Name: preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments
Uploaded: 2019-05-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Bu çalışmada Çin Ulusal Doğal Bilim Vakfı (81804116, 81673991, 81770107, 81603643 ve 81330085), yenilikçi takım, bilim ve Teknoloji Bakanlığı (2015RA4002 WYJ), programı için program hibe tarafından desteklenmektedir Yenilikçi takım, Çin Eğitim Bakanlığı (WYJ için IRT1270), Şangay TCM tıbbi merkezi kronik hastalık (2017ZZ01010 WYJ için), üç yıl eylem geleneksel Çin tıp planının gelişimini hızlandırmak için (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 WYJ için), ve Ulusal anahtar araştırma geliştirme projeleri (2018YFC1704302).

Tüm deneysel prosedürler, Shanghai Üniversitesi TCM (SZY201604005) Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi onayı ile yapılmıştır.
1. GSK çalışma çözümünün hazırlanması ve yönetilmesi
<ol><li>Fare için GSK granül eşdeğer dozlarda hesaplayın.<ol>
<li>Meeh-Rubner denklemine dayalı vücut yüzeyini hesaplayın15: vücut yüzeyi = k x (vücut ağırlığı2/3)/1000, k değerleri, insan için 10,6 ve fare için 9,1. İnsan vücudu ağırlığı...

<ol>
	<li>Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shen+(Kidney)-tonifying+principle+for+primary+osteoporosis:+to+treat+both+the+disease+and+the+Chinese+medicine+syndrome.">Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+naturally+derived+small+compound+Osthole+inhibits+osteoclastogenesis+to+prevent+ovariectomy-induced+bone+loss+in+mice.">The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice.</a> Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).</li><li>Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Herbal+Medicine:+Er-Xian+Decoction+and+Er-Xian-containing+Serum+for+In+vivo+and+In+vitro+Experiments.">Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55654 (2017).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+bone+protective+effects+of+Gushukang+granules+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis+and+stimulating+osteoblastogenesis.">The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).</li><li>Bian, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+an+osteoprotective+effect+in+ovariectomy-induced+osteoporotic+rats+and+stimulates+the+osteoblastic+differentiation+of+bone+mesenchymal+stem+cells+in+vitro.">Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro.</a> Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).</li><li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleanolic+acid+exerts+bone+protective+effects+in+ovariectomized+mice+by+inhibiting+osteoclastogenesis.">Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis.</a> Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).</li><li>Tang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osthole+Stimulates+Osteoblast+Differentiation+and+Bone+Formation+by+Activation+of+&#946;-Catenin-BMP+Signaling.">Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of &#946;-Catenin-BMP Signaling.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439 (2016).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha+induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gushukang+exerts+osteopreserve+effects+by+regulating+Vitamin+D+and+Calcium+metabolism+in+ovariectomized+mice.">Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice.</a> Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).</li><li>Cui, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+study+of+Shen+(Kidney)tonifying+prescription+Gushukang+in+Preventing+and+Treating+Primary+Osteoporosis.">Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis.</a> Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).</li><li>Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+gushukang+on+osteoclast+cultured+from+type+I+diabetic+rat+in+vitro-a+preliminary+study.">Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study.</a> Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).</li><li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pharmacology Experiment. , (1996).</li><li>Zhao, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+causes+osteoporosis+in+C57BL/6+male+mice:+suppressive+effects+of+cyclophosphamide+on+osteoblastogenesis+and+osteoclastogenesis.">Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis.</a> Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology.">Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology.</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human).">A simple practice guide for dose conversion between animals and human).</a> Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells.">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells.</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway.">Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway.</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study.">A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study.</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Pacifici, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen,+cytokines,+and+pathogenesis+of+postmenopausal+osteoporosis.">Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis.</a> Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).</li><li>Ammann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+soluble+tumor+necrosis+factor-receptor+are+protected+against+bone+loss+caused+by+estrogen+deficiency.">Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency.</a> Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).</li><li>Kimble, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+block+of+interleukin-1+and+tumor+necrosis+factor+is+required+to+completely+prevent+bone+loss+in+the+early+postovariectomy+period.">Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period.</a> Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).</li></ol>

TCM ajanları granüller formülasyonlar veya reçete için ortak seçeneklerden biri haline gelmiştir. GSK granüller klinik deneyimler veya TCM teorisi dayalı çeşitli bitkisel ilaçlar oluşur, ve daha az yan etkileri ile daha iyi küratif efektler uygulamak4. Su kaynatma ile karşılaştırıldığında, granül bu avantajları vardır: iyi tat, teslimat kolaylığı, uzun süreli depolama, standart protokol ve tutarlı iyileştirici etkileri, yanı sıra daha yüksek verimlilik. Şu anda, ...

Geleneksel Çin tıbbı (TCM), osteoporoz tedavisi için önemli tamamlayıcı ve alternatif yaklaşımlardan biridir1,2. Su kaynatma formül3temel ve en sık kullanılan biçimidir. Ancak, dezavantajları da var: kötü tat, taşıma için rahatsızlık, kısa raf ömrü ve tutarsız protokoller, kullanımı yanı sıra iyileştirici etkileri sınırlandırmak. Yukarıdaki dezavantajları önlemek için yanı sıra daha iyi efektler sürdürmek için, granüller geliştirilmiştir ve yaygın olarak kullanılan4. Birçok çalışmada granül5,6,7, bir veya daha fazla etkili bileşenlerin farmakolojik mekanizmaları araştırılmış olsa da, tam mekanizmalar ve altta yatan farmakolojik süreçler hala tanımlamak zordur. Çünkü bir granül çok fazla etkili bileşenleri aynı anda benzer veya karşı etkileri4olabilir. Bu nedenle, gövdeye teslim etmeden önce granül hazırlamak için tek bir standart protokol gelişimi sadece terapötik sonuçlar üzerinde büyük bir etkiye sahip olmaz, hem in vivo hem de in vitro olarak da gereklidir.
Dahası, poliklinikte granüllerin küratif etkileri, farmakolojik mekanizmalar çok karmaşık olduğu için bir zorluk yaratır, in vitro veya ex vivo etütler kullanarak onaylamak ve tam olarak tanımlamak zordur. Bunu çözmek için, ilaç içeren serumun hazırlanması ilk olarak 1980 ' lerde Tashino tarafından önerilmiştir8. O andan itibaren, sayısız araştırmacılar bitkisel tıp ilaç içeren serum uygulanan, granül dahil9,10,11. Şu anda, in vitro araştırmalar için ilaç içeren serum seçimi, fizyolojik koşulları yakından taklit eden bir strateji olarak kabul edilir.
Gushukang (GSK) granüller, TCM teorisi ışığında klinik uygulamaya dayanan Postmenopozal Osteoporoz (POP) tedavisinde geliştirilmiştir. GSK granül, Ovariektomili (OVX) farelerde kemik kaybını önlemekte, osteoklastik kemik reorpsiyonunu inhibe eder ve osteorotik kemik oluşumu4' ü uyarır. Sonuç olarak, li ve al.12 , GSK granüllerinin kemik oluşumunu uyarmak için kalsiyum reseptörün faaliyetlerini geliştirerek OVX farelerinde kemik koruyucu etkilere sahip olduğunu tespit etmiştir. Kemik koruyucu etkilerinin yanı sıra GSK granüllerinin farmakolojik etkilerini onaylamak için, yazarlar burada çalışma çözümleri ve ilaç (GSK Granül)-içeren serum hazırlanması için ayrıntılı bir prosedür sağlar. Dahası, bu makalede, GSK granül bir OVX kaynaklı osteoporoz fare modeli ve GSK granül içeren serum in vitro osteoclastogenesis/osteoblastogenesis için uygulama açıklanır.
GSK granül çeşitli otlar oluşur13,14 ve tamamen tuzlu olarak kolayca çözünebilir. Bu nedenle, saline araç olarak hizmet vermektedir. Sham tarafından çalışan fareler (Sham) ve OVX fareleri, granül uygulanan fareler gibi aynı miktarda tuz uygulanmıştır. Fare için GSK granül eşdeğer dozlarda Meeh-Rubner denklem15dayalı hesaplanır. Bu denklem sadece güvenli dozlarda elde etmek avantajına sahip değil, aynı zamanda farmakolojik etkileri garanti15. GSK granül üç dozlarda aşağıdaki gibi oluşturuldu: (1) GSKL: OVX + düşük doz GSK granül, 2 g/kg/gün. (2) GSKM: OVX + orta doz GSK granül, 4 g/kg/gün. (3) GSKH: OVX + yüksek doz GSK granül, 8 g/kg/gün. Gskl 'de fareler, gskm ve gskh grupları intragastrik GSK granül uygulandı. Vitamin D3 (125 Uluslararası ünite/tablet) ile kalsiyum karbonat (600 mg/tablet), örneğin, Olgun ve pazarlanan bir ürün (örneğin, Caltrate [CAL]) osteoporoz tedavisinde ve önlenmesi için, olumlu bir kontrol olarak kullanıldı.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Hyclone 
			laboratories</td>
			<td>SH30265.018</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Glycerophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5422</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caltrate (CAL)</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>L96625</td>
			<td>Animal interventation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Ainimal preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexamethsome</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2438</td>
			<td>Cell frozen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>60-00-4</td>
			<td>Samples treatmnet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>FL-24562</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gushukang granules</td>
			<td>kangcheng companyin china</td>
			<td>Z20003255</td>
			<td>Herbal prescription</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Olympus BX50</td>
			<td>Images for osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate sequinagneium slat hyclrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td>Osteoblastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI300B</td>
			<td>Osteocast and osteoblast imagine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M-CSF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-300-25-10</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#924;icro-CT</td>
			<td>Scanco 
			Medical AG</td>
			<td>&#956;CT80 radiograph microtomograph</td>
			<td>Bone Structural analsysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RANKL</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>11682-HNCHF</td>
			<td>Osteoclastogenesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>SLAC Laboratory 
			Animal Co. Ltd.</td>
			<td>Random</td>
			<td>Blood serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tartrate-Resistant Acid Phosphate (TRAP) Kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>387A-1KT</td>
			<td>TRAP staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of gushukang (gsk) granules for in vivo and in vitro experiments

Geleneksel Çinli bitkisel tıp, Postmenopozal Osteoporoz (POP) gibi birçok hastalığın tedavisinde alternatif bir yöntem olarak rol oynar. Gushukang (GSK) granüller, Çin 'de pazarlanmış bir reçete, POP tedavisinde kemik koruyucu etkileri var. Vücuda yönetim önce, bir standart hazırlama prosedürü yaygın olarak gereklidir, hangi ham otlar aktif bileşenlerin serbest bırakma teşvik etmek ve farmakolojik etkileri yanı sıra terapötik sonuçları geliştirmek amaçlamaktadır. Bu çalışmada in vivo ve in vitro deneysel olarak GSK granül kullanımı için ayrıntılı bir protokol öneriliyor. Yazarlar ilk in vivo soruşturma için granül hayvan uygun dozajlar hesaplamak için ayrıntılı bir protokol sağlamak: tartım, çözünme, depolama, ve yönetim. Ikinci olarak, bu makalede mikro-CT tarama ve kemik parametrelerinin ölçümü için protokoller açıklanır. Numune hazırlama, mikro-CT makinesini çalıştırmak için protokoller ve kemik parametrelerinin ölçülmesini değerlendirilmiştir. Üçüncü olarak, serum içeren GSK granül hazırlanır ve ilaç içeren serum in vitro osteoclastogenesis ve osteoblastogenesis için ayıklanır. GSK granül üç gün boyunca fareler için günde iki kez intragastrik uygulandı. Daha sonra kan toplanan, santrifübe, inaktive ve filtrelenmiş. Son olarak, serum seyreltilmiş ve osteoclastogenesis ve osteoblastogenesis gerçekleştirmek için kullanılır. Burada açıklanan protokol bitkisel reçete ilaçların farmakolojik araştırmalar için bir referans olarak kabul edilebilir, granül gibi.

Micro-CT tarama sonuçları, OVX farelerinin tuzlu kontrol farelerine göre önemli kemik kaybına neden olduğunu göstermiştir (Şekil 1a). GSK granüllerinin müdahalesi (90 gün) özellikle GSKM grubunda (Şekil 1B) BMD 'yi büyük ölçüde artırmıştır. BMD, BV/TV, TB. N ve Tb.Th gibi kemik yapısı parametreleri niceleyilmiş. GSK granül tedavileri BMD, BV/TV, TB. N ve Tb.Th artmış ama TB. SP (?...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Bu makalede, hayvan çalışmaları için Gushukang granül ve in vitro deneyler için serum içeren GSK granül bir çalışma çözümü hazırlamak için ayrıntılı bir protokol sağlar. Bu protokol, bitkisel ilaçların farmakolojik araştırmalarına ve hem in vivo hem de in vitro deneyler için reçete olarak uygulanabilir.

In vivo ve In vitro deneyler için Gushukang (GSK) granül hazırlanması

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

Bu protokol, in vivo çalışmalar için granüllerin çalışma çözeltisinin hazırlanmasını ve in vitro deneyler için granül içeren serumun hazırlanmasını sağlar. Bu tekniğin bir avantajı, deneyler için oluşturduğunuz malzemelerin ve hayvanların düşük maliyeti nedeniyle yöntemin kolayca tekrarlanabiliyor olmasıdır. Arta sekiz, 16 ve 24 gram Gushukang veya GSK, granülleri tek tek 50 mililitrelik tüpler ekleyerek başlayın.Her tüpe 48 mililitre su ekleyin ve granülleri tamamen eritmek için tüpleri sallayın. Daha sonra, başka bir 50 mililitrelik tüp içine D3 vitamini ile desteklenen kalsiyum karbonat 1.6 tablet yerleştirin ve sallayarak tuzlu 48 mililitre tablet eritin. Çözümlerin intragastrik yönetimi için, ilk olarak hafifçe ama sıkıca elle bir aylık, kadın, C57 Siyah 6 fare iki ila üç dakika boyunca dizginlemek.Fare sakinleştiğinde, GSK granüllerinin bir çözeltisinin 0,24 mililitrelik 12 numaralı gavaj iğnesini yükleyin ve iğne direnci hissedilene kadar gavaj iğnesini ağzının bir tarafından fareye yerleştirin ve iğnenin mideye ulaştığını gösterin. Çalışma çözeltisinin tüm hacmini hayvana enjekte edin. Daha sonra, gavaj iğnesini geri alın ve diğer fareler e-posta ile 0,24 mililitre kalsiyum karbonat ve D3 vitamini çözeltisini aynı şekilde fareye enjekte etmeden önce GSK uygulanırken fareyi kafesine geri getirin.GSK içeren kan serumu toplama için, gsk uygun konsantrasyonları teslim ettikten sonra gavage tarafından bir sıçana sadece gösterildiği gibi, son GSK granül uygulamasından bir saat sonra parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayın. Bir karın deri ve periton kesi olun, ve toraks altına karın maruz. Açıkça damar ortaya çıkarmak için karın aort bağ dokusu kaldırmak için doku kağıt kullanın, ve aort kan çekmek için 22-gauge iğne ile donatılmış bir 10 mililitrelik şırınga kullanın.Kanı steril 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve tüpü oda sıcaklığında 30 ila 60 dakika dik olarak yerleştirin. Kan pıhtılaştığında, serumu ayırmak için tüpü santrifüj edin ve altı fareye kadar tüm serumu 50 mililitrelik yeni bir tüpe aktarın. Serum bileşenlerini 56 derecelik bir su banyosunda 30 dakika boyunca etkisiz hale getirerek serayı karıştırmak için tüpü sallayın.Daha sonra serumu 0,22 mikrometre büyüklüğünde hidrofilik polyethersulfone şırınga filtresinden filtreleyin ve bir yıla kadar eksi 80 santigrat derecede depolayın. In vitro osteoklastogenez için, En az Eagle orta L-glutamin ile takviye ile bir-dört oranında GSK içeren serum üç doz seyreltmek, ribonükleozitler, ve deoksiribonükleozitler. 96 kuyuluk bir tabaktaki kemik iliği makrofaj kültürünün her kuyuya her seyreltmenin 200 mikrolitresini ekleyin.Daha sonra, nükleer faktör-kappa B ligand için makrofaj koloni uyarıcı faktör ve reseptör aktivatör ile her iyi uyararak osteoklast nesil başlatın. In vitro osteoblastogenez için, 24-iyi plaka kemik mezenkimal kök hücre kültürünün her kuyusu seyreltilmiş GSK içeren serum iki mililitre ekleyin. Mikro-bilgisayarlı tomografi tarama sonuçları ovariektomized fareler tuzlu kontrol farelere göre önemli kemik kaybı gösterdiğini göstermektedir.90 günlük GSK granül tedavisiile yapılan müdahale, özellikle orta doz GSK ile tedavi edilen hayvanlarda kemik iliği yoğunluğunu büyük ölçüde artırır. GSK granül tedavisi de artmış trabeküler kemik sayısıyol açar, toplam hacim üzerinde kemik hacmi, ve trabeküler kemik kalınlığı, ancak azalmış kemik-trabeküler kemik ayrılması. Tartatata dirençli asit fosfataz veya TRAP, boyama, kontrol hayvanlarına göre ovariectomized farelerde osteoklast sayısında bir artış ortaya koymaktadır, GSK granül tedavileri ovariectomized hayvanlara göre TRAP pozitif osteoklast farklılaşmasını azaltır.GSK granül içeren serum, kontrol hayvanlarından toplanan seruma göre TRAP pozitif osteoklast sayısını da azaltır. İğnenin abdominal aort içine başarılı bir şekilde girmesi, her sıçandan yeterince yüksek hacimli bir kan topladığını garanti etmek için çok önemlidir. Bu yöntemin başarılı bir şekilde uygulanması, 15 ila 20 milimetre kan birikimini, in vitro deneylerde kullanılacak yeterli malzemeyi tahsis etmelidir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimize Analizi<em&gt; İn Vivo</em&gt; ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Karaciğer Steatoz

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Hazırlık ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Mıknatıslanmış karakterizasyonu Endotel Hücreleri miR-modifiye

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Bitkisel Tıbbın Hazırlanması: Er-Xian Kaynatma ve Er-Xian içeren Serum<emIn vivo</emVe<em&gt; In vitro</em&gt; Deneyler

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Vitro ve In Vivo insan hücreleri, C. Elegansve fareler Mitophagy tespiti

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

In vitro Radiobiology denemeleri için Lineer Hızlandırıcı kullanımı

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...