Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

この研究は、中国国家自然科学財団(81804116、81673991、81770107、81603643、81330085)、中国科学技術省革新的チームのためのプログラム(2015RA4002からWYJ)の助成金によって支援されました。中国教育省の革新的なチーム(IRT1270 to WYJ)、上海TCM医療センター(2017ZZ01010 to WYJ)、伝統的な中国医学計画の開発を加速する3年間の行動(ZY(2018-2020)-CCCX-3003からWYJへ、国家主要な研究開発プロジェクト(2018YFC1704302)。

すべての実験手順は、上海大学TCM(SZY201604005)の機関動物ケアおよび使用委員会の承認を得て行われました。
1. GSK作業ソリューションの準備と管理
<ol><li>マウスのGSK顆粒の同等の用量を計算します。<ol>
<li>Meeh-Rubner 方程式15に基づいて体表面を計算する : ボディ サーフェス = K x (体重 2/3)/1000、K 値は人間の場合は 10.6、マウスの場合は 9.1 です。人間の体重...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

TCM剤の顆粒は、製剤や処方箋のための一般的な選択肢の一つとなっています.GSK顆粒は、臨床経験またはTCM理論に基づいていくつかの漢方薬で構成され、副作用が少ないより良い治癒効果を発揮する4.水の煎じと比較して、顆粒はこれらの利点を有する:良い味、配達の利便性、長期貯蔵、標準的なプロトコルおよび一貫した治癒効果、ならびにより高い生産性。現在、顆粒は...

伝統的な中国医学(TCM)は、骨粗鬆症1、2を治療するための重要な補完的かつ代替的なアプローチの一つである。水の煎じりは、式3の基本的で最も一般的に使用される形態です。しかし、欠点も存在します:悪い味、キャリッジのための不便さ、短い貯蔵寿命と一貫性のないプロトコル、使用だけでなく、治癒効果を制限します。上記の欠点を避け、より良い効果を追求するために、顆粒が開発され、広く使用されている4.多くの研究は、顆粒5、6、7から1つ以上の有効な成分の薬理学的メカニズムを探索しているが、正確なメカニズムと基礎となる薬理学的プロセスはまだある識別が困難です。これは、1つの顆粒からあまりにも多くの有効成分が同時に類似または反対効果を発揮する可能性があるためです4.したがって、体内に送送る前に顆粒を調造する1つの標準プロトコルの開発は、治療結果に大きな影響を与えるだけでなく、生体内およびインビトロアッセイの両方にも必要とされる。
さらに、クリニックにおける顆粒の治癒効果は、インビトロまたはエクスビボ研究を用いて正確に同定することは困難であり、薬理学的メカニズムが複雑すぎるため課題を生み出します。これを解決するために、1980年代8年にタシノが薬剤含有血清の調製を最初に提案した。それ以来、多くの研究者が顆粒9、10、11を含む漢方薬に薬物含有血清を適用しました。現在、インビトロ調査のための薬物含有血清の選択は、生理学的条件を密接に模倣する1つの戦略とみなされている。
グシュカン(GSK)顆粒は、TCMの理論に照らして臨床実践に基づいて閉経後骨粗鬆症(POP)を治療するために開発された。GSK顆粒は、生体内の卵巣切除(OVX)マウスにおける骨損失を防ぎ、骨細胞性骨吸収を阻害し、骨芽細胞性骨形成を刺激する4。その結果、Li et al. 12は、GSK顆粒が骨形成を刺激するカルシウム受容体の活性を増強することによってOVXマウスにおいて骨保護効果を有することを見出した。GSK顆粒の骨保護効果と薬理学的効果を確認するために、著者らは、作業溶液および薬剤(GSK顆粒)含有血清の調製のための詳細な手順を提供する。さらに、この記事では、OVX誘発骨粗鬆症マウスモデルにおけるGSK顆粒および体外形成/骨芽形成におけるGSK顆粒含有血清の適用について説明する。
GSK顆粒は、いくつかのハーブ13、14で構成され、生理生理生理生理に完全に溶解することができます。したがって、生理食は車両として機能する。シャム投与マウス(シャム)およびOVXマウスを、顆粒投与マウスと同じ量の生理生理生理生理を投与した。マウスに対するGSK顆粒の同等の用量は、Meeh-Rubner方程式15に基づいて計算された。この方程式は、安全な用量を得ることの利点を有するだけでなく、薬理学的効果を保証する 15.GSK顆粒の3つの用量は、次のように生成されました: (1) GSKL: OVX + 低用量GSK顆粒, 2 g/kg/日.(2)GSKM:OVX+中用量GSK顆粒、4 g/kg/日。(3) GSKH: OVX + 高用量 GSK 顆粒, 8 g/kg/日.GSKL、GSKMおよびGSKH群におけるマウスを、GSK顆粒を胃内投与した。ビタミンD3(125国際単位/錠剤)を含む炭酸カルシウム(600mg/錠剤)は、例えば、骨粗鬆症を治療および予防するための成熟した市販品(例えば、カルトレート[CAL])において、陽性対照として使用された。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

伝統的な漢方薬は、閉経後骨粗鬆症(POP)などの多くの疾患を治療する代替方法としての役割を果たしています。中国で販売されている処方箋であるグシュカン(GSK)顆粒は、POPの治療に骨保護効果があります。体内に投与する前に、1つの標準的な調製手順が一般的に必要とされ、生ハーブからの活性成分の放出を促進し、薬理学的効果と治療結果を高めることを目的とする。本研究では、生体内およびインビトロ実験アッセイにおいてGSK顆粒を用いるための詳細なプロトコルを提案する。著者らはまず、生体内調査のための顆粒の動物に適した投与量を計算するための詳細なプロトコルを提供する:計量、溶解、貯蔵、および投与。次に、マイクロ CT スキャンのプロトコルと骨パラメータの測定について説明します。試料調製、マイクロCTマシンを実行するためのプロトコル、および骨パラメータの定量化を評価した。第3に、血清含有GSK顆粒が調製され、かつ、インビトロ破骨形成および骨芽形成のために薬物含有血清が抽出される。GSK顆粒を1日2回ラットに3日間連続して投与した。その後、血液を採取し、遠心分離し、不活性化し、濾過した。最後に、血清を希釈し、破骨形成および骨芽細胞形成を行うための使用を行った。ここで説明するプロトコルは、顆粒などの漢方薬の薬理学的調査のための参照と考えることができる。

マイクロCT走査の結果は、OVXマウスが生理生理生理用分掌マウスと比較して有意な骨損失を示したことを示した(図1A)。GSK顆粒の介入(90日)は、特にGSKM群においてBMDを大幅に増加させた(図1B)。BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Thなどの骨構造パラメータを定量化した。GSK顆粒治療は、BMD、BV/TV、Tb.NおよびTb.Th増加したが、Tb.Sp(...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

この記事では、動物実験用のグシュカン顆粒およびインビトロ実験用血清を含むGSK顆粒の作業溶液を調製するための詳細なプロトコルを提供する。このプロトコルは、生体内およびインビトロ実験の両方の処方箋と同様に、漢方薬の薬理学的調査に適用することができます。

インビボおよびインビトロ実験用グシュカン(GSK)顆粒の調製

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

このプロトコルは、インビボ研究のための顆粒の働く溶液の調製、ならびにインビトロ実験用の顆粒含有血清の調製を施設化する。この手法の利点の 1 つは、実験のために作成する材料や動物のコストが低いため、この方法を簡単に繰り返すことができる点です。まず、個々の50ミリリットルチューブに8グラム、16グラム、24グラムのグシュカン(GSK)顆粒を加えます。各チューブに48ミリリットルの水を加え、チューブを振って顆粒を完全に溶解します。次に、ビタミンD3を添加した炭酸カルシウム1.6錠を別の50ミリリットルチューブに入れ、48ミリリットルの生理食塩水に錠剤を振るで溶解する。溶液の胃内投与のために、最初に穏やかに、しかししっかりと手動で1ヶ月の女性、C57ブラック6マウスを2〜3分間拘束する。マウスが落ち着いたら、GSK顆粒の1つの作業溶液の0.24ミリリットルで40ミリメートル、番号12のガバジ針をロードし、針の抵抗が感じられるまで口の片側を通してマウスにガビンジ針を置き、針が胃に達したことを示します。動物に働く解決の全体の容積を注入する。次に、ガバジ針を引き込み、他のマウスがGSKを投与されている間にマウスをケージに戻してから、同じように各マウスに0.24ミリリットルの炭酸カルシウムとビタミンD3溶液を注入する。GSK含有血清採取については、ちょうど実証したように、適切な濃度のGSKをガビンジによってラットに送達した後、最後のGSK顆粒投与の1時間後につまみつまみへの応答の欠如を確認する。腹部の皮膚と腹膜切開を行い、腹部を胸郭の底に露出させます。ティッシュペーパーを使用して腹部大動脈の結合組織を取り除き、血管をはっきりと露出させ、大動脈から血液を引き出すために22ゲージの針を装備した10ミリリットルの注射器を使用する。血液を無菌15ミリリットルチューブに移し、チューブを室温で30〜60分間直立させます。血液が凝固したら、チューブを遠心分離して血清を分離し、最大6匹のラットの血清をすべて新しい50ミリリットルチューブに移します。56°Cの水浴で血清成分を30分間不活性化する前に、セラを混ぜるためにチューブを振ります。その後、0.22マイクロメートルサイズの親水性ポリエーテルスルホンシリンジフィルターを通して、血清をマイナス80°Cで最長1年間濾過します。インビトロ骨切皮新生の場合、L-グルタミン、リボヌクレオシド、およびデオキシリボヌクレオシドを添加した最小イーグル培地を1対4の比率でGSK含有血清の3用量を希釈する。96ウェルプレートの骨髄マクロファージ培養液の各ウェルに各希釈液の200マイクロリットルを加えます。次に、マクロファージコロニー刺激因子と核因子-κBリガンドの受容体活性化剤を用いて各々を刺激することにより、破骨細胞生成を開始する。インビトロ骨芽細胞化の場合、24ウェルプレートの骨間葉系幹細胞培養液の各ウェルに希釈GSK含有血清を2ミリリットル加える。マイクロコンピュータ断層撮影の結果は、卵巣切除マウスが生理的制御マウスと比較して有意な骨損失を示すことを示している。GSK顆粒処理の90日間の介入は、骨髄密度を大幅に増加させます, 特に中用量GSK処理動物で.GSK顆粒処理はまた、骨膜骨数の増加、総体積に対する骨容積、および骨骨の厚さをもたらすが、骨-骨骨分離の減少をもたらす。酒石耐性酸ホスファターゼ(TRAP)染色は、コントロール動物と比較して卵巣切除マウスの破骨細胞数の増加を明らかにし、GSK顆粒治療は卵巣切除動物と比較してTRAP陽性破骨細胞分化を減少させる。GSK顆粒含有血清はまた、対照動物から採取された血清と比較してTRAP陽性破骨細胞の数を減少させる。腹部大動脈への針の正常な浸透は、各ラットから十分な量の血液が収穫されることを保証するために重要です。この方法の実行に成功すると、15〜20ミリメートルの血液の蓄積を割り当て、インビトロ実験に使用するのに十分な材料を与える必要があります。

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

細胞追跡のためのin vivoでの19 F MRI における

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

マウスにおけるタキサンの薬物動態学的および薬力学的分析のための頸動脈煎茶

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

がん薬感の有効性を評価<em&gt;インビトロ</em&gt;と<em&gt;インビボ</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

ナノボディ及び抗体ベースの検証<em&gt;インビボ</em使用してマウスにおける&gt;腫瘍異種移植NIRFイメージング実験<em&gt;エクスビボ</em&gt;フローサイトメトリーおよび顕微鏡

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

の最適化分析<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;脂肪肝

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

準備と<em&gt;インビトロ</em磁化のmiR修飾内皮細胞の&gt;キャラクタリゼーション

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

漢方薬の準備：Er-Xian煎じ薬とEr-Xian含有血清<em&gt;インビボ</em&gt;と<em&gt;インビトロ</em&gt;実験

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In VitroとIn Vivo検出、ひと細胞、線虫、マウス Mitophagy の

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

体外放射線生物学実験における線形加速器の利用

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...