Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Denne studien ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation i Kina (81804116, 81673991, 81770107, 81603643, og 81330085), programmet for innovative team, departementet for vitenskap og teknologi i Kina (2015RA4002 til WYJ), programmet for Innovativt team, utdanningsdepartementet i Kina (IRT1270 til WYJ), Shanghai TCM Medical Center av kronisk sykdom (2017ZZ01010 til WYJ), tre års aksjon for å akselerere utviklingen av tradisjonell kinesisk medisin plan (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 til WYJ), og nasjonale nøkkel forsknings utviklingsprosjekter (2018YFC1704302).

Alle de eksperimentelle prosedyrene ble utført med godkjenning av institusjonelle Animal Care og bruk komité i Shanghai University of TCM (SZY201604005).
1. forberedelse og administrering av GSK arbeids løsning
<ol><li>Beregn tilsvarende doser av GSK granulat for mus.<ol>
<li>Beregn kroppens overflate basert på Meeh-Rubner ligningen15: Body Surface = K x (kroppsvekt2/3)/1000, der k-verdiene er 10,6 for mennesker og 9,1 for mus. Forutsatt en menneskelig kroppsvekt p?...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

Granulater av TCM-agenter har blitt en av de vanligste valgene for formuleringer eller resepter. GSK granulater er sammensatt av flere urte medisiner basert på kliniske erfaringer eller TCM-teorien, og de utøver bedre helbredende effekter med færre bivirkninger4. Sammenlignet med vann avkok, de granulater har disse fordelene: god smak, praktisk levering, langsiktig lagring, standard protokoll og konsekvent helbredende effekter, samt høyere produktivitet. For tiden er granulater en av de mest b...

Tradisjonell kinesisk medisin (TCM) er en av de viktigste komplementære og alternative tilnærminger til behandling av osteoporose1,2. Vann avkok er den grunnleggende og mest brukte form av formelen3. Men ulempene finnes også: dårlig smak, ulempe for befordring, kort holdbarhet og inkonsekvent protokoller, begrense bruker så vel som helbredende effekter. For å unngå de ovennevnte ulempene så vel som å forfølge bedre effekter, ble granulater utviklet og har vært mye brukt4. Selv om mange studier har utforsket farmakologiske mekanismer av en eller flere effektive komponenter fra granulater5,6,7, den eksakte mekanismer og underliggende farmakologiske prosesser er fortsatt vanskelig å identifisere. Dette er fordi for mange effektive komponenter fra en granule kan samtidig utøve lignende eller motsatte effekter4. Derfor vil utviklingen av en standard protokoll for å forberede granulater før levering til kroppen ikke bare ha en stor innvirkning på de terapeutiske resultatene, men er også nødvendig for både in vivo-og in vitro-analyser.
Videre er de helbredende virkningene av granulater i klinikken vanskelig å bekrefte og nøyaktig identifisere ved hjelp av in vitro eller ex vivo studier, noe som skaper en utfordring fordi de farmakologiske mekanismene er for kompliserte. For å løse dette ble utarbeidelsen av medikament som inneholder serum først foreslått av Tashino i 1980-årene8. Fra da av, mange forskere anvendt legemiddel som inneholder serum til urtemedisin, inkludert granulater9,10,11. For øyeblikket betraktes valget av medikament som inneholder serum for in vitro-undersøkelser som en strategi som etterligner fysiologiske tilstander.
Gushukang (GSK) granulater ble utviklet for å behandle postmenopausale osteoporose (POP) basert på klinisk praksis i lys av teorien om TCM. GSK granulater hindre bein tap i ovariectomized (OVX) mus in vivo, hemme osteoclastic bein resorpsjon, og stimulere osteoblastaktivitet beindannelse4. Følgelig Li et al.12 fant at GSK granulater har bein beskyttende effekter i OVX mus ved å forbedre aktivitetene til kalsium reseptor å stimulere beindannelse. For å bekrefte Ben-beskyttende effekter samt de farmakologiske virkningene av GSK granulater, forfatterne her gir en detaljert prosedyre for utarbeidelse av arbeidsløsninger og narkotika (GSK granule) inneholder serum. Videre beskriver denne artikkelen anvendelsen av GSK granulater i en OVX-indusert osteoporotiske musemodell og GSK granule-inneholdende serum for in vitro osteoclastogenesis/osteoblastogenesis.
GSK granulater er sammensatt av flere urter13,14 og kan være helt oppløst i saltvann lett. Derfor fungerer saltvann som kjøretøyet. Humbug-opererte mus (Sham) og OVX mus ble administrert samme volum av saltvann som granule-administrerte mus. Tilsvarende doser av GSK granulat for musen ble beregnet basert på Meeh-Rubner ligningen15. Denne ligningen ikke bare har fordelen av å skaffe trygge doser, men også garanterer farmakologiske effekter15. De tre doser av GSK granulater ble generert som følger: (1) GSKL: OVX + lav dose GSK granulater, 2 g/kg/dag. (2) GSKM: OVX + medium-dose GSK granulat, 4 g/kg/dag. (3) GSKH: OVX + høy dose GSK granulater, 8 g/kg/dag. Mus i GSKL, GSKM og GSKH grupper ble intragastrically administrert GSK granulater. Kalsium (600 mg/tablett) med vitamin D3 (125 internasjonal enhet/tablett), for eksempel i et produkt som er moden og markedsført (f.eks. Caltrate [CAL]) for behandling og forebygging av osteoporose, ble brukt som positiv kontroll.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

Tradisjonell kinesisk urtemedisin spiller en rolle som en alternativ metode i behandling av mange sykdommer, slik som postmenopausale osteoporose (POP). Gushukang (GSK) granulat, en markedsført resept i Kina, har bein-beskyttende effekter i behandling av POP. Før administrering til kroppen, en standard forberedelse prosedyre er vanligvis nødvendig, som har som mål å fremme frigjøring av aktive bestanddeler fra rå urter og forsterke de farmakologiske effektene samt terapeutiske utfall. Denne studien foreslår en detaljert protokoll for å bruke GSK granulater i in vivo og in vitro eksperimentelle analyser. Forfatterne først gi en detaljert protokoll for å beregne dyret-passende dosering av granulat for in vivo etterforskning: veiing, oppløsning, lagring og administrasjon. For det andre beskriver denne artikkelen protokoller for Micro-CT-skanning og måling av Ben parametre. Eksempel forberedelser, protokoller for å kjøre Micro-CT-maskinen og kvantifisering av Ben parametre ble evaluert. Tredje, serum-inneholdende GSK granulater er forberedt, og medikament som inneholder serum er ekstrahert for in vitro osteoclastogenesis og osteoblastogenesis. GSK granulater ble intragastrically administreres to ganger per dag til rotter i tre påfølgende dager. Blod ble deretter samlet inn, sentrifugert, deaktivert og filtrert. Til slutt ble serum fortynnet og brukt til å utføre osteoclastogenesis og osteoblastogenesis. Protokollen som er beskrevet her kan betraktes som en referanse for farmakologiske undersøkelser av urte reseptbelagte medisiner, slik som granulater.

Resultater fra mikro-CT-skanning indikerte at OVX-musene viste signifikant tap av bein i forhold til saltvanns mus (figur 1a). Intervensjonen (90 dager) av GSK granulater i stor grad økte BMD, spesielt i GSKM-gruppen (figur 1B). Benstruktur parametrene, for eksempel BMD, BV/TV, TB. N og Tb.Th, ble kvantifisert. GSK granule behandlinger førte til økt BMD, BV/TV, TB. N og Tb.Th, men reduserte TB. SP (figur 1...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Denne artikkelen gir en detaljert protokoll for å utarbeide en fungerende løsning av Gushukang granulater for dyrestudier og GSK granule som inneholder serum for in vitro eksperimenter. Denne protokollen kan anvendes på farmakologiske undersøkelser av urte medisiner, samt resepter for både in vivo-og in vitro-eksperimenter.

Utarbeidelse av Gushukang (GSK) granulat for in vivo og in vitro eksperimenter

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

Denne protokollen befaser utarbeidelse av en arbeidsløsning av granulat for in vivo-studier, samt fremstilling av granulatholdig serum for in vitro-eksperimenter. En fordel med denne teknikken er at metoden lett kan gjentas på grunn av den lave prisen på materialene og dyrene du lager for eksperimentene. Begynn med å legge til åtte, 16 og 24 gram Gushukang, eller GSK, granulat til individuelle 50-milliliter rør.Tilsett 48 milliliter vann til hvert rør, og rist rørene for å fullstendig oppløse granulatet. Deretter plasserer du 1,6 tabletter kalsiumkarbonat supplert med vitamin D3 i et annet 50-milliliter rør, og oppløs tablettene i 48 milliliter saltvann med risting. For intragastrisk administrasjon av løsningene, først forsiktig men fast manuelt begrense en måned gammel, kvinne, C57 Svart 6 mus i to til tre minutter.Når musen har roet seg, last en 40-millimeter, nummer 12 gavage nål med 0,24 milliliter av en arbeidsløsning av GSK granulat, og plasser gavage nålen i musen gjennom den ene siden av munnen til nålen motstand er følt, noe som indikerer at nålen har nådd magen. Injiser hele volumet av arbeidsløsning i dyret. Deretter trekker du tilbake gavage-nålen, og returnerer musen til buret mens de andre musene administreres GSK før de injiserer 0,24 milliliter kalsiumkarbonat og vitamin D3-løsning i hver mus på samme måte.For GSK-inneholdende blodserumsamling, etter å ha levert de riktige konsentrasjonene av GSK til en rotte ved gavage som nettopp vist, bekrefter du mangel på respons på tåklemmen en time etter siste GSK granulatadministrasjon. Lag en bukhud og peritoneal snitt, og utsett magen til bunnen av thoraxen. Bruk vevpapir til å fjerne bindevevet i bukaortaen for å eksponere fartøyet tydelig, og bruk en 10-milliliter sprøyte utstyrt med en 22-gauge nål for å trekke blod fra aorta.Overfør blodet til et sterilt 15-milliliter rør, og plasser røret oppreist ved romtemperatur i 30 til 60 minutter. Når blodet har clotted, sentrifugere røret for å skille ut serum, og overføre alt serum for opptil seks rotter til en ny 50-milliliter tube. Rist røret for å blande sera før du inaktiverer serumkomponentene i et 56-graders Celsius-vannbad i 30 minutter.Deretter filtrerer du serumet gjennom et 0,22-mikrometer-pore-størrelse hydrofil polyetersulfon sprøytefilter for lagring ved minus 80 grader Celsius i opptil et år. For in vitro osteoklastogenesis, fortynne de tre dosene av GSK-inneholdende serum på en en-til-fire ratio med minimum Eagle medium supplert med L-glutamin, ribonucleosides, og deoksyribonucleosides. Tilsett 200 mikroliter av hver fortynning til hver brønn av en benmargsmakrofagkultur i en 96-brønnsplate.Deretter initierer osteoklalastgenerering ved å stimulere hver brønn med makrofagkolonistimulerende faktor og reseptoraktivator for kjernefysisk faktor-kappa B ligand. For in vitro osteoblastogenese, tilsett to milliliter fortynnet GSK-inneholdende serum til hver brønn av en 24-brønns platebenmesenchymal stamcellekultur. Mikrodatatomografiskanningsresultater indikerer at ovariectomiserte mus viser betydelig bentap sammenlignet med saltvannskontrollmus.Intervensjon med 90 dager med GSK granulatbehandling øker i stor grad benmargstettheten, spesielt hos middels dose GSK-behandlede dyr. GSK granulatbehandling fører også til økt trabecular beinnummer, beinvolum over totalt volum og travaskulær beintykkelse, men en redusert bein-trabecular bein separasjon. Tartratresistent syrefosfatase, eller TRAP, viser en økning i antall osteoklaster hos ovariectomiserte mus sammenlignet med kontrolldyr, mens GSK granulatbehandlinger reduserer TRAP-positiv osteoklakkdilatering sammenlignet med de ovariektomiiserte dyrene.GSK granulatholdig serum reduserer også antall TRAP-positive osteoklaster sammenlignet med serum samlet inn fra kontrolldyr. Vellykket penetrasjon av nålen i abdominal aorta er avgjørende for å garantere at et høyt nok volum blod høstes fra hver rotte. En vellykket utførelse av denne metoden bør allot akkumulering av 15 til 20 millimeter blod, nok materiale som skal brukes til in vitro eksperimenter.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MR for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Carotisar infusjoner for farmakokinetiske og farmakodynamiske Analyse av Taxaner i Mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluere effektiviteten av Cancer Drug Sensibilisering<em&gt; In Vitro</em&gt; Og<em&gt; I Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validering av Nanobody og antistoff Based<em&gt; I Vivo</em&gt; Tumor Xenotransplantat NIRF-bildebehandling Eksperimenter i Mus Bruke<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Flowcytometrisystemer og Mikros

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Nedbryting av museceller fra menneske tumorxenotransplantater forbedrer Nedstrøms Analyse av Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimalisert Analyse av<em&gt; I Vivo</em&gt; og<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Fremstilling og<em&gt; In Vitro</em&gt; Karakterisering av magnetisert mir-modifisert endotelceller

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Forberedelse av urtemedisin: Er-Xian Decoction og Er-Xian-holdig Serum for<em&gt; In vivo</em&gt; Og<em&gt; I Vitro</em&gt; Eksperimenter

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro og i Vivo oppdagelse av Mitophagy i menneskelige celler, C. Elegansog mus

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Bruk av en lineær akselerator for å gjennomføre in vitro Radiobiology eksperimenter

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...