Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

وقد دعمت هذه الدراسة من قبل المنح المقدمة من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81804116، 81673991، 81770107، 81603643، و 81330085)، وبرنامج الفريق المبتكر، وزارة العلوم والتكنولوجيا في الصين (2015RA4002 إلى WYJ)، وبرنامج فريق مبتكر، وزارة التعليم في الصين (IRT1270 إلى WYJ)، مركز شنغهاي الطبي للأمراض المزمنة (2017ZZ01010 إلى WYJ)، عمل ثلاث سنوات لتسريع تطوير خطة الطب الصيني التقليدي (ZY(2018-2020)-CCCX-3003 إلى WYJ)، و المشاريع الوطنية الرئيسية لتطوير البحوث (2018YFC1704302).

وقد أجريت جميع الإجراءات التجريبية بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لجامعة شنغهاي التابعة للجنة TCM (SZY201604005).
1. إعداد وإدارة حل العمل GSK
<ol><li>حساب الجرعات المكافئة من حبيبات GSK للماوس.<ol>
<li>حساب سطح الجسم استناداً إلى معادلة Meeh-Rubner15: سطح الجس?...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

حبيبات وكلاء TCM أصبحت واحدة من الخيارات المشتركة للتركيبات أو الوصفات الطبية. وتتكون حبيبات GSK من العديد من الأدوية العشبية على أساس التجارب السريرية أو نظرية TCM, وأنها تمارس آثار علاجية أفضل مع آثار جانبية أقل4. بالمقارنة مع ديكوتيون المياه، وحبيبات لديها هذه المزايا: الذوق ا?...

الطب الصيني التقليدي (TCM) هو واحد من النهج التكميلية والبديلة الهامة لعلاج هشاشة العظام1،2. ديكوتيون المياه هو الشكل الأساسي والأكثر استخداما من الصيغة3. ومع ذلك، توجد عيوب أيضا: سوء الذوق، وإزعاج النقل، وقصر مدة الصلاحية والبروتوكولات غير المتسقة، والحد من الاستخدامات، فضلا عن الآثار العلاجية. لتجنب العيوب المذكورة أعلاه، فضلا عن متابعة آثار أفضل، تم تطوير حبيبات واستخدمت على نطاق واسع4. على الرغم من أن العديد من الدراسات قد استكشفت الآليات الدوائية لواحد أو أكثر من المكونات الفعالة من حبيبات5و6و7، والآليات الدقيقة والعمليات الدوائية الكامنة لا تزال من الصعب تحديدها. وذلك لأن الكثير من المكونات الفعالة من حبيبات واحدة قد تمارس في وقت واحد آثار مماثلة أو معارضة4. ولذلك، فإن وضع بروتوكول قياسي واحد لإعداد حبيبات قبل تسليمها إلى الجسم ليس فقط سيكون لها تأثير كبير على النتائج العلاجية ولكن مطلوب أيضا لكل من الاختبارات في الجسم الحي وفي المختبر.
وعلاوة على ذلك، فإن الآثار العلاجية للحبيبات في العيادة من الصعب تأكيد وتحديد بالضبط باستخدام في المختبر أو الدراسات الخارجية، مما يخلق تحديا لأن الآليات الدوائية معقدة للغاية. لحل هذه المشكلة، تم اقتراح إعداد المصل الذي يحتوي على المخدرات لأول مرة من قبل Tashino في الثمانينات8. ومنذ ذلك الحين، طبق العديد من الباحثين المصل المحتوي على الأدوية على الأدوية العشبية، بما في ذلك حبيبات9و10و11 . وفي الوقت الراهن، يعتبر اختيار المصل المحتوي على المخدرات للتحقيقات في المختبر استراتيجية واحدة تحاكي الظروف الفسيولوجية عن كثب.
تم تطوير حبيبات Gushukang (GSK) لعلاج هشاشة العظام بعد انقطاع الطمث (POP) على أساس الممارسة السريرية في ضوء نظرية TCM. حبيبات GSK منع فقدان العظام في الفئران المبيض (OVX) في الجسم الحي، وتمنع ارتشاف العظامالعظمية، وتحفيز تشكيل العظام osteoblastic 4. وبالتالي، وجد لي وآخرون12 أن حبيبات GSK لها آثار وقائية على العظام في الفئران OVX عن طريق تعزيز أنشطة مستقبلات الكالسيوم لتحفيز تشكيل العظام. لتأكيد آثار حماية العظام، فضلا عن الآثار الدوائية من حبيبات GSK، والمؤلفين هنا توفير إجراء مفصل لإعداد حلول العمل والمخدرات (GSK الحبيبية) التي تحتوي على المصل. وعلاوة على ذلك، تصف هذه المقالة تطبيق حبيبات GSK في نموذج الماوس العظمي المستحث OVX والمصل الذي يحتوي على حبيبات GSK في المختبر osteoclastogenes/ osteoblastogenes.
وتتكون حبيبات GSK من العديد من الأعشاب13،14 ويمكن حلها تماما في المالحة بسهولة. لذلك، المالحة بمثابة السيارة. وكانت الفئران التي تديرها الشام (الشام) وفئران OVX تدار بنفس حجم الفئران المالحة التي تديرها الفئران الحبيبية. تم حساب الجرعات المكافئة من حبيبات GSK للماوس على أساس معادلة Meeh-Rubner15. هذه المعادلة ليس فقط لديه ميزة الحصول على جرعات آمنة ولكن أيضا يضمن الآثار الدوائية15. تم إنشاء الجرعات الثلاث من حبيبات GSK على النحو التالي: (1) GSKL: OVX + حبيبات GSK جرعة منخفضة، 2 غرام / كغ / يوم. (2) GSKM: OVX + جرعة متوسطة حبيبات GSK، 4 غرام / كغ / يوم. (3) GSKH: OVX + جرعة عالية من حبيبات GSK، 8 غرام / كغ / يوم. وكانت الفئران في مجموعات GSKL وGSKM و GSKH حبيبات GSK تدار داخل المعدة. كربونات الكالسيوم (600 ملغ / قرص) مع فيتامين D3 (125 وحدة دولية / قرص)، على سبيل المثال، في منتج ناضجة وتسويقها (على سبيل المثال، Caltrate [CAL]) لعلاج والوقاية من هشاشة العظام، واستخدمت كسيطرة إيجابية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

يلعب الطب العشبي الصيني التقليدي دورًا كطريقة بديلة في علاج العديد من الأمراض، مثل هشاشة العظام بعد انقطاع الطمث (POP). الحبيبات Gushukang (GSK)، وصفة طبية تسويقها في الصين، لها آثار واقية من العظام في علاج POP. قبل الإدارة إلى الجسم، هناك حاجة عادة إلى إجراء إعداد معيار واحد، والذي يهدف إلى تعزيز الإفراج عن المكونات النشطة من الأعشاب الخام وتعزيز الآثار الدوائية، فضلا عن النتائج العلاجية. تقترح هذه الدراسة بروتوكولمفصل لاستخدام حبيبات GSK في الاختبارات التجريبية في الجسم الحي وفي المختبر. يقدم المؤلفون أولاً بروتوكولاً مفصلاً لحساب الجرعات المناسبة للحيوانية من حبيبات في التحقيق في الجسم الحي: وزنها، حل، تخزين، والإدارة. ثانياً، تصف هذه المقالة بروتوكولات المسح المقطعي الدقيق وقياس معلمات العظام. وتم تقييم إعداد العينات، وبروتوكولات لتشغيل آلة التصوير المقطعي المحوسب الدقيقة، والتحديد الكمي لبارامترات العظام. ثالثا، يتم إعداد حبيبات GSK التي تحتوي على المصل، ويتم استخراج المصل الذي يحتوي على المخدرات لنشأة العظام في المختبر وأوستيولاستوجينيسيس. كانت حبيبات GSK داخل المعدة تدار مرتين في اليوم للفئران لمدة ثلاثة أيام متتالية. ثم تم جمع الدم، والطرد المركزي، وتعطيل، وتصفيتها. وأخيرا، تم تخفيف المصل واستخدامها لإجراء تكوين العظام وosteoblastogenes. يمكن اعتبار البروتوكول الموضح هنا مرجعًا للتحقيقات الدوائية للأدوية العشبية الموصوفة، مثل حبيبات.

وأشارت نتائج المسح المقطعي الدقيق إلى أن فئران OVX أظهرت خسارة كبيرة في العظام مقارنة بفئران التحكم المالحة (الشكل1A). التدخل (90 يوما) من حبيبات GSK زيادة كبيرة في BMD، لا سيما في مجموعة GSKM (الشكل1B). تم تحديد معايير هيكل العظام، مثل BMD، BV/TV، Tb.N، وTb.T...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

توفر هذه المقالة بروتوكول مفصل لإعداد حل عمل من حبيبات Gushukang للدراسات الحيوانية وحبيبات GSK التي تحتوي على المصل للتجارب في المختبر. ويمكن تطبيق هذا البروتوكول على التحقيقات الدوائية للأدوية العشبية، فضلا عن الوصفات الطبية لكل من التجارب الحية والمختبرية.

إعداد حبيبات غوشوكانغ (GSK) للتجارب في الجسم الحي وفي المختبر

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

هذا البروتوكول مرافق إعداد حل عمل من حبيبات لفي دراسات الجسم الحي، فضلا عن إعداد مصل تحتوي على حبيبات للتجارب في المختبر. إحدى مزايا هذه التقنية هي أن الطريقة يمكن تكرارها بسهولة بسبب انخفاض تكلفة المواد والحيوانات التي تنشئها للتجارب. تبدأ بإضافة ثمانية، 16، و 24 غراما من غوشوكانغ، أو GSK، حبيبات إلى أنابيب فردية 50 ملليلتر.إضافة 48 ملليلتر من الماء إلى كل أنبوب، وتهز الأنابيب إلى حل الحبيبات تماما. ثم، ضع 1.6 حبة من كربونات الكالسيوم المكملة بفيتامين D3 في أنبوب آخر 50 ملليلتر، وقم بحل الأقراص في 48 ملليلتر من المالحة مع اهتزاز. لإدارة داخل المعدة من الحلول، أولا بلطف ولكن بحزم يدويا كبح جماح شهر واحد من العمر، أنثى، C57 الأسود 6 الماوس لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق.عندما هدأ الماوس، تحميل 40 ملليمتر، وعدد 12 إبرة gavage مع 0.24 ملليلتر من حل واحد يعمل من حبيبات GSK، ووضع إبرة gavage في الماوس من خلال جانب واحد من فمه حتى يتم الشعور المقاومة إبرة، مما يدل على أن الإبرة قد وصلت إلى المعدة. حقن كامل حجم حل العمل في الحيوان. ثم، تراجع إبرة gavage، والعودة الماوس إلى قفصه بينما يتم إعطاء الفئران الأخرى GSK قبل حقن 0.24 ملليلتر من كربونات الكالسيوم وفيتامين D3 حل في كل فأرة بنفس الطريقة.لجمع الدم المحتوي على GSK ، بعد تسليم التركيزات المناسبة من GSK إلى جرذ من قبل gavage كما هو موضح للتو ، تؤكد عدم الاستجابة لقرصة إصبع قدمه بعد ساعة واحدة من إدارة حبيبات GSK الأخيرة. جعل الجلد البطني وشق البريتوني، وفضح البطن إلى الجزء السفلي من الصدر. استخدم ورق الأنسجة لإزالة النسيج الضام من الشريان الأورطي البطني لفضح الوعاء بشكل واضح، واستخدم حقنة 10 ملليلتر مجهزة بإبرة من عيار 22 لسحب الدم من الشريان الأورطي.نقل الدم إلى أنبوب 15 ملليلتر معقمة، ووضع أنبوب تستقيم في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 إلى 60 دقيقة. عندما تتخثر الدم، الطرد المركزي أنبوب لفصل المصل، ونقل كل من المصل لمدة تصل إلى ستة فئران في أنبوب جديد 50 ملليلتر. هز الأنبوب لخلط سيرا قبل تعطيل مكونات المصل في حمام مائي 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.ثم، تصفية المصل من خلال 0.22 ميكرومتر المسامية البولي ثيرسولفون مرشح حقنة لتخزين في ناقص 80 درجة مئوية لمدة تصل إلى عام. لـ في المختبر العظمي، تمييع الجرعات الثلاث من مصل يحتوي على GSK بنسبة واحد إلى أربعة مع الحد الأدنى المتوسط النسر تستكمل مع L-الجلوتامين، ريبونوكليوسيدات، وديوكسيريبونوكليوسيد. أضف 200 ميكرولترات من كل تخفيف إلى كل بئر من ثقافة الضامة نخاع العظم في لوحة 96 جيدا.ثم, بدء توليد أوستيوكلات من خلال تحفيز كل بئر مع عامل الضامة المحفزة مستعمرة والمستقبِل للمُستقبِل للعامل النووي-كابا B ligand. لـ في المختبرات العظمية، أضف ملليلترين من المصل المخفف المحتوي على GSK إلى كل بئر من 24 بئرًا لثقافة الخلايا الجذعية النخاعية للعظم 24 بئرًا. تشير نتائج المسح المقطعي المحوسبة الدقيقة إلى أن الفئران ذات المتغيرات المُجَزَعَة تُظهر فقدانًا كبيرًا للعظام مقارنة بفئران التحكم بالملوحة المالحة.التدخل مع 90 يوما من العلاج الحبيبية GSK يزيد كثيرا من كثافة نخاع العظام، وخاصة في جرعة متوسطة GSK الحيوانات المعالجة. كما يؤدي علاج حبيبات GSK إلى زيادة عدد العظام البرمية ، وحجم العظام على الحجم الإجمالي ، وسمك العظام الترابلية ، ولكن انخفاض فصل العظام الترابلية للعظام. phosphatase حمض طرطرات المقاومة، أو TRAP، تلطيخ يكشف عن زيادة في عدد العظام في الفئران ovariectomized بالمقارنة مع الحيوانات التحكم، في حين أن العلاجات حبيبات GSK تقليل تمايز OSTeoclast TRAP إيجابية بالمقارنة مع الحيوانات ovariectomized.كما يقلل المصل المحتوي على حبيبات GSK من عدد العظام الإيجابية TRAP مقارنة بالمصل الذي تم جمعه من الحيوانات الخاضعة للتحكم. إن الاختراق الناجح للإبرة في الشريان الأورطي البطني أمر بالغ الأهمية لضمان حصاد كمية كبيرة بما يكفي من الدم من كل فأر. وينبغي أن يؤدي التنفيذ الناجح لهذه الطريقة إلى تخصيص تراكم 15 إلى 20 ملليمترا من الدم، وهو ما يكفي من المواد لاستخدامها في التجارب المختبرية.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخليوي

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

التحقق من Nanobody والجسم المضاد القائم<em&gt; في فيفو</em&gt; التجارب ورم طعم أجنبي NIRF التصوير في الفئران عن طريق<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; التدفق الخلوي والميكروسكوب

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

تحليل الأمثل ل<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; كبدي تشحم

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف ممغنط مير تعديل الخلايا البطانية

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

إعداد الأدوية العشبية: إير-زيان ديكوتيون و إير-زيان التي تحتوي على مصل ل<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; التجارب

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

في المختبر و في فيفو كشف ميتوفاجي في الخلايا البشرية، ايليجانس جيموالفئران

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

استخدام مسرّع خطي لإجراء تجارب البيولوجيا الإشعاعية في المختبر

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...