Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

מחקר זה היה נתמך על ידי מענקים הלאומי המדע הטבעי הקרן של סין (81804116, 81673991, 81770107, 81603643, ו 81330085), התוכנית עבור צוות חדשני, משרד המדע וטכנולוגיה של סין (2015RA4002 כדי WYJ), התוכנית עבור צוות חדשני, משרד החינוך של סין (IRT1270 to WYJ), שנגחאי TCM מרכז רפואי של מחלה כרונית (2017ZZ01010 to WYJ), שלוש שנים פעולה כדי להאיץ את ההתפתחות של תוכנית הרפואה הסינית המסורתית (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 כדי WYJ), ו פרויקטים של פיתוח מחקר מפתח לאומי (2018YFC1704302).

כל ההליכים הניסיוניים בוצעו עם אישור של טיפול בעלי חיים מוסדיים וועדת השימוש של אוניברסיטת שנגחאי של TCM (SZY201604005).
1. הכנה ואדמיניסטרציה של פתרון העבודה של GSK
<ol><li>לחשב את המינון המקביל של גרגרי GSK לעכבר.<ol>
<li>חישוב משטח הגוף מבוסס על משוואת Meeh-Rubner15: משטח הגוף = K x (הגוף משקל...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

גרגירים של סוכני TCM הפכו לאחת הבחירות הנפוצות עבור ניסוחים או מרשמים. גרגירים GSK מורכבים מספר תרופות צמחיות מבוסס על חוויות קליניות או התיאוריה TCM, והם להפעיל אפקטים מרפא טוב יותר עם פחות תופעות לוואי4. לעומת decoction מים, הגרגירים יש יתרונות אלה: טעם טוב, נוחות של משלוח, אחסון לטווח...

הרפואה הסינית המסורתית (TCM) היא אחת מגישות משלימות וחלופיות חשובות לטיפול באוסטאופורוזיס1,2. רתח מים היא הצורה הבסיסית הנפוצה ביותר של הנוסחה3. עם זאת, החסרונות קיימים גם: טעם רע, אי נוחות לתובלה, חיי מדף קצרים פרוטוקולים לא עקביים, הגבלת השימושים, כמו גם את ההשפעות המרפא. כדי למנוע את החסרונות הנ ל, כמו גם לשאוף להשפעות טובות יותר, הגרגירים פותחו והיה בשימוש נרחב4. למרות מחקרים רבים חקרו את מנגנוני הפרמקולוגית של רכיבים יעילים אחד או יותר מן הגרגירים5,6,7, המנגנון המדויק תהליכים תרופתי הבסיסי עדיין קשה לזהות. הסיבה לכך היא שרכיבים יעילים יותר מדי מגרריר אחד עשויים להפעיל בו השפעות דומות או מנוגדים4. לכן, ההתפתחות של פרוטוקול רגיל אחד כדי להכין את הגרגירים לפני האספקה לגוף לא רק תהיה השפעה רבה על התוצאות הטיפוליות, אלא גם נדרש עבור שניהם בvivo וגם מבחנה.
יתר על כן, את ההשפעות המרפא של גרגירים במרפאה קשה לאשר ולזהות בדיוק באמצעות לימודי חוץ גופית או לשעבר vivo, אשר יוצר אתגר כי מנגנוני הפרמקולוגית מורכבים מדי. כדי לפתור את זה, הכנת סרום המכיל סמים הוצע לראשונה על ידי טסטינוב שנות ה-80. מכאן והלאה, חוקרים רבים מיושמים סרום המכיל תרופות לצמחי מרפא, כולל גרגירים9,10,11. כיום, הבחירה של סרום המכיל תרופות לחקירות מבחנה נחשבת כאסטרטגיה אחת הקרובה מחקה את התנאים הפיזיולוגיים.
גושוקאנג (GSK) בגרגרים פותחו לטיפול באוסטאופורוזיס בגיל המעבר (POP) מבוסס על פרקטיקה קלינית לאור התאוריה של TCM. גרגירים GSK למנוע אובדן העצם ב ovariectomized (OVX) עכברים ב vivo, לעכב את העצם האוסטאופתית ספיגת עצמות, ולעורר osteoblastic עצם היווצרות4. כתוצאה מכך, לי ואח '12 מצאו כי גרגירים gsk יש השפעות מגן העצם ב ovx עכברים על ידי שיפור הפעילות של קולטן סידן כדי לעורר את היווצרות העצם. כדי לאשר את ההשפעות העצם מגן, כמו גם את ההשפעות הפרמקולוגית של גרגרי GSK, המחברים כאן לספק הליך מפורט להכנת פתרונות עבודה ותרופות (granule)-המכיל סרום. יתר על כן, מאמר זה מתאר את היישום של בגרגרים GSK במודל עכבר osteoporotic המושרה ו GSK מכיל סרום לתוך מבחנה מחוץ למבחנה/אוסטאופהסטובגנזה.
גרגרי gsk מורכבים מכמה צמחי מרפא13,14 והוא יכול להיות מומס לחלוטין בקלות מלוחים. לכן, תמיסת מלח משמשת כרכב. עכברים מופעלים (שאם) ועכברים OVX היו בעלי אותו נפח של תמיסת מלח כמו עכברים מנוהל. המינון המקביל של גרגרי GSK עבור העכבר חושבו על בסיס משוואת Meeh-Rubner15. משוואה זו לא רק יש את היתרון של קבלת מינונים בטוחים אלא גם ערבויות השפעות פרמקולוגית15. שלושת המינונים של גרגרים GSK נוצרו כדלקמן: (1) GSKL: OVX + מינון נמוך בגרגרים GSK, 2 g/ק"ג/יום. (2) GSKM: OVX + בינוני מינון בגרגרים GSK, 4 ג'/ק"ג/יום. (3) GSKH: OVX + מינון גבוה בגרגרים GSK, 8 ג'/ק"ג/יום. עכברים בקבוצות GSKL, GSKL ו GSKL היו intragastrically מנוהלים בגרגרים GSK. סידן פחמתי (600 mg/tablet) עם ויטמין D3 (125 יחידה בינלאומית/tablet), למשל, במוצר בוגר ומשווק (g., Caltrate [CAL]) לטיפול ומניעת אוסטאופורוזיס, שימש כשליטה חיובית.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

צמחי מרפא סיניים מסורתיים ממלאים תפקיד כשיטה חלופית בטיפול במחלות רבות, כגון אוסטאופורוזיס בגיל המעבר (POP). Gushukang (GSK) בגרגרים, מרשם משווק בסין, יש השפעות מגן העצם בטיפול POP. לפני המינהל לגוף, אחד הליך ההכנה הסטנדרטי נדרש בדרך כלל, אשר מטרתו לקדם את שחרורו של המרכיבים הפעילים מצמחי מרפא גולמיים ולשפר את ההשפעות תרופתי, כמו גם תוצאות טיפוליות. מחקר זה מציע פרוטוקול מפורט עבור שימוש בגרגרים GSK ב vivo ו ניסיוני מחוץ לבית הספר. המחברים מספקים תחילה פרוטוקול מפורט לחישוב המינונים המתאימים לבעלי חיים של גרגירים בחקירה vivo: שקילה, המסת, אחסון ואדמיניסטרציה. שנית, מאמר זה מתאר פרוטוקולים עבור סריקת מיקרו-CT ומדידת פרמטרי העצם. הכנה לדוגמה, פרוטוקולים להפעלת מכונת מיקרו-CT וכימות של פרמטרי עצם הוערכו. שלישית, סרום, המכיל גרגרי GSK מוכנים, והסרום המכיל תרופות מופק עבור בתוך מבחנה ואוסטאופלסטובגנזה. גרגרי GSK היו intragastrically מנוהל פעמיים ביום לחולדות במשך שלושה ימים רצופים. בלאד נאסף לאחר מכן, מcentrifuged, מופעל ומסונן. לבסוף, הסרום היה מדולל ומשמש לביצוע אוסטאופלסטובגנזה ואוסטאופהסטובגנזה. הפרוטוקול המתואר כאן יכול להיחשב התייחסות לחקירות תרופתי של תרופות מרשם צמחים, כגון גרגירים.

תוצאות סריקת מיקרו-CT הראו כי העכברים OVX הראו אובדן עצם משמעותי לעומת עכברים שליטה מלוחים (איור 1A). ההתערבות (90 ימים) של גרגרי GSK הגדילה מאוד את BMD, במיוחד בקבוצת GSKM (איור 1B). הפרמטרים של מבנה העצם, כגון BMD, BV/TV, Tb. N, ו Tb.Th, היו כמותית. הטיפולים הגרתי?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

מאמר זה מספק פרוטוקול מפורט להכנת פתרון העבודה של בגרגרים gushukang עבור לימודי בעלי חיים, גרגר עושה המכיל סרום עבור ניסויים מבחנה. פרוטוקול זה ניתן להחיל על חקירות תרופתי של תרופות צמחיות, כמו גם מרשמים הן בvivo והן בניסויים מבחנה.

הכנת הגרגירים של גושוקאנג (GSK) בגרגרים בVivo ובניסויים חוץ-גופית

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

פרוטוקול זה מתקנים את הכנת פתרון עבודה של גרגירי למחקרים in vivo, כמו גם הכנת סרום המכיל גרגירה לניסויים במבחנה. אחד היתרונות של טכניקה זו הוא כי השיטה יכולה לחזור בקלות בשל העלות הנמוכה של החומרים ואת בעלי החיים שאתה יוצר עבור הניסויים. התחל על ידי הוספת שמונה, 16, ו 24 גרם של Gushukang, או GSK, גרגירי צינורות בודדים 50 מיליליטר.מוסיפים 48 מיליליטר מים לכל צינור, ומנערים את הצינורות כדי להמיס לחלוטין את הגרגריים. לאחר מכן, מניחים 1.6 טבליות של סידן פחמתי בתוספת ויטמין D3 לתוך צינור אחר 50 מיליליטר, ולהמיס את הטבליות ב 48 מיליליטר של מלוחים עם רועד. עבור ניהול תוך-אורגזמי של הפתרונות, תחילה בעדינות אך באופן ידני לרסן בן חודש, נקבה, C57 שחור 6 עכבר במשך שתיים עד שלוש דקות.כאשר העכבר נרגע, לטעון מחט 40 מילימטר, מספר 12 gavage עם 0.24 מיליליטר של פתרון עבודה אחד של גרגירי GSK, ולמקום את מחט gavage לתוך העכבר דרך צד אחד של הפה שלה עד עמידות המחט מורגש, המציין את המחט הגיעה לקיבה. להזריק את כל נפח פתרון העבודה לתוך החיה. לאחר מכן, לסגת מחט gavage, ולהחזיר את העכבר לכלוב שלה בעוד העכברים האחרים מנוהלים GSK לפני הזרקת 0.24 מיליליטר של סידן פחמתי וויטמין D3 פתרון לתוך כל עכבר באותו אופן.עבור GSK המכיל אוסף סרום דם, לאחר אספקת הריכוזים המתאימים של GSK לחולדה על ידי gavage כפי שהודגם רק, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן שעה לאחר הממשל האחרון GSK גרגיר. הפוך עור בטן חתך צנית, ולחשוף את הבטן לתחתית בית החזה. השתמש בנייר טישו כדי להסיר את רקמת החיבור של דרך הבטן כדי לחשוף את הכלי בבירור, ולהשתמש מזרק 10 מיליליטר מצויד מחט 22-מד כדי למשוך דם מן האבי העורקים.מעבירים את הדם לצינור סטרילי של 15 מיליליטר, ומ מניחים את הצינור זקוף בטמפרטורת החדר במשך 30 עד 60 דקות. כאשר הדם קרוש, צנטריפוגה הצינור כדי להפריד את הסרום, ולהעביר את כל הנסיוב עד שישה חולדות לתוך צינור חדש 50 מיליליטר. לנער את הצינור כדי לערבב את sera לפני השבתת רכיבי הסרום באמבט מים 56 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.לאחר מכן, לסנן את הסרום דרך 0.22 מיקרומטר-נקבובי בגודל פוליאתרסולפון מסנן מזרק לאחסון במינוס 80 מעלות צלזיוס עד שנה. עבור in vitro osteoclastogenesis, לדלל את שלושת המינונים של סרום המכיל GSK ביחס של אחד עד ארבעה עם המדיום המינימלי של הנשר בתוספת L-גלוטמין, ריבונוקלוזידים, ו deoxyribonucleosides. הוסיפו 200 מיקרוליטרים של כל דילול לכל באר של תרבות מקרופאג' מח עצם בצלחת של 96 בארות.לאחר מכן, ליזום דור osteoclast על ידי מגרה כל גם עם גורם מגרה מושבת מקרופאג מפעיל קולטן עבור גורם גרעיני-קאפה B ligand. עבור in vitro osteoblastogenesis, להוסיף שני מיליליטר של סרום מדולל GSK המכיל לכל באר של 24 היטב צלחת עצם תרבות תאי גזע mesenchymal. תוצאות סריקת טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת מצביעות על כך שעכברים אובריקטומיים מדגימים אובדן עצם משמעותי בהשוואה לעכברי בקרה מלוחים.התערבות עם 90 ימים של טיפול גרנול GSK מגדילה מאוד את צפיפות מח העצם, במיוחד במינון בינוני GSK-מטופלים בעלי חיים. טיפול גרנול GSK גם מוביל מספר עצם trabecular מוגברת, נפח העצם על נפח כולל, ועובי עצם trabecular, אבל הפרדת עצם-trabecular ירד. פוספטאז חומצה עמיד טרטראט, או TRAP, כתמים מגלה עלייה במספר osteoclasts בעכברים ovariectomized בהשוואה לבעלי חיים שליטה, בעוד טיפולים גרנול GSK להקטין את ההידול OSTEOCLAST חיובי TRAP בהשוואה לבעלי חיים ovariectomized.סרום המכיל גרגרי GSK גם מקטין את מספר osteoclasts חיובי TRAP לעומת סרום שנאסף מבעלי חיים שליטה. החדירה המוצלחת של המחט לתוך בית המשפט בבטן היא קריטית כדי להבטיח כי דם נפח גבוה מספיק נקצר מכל חולדה. ביצוע מוצלח של שיטה זו צריך להקצת הצטברות של 15 עד 20 מילימטרים של דם, מספיק חומר כדי לשמש לניסויים במבחנה.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

אימות של Nanobody ונוגדנים מבוסס<em&gt; In vivo</em&gt; ניסויי גידול xenograft NIRF הדמיה בעכברים באמצעות<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cytometry הזרימה ומיקרוסקופי

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

ניתוח אופטימלי של<em&gt; In vivo</em&gt; ו<em&gt; במבחנה</em&gt; כבדית steatosis

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

הכנה<em&gt; במבחנה</em&gt; אפיון ממוגנטים miR-modified לתאי אנדותל

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

הכנה של צמחי מרפא: Er-Xian מרתח ו Er-Xian המכיל בסרום עבור<em&gt; בויבו</em&gt;<em&gt; במבחנה</em&gt; ניסויים

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

שימוש במאיץ ליניארי לניהול ניסויים רדיוביולוגיה ביולוגיה

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...