection among Shigella flexneri serotypes.</a> Infection and Immunity. 67 (2), 782-788 (1999).</li><li>Levine, M. M., Kotloff, K. L., Barry, E. M., Pasetti, M. F., Sztein, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+trials+of+Shigella+vaccines:+two+steps+forward+and+one+step+back+on+a+long,+hard+road.">Clinical trials of Shigella vaccines: two steps forward and one step back on a long, hard road.</a> Nature Reviews Microbiology. 5 (7), 540-553 (2007).</li><li>Sayem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+host+immune+responses+to+epidemic+and+endemic+strains+of+Shigella+dysenteriae+type+I.">Differential host immune responses to epidemic and endemic strains of Shigella dysenteriae type I.</a> Journal of Health Population and Nutrition. 29 (5), 429-437 (2011).</li><li>Rahman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+zinc+supplementation+as+adjunct+therapy+on+the+systemic+immune+responses+in+shigellosis.">Effects of zinc supplementation as adjunct therapy on the systemic immune responses in shigellosis.</a> The American Journal of Clinical Nutrition. 81 (2), 495-502 (2005).</li><li>Nahm, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=interlaboratory+evaluations,+and+application+of+a+simple,+high-throughput+Shigella+serum+bactericidal+assay.">interlaboratory evaluations, and application of a simple, high-throughput Shigella serum bactericidal assay.</a> mSphere. 3 (3), (2018).</li><li>Burton, R. L., Nahm, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+fourfold+multiplexed+opsonization+assay+(MOPA4)+for+pneumococcal+antibodies.">Development and validation of a fourfold multiplexed opsonization assay (MOPA4) for pneumococcal antibodies.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 13 (9), 1004-1009 (2006).</li><li>Tribble, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+immunogenicity+of+a+Shigella+flexneri+2a+Invaplex+50+intranasal+vaccine+in+adult+volunteers.">Safety and immunogenicity of a Shigella flexneri 2a Invaplex 50 intranasal vaccine in adult volunteers.</a> Vaccine. 28 (37), 6076-6085 (2010).</li><li>Kim, H. W., Kim, K. H., Kim, J., Nahm, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+throughput+serum+bactericidal+assay+for+antibodies+to+Haemophilus+influenzae+type+b.">A high throughput serum bactericidal assay for antibodies to Haemophilus influenzae type b.</a> BMC Infectious Diseases. 16, 473 (2016).</li><li>Maslanka, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+and+a+multilaboratory+comparison+of+Neisseria+meningitidis+serogroup+A+and+C+serum+bactericidal+assays.">Standardization and a multilaboratory comparison of Neisseria meningitidis serogroup A and C serum bactericidal assays.</a> The Multilaboratory Study Group. Clinical Diagnostic Laboratory Immunology. 4 (2), 156-167 (1997).</li><li>Jang, M. S., Sahastrabuddhe, S., Yun, C. H., Han, S. H., Yang, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+bactericidal+assay+for+the+evaluation+of+typhoid+vaccine+using+a+semi-automated+colony-counting+method.">Serum bactericidal assay for the evaluation of typhoid vaccine using a semi-automated colony-counting method.</a> Microbial Pathogeneis. 97, 19-26 (2016).</li><li>Necchi, F., Saul, A., Rondini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+high-throughput+method+to+evaluate+serum+bactericidal+activity+using+bacterial+ATP+measurement+as+survival+readout.">Development of a high-throughput method to evaluate serum bactericidal activity using bacterial ATP measurement as survival readout.</a> PLoS One. 12 (2), e0172163 (2017).</li><li>Riddle, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+immunogenicity+of+a+candidate+bioconjugate+vaccine+against+Shigella+flexneri+2a+administered+to+healthy+adults:+a+single+blind,+randomized+phase+I+study.">Safety and immunogenicity of a candidate bioconjugate vaccine against Shigella flexneri 2a administered to healthy adults: a single blind, randomized phase I study.</a> Clinical and Vaccine Immunology. , (2016).</li><li>Shimanovich, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+Antigen-Specific+Serum+Antibody+Levels+as+Correlates+of+Protection+against+Shigellosis+in+a+Controlled+Human+Challenge+Study.">Functional and Antigen-Specific Serum Antibody Levels as Correlates of Protection against Shigellosis in a Controlled Human Challenge Study.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 24 (2), (2017).</li></ol>

R.W.K является сотрудником правительства США и таким образом мнения, выраженные в настоящей публикации являются мнениями авторов и не обязательно отражают официальную политику или координата Департамента армии, министерства обороны, ни правительство США.

Протокол, описанные здесь демонстрирует функциональной иммунной пробирного оценить shigellacidal активности антител в сыворотке крови. В assay продемонстрировал для этого протокол моноклональных антител специфических для S. Флекснера 3а были используемые9 наряду с управления человеческой сыворотки от предыдущих Shigella вакцины исследование11. Источник сыворотки испытания в этот assay может широко варьироваться от доклинические животных образцы человека клинических образцов, и shigellacidal активности сыворотки образца будет затронуто иммунизации и воздействия, которые человек переживает. Некоторые перекрестной реактивности может ожидать между тесно связанных серотипов, специально S. Флекснера 2a и 3a Флекснера S. но мало перекрестной реактивности был замечен в этих штаммов по сравнению с S. sonnei9. Основу SBA фокусируется на активации комплемента Каскад путем связывания антител антигена. Таким образом обработка реагента BRC является одним из многих критических шагов, участвующих в выполнении настоящего Протокола. BRC был выбран для использования в этом assay из-за его стабильную производительность и низкий уровень NSK в других бактерицидных анализов по12,13,14.  Деятельность BRC – температура чувствительных и должны быть соответствующие меры для обеспечения что заморозить циклов сведены к минимуму, что BRC aliquoted на одноместное размещение томов, и что BRC аликвоты оттаяла быстро, непосредственно перед использованием в assay таяния. Согласованность дополнением деятельности повлияет воспроизводимость этот assay. Другой критический шаг, который воздействие пробирного воспроизводимость является производство и разбавления бактериальной запасов. Важно, что перед началом анализа соответствующих разрежения бактериальной запасов определяется, как assay успех в зависимости от последовательного производства элементов A и B имеющие CFU графов в среднем ~ 120 кое на месте. Для того чтобы получить пятна, которые countable программного обеспечения, важно также, что метод, используемый для бактерий пластина выполнена успешно. Осаждение бактериальных решение и наклона пластины, так что места выполнения ~ 2-3 см имеет решающее значение для производства колонии право размер и правильное распределение для точного подсчета Ницца программного обеспечения. Мастеринг все эти шаги будет гарантировать, что точные, последовательные результаты производятся этот протокол
Даже когда все важнейшие шаги выполняются также могут существовать случаи, когда это необходимо для изменения или устранения неполадок Этот протокол. Изменения настоящего протокола для оценки других бактерий может потребоваться оптимизация ночи температуры инкубации пластины LBA, обеспечить формирование микро колоний. Другие штаммы бактерий или антитела источников, отличных от сыворотки, может потребоваться оптимизация дополнением концентрации. NSK ценностей и KIs контроля сывороток также должна контролироваться для обеспечения что assay работает надлежащим образом. NSK следует рост не более 70%. КИ контроля сывороток не должны варьироваться более чем означает ± 2SD. Для достижения успешных и согласованных результатов при использовании данного протокола, будет необходимо выполнить все шаги, как описано здесь, с уделением особого внимания критическим шаги, описанные выше.
Хотя этот протокол заполняет важную потребность в Shigella исследовательского сообщества, это не без его ограничения. Этот протокол основывается на биологических материалов и, таким образом, всегда будут некоторые изменчивости, которую трудно контролировать. Вариации в дополнение деятельности из разных партий и источников может способствовать вариативности в анализов. Чтобы избежать этого, важно правильно обрабатывать дополнением и тестирование новых много дополнения деятельности перед покупкой. Она также может быть полезно для создания пулов дополнением лотов с известной активностью иметь однородную поставок. Этот протокол является простой конструкцией и не требует какого-либо специализированного оборудования и автоматизированных колонии, перечисляя программное обеспечение является свободно доступным. Хотя эта простота является преимуществом, позволяя этот протокол, которые будут использоваться в практически любой лаборатории, она по-прежнему требуют ночь инкубации. Недавние анализы были описаны которые гораздо короче инкубационного требование, но требуют специализированных, подготовительные реагентов15. Другое ограничение этот assay состоит, что в своем нынешнем виде она способна только расследования одного бактериальных видов одновременно. В поле Shigella есть желание создать многовалентных вакцины, и имеющие иммунологические анализы, которые можно оценить патогенов в духе мультиплекс имеет большое значение. Этот assay может быть изменен в будущем, чтобы удовлетворить эту потребность, но в его нынешнем виде, это один plex пробирного.
Хотя этот assay имеет некоторые ограничения, она по-прежнему имеет много преимуществ над существующими или альтернативных методов. Эти преимущества включают в себя множество улучшений, которые объединяются, чтобы сделать выполнение этого метода гораздо менее трудоемкой и более высок объём чем традиционные SBA. Использование замороженных бактериальной запасов, формат пробирного 96-луночных пластины, покрытия на большие площади Петри, окраски колоний, которая позволяет для фотографирования и автоматического подсчета колонии, все помогают сократить материалы и время, необходимое для завершения этого анализа. Этот assay также имеет преимущества перед другими методами высок объём, потому что он не требует никаких специальных реагентов или оборудования. Протокол, в описанный могут быть выполнены с основные реагенты и свободно доступного программного обеспечения, позволяя для его применения в любых условиях лаборатории.
Все преимущества, которые предоставляет этот протокол поддерживает его использование многих будущих расследований. Assay идеально подходит для изучения иммунной реакции после вакцинации или природные инфекции. Это приложение позволяет SBA быть ценным инструментом в исследования в области вакцин, шигеллы и уже используется для оценки иммуногенность вакцины в вакцинах био конъюгат шигеллы , где она продемонстрировала способность этих вакцин для стимулировать производство функциональных антител16. Этот протокол были тщательно протестированы несколькими лабораториями и было показано для получения надежных и воспроизводимых результатов9. Этот протокол также производит сопоставимые результаты, когда же образцы тестируются с помощью других бактерицидных анализов17. Последовательности в данных, генерируемых этот assay, и его совместимости с другими старых методов делает это надежный инструмент для точной оценке бактерицидная активность в образцах сыворотки. Assay также легко могут быть адаптированы для оценки дополнительных образцов типов. В то время как сыворотка легко доступны в взрослых клинических испытаниях, это может быть трудно получить достаточно сыворотки в исследованиях, посвященных младенцев и маленьких детей; один из возможных целевых групп населения Shigella вакцин. В этих испытаниях цельная кровь регулярно собираются на фильтровальной бумаге и сушат. Был некоторые предварительные успех с этим типом типовой формат, используя SBA. В дополнение к цельной крови слизистой образцов (например, слюны, фекальные экстракты и мочи) также являются цели, которая актуальна в исследование вакцин бактерии Shigella . В настоящее время этот протокол был оценен для трех из наиболее клинически значимых серотипов шигеллы , но она также может быть адаптирована для дополнительных Shigella spp., а также других бактериальных патогенов. Будущая работа будет сосредоточена на производстве мультиплекс пробирного многие из те же характеристики, как assay, описанных в настоящем Протоколе. Мультиплексированных пробирного позволит для оценки нескольких серотипов Shigella одновременно, дальнейшее сохранение образца томов и руки на время пробирного. Существует также работа ведется передать этот assay лабораторий по всему миру. Эти глобальные оценки будет генерировать больше данных на отборочный пробу на более широком масштабе исследований, хотя в то же время увеличивая количество микробиологии и иммунологии лабораторий, которые имеют доступ к этой СБА для оценки бактерий и сыворотки образцов собранные из разных мест эндемичных. Описанные здесь проста и высок объём и имеет возможность улучшить иммунологические оценки в поле шигеллы , а также более широкое применение для оценки других бактериальных патогенов.

Шигеллы серотипов, шигеллам Флекснера 2а, 3а S. Флекснера и S. sonnei, демонстрации эпидемиологических распространенности глобально. Диарейных заболеваний вызванных этими Shigella видов воздействия военных, путешественники1и является основной причиной диарейных смерти среди детей в возрасте до 5 лет в развивающихся странах2. Есть в настоящее время не лицензированных вакцин для защиты от шигеллы, однако, есть несколько вакцин на различных этапах развития. Многие из этих вакцин и других профилактических мер в настоящее время в процессе развития, сосредоточить внимание на антитела, вырабатываемые против Shigella липополисахарида (LPS). LPS является привлекательным вакцины-кандидата, потому что это основной поверхностный антиген и природные инфекции с шигеллезом индуцирует LPS-специфические антитела, которые могут быть защитные против повторного заражения серотип конкретным образом. Таким образом успешный Shigella вакцины будет скорее всего нужно быть multi валентных и цели 3-4, которую Shigella серотипов побудить иммунитет против 70-80% глобально циркулирующих штаммов3,4, 5 , 6. это требует, чтобы анализов для оценки вакцин-кандидатов Shigella специфически для нескольких различных серотипов.
Текущий иммунологические анализы для оценки вакцин-кандидатов сосредоточиться на количественной оценки уровня титры антител, но есть несколько хорошо известных анализов для оценки функциональных антител. Изучение функциональной способности антител важно, потому что возбудителя специфические антитела отвечают за борьбу с инфекцией через ряд функциональных механизмов, включая привязки поверхностных антигенов бактерии и предотвращения прилипания к и инфекция эпителиальных клеток, ориентации клетки бактерий или опсонизацию и фагоцитоз и непосредственно убивает привязки и инициирует каскад дополнением патогенов. Прямое уничтожение бактерий антителами происходит, когда антитела связывать поверхности компонентов целевой бактерий и инициировать дополнением Каскад, ведущие к активации многих zymogens, что в конечном итоге результат в порообразования в бактериальных клеток вызывает лизис и бактериальных смерть. Это прямое убийство бактерий, циркулирующих антител и дополнения могут быть важнейшим ранних линию обороны во время инфекции.
Люди естественно инфицированных имеют антитела с shigellacidal активностью в их сера. Эти бактерии Shigella -специфические антитела были обнаружены с помощью традиционных дополнение опосредованной убийство assays 7,8. Это означает, что, возможно, определенную роль для бактерицидной антител в защиту от Shigella. Традиционные бактерицидной анализов просты в их исполнении: Сыворотка инактивированная тепла (чтобы уничтожить эндогенного дополнением деятельности) и смешанные с бактериями интерес. Экзогенные дополнением добавляется к этой смеси на конкретную концентрацию. Реакционную смесь инкубированы для того чтобы позволить для бактериальных убийства и затем покрытием для подтверждения образуя колонии единиц (CFUs). После того, как учитываются CFUs, 50% убийство индекс (KI) может быть рассчитана и SBA титр определено. Хотя эта процедура является относительно простым, эти анализы может быть трудоемким и длительным для выполнения и результаты могут быть крайне непостоянны. Помимо этих ограничений, не хорошо характеризуется функциональных анализов в настоящее время существуют для Shigella. Таким образом мы успешно разработали и квалифицированных простой, высок объём пробирного измерить Shigella бактерицидной активности для трех из наиболее клинически значимых штаммов9. Этот протокол описывает SBA с изменениями, которые повышают эффективность анализа и воспроизводимость. Первым из этих изменений является использование замороженных бактериальных запасов. Производство одноразовых запасов устраняет необходимость культуры свежие бактерии для калибровочных сокращая при этом assay для анализа изменчивости. Другого времени и труда Экономия преимущества этого протокола является использование формата пробирного 96-луночных пластины. Это позволяет для последовательного разбавления проб, так что диапазон концентраций могут быть проверены.  Она также позволяет для использования многоканальных пипеток для обшивки образцы на площади Петри. Когда эти площади Петри используются в сочетании с системой культуры, которая производит микро колоний, уменьшается количество агар пластин, необходимых для анализа. Это, в сочетании с свободно доступного программного обеспечения, подсчета колонии, первоначально разработанный для пневмококковой мультиплексных opsonophagocytic убийство пробирного (МЕПА)10, позволяет для быстрый, автоматизированный и надежный колонии перечисления. Все эти усовершенствования значительно сократить время практического анализа и создание высокой пропускной способности системы, позволяя несколько пластин выполняется одновременно.
Хотя этот протокол был оптимизирован для трех из наиболее клинически значимых серотипов шигеллами, SBA описанные здесь могут легко применяться к многих других бактериальных патогенов. В дополнение к возможности использования настоящего Протокола с другими бактериями этот протокол имеет потенциал, чтобы расширить пределы используя только сыворотки в качестве исходного материала, который может включать в себя анализ антител в других соответствующих образцов типов, таких как слизистая образцы, включая слюны и фекальных проб. Использование этот assay расследовать иммунологические реакции после вакцинации может дать более широкие понимание иммунной реакции, порожденные вакцинации, ведущих к рациональной разработки вакцин, и помощь в понимании как естественный иммунитет развивается.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td>Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td>&#8805;98.0% (HPLC)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide (NaN3)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>&#8805;99.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby Rabbit Complement</td>
			<td>PelFreez</td>
			<td>31061-3</td>
			<td>3-4 week old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS with Ca2+/Mg2+</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>14065-56</td>
			<td>Without Phenol Red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar (Lennox)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2897</td>
			<td>Powder microbial growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>BD</td>
			<td>214010</td>
			<td>Powdered, (C12H18O9)n</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5516</td>
			<td>For molecular biology, &#8805;99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth (Lennox)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L3022</td>
			<td>Powder microbial growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square Petri Dish</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z617679-240EA</td>
			<td>120 mm x 120 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assay Plate</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3799</td>
			<td>96 well u-bottom plate with lid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NICE Software</td>
			<td>University of Alabama at Birmingham</td>
			<td></td>
			<td>ftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-throughput shigella-specific bactericidal assay

Бактерицидная анализы сыворотки (SBAs) измеряют функциональной активности антител и были использованы в течение многих десятилетий. SBA непосредственно измерить активность антител убийства путем оценки способности антител в сыворотке для привязки к бактерии и активировать комплемент. Этот активации комплемента приводит к лизис и уничтожение бактерий целевого объекта. Эти анализы являются ценными, поскольку они выходят за рамки количественного определения антител к разъяснению биологических функций, которые эти антитела, что позволяет исследователям изучить роль, которую антитела могут играть в предотвращении инфекции. SBA были использованы для изучения иммунных реакций для многих патогенов человека, но в настоящее время существует нет общепринятой методологии для Shigella . Исторически SBAs были очень трудоемкий, требующий много времени шаги для точного количественного определения живых бактерий. Этот протокол описывает простой, надежный, и высок объём пробирного что меры функциональных антител, специфичных для шигеллы в сыворотке в пробирке. Метод, описанный здесь предлагает много преимуществ над традиционными SBAs, включая использование замороженных бактериальной запасов, 96 хорошо пробирного плиты, системы микро культура и автоматического подсчета колонии. Все эти изменения делают этот assay, менее трудоемкое и более высокой пропускной способностью. Этот протокол является проще и быстрее выполнять, чем традиционные SBAs пока еще с помощью простых технологий и легко доступных реагентов. Протокол успешно применяется в нескольких независимых лабораториях и анализа надежных и воспроизводимых. Assay может использоваться для оценки иммунного ответа в доклинические, а также клинические исследования. Количественная оценка титры антител shigellacidal, до и после воздействия антигена (либо путем иммунизации или инфекции) позволяет для более широкого понимания как функциональных антител, ответы создаются и их вклад защитного иммунитета. Развитие этого стандартизированы, хорошо изученных пробирного значительно может облегчить Shigella вакцины дизайн.

96-луночных пластины макет, используемый в типичной assay показано в Таблица 1. Эта схема имеет активную дополнение контроля скважин (управления B), тепло инактивированная дополнение контроля скважин (элемент A) и пять образцов в двух экземплярах. Образцы серийно разводили 3 раза вверх пластину от H строки для строки, позволяющий для 8 разведений каждого образца испытываться одновременно. Рисунок 1 показывает две пластины LBA после ночи инкубации и оверлея сложения. Цвет развития имело место и все выжившие колонии отображаются красным цветом. Бактериальные убийство ясно видно для всех образцов в первых трех разведений (строк F-H) и как образцы разводят далее вверх пластину, снижение бактериальной убийство видно где сыворотки менее концентрированным. NICE программного интерфейса можно увидеть на рисунке 2. Микро колонии графов из Ницца программного обеспечения можно увидеть на рисунке 3, и эти отсчеты были организованы в таблице 2. Среднее количество кое для каждого разведения каждого образца вычисляется и значение KI 50% в таблице 3. Это значение 50% KI может применяться к усредненной CFUs для каждого разведения сыворотки для определения значения, необходимые для расчета KI УМБ по формуле, описанные на рис. 4. Окончательный результат анализа показана в таблице 4.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>3</td>
			<td>4</td>
			<td>5</td>
			<td>6</td>
			<td>7</td>
			<td>8</td>
			<td>9</td>
			<td>10</td>
			<td>11</td>
			<td>12</td>
		</tr>
<tr>
<td>A</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
			<td>Разбавление 8</td>
		</tr>
<tr>
<td>B</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
			<td>Разбавление 7</td>
		</tr>
<tr>
<td>C</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
			<td>Разбавление 6</td>
		</tr>
<tr>
<td>D</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
			<td>Разрежения 5</td>
		</tr>
<tr>
<td>E</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
			<td>Разбавление 4</td>
		</tr>
<tr>
<td>F</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
			<td>Разбавление 3</td>
		</tr>
<tr>
<td>G</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
			<td>Разбавление 2</td>
		</tr>
<tr>
<td>H</td>
			<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
			<td>Разбавления 1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td colspan="2">Пример 1</td>
			<td colspan="2">Пример 2</td>
			<td colspan="2">Пример 3</td>
			<td colspan="2">Пример 4</td>
			<td colspan="2">Пример 5</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1: Assay пластины макета. Колонки 1 и 2 содержат дополнение контроля скважин. Управления A расположен в колонке 1 и тепло инактивированная дополнять элемент управления, содержащий буфер SBA, бактерий и тепло инактивированная дополнения. Управления B расположен в колонке 2 и активной дополнять элемент управления, содержащий буфер SBA, бактерий и дополнения. Столбцы 3-12 содержат образцы сыворотки. Каждый образец выполняется в повторяющихся и серийно разреженных 3 раза из строки H для строки A
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59164/59164fig1.jpg"> Рисунок 1: LBA пластины после разработки цвет. Представитель S. Флекснера 3a микро колонии бактерий на ночь выросли до соответствующего размера. Был добавлен оверлей агар и колониях разработали красный цвет путем уменьшения TTC комплекса в агар оверлея. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59164/59164fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59164/59164fig2.jpg"> Рисунок 2: НИСТ интерфейс программного обеспечения комплексной перечислитель колонии (Ницца). Графическое представление NICE программного интерфейса. Регионы интереса (ROI) сосредоточены над колониями для каждого пятна до подсчета. Данные могут быть экспортированы непосредственно из окна хороший. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59164/59164fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59164/59164fig3.jpg"> Рисунок 3: LBA плиты подсчитанных в Ницца программного обеспечения. Цветные фотографии изображения загружаются в Ницца программного обеспечения и автоматически подсчитываются колонии формируя единиц (CFUs). Это изображение показывает два представителя LBA пластины с их колонии количество информации. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59164/59164fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>185</td>
			<td>167</td>
			<td>145</td>
			<td>151</td>
			<td>122</td>
			<td>134</td>
			<td>119</td>
			<td>142</td>
			<td>124</td>
			<td>115</td>
			<td>113</td>
			<td>123</td>
			<td>1:17496</td>
			<td>Разбавление 8</td>
		</tr>
<tr>
<td>186</td>
			<td>152</td>
			<td>145</td>
			<td>138</td>
			<td>132</td>
			<td>135</td>
			<td>108</td>
			<td>116</td>
			<td>100</td>
			<td>119</td>
			<td>105</td>
			<td>109</td>
			<td>1:5832</td>
			<td>Разбавление 7</td>
		</tr>
<tr>
<td>179</td>
			<td>160</td>
			<td>145</td>
			<td>135</td>
			<td>109</td>
			<td>120</td>
			<td>54</td>
			<td>55</td>
			<td>71</td>
			<td>75</td>
			<td>79</td>
			<td>89</td>
			<td>1:1944</td>
			<td>Разбавление 6</td>
		</tr>
<tr>
<td>193</td>
			<td>153</td>
			<td>146</td>
			<td>138</td>
			<td>87</td>
			<td>105</td>
			<td>5</td>
			<td>6</td>
			<td>6</td>
			<td>9</td>
			<td>19</td>
			<td>30</td>
			<td>1:648</td>
			<td>Разрежения 5</td>
		</tr>
<tr>
<td>184</td>
			<td>129</td>
			<td>121</td>
			<td>143</td>
			<td>6</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1:216</td>
			<td>Разбавление 4</td>
		</tr>
<tr>
<td>180</td>
			<td>145</td>
			<td>22</td>
			<td>24</td>
			<td>2</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>1: 72</td>
			<td>Разбавление 3</td>
		</tr>
<tr>
<td>207</td>
			<td>129</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>4</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>1:24</td>
			<td>Разбавление 2</td>
		</tr>
<tr>
<td>201</td>
			<td>140</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>4</td>
			<td>4</td>
			<td>1:8</td>
			<td>Разбавления 1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td colspan="2">Пример 1</td>
			<td colspan="2">Пример 2</td>
			<td colspan="2">Пример 3</td>
			<td colspan="2">Пример 4</td>
			<td colspan="2">Пример 5</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 2: количество бактериальных колоний. КОЕ графов экспортируются из Ницца программного обеспечения в excel формат. Эти счетчики могут быть организованы в таблицу, бактериальных подсчитывает все дубликаты проб и контроль скважины.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Элемент управления элемент</td>
			<td>Управление B</td>
			<td>148</td>
			<td>128</td>
			<td>131</td>
			<td>120</td>
			<td>118</td>
			<td>1:17496</td>
			<td>Разбавление 8</td>
		</tr>
<tr>
<td>189</td>
			<td>147</td>
			<td>142</td>
			<td>134</td>
			<td>112</td>
			<td>110</td>
			<td>107</td>
			<td>1:5832</td>
			<td>Разбавление 7</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">NSK (1-CtrB/CtrA): 22%</td>
			<td>140</td>
			<td>115</td>
			<td>55</td>
			<td>73</td>
			<td>84</td>
			<td>1:1944</td>
			<td>Разбавление 6</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">50% KI (CtrB/2): 73</td>
			<td>142</td>
			<td>96</td>
			<td>6</td>
			<td>8</td>
			<td>25</td>
			<td>1:648</td>
			<td>Разрежения 5</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>132</td>
			<td>7</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1:216</td>
			<td>Разбавление 4</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>23</td>
			<td>3</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>1: 72</td>
			<td>Разбавление 3</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>3</td>
			<td>1</td>
			<td>1:24</td>
			<td>Разбавление 2</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>4</td>
			<td>1:8</td>
			<td>Разбавления 1</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>Пример 1</td>
			<td>Пример 2</td>
			<td>Пример 3</td>
			<td>Пример 4</td>
			<td>Пример 5</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 3: расчет пороговое значение 50% KI и дублировать образец средние. Пороговое значение 50% ки рассчитывалась путем среднее всех управления B скважин и деления на 2. Для каждого разведения каждого образца, который был выполнен в двух экземплярах были рассчитаны средние дубликатов. Также вычисляется значение NSK.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59164/59164fig4.jpg"> Рисунок 4: схема линейной интерполяции. Количество живых бактерий (ось y) на каждого разведения сыворотки испытания (ось x) печать (бриллианты), и отдельные точки соединены тонкой, пунктирная черная линия. Сплошная и пунктирная горизонтальные линии указывают на 0% и 50% убийств, соответственно. Разведения сыворотки выше (разрежения 5) и ниже (разбавления 4) 50% убийство линии соединены красной линией, и указывается бактерицидный титр (KI). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59164/59164fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>SBA KI</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пример 1</td>
			<td>72</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пример 2</td>
			<td>216</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пример 3</td>
			<td>1994</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пример 4</td>
			<td>1994</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пример 5</td>
			<td>648</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 4: SBA результаты показаны бактерицидный титр (KI). Конечные значения SBA KI были определены для каждого образца и показаны. Эти значения вычисляются с помощью средняя CFUs, пороговое значение 50% KI и формулы линейной интерполяции.

Watch this Scientific Journal Video about A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay at JoVE.com

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Здесь мы представляем протокол для измерения активности Shigellacidal антител в сыворотке крови. Сыворотка смешивается с бактериями и экзогенные дополнением, инкубировали, и реакционную смесь покрытием на плитах агара. Жизнеспособные бактерии образуют колоний, которые подсчитываются, используя перечислитель автоматизированных колонии и используется для определения бактерицидный титр.

Высок объём шигеллезом-конкретные бактерицидной Assay

Serum bactericidal assays (SBAs) measure the functional activity of antibodies and have been used for many decades. SBAs directly measure antibody killing ...

Научно-исследовательская область Шигелла в настоящее время не имеет четко определенных анализов для изучения функциональной роли антител, генерируемых иммунизацией или инфекцией. Этот анализ представляет собой четко определенный метод, чтобы квалифицировать эти иммунные реакции и измерения бактерицидной активности Shigella конкретных антител. Основным преимуществом этого анализа является то, что он позволяет провести высокий пропускной анализ нескольких образцов.Методы, используемые в этом протоколе значительно сократить практическое время и общее время анализа для измерения прямого бактериального убийства антител и образцов сыворотки. Для начала инкубируйте образцы в теплой водяной бане при температуре 56 градусов по Цельсию в течение 30 минут, чтобы нагреть и активировать тестовые образцы. Получить анализ пластины и 20 микролитров анализа буфера для столбцов от одного до двенадцати строк через G.Add 20 микролитров анализа буфера для столбцов один и два строки H.Load 30 микролитров каждого образца теста и дублировать строку H анализа пластины.Для начала трехкратного последовательного разбавления тестовых образцов используйте многоканарную пипетку для удаления 10 микролитров из скважин 3H до 12H. Передача образцов в соответствующие скважины подряд G и пипетки вверх и вниз от 8 до 10 раз, чтобы смешать образец хорошо. Затем удалите из этих скважин 10 микролитров.Передача в соответствующие скважины подряд F и пипетки вверх и вниз от 8 до 10 раз, чтобы смешать. Продолжить этот серийный процесс разбавления через ряд A.After смешивания скважин подряд, удалить и отбросить 10 микролитров из скважин 3A через 12A, так что окончательный объем во всех скважинах составляет 20 микролитров. Получить один флакон замороженных целевых бактериальных запасов и разморозить его при комнатной температуре.Затем разбавьте бактерии в 20 миллилитров буфера анализа. в соответствии с предопределенным оптимальным фактором разбавления. Используя многоканарный пипетку, добавьте 10 микролитров разбавленных бактерий к каждому колодец анализной пластины.Получить один флакон замороженных Baby Кролик Комплимент и один флакон замороженного тепла активирован BRC. Используйте холодную проточной водой, чтобы разморозить флаконы до комнатной температуры. Затем смешайте 100 микролитров активированного тепла BRC с 400 микролитров буфера анализа.Добавьте 50 микролитров этого 20-процентного теплового активированного раствора BRC ко всем скважинам в столбце один. Смешайте один миллилитр родного BRC с четырьмя миллилитров анализа буфера. Добавьте 50 микролитров этой 20-процентной смеси ко всем скважинам в столбцах от двух до двенадцати.Поместите тарелку один шейкер пластины в течение 10 до 15 секунд, чтобы аккуратно смешать анализ пластины. Инкубировать анализ пластины в микробиологическом инкубаторе в течение двух часов. Между тем, удалить крышки из двух пластин LB Агар и поместите пластины лицом вверх в шкаф биологической безопасности в течение 40 до 60 минут, чтобы высохнуть.Когда инкубация завершена, перенесите анализную пластину на мокрый лед и инкубировать в течение 10-20 минут, чтобы остановить реакцию. Используя 12 каналов пипетки, смешать скважины в ряд H и пятно пластины 10 микролитров реакционной смеси на дно пластины LBA. Немедленно наклоните пластину и дайте пятнам пробежать от 1,5 до 2 сантиметров.Повторите эту процедуру для строк G, F и E, заметив их выше предыдущего ряда. Инкубировать пластины LBA при комнатной температуре до тех пор, пока раствор не впитается в пластины LBA. Затем положите крышки на пластины и перенесите их вверх дном в микробиологический инкубатор, чтобы инкубировать на ночь.На следующий день добавьте 25 миллилитров наложения Агара при 55 градусах по Цельсию, содержащих 100 микрограмм на миллилитр ТТК и 0,1 процента азида натрия к каждой пластине LBA. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение двух часов, чтобы позволить выживших бактерий развивать красный цвет. Затем используйте цифровую камеру для фотографирования пластин.Перенесите изображения на компьютер и используйте программное обеспечение NIST integrated Colony Enumerating для анализа изображений, изложенных в текстовом протоколе. Представитель пластин LBA демонстрирует, что развитие цвета произошло после ночного инкубации и добавления наложения, при этом все оставшиеся в живых колонии были видны красным цветом. Бактериальное убийство хорошо видно для всех образцов, протестированных в первых трех разбавлениях.Снижение бактериального убийства рассматривается как образцы разбавляются дальше вверх по пластине и сыворотка менее концентрированной. Микроколонии затем выполняются с помощью программного обеспечения NIST. Затем рассчитывается среднее количество CFU для каждого разбавления каждой выборки, а также 50-процентное значение убийства.Это 50-процентное значение убийства затем применяется к средним CFUs для каждого разбавления сыворотки, чтобы определить значения, необходимые для расчета SBA KI. Этот протокол опирается на последовательное и равномерное бактериальное покрытие на LB Auger. Хорошее точечное покрытие и техника наклона позволят обеспечить рост дискретных микроколоний и точного подсчета колоний. Этот метод использует живую вирулентную шигеллу и требует соответствующей асептической техники и СИЗ, чтобы обеспечить безопасное обработание бактерий в соответствии с процедурами BSL 2.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A High-throughput Shigella-specific Bactericidal Assay

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

Количественные высокой пропускной Single-клеточной цитотоксичности анализа для Т-клеток

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

A Microscopic Phenotypic Assay for the Quantification of Intracellular Mycobacteria Adapted for High-throughput/High-content Screening

Микроскопический фенотипический анализ для количественной оценки внутриклеточных микобактерий, адаптированных для скрининга с высокой пропускной способностью/высоким содержанием

Despite the availability of therapy and vaccine, tuberculosis (TB) remains one of the most deadly and widespread bacterial infections in the world. Since ...

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

Высокая пропускная Анализ фенотипу<em&gt; Salmonella enterica</em&gt; Typhimurium Ассоциация, Нашествие, и репликации в макрофагах

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

Высокая пропускная способность Количественный реальном времени RT-PCR анализа для определения профилей экспрессии типов I и III интерферона подтипов

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

High-throughput Gene Tagging in Trypanosoma brucei

Высокая пропускная способность гена Tagging в<em&gt; Trypanosoma brucei</em

Improvements in mass spectrometry, sequencing and bioinformatics have generated large datasets of potentially interesting genes. Tagging these proteins ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Высокая пропускная способность Обнаружение респираторными патогенами в образцах животных с помощью наноразмерных ПЦР

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

Флуоресцентным на основе анализа Лимфоцит Подходит для высокопроизводительного скрининга малых молекул

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

Высокая пропускная способность Совместимость анализа для оценки эффективности против наркотиков пассировать макрофагов<em&gt; Микобактерии туберкулеза</em

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to ...

Cell-free Biochemical Fluorometric Enzymatic Assay for High-throughput Measurement of Lipid Peroxidation in High Density Lipoprotein

Ячейки бесплатно биохимических флуориметрический ферментативные Assay высок объём измерения перекисного окисления липидов в липопротеинов высокой плотности

Low high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels are one of the most powerful independent negative predictors of atherosclerotic cardiovascular ...

A High-throughput, High-content, Liquid-based C. elegans Pathosystem

A High-throughput, High-content, Liquid-based C. elegans Pathosystem

Высокой пропускной способностью, высоким содержанием, на основе жидкости C. elegans Pathosystem

The number of new drugs identified by traditional, in vitro screens has waned, reducing the success of this approach in the search for new weapons to ...