Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Deze studie werd gesteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (81804116, 81673991, 81770107, 81603643 en 81330085), het programma voor innovatief team, ministerie van Wetenschappen en technologie van China (2015RA4002 naar WYJ), het programma voor Innovatief team, ministerie van onderwijs van China (IRT1270 naar WYJ), Shanghai TCM Medical Center van chronische ziekte (2017ZZ01010 naar WYJ), drie jaar actie om de ontwikkeling van de traditionele Chinese geneeskunde plan (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 naar WYJ) te versnellen, en nationale belangrijke onderzoeks-ontwikkelingsprojecten (2018YFC1704302).

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité van de Shanghai Universiteit van TCM (SZY201604005).
1. voorbereiding en toediening van de werkoplossing van GSK
<ol><li>Bereken de equivalente doses van GSK granulaat voor muis.<ol>
<li>Bereken het lichaamsoppervlak op basis van de Meeh-Rubner vergelijking15: lichaamsoppervlak = K x (lichaamsgewicht2/3)/1000, waarbij de K-waarden 10,6 zijn voor de me...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

Korrels van TCM agenten zijn uitgegroeid tot een van de gemeenschappelijke keuzes voor formuleringen of recepten. GSK-korrels zijn samengesteld uit verschillende kruidengeneesmiddelen op basis van klinische ervaringen of de TCM-theorie, en ze oefenen betere curatieve effecten uit met minder bijwerkingen4. Vergeleken met water afkooksel hebben de korrels deze voordelen: goede smaak, gemak van levering, lange termijn opslag, standaardprotocol en consistente curatieve effecten, evenals een hogere pro...

Traditionele Chinese geneeskunde (TCM) is een van de belangrijke complementaire en alternatieve benaderingen voor de behandeling van osteoporose1,2. Water afkooksel is de basis en meest gebruikte vorm van de formule3. Echter, nadelen bestaan ook: slechte smaak, ongemak voor het vervoer, korte houdbaarheid en inconsistente protocollen, beperken van het gebruik, evenals de curatieve effecten. Om te voorkomen dat de bovenstaande nadelen en om te streven naar betere effecten, korrels werden ontwikkeld en zijn op grote schaal gebruikt4. Hoewel veel studies hebben onderzocht de farmacologische mechanismen van een of meer effectieve componenten uit de korrels5,6,7, de exacte mechanismen en onderliggende farmacologische processen zijn nog steeds moeilijk te identificeren. Dit komt doordat te veel effectieve componenten uit één korrel gelijktijdig vergelijkbare of tegengestelde effecten4kunnen uitoefenen. Daarom zou de ontwikkeling van een standaardprotocol om de korrels voor te bereiden voordat het aan het lichaam wordt gegeven, niet alleen een grote invloed hebben op de therapeutische resultaten, maar is het ook nodig voor zowel in vivo als in vitro testen.
Bovendien zijn de curatieve effecten van granulaat in de kliniek moeilijk te bevestigen en exact te identificeren met behulp van in vitro-of ex vivo-studies, wat een uitdaging creëert omdat de farmacologische mechanismen te complex zijn. Om dit op te lossen, de voorbereiding van drug-bevattende serum werd voor het eerst voorgesteld door Tashino in de jaren 19808. Vanaf dat moment, talrijke onderzoekers toegepast drug-bevattende serum aan kruidengeneeskunde, met inbegrip van korrels9,10,11. Momenteel wordt de keuze van het medicijn bevattende serum voor in-vitro onderzoeken beschouwd als één strategie die de fysiologische omstandigheden nauwlettend nabootst.
Gushukang (GSK) granulaat werd ontwikkeld om postmenopauzale osteoporose (POP) te behandelen op basis van de klinische praktijk in het licht van de theorie van de TCM. GSK-korrels voorkomen botverlies bij muizen met ovariectomized (OVX) in vivo, remmen osteoclastische botresorptie en stimuleren osteoblastische botvorming4. Bijgevolg constateerden Li et al.12 dat GSK-korrels botbeschermende effecten in ovx-muizen hebben door de activiteiten van de calcium receptor te verbeteren om botvorming te stimuleren. Om de botbeschermende effecten en de farmacologische effecten van GSK-korrels te bevestigen, bieden de auteurs hier een gedetailleerde procedure voor de bereiding van werkoplossingen en geneesmiddelen (GSK-granule) die serum bevatten. Bovendien beschrijft dit artikel de toepassing van GSK-korrels in een OVX-geïnduceerde osteoporotische Mouse-model en GSK-granule-bevattende serum voor in vitro osteoclastogenese/osteoblastogenese.
GSK korrels zijn samengesteld uit verschillende kruiden13,14 en kunnen volledig worden opgelost in zoutoplossing gemakkelijk. Daarom dient Saline als het voertuig. Sham-bediende muizen (Sham) en OVX-muizen werden dezelfde hoeveelheid zoutoplossing toegediend als de met korrels toegediende muizen. De equivalente doses van GSK korrels voor de muis werden berekend op basis van de Meeh-Rubner vergelijking15. Deze vergelijking heeft niet alleen het voordeel van het verkrijgen van veilige doseringen, maar garandeert ook farmacologische effecten15. De drie doseringen van GSK-korrels werden als volgt gegenereerd: (1) GSKL: OVX + low-dose GSK granulaat, 2 g/kg/dag. (2) GSKM: OVX + middel-dosis GSK korrels, 4 g/kg/dag. (3) GSKH: OVX + hoge dosis GSK-korrels, 8 g/kg/dag. Muizen in de GSKL-, GSKM-en GSKH-groepen waren intragastrisch toegediende GSK-korrels. Calcium carbonaat (600 mg/tablet) met vitamine D3 (125 internationale eenheid/Tablet), bijvoorbeeld in een volwassen en op de markt gebracht product (bijvoorbeeld Caltraat [CAL]) voor de behandeling en preventie van osteoporose, werd gebruikt als een positieve controle.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

Traditionele Chinese kruidengeneeskunde speelt een rol als een alternatieve methode bij de behandeling van vele ziekten, zoals postmenopauzale osteoporose (POP). Gushukang (GSK) korrels, een op de markt gebrachte recept in China, hebben bot-beschermende effecten in de behandeling van POP. Vóór toediening aan het lichaam, een standaard voorbereidingsprocedure is vaak nodig, die tot doel heeft de vrijlating van actieve bestanddelen van rauwe kruiden bevorderen en verbeteren van de farmacologische effecten, alsmede therapeutische uitkomsten. In deze studie wordt een gedetailleerd protocol voorgesteld voor het gebruik van GSK-korrels in in-vivo-en in-vitro-experimentele testen. De auteurs geven eerst een gedetailleerd protocol voor het berekenen van de dier geschikte doseringen van korrels voor in vivo onderzoek: wegen, oplossen, opslag en administratie. Ten tweede worden in dit artikel de protocollen voor micro-CT-scans en de meting van botparameters beschreven. Monstervoorbereiding, protocollen voor het uitvoeren van de micro-CT-machine en kwantificering van botparameters werden geëvalueerd. Ten derde worden serum bevattende GSK-korrels bereid en wordt het geneesmiddel bevattende serum geëxtraheerd voor in vitro osteoclastogenese en osteoblastogenese. GSK-korrels werden gedurende drie opeenvolgende dagen tweemaal per dag intragastrisch toegediend aan ratten. Vervolgens werd bloed verzameld, gecentrifugeerd, geïnactiveerd en gefilterd. Ten slotte werd serum verdund en gebruikt voor het uitvoeren van osteoclastogenese en osteoblastogenese. Het hier beschreven protocol kan worden beschouwd als een referentie voor farmacologische onderzoeken van geneesmiddelen op kruiden voorschrift, zoals korrels.

Micro-CT-scanresultaten gaven aan dat de OVX-muizen significant botverlies vertoonden in vergelijking met zout bestrijdings muizen (Figuur 1a). De interventie (90 dagen) van GSK-korrels heeft de BMD sterk verhoogd, met name in de GSKM-groep (Figuur 1b). De parameters van de botstructuur, zoals BMD, BV/TV, TB. N en Tb.Th, werden gekwantificeerd. De submodules van GSK leidden tot verhoogde BMD, BV/TV, TB. N en Tb.Th, maar daalden m...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Dit artikel bevat een gedetailleerd protocol voor de voorbereiding van een werkoplossing van Gushukang granulaat voor dierproeven en GSK-submodule die serum voor in vitro experimenten bevat. Dit protocol kan worden toegepast op farmacologische onderzoeken van kruidengeneesmiddelen, alsmede op recepten voor zowel in vivo als in vitro experimenten.

Bereiding van Gushukang (GSK) granulaat voor in vivo en in vitro experimenten

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

Dit protocol voorschrijft de voorbereiding van een werkoplossing van korrels voor in vivo studies, evenals de bereiding van korrelhoudend serum voor in vitro experimenten. Een voordeel van deze techniek is dat de methode gemakkelijk kan worden herhaald vanwege de lage kosten van de materialen en de dieren die u maakt voor de experimenten. Begin met het toevoegen van acht, 16 en 24 gram Gushukang, of GSK, korrels aan individuele 50-milliliter buizen.Voeg 48 milliliter water toe aan elke buis en schud de buizen om de korrels volledig op te lossen. Plaats vervolgens 1,6 tabletten calciumcarbonaat aangevuld met vitamine D3 in nog eens 50 milliliter buis, en los de tabletten op in 48 milliliter zout met schudden. Voor intragastrische toediening van de oplossingen, eerst voorzichtig maar stevig handmatig een een maand oude, vrouwelijke, C57 Black 6 muis gedurende twee tot drie minuten.Wanneer de muis is gekalmeerd, laad een 40-millimeter, nummer 12 gavage naald met 0,24 milliliter van een werkende oplossing van GSK korrels, en plaats de gavage naald in de muis door een kant van zijn mond totdat de naald weerstand wordt gevoeld, wat aangeeft dat de naald heeft bereikt de maag. Injecteer het volledige volume van de werkoplossing in het dier. Trek vervolgens de gavageaald in en breng de muis terug naar zijn kooi, terwijl de andere muizen GSK worden toegediend voordat ze op dezelfde manier 0,24 milliliter calciumcarbonaat en vitamine D3-oplossing in elke muis injecteren.Voor GSK-bevattende bloedserum verzameling, na het leveren van de juiste concentraties van GSK aan een rat door gavage zoals net aangetoond, bevestigen een gebrek aan reactie op teen pinch een uur na de laatste GSK korrel toediening. Maak een buikhuid en buikvliesincisie, en bloot de buik aan de onderkant van de thorax. Gebruik tissuepapier om het bindweefsel van de abdominale aorta te verwijderen om het vat duidelijk bloot te leggen en gebruik een spuit van 10 milliliter die is uitgerust met een naald van 22 meter om bloed uit de aorta te halen.Breng het bloed naar een steriele buis van 15 milliliter en plaats de buis 30 tot 60 minuten rechtop bij kamertemperatuur. Wanneer het bloed is geklonterd, centrifugeer de buis om het serum te scheiden, en breng al het serum voor maximaal zes ratten in een nieuwe 50-milliliter buis. Schud de buis om de sera te mengen voordat u de serumcomponenten gedurende 30 minuten in een waterbad van 56 graden Celsius in activeert.Vervolgens filtert u het serum door een hydrofiele polyethersulfonespuitfilter van 0,22 micrometer-grootte voor een huidig polyetherfonefilter voor opslag bij min 80 graden Celsius gedurende maximaal een jaar. Voor in vitro osteoclastogenese verdun je de drie doseringen GSK-bevattende serum bij een één-op-vier-verhouding met minimaal Eagle's medium aangevuld met L-glutamine, ribonucleose en deoxyribonucleoseiden. Voeg 200 microliter van elke verdunning toe aan elke put van een beenmergmacrophagecultuur in een 96-putplaat.Dan, initiëren osteoclast generatie door het stimuleren van elke put met macrofaag kolonie-stimulerende factor en receptor activator voor nucleaire factor-kappa B ligand. Voor in vitro osteoblasogenese, voeg twee milliliter verdund GSK-bevattend serum toe aan elke put van een 24-well plaat bot mesenchymale stamcelcultuur. Micro-computertomografie scanresultaten geven aan dat ovariectomized muizen aantonen aanzienlijk botverlies in vergelijking met zoutbeheersing muizen.Interventie met 90 dagen GSK-korrelbehandeling verhoogt de beenmergdichtheid sterk, met name bij gsk-behandelde dieren met gemiddelde dosis. GSK granulaat behandeling leidt ook tot een verhoogd trabeculair botnummer, bot volume over het totale volume, en trabeculaire botdikte, maar een verminderde bot-trabecular botscheiding. Tartraatbestendige zuurfosfatase, of TRAP, vlekken blijkt een toename van het aantal osteoclasten in ovariectomized muizen in vergelijking met controledieren, terwijl GSK korrel behandelingen verminderen TRAP-positieve osteoclast differentiatie in vergelijking met de ovariectomized dieren.GSK granulaathoudend serum vermindert ook het aantal TRAP-positieve osteoclasten in vergelijking met serum verzameld van controledieren. De succesvolle penetratie van de naald in de abdominale aorta is van cruciaal belang om te garanderen dat een hoog genoeg volume bloed wordt geoogst van elke rat. Een succesvolle uitvoering van deze methode moet de accumulatie van 15 tot 20 millimeter bloed toe wijzen, genoeg materiaal om te worden gebruikt voor in vitro experimenten.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MRI voor mobiele Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halsslagader Infusions voor farmacokinetische en farmacodynamische analyse van Taxanen in Muizen

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Het evalueren van de effectiviteit van Cancer Drug Overgevoeligheid<em&gt; In Vitro</em&gt; En<em&gt; In Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validatie van Nanobody en antilichamen gebaseerde<em&gt; In Vivo</em&gt; Tumor Xenograft NIRF-imaging Experimenten op muizen, waarbij<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Flowcytometrie en Microscopie

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Uitputting van de Muis Cellen van geënte, humane tumoren verbetert Downstream Analyse van Target Cellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Geoptimaliseerd Analyse van<em&gt; In Vivo</em&gt; en<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

voorbereiding en<em&gt; In Vitro</em&gt; Karakterisering van Magnetische miR-gemodificeerde endotheelcellen

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Voorbereiding van kruidengeneeskunde: Er-Xian Decoction en Er-Xian-Serum voor<em&gt; In Vivo</em&gt; En<em&gt; In Vitro</em&gt; Experimenten

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro en In Vivo opsporing van Mitophagy in menselijke cellen, C. Elegansen muizen

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Gebruik van een lineaire versneller voor het uitvoeren van in vitro radiobiologie experimenten

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...