Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation i Kina (81804116, 81673991, 81770107, 81603643, og 81330085), programmet for innovative team, Ministeriet for videnskab og teknologi i Kina (2015RA4002 til WYJ), programmet for Innovativt team, Undervisningsministeriet i Kina (IRT1270 til WYJ), Shanghai TCM Medical Center for kronisk sygdom (2017ZZ01010 til WYJ), tre år handling for at fremskynde udviklingen af traditionel kinesisk medicin plan (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 til WYJ), og nationale nøgle forsknings udviklingsprojekter (2018YFC1704302).

Alle de eksperimentelle procedurer blev udført med godkendelse af institutionel Animal Care og brug udvalg af Shanghai University of TCM (SZY201604005).
1. klargøring og administration af GSK'S arbejds løsning
<ol><li>Beregn de ækvivalente doser af GSK granulat til mus.<ol>
<li>Beregn legemsoverflade baseret på Meeh-Rubner ligningen15: legemsoverflade = k x (legemsvægt2/3)/1000, hvor K-værdierne er 10,6 for mennesker og 9,1 for mus. Under forudsætning af en menn...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

Granulat af TCM agenter er blevet en af de fælles valg for formuleringer eller recepter. GSK granulat er sammensat af flere plantelægemidler baseret på kliniske erfaringer eller TCM teori, og de udøver bedre helbredende virkninger med færre bivirkninger4. Sammenlignet med vand afkog, granulatet har disse fordele: god smag, bekvemmelighed levering, langsigtet opbevaring, standardprotokol og konsekvente helbredende virkninger, samt højere produktivitet. I øjeblikket, granulat er en af de mest...

Traditionel kinesisk medicin (TCM) er en af de vigtige komplementære og alternative tilgange til behandling af osteoporose1,2. Vand afkog er den grundlæggende og mest almindeligt anvendte form af formlen3. Men, ulemper findes også: dårlig smag, ulejlighed for transport, kort holdbarhed og inkonsekvente protokoller, begrænse anvendelser samt helbredende virkninger. For at undgå de ovennævnte ulemper samt at forfølge bedre effekter, granulat blev udviklet og har været almindeligt anvendt4. Selv om mange undersøgelser har undersøgt de farmakologiske mekanismer af en eller flere effektive komponenter fra granulatet5,6,7, er de nøjagtige mekanismer og underliggende farmakologiske processer stadig vanskeligt at identificere. Dette skyldes, at for mange effektive komponenter fra et granul kan samtidig udøve lignende eller modsatrettede effekter4. Derfor vil udviklingen af en standardprotokol til klargøring af granulatet før levering til kroppen ikke kun have en stor indvirkning på de terapeutiske resultater, men er også påkrævet for både in vivo-og in vitro-assays.
Desuden er de helbredende virkninger af granulat i klinikken vanskeligt at bekræfte og præcist identificere ved hjælp af in vitro-eller ex vivo-undersøgelser, hvilket skaber en udfordring, fordi de farmakologiske mekanismer er for komplekse. For at løse dette blev forberedelsen af et stof indeholdende serum først foreslået af Tashino i 1980 ' erne8. Fra da af, talrige forskere anvendt stof-holdige serum til urtemedicin, herunder granulat9,10,11. I øjeblikket er valget af lægemiddel indeholdende serum til in vitro-undersøgelser betragtes som en strategi, der nøje efterligner fysiologiske forhold.
Gushukang (GSK) granulat blev udviklet til behandling af postmenopausale osteoporose (POP) baseret på klinisk praksis i lyset af teorien om TCM. GSK granulat forhindrer knogletab i ovariectomized (OVX) mus in vivo, hæmmer osteoklastisk knogleresorption, og stimulere osteoblastisk knogledannelse4. Derfor fandt Li et al.12 , at GSK granulat har knogle beskyttende virkninger i ovx mus ved at øge aktiviteterne af calcium receptor til at stimulere knogledannelse. For at bekræfte knogle beskyttende virkninger samt de farmakologiske virkninger af GSK granulat, forfatterne her giver en detaljeret procedure for udarbejdelse af arbejds løsninger og narkotika (GSK granule)-indeholdende serum. Desuden beskriver denne artikel anvendelsen af GSK granulat i en OVX-induceret osteoporotisk musemodel og GSK granule-holdige serum for in vitro osteoclastogenesis/osteoblastogenesis.
GSK granulat er sammensat af flere urter13,14 og kan helt opløses i saltvand nemt. Derfor, saltvand fungerer som køretøjet. Sham-opererede mus (Sham) og OVX-mus blev administreret med den samme mængde saltvand som de granule-administrerede mus. De ækvivalente doser af GSK granulat til mus blev beregnet på grundlag af Meeh-Rubner ligningen15. Denne ligning ikke kun har den fordel at opnå sikker doser, men også garanterer farmakologiske virkninger15. De tre doser af GSK granulat blev genereret som følger: (1) GSKL: OVX + lav-dosis GSK granulat, 2 g/kg/dag. (2) GSKM: OVX + medium-dosis GSK granulat, 4 g/kg/dag. (3) GSKH: OVX + højdosis GSK granulat, 8 g/kg/dag. Mus i GSKL, GSKM og GSKH grupper blev intragastrisk administreret GSK granulat. Calciumcarbonat (600 mg/tablet) med vitamin D3 (125 International enhed/Tablet), for eksempel i et modent og markedsført produkt (f. eks. Caltrat [CAL]) til behandling og forebyggelse af osteoporose, blev anvendt som en positiv kontrol.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

Traditionel kinesisk urtemedicin spiller en rolle som en alternativ metode til behandling af mange sygdomme, såsom postmenopausale osteoporose (POP). Gushukang (GSK) granulat, en markedsført recept i Kina, har knogle beskyttende virkninger i behandling af POP. Før administration til kroppen er en standard forberedelsesprocedure almindeligt påkrævet, som har til formål at fremme frigivelsen af aktive bestanddele fra rå urter og forbedre de farmakologiske virkninger samt terapeutiske resultater. Denne undersøgelse foreslår en detaljeret protokol for anvendelse af GSK granulat i in vivo og in vitro eksperimentelle undersøgelser. Forfatterne først give en detaljeret protokol til at beregne dyret passende doser af granulat til in vivo undersøgelse: vejning, opløsning, opbevaring, og administration. For det andet, denne artikel beskriver protokoller for mikro-CT-scanning og måling af knogle parametre. Prøveforberedelse, protokoller for kørsel af mikro-CT-maskine og kvantificering af knogle parametre blev evalueret. Tredje, serum-holdige GSK granulat er tilberedt, og stof-holdige serum ekstraheres for in vitro osteoclastogenesis og osteoblastogenesis. GSK granulat blev intragastrisk administreret to gange pr. dag til rotter i tre på hinanden følgende dage. Blodet blev derefter indsamlet, centrifugeret, inaktiveret og filtreret. Endelig blev serum fortyndet og anvendt til at udføre osteoclastogenesis og osteoblastogenesis. Den protokol, der er beskrevet her, kan betragtes som en reference for farmakologiske undersøgelser af plantelægemidler, såsom granulat.

Resultaterne af mikro-CT-scanning indikerede, at OVX-musene viste signifikant knogletab sammenlignet med salt kontrolmus (figur 1a). Den intervention (90 dage) af GSK granulat i høj grad øget BMD, især i GSKM gruppen (figur 1b). Knoglestruktur parametrene, såsom BMD, BV/TV, TB. N og Tb.Th, blev kvantificeret. GSK granulet behandlinger førte til øget BMD, BV/TV, TB. N og Tb.Th, men faldt TB. SP (figur 1c...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Denne artikel indeholder en detaljeret protokol til forberedelse af en arbejdsopløsning af Gushukang granulat til dyreforsøg og GSK granulat indeholdende serum til in vitro eksperimenter. Denne protokol kan anvendes på farmakologiske undersøgelser af plantelægemidler samt recepter for både in vivo-og in vitro-forsøg.

Klargøring af Gushukang (GSK) granulat til in vivo-og in vitro-forsøg

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

Denne protokol omfatter fremstilling af en arbejdsopløsning af granulat til in vivo-studier samt fremstilling af granulatholdigt serum til in vitro-forsøg. En fordel ved denne teknik er, at metoden let kan gentages på grund af de lave omkostninger ved materialerne og de dyr, du opretter til forsøgene. Begynd med at tilføje otte, 16 og 24 gram Gushukang, eller GSK, granulat til de enkelte 50-milliliter rør.Tilsæt 48 milliliter vand til hvert rør, og ryst rørene til helt at opløse granulatet. Derefter anbringes 1,6 tabletter calciumcarbonat suppleret med D3-vitamin i et andet 50-milliliterrør, og tabletterne opløses i 48 milliliter saltvand med omrystning. Til intragastrisk administration af opløsningerne, først forsigtigt, men fast manuelt begrænse en en måned gammel, kvinde, C57 Black 6 mus i to til tre minutter.Når musen er faldet til ro, skal du lægge en 40-millimeter, nummer 12 sondenål med 0,24 milliliter en arbejdsopløsning af GSK-granulat, og placere sondenålen i musen gennem den ene side af munden, indtil nålemodstanden kan mærkes, hvilket indikerer, at nålen har nået maven. Indsprøjt hele arbejdsopløsningen i dyret. Træk derefter sondenålen tilbage, og vend musen tilbage til buret, mens de andre mus administreres GSK, før du injicerer 0,24 milliliter calciumcarbonat og D3-vitaminopløsning i hver mus på samme måde.For GSK-holdige blodserum, efter at have leveret de relevante koncentrationer af GSK til en rotte ved sonde som netop påvist, bekræftes manglende respons på tåspidsspidsen en time efter den sidste GSK-granulatadministration. Lav en abdominal hud og bughinde indsnit, og udsætte maven til bunden af brystkassen. Brug silkepapir til at fjerne bindevævet i abdominal aorta at udsætte fartøjet tydeligt, og bruge en 10-milliliter sprøjte udstyret med en 22-gauge nål til at trække blod fra aorta.Overfør blodet til et sterilt 15-milliliterrør, og anslå røret oprejst ved stuetemperatur i 30 til 60 minutter. Når blodet er størknet, centrifugerøret til at adskille serum, og overføre alle serum for op til seks rotter i en ny 50-milliliter rør. Ryst røret for at blande seraen, før serumkomponenterne inaktiveres i et 56-graders Celsius-vandbad i 30 minutter.Derefter filtreres serum gennem et 0,22 mikrometer-pore-størrelse hydrofile polyethersulfon sprøjte filter til opbevaring ved minus 80 grader Celsius i op til et år. For in vitro osteoklastogenese fortyndes de tre doser GSK-holdige serum i et en-til-fire forhold med minimum Eagle's medium suppleret med L-glutamin, ribonucleosides og deoxyribonucleosides. Tilføj 200 mikroliter af hver fortynding til hver brønd af en knoglemarv makrofag kultur i en 96-brønd plade.Derefter indlede osteoklast generation ved at stimulere hver brønd med makrofag koloni-stimulerende faktor og receptor aktivator for nuklear faktor-kappa B ligand. For in vitro osteoblastogenese tilsættes to milliliter fortyndet GSK-holdige serum til hver brønd af en 24-brønd plade knogle mesenkymal stamcellekultur. Mikro-computertomografi scanning resultater viser, at ovariectomized mus demonstrere betydelige knogletab i forhold til saltvand kontrol mus.Intervention med 90 dages GSK-granulatbehandling øger i høj grad knoglemarvstætheden, især i mellemdosis GSK-behandlede dyr. GSK granulat behandling fører også til en øget trabecular knogle nummer, knogle volumen over det samlede volumen, og trabekulære knogletykkelse, men en nedsat knogle-trabecular knogle separation. Tartratresistent syre fosfatase, eller TRAP, farvning afslører en stigning i antallet af osteoklaster i ovariectomized mus i forhold til kontrol dyr, mens GSK granulat behandlinger mindske TRAP-positive osteoklast differentiering i forhold til ovariectomized dyr.GSK granulatholdigt serum reducerer også antallet af TRAP-positive osteoklaster sammenlignet med serum indsamlet fra kontroldyr. Den vellykkede indtrængen af nålen i abdominal aorta er afgørende for at sikre, at en høj nok volumen blod er høstet fra hver rotte. En vellykket udførelse af denne metode bør tildele ophobning af 15 til 20 millimeter blod, nok materiale, der skal anvendes til in vitro eksperimenter.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MR for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsåren infusioner farmakokinetisk og farmakodynamisk analyse af Taxaner i mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluere effektiviteten af ​​Cancer Drug Sensibilisering<em&gt; In vitro</em&gt; Og<em&gt; In Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validering af Nanobody og antistofbaserede<em&gt; In Vivo</em&gt; Tumor xenograft NIRF-imaging Forsøg på mus ved brug<em&gt; Ex vivo</em&gt; Flowcytometri og mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Udtømning af Mouse Celler fra Humane tumorxenoplantater Markant Forbedrer Downstream Analyse af Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimeret Analyse af<em&gt; In vivo</em&gt; og<em&gt; In vitro</em&gt; Nedsat Steatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

fremstilling og<em&gt; In vitro</em&gt; Karakterisering af Magnetized miR-modificerede endotelceller

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Forberedelse af urtemedicin: Er-Xian Decoction og Er-Xian-indeholdende Serum for<em&gt; In vivo</em&gt; Og<em&gt; In Vitro</em&gt; Eksperimenter

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro og In Vivo påvisning af Mitophagy i humane celler, C. Elegansog mus

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Anvendelse af en lineær accelerator til udførelse in vitro radiobiologi eksperimenter

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...