Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Denna studie stöddes av bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (81804116, 81673991, 81770107, 81603643 och 81330085), programmet för innovativa team, ministeriet för vetenskap och teknik i Kina (2015RA4002 till WYJ), programmet för Innovativt team, Undervisningsministeriet i Kina (IRT1270 till WYJ), Shanghai TCM Medical Center of kronisk sjukdom (2017ZZ01010 till WYJ), tre år åtgärder för att påskynda utvecklingen av traditionell kinesisk medicin plan (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 till WYJ), och nationella centrala forsknings utvecklings projekt (2018YFC1704302).

Alla experimentella förfaranden utfördes med godkännande av institutionella djuromsorg och användning kommitté för Shanghai University of TCM (SZY201604005).
1. beredning och administrering av GSK-arbetslösning
<ol><li>Beräkna de ekvivalentdoserna av GSK granulat för mus.<ol>
<li>Beräkna kroppsyta baserat på meeh-Rubner ekvation15: kroppsyta = k x (kroppsvikt2/3)/1000, där K-värdena är 10,6 för människa och 9,1 för mus. Om man antar en mänsklig kroppsv...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

Granulat av TCM-medel har blivit ett av de vanligaste valen för formuleringar eller recept. GSK granulat består av flera växtbaserade läkemedel baserade på kliniska erfarenheter eller TCM teorin, och de utövar bättre läkande effekter med färre biverkningar4. Jämfört med vatten dekokt, granulatet har dessa fördelar: god smak, bekvämlighet för leverans, långsiktig lagring, standardprotokoll och konsekventa läkande effekter, samt högre produktivitet. För närvarande granulat är en ...

Traditionell kinesisk medicin (TCM) är en av de viktiga komplementära och alternativa metoder för att behandla osteoporos1,2. Vatten dekokt är den grundläggande och mest använda formen av formel3. Men nackdelar finns också: dålig smak, olägenhet för transport, kort hållbarhetstid och inkonsekvent protokoll, begränsa användningsområden samt läkande effekter. För att undvika ovanstående nackdelar samt att fullfölja bättre effekter, granulat utvecklades och har använts i stor utsträckning4. Även om många studier har undersökt farmakologiska mekanismer för en eller flera effektiva komponenter från granulatet5,6,7, de exakta mekanismerna och underliggande farmakologiska processer är fortfarande svårt att identifiera. Detta beror på att alltför många effektiva komponenter från en granule kan samtidigt utöva liknande eller motsatta effekter4. Därför, utvecklingen av ett standardprotokoll för att förbereda granulerna innan de levereras till kroppen inte bara skulle ha en stor inverkan på de terapeutiska resultaten men krävs också för både in vivo och in vitro-analyser.
Dessutom är de läkande effekterna av granulat på kliniken svåra att bekräfta och exakt identifiera med hjälp av in vitro-eller ex vivo-studier, vilket skapar en utmaning eftersom de farmakologiska mekanismerna är för komplexa. För att lösa detta, beredning av läkemedel som innehåller serum föreslogs först av Tashino i 1980-talet8. Från och med då, många forskare tillämpade läkemedelhaltiga serum till örtmedicin, inklusive granulat9,10,11. För närvarande, valet av läkemedel som innehåller serum för in vitro-undersökningar betraktas som en strategi som nära härmar fysiologiska tillstånd.
Gushukang (GSK) granulat utvecklades för att behandla postmenopausala osteoporos (POP) baserat på klinisk praxis i ljuset av teorin om TCM. GSK granulat förhindra benförlust hos ovariectomized (OVX) möss in vivo, hämmar osteoklastisk benresorption, och stimulera osteoblastiska benbildning4. Följaktligen fann Li et al.12 att GSK granulat har ben skyddande effekter i OVX möss genom att öka verksamheten i kalcium receptor för att stimulera benbildning. För att bekräfta ben skyddande effekter samt de farmakologiska effekterna av GSK granulat, författarna här ger ett detaljerat förfarande för beredning av arbetslösningar och Drug (GSK granule)-innehållande serum. I denna artikel beskrivs dessutom tillämpningen av GSK-granulat i en OVX-inducerad modell av osteoporotisk mus och GSK-granule-innehållande serum för in vitro-osteoclastogenes/osteoblastogenes.
GSK granulat består av flera örter13,14 och kan helt lösas i saltlösning lätt. Därför är saltlösning fungerar som fordonet. Simulerad mus (Sham) och OVX-möss administrerades i samma volym av saltlösning som de granule-administrerade mössen. De ekvivalentdoserna av GSK-granulat för musen beräknades utifrån meeh-Rubner ekvation15. Denna ekvation har inte bara fördelen av att få säkra doser men också garantier farmakologiska effekter15. De tre doserna av GSK granulat genererades enligt följande: (1) GSKL: OVX + lågdos GSK granulat, 2 g/kg/dag. (2) GSKM: OVX + medelstora GSK granulat, 4 g/kg/dag. (3) GSKH: OVX + hög dos GSK granulat, 8 g/kg/dag. Möss i grupperna GSKL, GSKM och GSKH var intragastriskt administrerade GSK-granulat. Kalciumkarbonat (600 mg/tablett) med vitamin D3 (125 internationell enhet/tablett), till exempel, i en mogen och marknadsförs produkt (t. ex., Caltrate [CAL]) för behandling och förebyggande av osteoporos, användes som en positiv kontroll.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

Traditionell kinesisk örtmedicin spelar en roll som en alternativ metod vid behandling av många sjukdomar, såsom postmenopausala osteoporos (POP). Gushukang (GSK) granulat, ett marknadsfört recept i Kina, har ben skyddande effekter vid behandling av POP. Före administrering till kroppen, en standard beredning förfarande är vanligen krävs, som syftar till att främja frisättningen av aktiva beståndsdelar från råa örter och förbättra de farmakologiska effekterna samt terapeutiska resultat. I denna studie föreslås ett detaljerat protokoll för användning av GSK-granulat i experimentella analyser in vivo och in vitro. Författarna ger först ett detaljerat protokoll för att beräkna djur-lämpliga doser av granulat för in vivo undersökning: vägning, upplösning, lagring, och administration. För det andra beskriver den här artikeln protokoll för mikrodatortomografi och mätning av ben parametrar. Provberedning, protokoll för att köra mikro-CT-maskin och kvantifiering av ben parametrar utvärderades. Tredje, serum innehållande GSK granulat bereds, och läkemedelhaltiga serum extraheras för in vitro osteoclastogenes och osteoblastogenes. GSK granulat var intragastrically administreras två gånger per dag till råttor under tre dagar i följd. Blod samlades sedan in, centrifugeras, inaktiveras och filtreras. Slutligen, serum späddes och används för att utföra osteoclastogenes och osteoblastogenes. Det protokoll som beskrivs här kan betraktas som en referens för farmakologiska undersökningar av växtbaserade receptbelagda läkemedel, såsom granulat.

Mikrodatortomografi visade att OVX-möss uppvisade signifikant benförlust jämfört med saltbekämpnings möss (figur 1a). Den intervention (90 dagar) av GSK granulat ökade kraftigt BMD, särskilt i GSKM-gruppen (figur 1b). Benstruktur parametrarna, såsom BMD, BV/TV, TB. N och Tb.Th, kvantifierades. GSK granule behandlingar ledde till ökad BMD, BV/TV, TB. N och Tb.Th men minskade TB. SP (figur 1c...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Denna artikel innehåller ett detaljerat protokoll för beredning av en fungerande lösning av Gushukang granulat för djurstudier och GSK granule som innehåller serum för in vitro-experiment. Detta protokoll kan tillämpas på farmakologiska undersökningar av växtbaserade läkemedel samt recept för både in vivo-och in vitro-experiment.

Beredning av Gushukang (GSK) granulat för in vivo-och in vitro-experiment

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

Detta protokoll anläggningar utarbetandet av en fungerande lösning av granulat för in vivo studier, samt beredning av granulat-innehållande serum för in vitro-experiment. En fördel med denna teknik är att metoden lätt kan upprepas på grund av den låga kostnaden för materialen och de djur du skapar för experimenten. Börja med att lägga till åtta, 16 och 24 gram Gushukang, eller GSK, granulat till enskilda 50-milliliter rör.Tillsätt 48 milliliter vatten till varje rör, och skaka rören för att helt lösa upp granulerna. Placera sedan 1,6 tabletter kalciumkarbonat kompletterat med vitamin D3 i ett annat 50-milliliterrör och lös tabletterna i 48 milliliter saltlösning med skakningar. För intragastrisk administrering av lösningarna, först försiktigt men fast manuellt hålla fast en månad gammal, kvinnlig, C57 Svart 6 mus i två till tre minuter.När musen har lugnat, ladda en 40-millimeters, nummer 12 sondmatning nål med 0,24 milliliter av en fungerande lösning av GSK granulat, och placera sondmatning nålen i musen genom ena sidan av munnen tills nålen motstånd känns, vilket indikerar nålen har nått magen. Injicera hela volymen arbetslösning i djuret. Dra sedan tillbaka sondmatningsnålen och återför musen till sin bur medan de andra mössen administreras GSK innan du injicerar 0,24 milliliter kalciumkarbonat och vitamin D3-lösning i varje mus på samma sätt.För GSK-innehållande blod serum insamling, efter leverera lämpliga koncentrationer av GSK till en råtta genom sondmatning som just visat, bekräfta en brist på svar på tå nypa en timme efter den senaste GSK granulat administrering. Gör en buk hud och peritoneal snitt, och exponera buken till botten av bröstkorgen. Använd mjukpapper för att avlägsna den bindväv i bukaortan för att exponera kärlet tydligt, och använd en 10-milliliter spruta utrustad med en 22-gauge nål för att dra blod från aorta.Överför blodet till ett sterilt 15-milliliter rör, och placera röret upprätt vid rumstemperatur i 30 till 60 minuter. När blodet har koagulerat, centrifug röret för att separera ut serumet, och överföra alla serum för upp till sex råttor i en ny 50-milliliter rör. Skaka röret för att blanda sera innan du inaktiverar serumkomponenterna i ett 56-graders Celsius vattenbad i 30 minuter.Filtrera sedan serumet genom ett 0,22-mikrometer-porstorlek hydrofil polyetersulfone spruta filter för lagring vid minus 80 grader Celsius i upp till ett år. För osteoklastogenes in vitro, späd de tre doserna av GSK-innehållande serum vid ett en-till-fyra-förhållande med minsta Eagle's medium kompletterat med L-glutamin, ribonucleosider och deoxyribonucleider. Tillsätt 200 mikroliter av varje utspädning till varje brunn av en benmärgs makrofag kultur i en 96-brunnsplatta.Därefter, initiera osteoklast generation genom att stimulera varje brunn med makrofagkolonistimulerande faktor och receptor aktivator för nuclear factor-kappa B ligand. För in vitro osteoblastogenesis, tillsätt två milliliter av utspädda GSK-innehållande serum till varje brunn av en 24-väl platta ben mesenchymal stamcellsodling. Mikro-datortomografi skanning resultat tyder på att ovariectomized möss visar betydande benförlust jämfört med saltlösning kontroll möss.Intervention med 90 dagars behandling med GSK-granulat ökar kraftigt benmärgstätheten, särskilt hos GSK-behandlade djur med medeldos. GSK granulat behandling leder också till en ökad trabekulär ben nummer, ben volym över total volym, och trabekulära bentjocklek, men en minskad ben-trabekulär ben separation. Tartratresistent syra fosfatas, eller TRAP, färgning avslöjar en ökning av antalet osteoklaster i ovariectomized möss jämfört med kontroll djur, medan GSK granulat behandlingar minska TRAP-positiva osteoklast differentiering jämfört med de ovariectomized djur.GSK granulatinnehållande serum minskar också antalet TRAP-positiva osteoklaster jämfört med serum som samlats in från kontrolldjur. Den framgångsrika penetrationen av nålen i bukaortan är avgörande för att garantera att en tillräckligt hög volym blod skördas från varje råtta. Ett lyckat utförande av denna metod bör tilldela ackumuleringen av 15 till 20 millimeter blod, tillräckligt med material för att användas för in vitro-experiment.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MRI för Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Utvärdera effektiviteten i Cancer Drug Sensibilisering<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validering av Nanobody och antikroppsbaserade<em&gt; In Vivo</em&gt; Tumör Xenograft NIRF-imaging Experiment i möss med användning<em&gt; Ex vivo</em&gt; Flödescytometri och mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Utarmning av musceller från humana tumörxenotransplantat avsevärt förbättrar Nedströms analys av målceller

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimerad Analys av<em&gt; In Vivo</em&gt; och<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatos

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

framställning och<em&gt; In Vitro</em&gt; Karakterisering av Magnetized miR-modifierade endotelceller

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Beredning av växtbaserad medicin: Er-Xian Decoction och Er-Xian-innehållande serum för<em&gt; In vivo</em&gt; Och<em&gt; In Vitro</em&gt; Experiment

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro och In Vivo upptäckt av Mitophagy i mänskliga celler, C. Elegansoch möss

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

Användning av en linjär Accelerator för att genomföra in vitro-radiobiologi experiment

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...