Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
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이 연구는 중국 국립 자연과학 재단(81804116, 81673991, 81770107, 81603643, 81330085), 혁신팀, 중국 과학기술부(2015RA4002 ~ WYJ)의 보조금으로 지원되었다. 혁신팀, 중국교육부(IRT1270 to WYJ), 상하이 TCM 만성질환 의료센터(2017ZZ01010 ~ WYJ), 중국 전통 의학 계획 개발을 가속화하기 위한 3년간의 조치(ZY(2018-2020-WYJ) -CCCX-3003 국가 핵심 연구 개발 프로젝트 (2018YFC1704302).

모든 실험 절차는 TCM의 상하이 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인으로 수행되었다 (SZY201604005).
1. GSK 작업 솔루션의 준비 및 관리
<ol><li>마우스에 대한 GSK 과립의 동등한 복용량을 계산합니다.<ol>
<li>Meeh-Rubner 방정식15를기준으로 바디 표면 계산 : 바디 표면 = K x (체중 2/3)/1000, 여기서 K 값은 인간의 경우 10.6, 마우스의 경우 9.1입니다. 인체 의 체중이 7...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. 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F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

한 의학 제제의 과립 제형 또는 처방에 대 한 일반적인 선택 중 하나가 되고있다. GSK 과립은 임상 경험 또는 한의학 이론에 근거한 몇몇 한방 약으로 구성되고,적은 부작용으로 더 나은 치료 효력을 발휘합니다 4. 물 달인에 비해, 과립은 다음과 같은 장점이 있습니다 : 좋은 맛, 배달의 편리성, 장기 저장, 표준 프로토콜 및 일관된 치료 효과뿐만 아니라 높은 생산성. 현재, 과립은 ...

중국 전통 의학 (한의학)은 골다공증을 치료하는 중요한 보완및 대체접근법 중 하나입니다 1,2. 물 달인은 공식 3의 기본 및가장 일반적으로 사용되는 형태입니다. 그러나 단점도 존재: 나쁜 맛, 운송에 대 한 불편, 짧은 수명 및 일관성 없는 프로토콜, 사용 뿐만 아니라 치료 효과 제한. 위의 단점을 방지하고 더 나은 효과를 추구하기 위해 과립이 개발되었으며 널리 사용되어 왔습니다4. 많은 연구가과립5,6,7에서하나 이상의 효과적인 성분의 약리학적 메커니즘을 탐구했지만, 정확한 메커니즘과 기본 약리학적 과정은 여전히 식별하기 가 어렵습니다. 이것은 하나의 과립에서 너무 많은 효과적인 성분이 동시에 유사하거나 반대 효과를 발휘 할 수 있기 때문이다4. 따라서, 체내에 전달하기 전에 과립을 준비하는 하나의 표준 프로토콜의 개발은 치료 결과에 큰 영향을 미칠 뿐만 아니라 생체 내 및 시험관내 분석법 모두에 대해서도 요구된다.
더욱이, 진료소에 있는 과립의 치료 효력은 약리학 기계장치가 너무 복잡하기 때문에 도전을 만드는 시험관 내 또는 ex vivo 연구 결과를 사용하여 확인하고 정확하게 확인하기 어렵습니다. 이 문제를 해결하기 위해 1980 년대8에서 타시노가 약물 함유 혈청의 제조를 처음 제안했습니다. 그 때부터, 수많은 연구자들은 과립9,10,11을포함하여 한방 의학에 약물 함유 혈청을 적용했습니다. 현재, 생체외 조사를 위한 약물 함유 혈청의 선택은 생리적 조건을 밀접하게 모방하는 하나의 전략으로 여겨진다.
구슈강(GSK) 과립은 한의학이론에 비추어 임상실습에 기초하여 폐경기 골다공증(POP)을 치료하기 위해 개발되었다. GSK 과립은 생체 내 난소절제술(OVX) 마우스에서 뼈 손실을 방지하고, 파골세포 뼈 흡수를 억제하며, 골형성골형성을 자극한다4. 따라서, Li 등.12 GSK 과립 뼈 형성을 자극 하는 칼슘 수용 체의 활동을 강화 하 여 OVX 쥐에 뼈 보호 효과 발견. GSK 과립의 약리효과뿐만 아니라 뼈 보호 효과를 확인하기 위해 저자는 작동 용액 및 약물 (GSK 과립)-함유 혈청의 제조를위한 상세한 절차를 제공합니다. 더욱이, 본 호는 OVX 유도 골다공증 마우스 모델 및 GSK 과립 함유 혈청에서 시험관내 파골세포형성/골다공증 발생에 대한 GSK 과립의 적용에 대해 설명한다.
GSK 과립은 여러 허브13,14로 구성되며 식염수로 쉽게 완전히 용해될 수 있다. 따라서 식염수는 차량 역할을 합니다. 샴-조작마우스(Sham) 및 OVX 마우스는 과립 투여 마우스와 동일한 부피의 식염수를 투여하였다. 마우스에 대한 GSK 과립의 동등한 용량은 Meeh-Rubner 방정식15에기초하여 계산되었다. 이 방정식은 안전한 복용량을 얻는 이점이없을뿐만 아니라 약리효과15를보장합니다. GSK 과립의 3개의 투여량은 다음과 같이 생성되었다: (1) GSKL: OVX + 저용량 GSK 과립, 2 g/kg/day. (2) GSKM: OVX + 중간 용량 의 GSK 과립, 4 g / kg / 일. (3) GSKH: OVX + 고용량 GSK 과립, 8 g/ kg/일. GSKL, GSKM 및 GSKH 군의 마우스를 위내 로 GSK 과립을 투여하였다. 탄산칼슘(600 mg/정제)과 비타민 D3(125 국제 단위/정제)를 함유하고, 예를 들어, 골다공증을 치료 및 예방하기 위한 성숙하고 시판된 제품(예를 들어, 칼트레이트[CAL])에서, 양성 대조군으로 사용하였다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

중국 전통 한방 의학은 폐경 후 골다공증 (POP)과 같은 많은 질병을 치료하는 대체 방법으로 역할을합니다. Gushukang (GSK) 과립, 중국에서 판매 처방, POP 치료에 뼈 보호 효과. 신체에 투여하기 전에, 하나의 표준 준비 절차가 일반적으로 필요합니다, 이는 원시 허브에서 활성 성분의 방출을 촉진하고 약리효과뿐만 아니라 치료 결과를 향상시키는 것을 목표로. 본 연구는 생체 내 및 시험관내 실험 분석에서 GSK 과립을 사용하기 위한 상세한 프로토콜을 제안한다. 저자는 먼저 생체 내 조사를 위한 과립의 동물적 적당한 복용량을 계산하기 위하여 상세한 프로토콜을 제공합니다: 계량, 용해, 저장 및 관리. 둘째, 이 문서에서는 마이크로 CT 스캐닝프로토콜과 골격 파라미터 측정에 대해 설명합니다. 샘플 전처리, 마이크로 CT 기계를 실행하기 위한 프로토콜 및 뼈 파라미터의 정량화를 평가하였다. 셋째, 혈청 함유 GSK 과립이 제조되고, 약물 함유 혈청은 시험관내 골다강 형성 및 골아세포 발생을 위해 추출된다. GSK 과립은 3일 연속적으로 쥐에게 하루에 두 번 위내 투여하였다. 혈액을 수집, 원심 분리, 비활성화, 필터링. 마지막으로, 혈청을 희석시키고 골성형술 및 골아합형성을 수행하기 위해 사용되었다. 여기에 기술된 프로토콜은 과립과 같은 한방 처방 의약품의 약리학적 조사를 위한 참고자료로 간주될 수 있다.

마이크로 CT 스캐닝 결과는 OVX 마우스가 식염수 대조군마우스에 비해 상당한 뼈 손실을 보였다는 것을 나타냈다(도 1A). GSK 과립의 개입(90일)은 특히 GSKM 군에서 BMD를크게 증가시켰습니다(도 1B). BMD, BV/TV, Tb.N 및 Tb.Th 같은 뼈 구조 파라미터를 정량화했습니다. GSK 과립 치료는 증가 BMD를 주도, BV / TV, Tb.N과 Tb.T...

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Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

본 품은 동물 연구를 위한 구슈강 과립 및 시험관 내 실험을 위한 혈청을 함유하는 GSK 과립의 작동 용액을 준비하기 위한 상세한 프로토콜을 제공한다. 이 프로토콜은 한방 의약품의 약리학적 조사뿐만 아니라 생체 내 및 시험관 내 실험 모두에 대한 처방에 적용 할 수 있습니다.

구슈강(GSK) 생체내 및 체외 실험을 위한 과립 준비

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

이 프로토콜은 생체 내 연구를 위한 과립의 작업 용액의 준비뿐만 아니라 체외 실험을 위한 과립 함유 혈청의 준비를 갖추고 있습니다. 이 기술의 한 가지 장점은 실험에 대해 생성하는 재료와 동물의 저렴한 비용으로 인해 방법을 쉽게 반복 할 수 있다는 것입니다. 8그램, 16그램, 24그램의 구수강 또는 GSK를 개별 50밀리리터 튜브에 첨가하여 시작합니다.각 튜브에 48밀리리터의 물을 넣고 튜브를 흔들어 과립을 완전히 녹입니다. 그런 다음 비타민 D3로 보충된 탄산칼슘 1.6정을 또 다른 50밀리리터 튜브에 넣고, 탈염기 48밀리리터에 정제를 녹입니다. 솔루션의 위장 투여를 위해 먼저 1개월 된 여성 C57 Black 6 마우스를 2~3분 동안 부드럽게 억제합니다.마우스가 진정되면, GSK 과립의 한 작업 용액의 0.24 밀리리터가 있는 40밀리미터, 번호 12 개바게 바늘을 적재하고, 바늘 저항이 느껴지기 전까지 마우스에 개간 바늘을 배치하여 바늘이 위장에 도달했음을 나타낸다. 작업 용액의 전체 볼륨을 동물에 주입합니다. 이어서, 개비지 바늘을 회수하고, 마우스를 케이지로 되돌리고, 다른 마우스가 GSK를 투여하는 동안 각 마우스에 탄산칼슘과 비타민 D3 용액을 동일한 방식으로 주입한다.GSK 함유 혈액 혈청 수집의 경우, 방금 입증된 바와 같이 개비지에 의한 GSK의 적절한 농도를 쥐에 전달한 후, 마지막 GSK 과립 투여 후 1시간 후에 발가락 꼬집어에 대한 반응부족을 확인한다. 복부 피부와 복막 절개를 하고 복부를 흉부 바닥에 노출시십시오. 티슈 페이퍼를 사용하여 복부 대어타의 결합 조직을 제거하여 혈관을 명확하게 노출시키고 대어타에서 혈액을 끌어들이기 위해 22 게이지 바늘을 장착한 10 밀리리터 주사기를 사용합니다.혈액을 멸균 15 밀리리터 튜브로 옮기고 튜브를 실온에서 30~60분 동안 똑바로 세워 놓습니다. 혈액이 응고되면 튜브를 원심분리하여 혈청을 분리하고 최대 6마리의 쥐를 새로운 50밀리리터 튜브로 옮기습니다. 튜브를 흔들어 혈청 성분을 활성화하기 전에 56도 의 수조에서 30 분 동안 세레고 성분을 혼합하십시오.이어서, 0.22 마이크로미터-공극식 포머 크기의 폴리테셔술폰 주사기 필터를 통해 혈청을 최대 1년 동안 영하 80도까지 보관한다. 체외 골세포 신생의 경우, L-글루타민, 리보뉴클레오시드 및 데옥시리보뉴클레오시드로 보충된 최소 독수리의 배지로 1 대 4 비율로 GSK 함유 혈청의 3가지 투여량을 희석시합니다. 96웰 플레이트에 골수 대식파지 배양의 각 웰에 각 희석제 200마이크로리터를 추가합니다.이어서, 핵인자-카파 B 리간드에 대한 대식세포 식민지 자극 인자 및 수용체 활성제로 각각을 잘 자극하여 골세포 생성을 개시한다. 체외 골세포 발생의 경우, 24웰 플레이트 뼈 중간엽 줄기 세포 배양의 각 웰에 희석 된 GSK 함유 혈청의 2 밀리리터를 추가합니다. 마이크로 컴퓨팅 단층 촬영 스캐닝 결과는 ovaictomized 마우스가 식염수 대조군 마우스에 비해 상당한 뼈 손실을 입증한다는 것을 나타냅니다.GSK 과립 치료의 90 일 내정간섭은 골수 조밀도를 크게 증가, 특히 중간 용량 GSK 처리 동물. GSK 과립 치료는 또한 증가 된 반관 골 수로 이끌어 내고, 총 부피에 뼈 부피, 및 반경 골 두께를 증가하되, 그러나 감소된 뼈-반경 골 분리. 타르타르트 내성 산인산인산염 또는 TRAP, 염색은 대조군 동물에 비해 소뇌마우스의 골세포 수가 증가하고, GSK 과립 치료는 암소암화 동물에 비해 트랩 양성 골세포 분화를 감소시다.GSK 과립 함유 혈청은 또한 대조군 동물로부터 수집된 혈청에 비해 TRAP 양성 골의 수를 감소시킨다. 복부 대오르타로 바늘의 성공적인 침투는 각 쥐에서 충분한 양의 혈액이 수확되는 것을 보장하기 위해 중요합니다. 이 방법의 성공적인 실행은 15 에서 20 밀리미터의 혈액축적을 할당해야하며, 체외 실험에 사용할 수있는 충분한 물질.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

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세포 추적을위한 생체 19 F MRI에서

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

연구

의학

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

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암 약물 과민 반응의 효과를 평가<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

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나노 바디 및 항체 기반의 검증<em&gt; 생체</em마우스에서&gt; 종양 이종 이식 NIRF 이미징 실험 사용<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 유동 세포 계측법 및 현미경

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

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의 최적화 분석<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 체외</em&gt; 간 지방증

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

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준비 및<em&gt; 체외</em&gt; 자화 특성의 내피 세포를 미르 변성

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

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약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼<em&gt; In Vivo</em&gt; 및<em&gt; 체외에서</em&gt; 실험

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

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생체 외에서 그리고 Vivo에서 인간 세포, C. 선 충, 쥐에서 Mitophagy의 검출

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

체외 방사선 생물학 실험을 수행하기위한 선형 가속기 의 사용

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...