Name: isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

تم تأسيس هذا العمل من قبل مستشفى جامعة أودنسه (11/31936) والمركز الدنماركي للطب التجديدي (14/50427) وجمعية السرطان الدنماركية.

تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة في البروتوكول من قبل لجنة الأخلاقيات الوطنية الدنماركية (رقم 37054) ، وهيئة الصحة والأدوية الدنماركية (رقم EUDRA-CT 2013-004220-11) والوكالة الدنماركية لحماية البيانات (2008-58-0035). تم تسجيل الدراسة في ClinicalTrials.gov (NCT02240823). أجريت الدراسة وفقا لإعلان هلسنكي الذي رصدته وحدة الممارسة السريرية الجيدة (GCP) في مستشفى جامعة أودنسه. تم إعداد ADRC في مؤسسة أنسجة معتمدة للتعامل مع الأنسجة والخلايا البشرية في مستشفى جامعة أودنسه (هيئة الصحة والأدوية الدنماركية ، ترخيص رقم 29035).
1. توظيف المريض / المشاركين
<ol><li>للمشاركة في التجربة ، قم بتجنيد المرضى الذين يستوفون معايير الإدراج التالية.<ol>
<li>تجنيد المرضى الذين تزيد أعمارهم عن 18 عاما ، والنشطين جنسيا قبل RP وغير المصابين بالأمراض المنقولة جنسيا مثل عدوى فيروس نقص المناعة البشرية أو الزهري أو التهاب الكبد.</li>
		<li>تأكد من أنهم يعانون من ضعف الانتصاب بعد RP الذي تم إجراؤه بسبب سرطان البروستاتا. ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم تسجيل المرضى في الدراسة بعد 5-18 شهرا من RP وتم تضمينهم بغض النظر عن طريقة الجراحة: مفتوحة / مساعدة روبوتية أو تجنيب الأعصاب / عدم تجنيب الأعصاب.</li>
		<li>تأكد من أن قيمة المستضد الخاص بالبروستاتا (PSA) يجب أن تكون غير قابلة للكشف في المتابعة السريرية بعد RP.</li>
		<li>تأكد من أن المرضى كانوا نشطين جنسيا قبل RP ، وما زالوا يعبرون عن رغبتهم في البقاء نشطين جنسيا بعد RP. تأكد من أن التدخل الدوائي مع مثبط فوسفوديستراز من النوع 5 (مثبط PDE5 ) أو تناظرية اصطناعية من البروستاجلاندين E1 (PGE1) قد تمت تجربته قبل المشاركة واعتبر غير كاف.</li>
		<li>علاوة على ذلك ، تأكد من أن المرضى لديهم ما يكفي من الدهون تحت الجلد على البطن أو الفخذ.</li>
	</ol>
</li>
	<li>استبعاد المرضى من التجربة ، إذا كانت هناك أحداث شديدة تحت التخدير أثناء RP أو إذا تم علاجهم بمضادات التخثر.</li>
</ol>2. شفط الدهون
ملاحظة: شفط الدهون هو عملية تزيل الدهون أو الخلايا الشحمية من المنطقة تحت الجلد. يتم تنفيذ هذا الجزء من البروتوكول كشفط الدهون القياسي ويتم تنفيذ الإجراء تحت ظروف معقمة في غرفة العمليات. يجب أن تكون جميع الأدوات المستخدمة في إطار الإجراء معقمة ويجب على الجراح ارتداء الدعك والثوب الجراحي المعقم والقفازات المعقمة والقناع الجراحي والقبعة.
<ol><li>تخدير المريض.<ol>
<li>تأكد من أن المريض تحت التخدير العام أثناء العملية ، ويتم تنفيذ هذا الجزء من قبل طبيب تخدير.</li>
		<li>تطهير جلد البطن وكيس الصفن بالكلورهيكسيدين 0.5٪ (روح كلوريكسيدين ، 96٪ إيثانول ثنائي غلوكونات الكلورهيكسيدين الطبي 77٪ W / W = 83٪ v / v). استخدم علامة جراحية لرسم المناطق الموجودة على البطن والتي سيتم فيها إجراء عملية شفط الدهون. عادة ما تكون المنطقة هي المنطقة الواقعة بين التماثل والسرة.</li>
	</ol></li>
	<li>قم بعمل شقين بعرض 6 مم في جلد البطن باستخدام مشرط (رقم 11). ضع الشقوق بشكل متماثل وجانبي من منطقة شفط الدهون المسحوبة.<ol>
<li>ضع القليل من مواد التشحيم مثل الفازلين على الشقوق ، للتأكد من أن قنية التسلل تنزلق داخل وخارج الشقوق بسهولة أثناء شفط الدهون.</li>
	</ol></li>
	<li>إدخال قنية تسلل بحجم 14 جم من خلال الشقوق في الجلد. حقن محلول كلاينز المعدل تحت الجلد في المناطق المحددة الموازية لسطح الجلد. حقن الكثير من المحلول بحيث تصبح الأنسجة المستهدفة منتفخة وثابتة أو منتفخة. ملاحظة: يتكون محلول Kleins المعدل من محلول من 1000 مل من لاكتات Ringers و 1 ملغ من الأدرينالين (الإبينفرين (1: 1000000)). لا تضع التخدير الموضعي على المحلول ، لأنه قد يكون له تأثير سلبي على ADRCs.<ol>
<li>حقن حجم من محلول كلاينز المعدل الذي يتوافق مع نسبة 1: 1 إلى الأنسجة الدهنية.</li>
		<li>انتظر لمدة 10 دقائق لزيادة تأثير الأدرينالين وتقليل كمية الدم في الأنسجة الدهنية التي يتم حصادها.</li>
	</ol></li>
	<li>قم بإجراء عملية شفط الدهون القياسية باستخدام شفط الدهون بالتسريب النفاث لحصاد 200-300 مل من الأنسجة الدهنية. استخدم القنية الحادة المجوفة ، والتي يتم دمج أنبوب التسريب والفوهة فيها. قم بتوصيل القنية بجهاز شفط لشفط الدهون. ملاحظة: يعمل ضخ الماء المستمر على شكل مروحة على تخفيف الأنسجة الدهنية إلى شظايا يمكن شفطها بسهولة من خلال الفتحة الموجودة في الكانيولا.<ol>
<li>إدخال حقنة 3 مم مع طرف حاد من خلال شقوق على البطن</li>
	</ol></li>
	<li>جمع الأنسجة الدهنية في جامع الدهون للحفاظ على الشحوم في بيئة معقمة. سيبدأ الشحم الشحمي في الانفصال عن مرحلة الماء.</li>
	<li>استخدم محاقن معقمة سعة 50 مل لامتصاص الشحميات من جامع الدهون.<ol>
<li>قلل من حجم الماء الممتص في المحاقن والمسمار على قابس على طرف المحاقن للحفاظ على الأنسجة الدهنية معقمة.</li>
	</ol></li>
	<li>ضع المحاقن مع طرف لأسفل في كيس بلاستيكي معقم لبدء فصل الشحوم عن مرحلة الماء. ضع الكيس في حاوية معقمة مع توجيه الأطراف لأسفل لمواصلة الفصل.<ol>
<li>قم بتغطية الحاوية بستارة معقمة لتأمين البيئة المعقمة أثناء النقل. ملاحظة: وفقا لدليل المستخدم الخاص بالجهاز المستخدم في العزل ، يمكن تخزين الشحميات لمدة تصل إلى 4 ساعات كحد أقصى قبل عزل ADRCs ، ومع ذلك ، فإننا نعالجها دائما على الفور.</li>
	</ol></li>
	<li>أغلق شقوق الجلد مع الجراحين يفضلون مادة خياطة. ضع ثوبا ضاغطا ، وهو رابط في البطن ، حول البطن لتقليل الوذمة بعد العملية الجراحية.</li>
	<li>اصنع كتلة القضيب عن طريق حقن 20 مل بوبيفاكايين 5 ملغم / مل تحتوي على 5 ميكروغرام من الأدرينالين.<ol>
<li>استخدم حقنة سعة 20 مل وضعها بإبرة 23 جم ، طولها 1 1/4 بوصة.</li>
		<li>ضع 5 مل من بوبيفاكايين في كل ربع في تحت الجلد.</li>
		<li>حقن بوبيفاكايين في موقعين، أحدهما يوضع بطنيا والآخر ظهريا. أدخل الإبرة في كامل طولها في الأنسجة تحت الجلد مع توجيه الإبرة أفقيا إلى اليمين وحقن التخدير أثناء سحب الإبرة. كرر الحقن مع توجيه الإبرة إلى اليسار. ملاحظة: يمكن الآن إيقاظ المريض من التخدير العام من قبل طبيب التخدير.</li>
	</ol></li>
</ol>3. عزل ADRCs
ملاحظة: يتم تنفيذ عملية عزل ADRCs كما هو موضح بالتفصيل في دليل المستخدم التالي للجهاز (انظر جدول المواد). من المهم أن يتم تنفيذ الإجراء في ظل ظروف معقمة لضمان عدم تعرض الشحم الشحمي لأي ملوثات أثناء تنقية ADRCs. يعتمد الوقت المستغرق لعزل ADRCs على حجم lipoaspirate ، لكن الإجراء بأكمله سيستغرق حوالي 2.5 ساعة باستخدام الجهاز شبه التلقائي كما هو موضح هنا.
<ol><li>ضع جميع المواد الاستهلاكية والإنزيمات بشكل معقم على طاولة مغطاة بمنشفة جراحية معقمة يمكن التخلص منها. ملاحظة: تحتوي مجموعة الإجراءات على جميع المواد الاستهلاكية والإنزيمات الضرورية اللازمة لعزل ADRCs عن مريض واحد. إلى جانب ذلك ، يجب أن تتوفر ثلاثة أكياس تسريب سعة 37-39 درجة مئوية سعة لتر واحد من Lactated Ringers جنبا إلى جنب مع الملابس المعقمة والقفازات والمناشف والإيثانول للتطهير. دون جميع أعداد القطع من المواد الاستهلاكية والإنزيمات وكذلك درجة حرارة Lactated Ringers ، عند توصيلها بالنظام.<ol>
<li>امسح الجهاز باستخدام الإيثانول واتبع تعليمات الشركة المصنعة</li>
		<li>قم بتحميل مجموعة المواد الاستهلاكية على الجهاز وقم بتوصيل كيس من Lactated Ringers بالنظام.</li>
		<li>قم بإجراء سلسلة من الاختبارات شبه التلقائية (فحص النظام واختبار التسرب) قبل إضافة lipoaspirate.</li>
	</ol>
</li>
	<li>دع الشحميات تقف في أنابيب 50 مل أثناء تنفيذ الخطوات في 3.1. هذا سيسمح للدهون بالانفصال عن المرحلة السائلة. دون الكمية الإجمالية (بالمل) من الأنسجة الدهنية واستخدمها للتأكد من أن كمية الدهون المحملة ستكون في نطاق سعة الجهاز.</li>
	<li>قم بتحميل الأنسجة عندما يطلب منك الجهاز ذلك. ستقوم الماكينة الآن بتصريف السوائل الزائدة ووزن كمية الأنسجة الدهنية المحملة قبل غسلها باستخدام Lactated Ringers.<ol>
<li>عندما يتم غسل الأنسجة وتصريفها مرة أخرى ، قم بتوصيل كيس تسريب جديد ب 37-39 درجة مئوية من الرنين المرضع عند طلب الماكينة.</li>
		<li>أعد تشكيل الإنزيم المتاح تجاريا الذي يحتوي على مزيج الكولاجيناز والبروتياز في 5 مل من الرنين المرضع (قارورة واحدة من الإنزيم تكفي لكميات الدهون التي تصل إلى 270 مل).</li>
		<li>تأكد من أن الجهاز يعرض كمية الإنزيم (بناء على وزن الأنسجة) لحقنه في العلبة بالأنسجة الدهنية. بمجرد حقنه ، سيستمر الهضم الأنزيمي الذي يتم تحت الإثارة حوالي 20 دقيقة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>بعد هضم الأنسجة ، دع المحرض يتوقف ويتحقق من فصل المحتوى إلى مرحلتين: مرحلة صفراء تحتوي على الدهون العليا وطبقة وردية سفلية تحتوي على ADRCs. دع الطبقة الأخيرة تستنزف في غرفة معالجة الخلايا (التي تدخل في جهاز الطرد المركزي المدمج في الجهاز) من المجموعة الاستهلاكية ، مع ترك طبقة الدهون وراءها.</li>
	<li>دع ADRCs تتركز في غرفة معالجة الخلايا خلال جولات متعددة من الطرد المركزي. الآن أضف 10 مل من Intravase (يحتوي على DNase ، مما يساعد على تجنب التكتل في تعليق ADRC النهائي) المعاد تشكيله في Lactated Ringers. يستمر التفاعل الأنزيمي لمدة 10 دقائق وبعد ذلك يتم غسل ADRCs. ملاحظة: هذه الخطوة تلقائية بالكامل، وسيقوم الجهاز بإبلاغ وقت الانتهاء من العملية.</li>
	<li>عند اكتمال عزل ADRCs ، أعد تعليق الخلايا في 5 مل من Ringer Lactate. استنشاق الحل في حقنة 5 مل.</li>
	<li>قم بتركيب قفل Luer-lock من 3 اتجاهات على حقنة 5 مل تحتوي على ADRCs ، وقم بشفط 4 مل من ADRCs في حقنة معقمة أخرى سعة 5 مل.</li>
	<li>انقل آخر 1 مل إلى حقنة 1 مل. استخدم هذا 1 مل لتوصيف ADRC على سبيل المثال ، عدد الخلايا ، وجدوى الخلية ، وتحليل علامات السطح عن طريق قياس التدفق الخلوي والقدرة على تمايز ADRC.</li>
	<li>ضع إبرة 25 جم على حقنة سعة 5 مل تحتوي على 4 مل من ADRC قبل تعبئتها في ستارة معقمة. استخدم ADRCs للحقن في المتلقي. في هذه الحالة ، سيحتوي محلول ADRCs في المتوسط على 8.4-32.7 مليون خلية.</li>
</ol>4. زرع ADRCs في الجسم الكهفي
ملاحظة: هذا إجراء معقم. يجب أن تكون جميع الأدوات معقمة ، ويجب على الشخص الذي يحقن المحلول الذي يحتوي على الخلايا الجذعية في الجسم الكهفي ارتداء قفازات معقمة. المريض مستيقظ أثناء هذا الإجراء وسيتلقى خلاياه الجذعية الخاصة. يتم حقن ADRCs دون حساب الخلايا قبل الحقن.
<ol><li>حافظ على تجانس محلول ADRCs عن طريق إمالة المحقنة بلطف حتى يتم حقنها في الجسم الكهفي.</li>
	<li>ضع ستارة فتحة فوق القضيب. ضع عاصبة في جذر القضيب باستخدام حلقة وعاء سيليكون. شد الحلقة وتأمينها باستخدام البازلاء المنحنية الملقط. اجعل العاصبة ضيقة بما يكفي لوقف تدفق الدم من القضيب.</li>
	<li>استخدم مبادلتين مطهرتين لتطهير جلد القضيب في موقع الحقن (الموقع الجانبي للجسم الكهفي). حقن 1 مل من المحلول الذي يحتوي على ADRCs ، بزاوية مباشرة في الجسم الكهفي على الجانب الأيمن في مكانين مختلفين ، كرر هذه الخطوة بعد ذلك في الجسم الكهفي الأيسر. الحجم الإجمالي ل ADRCs المحقونة هو 4 مل.</li>
	<li>انتظر لمدة 30 دقيقة ثم قم بإزالة العاصبة.</li>
	<li>تفريغ المريض بعد 2 ساعة من المراقبة بعد حقن ADRCs ، لضمان تعافي المريض جيدا بعد التخدير.</li>
</ol>5. رعاية ما بعد الجراحة
<ol><li>يوصي المريض بعدم القيام بأي أداء بدني يمكن أن يرفع ضغط الدم خلال الأسبوع الأول، لمنع تطور الأورام الدموية.</li>
	<li>نوصي المريض بارتداء الموثق البطني لمدة 24 ساعة في أول 14 يوما بعد الجراحة وفيما بعد لمدة 14 يوما خلال النهار.</li>
	<li>علاج الألم بعد الجراحة باستخدام الأسيتامينوفين الفموي (على سبيل المثال، الباراسيتامول؛ 1000 ملغ، 4 مرات في اليوم) ومضاد للالتهابات عن طريق الفم (على سبيل المثال، الإيبوبروفين؛ 400 ملغ 3 مرات في اليوم).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1,+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats.">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li><li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction.">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li><li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+baseline:+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients'+perspective.">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li><li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy:+what+the+evidence+really+says.">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li><li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting:+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail.">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li><li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model.">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), 1391-1400 (2010).</li><li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells.">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), 89-98 (2010).</li><li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction.">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial.">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li><li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart.">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction.">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14 (2016).</li><li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal/stem+cells:+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+(IFATS)+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+(ISCT).">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial.">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203 (2018).</li><li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth.">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li><li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells:+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking.">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury.">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13 (2013).</li><li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia.">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li></ol>

المؤلف سورين ب. شيخ هو الرئيس التنفيذي لشركة Blue Cell Therapeutics ، كوبنهاغن ، الدنمارك.

لا يقتصر الإجراء المقدم لعزل ADRCs على استخدامه فقط لعلاج الضعف الجنسي ، ولكن يمكن استخدامه في أشكال أخرى متعددة من العلاج والتجارب. أظهرت تجربتنا أن ADRCs الذاتية والمعزولة حديثا آمنة للاستخدام ، وأن العلاج مقبول بشكل جيد في متابعة مدتها 12 شهرا.
قبل استخدام الإجراء ، هناك بعض الاعتبارات التي يجب مراعاتها. عيب هذا الإجراء هو أن المريض يجب أن يكون تحت التخدير العام أثناء شفط الدهون. من الممكن إجراء عملية شفط الدهون تحت التخدير الموضعي ، لكن تجربة سابقة أظهرت أن مزيجا من التخدير الموضعي والأدرينالين قد يكون له تأثير سلبي على نمو خلايا الخلايا الليفية20. خطر التعرض للتخدير العام منخفض بشكل عام ، ولكن لا يزال ينظر إلى نتيجة سلبية. يجب أن تؤخذ هذه المخاطر في الاعتبار عند اختيار المرضى للعلاج. شفط الدهون هو إجراء جراحي ، وبالتالي ، سوف يحمل دائما خطر حدوث مضاعفات. كما هو الحال مع جميع العمليات الجراحية الأخرى ، هناك خطر حدوث نزيف بعد العملية الجراحية مما يؤدي إلى تكوين أورام دموية وخطر العدوى. أبلغ بعض مرضانا أيضا عن انخفاض عابر في حساسية جلد البطن. المضاعفات الفورية لشفط الدهون هي النزيف. من المعروف أن المرضى يخاطرون بالحصول على مضاعفات جهازية عند إزالة كميات كبيرة من الأنسجة. كان شفط الدهون في هذا الإجراء صغيرا نسبيا وبالتالي لا يعتبر عامل خطر.
يتم الإبلاغ عن مضاعفات حقن الخلايا على أنها احمرار عابر وحنان وأورام دموية.
تم اختيار الجهاز المستخدم لعزل ADRCs ، لأن النظام معتمد من CE. في الدنمارك ، من الضروري استخدام المعدات المعتمدة من CE لأن السلطات تصنف العلاج بالخلايا الجذعية كتجربة اختبار المخدرات ، عندما يتم استخدام ADRC للحقن في البشر.
يتمتع الجهاز بمزايا مثل توحيد الإجراء بأكمله وتنفيذه في بيئة معقمة مغلقة دون الحاجة إلى مختبر عالي السرية. وبالتالي ، يتم تقليل خطر التلوث. هذا يضمن أن الإجراء موحد وقابل للتكرار ، وأن جودة المنتج النهائي هي نفسها دائما في كل مرة (ومع ذلك ، فإنه يعتمد أيضا على جودة أنسجة المدخلات). يعد إجراء العزل على الجهاز أمرا سهلا ولا يتطلب مشغلين متعلمين بشكل خاص.
أحد قيود الجهاز هو أن الحد الأدنى من الإدخال في الجهاز هو 100 غرام من الدهون المستنزفة. نظرا لأن شفط الدهون قد انتهى تماما قبل بدء معالجة الخلايا (وفي حالتنا ، في موقع مختلف ، وليس في غرفة العمليات) في تجربتنا ، فإن هذا سيتطلب أن تكون كمية الشحم الشفتيرية 125 مل على الأقل باستخدام المقياس التقريبي لمحاقن 50 مل. خلاف ذلك ، هناك خطر من عدم وجود مواد كافية للآلة للمضي قدما. أيضا ، فإن استخدام الحد الأقصى للنهاية (الحد الأقصى للإدخال هو 425 مل) سيؤدي إلى إجراء عزل طويل جدا.
يبدو أن الخلايا الجذعية البالغة من كل من الأنسجة الدهنية ونخاع العظم لديها القدرة على التجديد الذاتي والتمايز مثل الخلايا الجذعية الجنينية. واحدة من مزايا ADRCs على الخلايا الجذعية المكونة للدم هي عائد أعلى 100-500 مرة لكل حجم الأنسجة مقارنة بنخاع العظم21,22 ، وبالتالي ، لا تحتاج ADRCs إلى الاستزراع. علاوة على ذلك ، فإن الخلايا الجذعية المكونة للدم أكثر صعوبة وأكثر إيلاما في الحصاد من المريض من الأنسجة الدهنية. في كثير من الحالات ، تكون الأنسجة الدهنية مجرد منتج نفايات بعد الجراحة. من الممكن استزراع الخلايا الجذعية لإعطاء عائد أعلى مناسب لتكوين الأوعية الدموية ، ولكن قد يكون ل ADRC المعزول حديثا إمكانات وعائية أعلى من23 المستزرعة.

الخلايا الجذعية لديها القدرة على التمايز إلى أنواع مختلفة من الخلايا ، وهي تفرز عوامل باراكرين يعتقد أنها تعزز عملية الشفاء في الأنسجة التالفة1،2،3،4. وبالتالي ، فهي جذابة في مجال الطب التجديدي ، لأنها يمكن أن تمثل علاجا علاجيا ممكنا.
استئصال البروستاتا الجذري (RP) هو العلاج العلاجي الذهبي للمرضى الذين يعانون من سرطان البروستاتا الموضعي منخفض / متوسط الخطورة ومتوسط العمر المتوقع > 10 سنوات. الهدف من الجراحة هو القضاء على السرطان ، ولكن له العديد من الآثار الجانبية. يتراوح انتشار سلس البول بعد استئصال البروستاتا من 2-60٪ ويعاني 20-90٪ من المرضى من ضعف الانتصاب (ED) من5. تعد تقنية تجنيب الأعصاب خيارا متاحا لدى بعض المرضى (درجة غليسون < 7 ، وانخفاض خطر الإصابة بمرض خارج الكبسولة)5. هذه التقنية تنقذ الأعصاب المسؤولة عن الانتصاب ، ولكن على الرغم من أن هذا ممكن ، إلا أن العديد من المرضى ما زالوا يبلغون عن الضعف الجنسي بعد الجراحة.
تتكون خيارات العلاج لإعادة تأهيل القضيب بعد RP في المقام الأول من العلاج باستخدام مثبطات PDE-5 ، والعلاج بالحقن أو التقطير ومضخات التفريغ. تختلف الأدوية المستخدمة لإعادة تأهيل القضيب من الناحية الدوائية ، ولكن آلية عملها تشمل استرخاء خلايا العضلات الملساء في الجسم الكهفي. ومع ذلك ، فإن العديد من المرضى يعانون من فشل العلاج ولا يحققون أبدا تأثيرا للدواء الذي يمكن الجماع6.
يعتقد أن الضعف الجنسي الذي يحدث بعد RP يرجع إلى تغييرات لا رجعة فيها هيكليا7. تحدث هذه التغيرات في الأنسجة الكهفية وتشمل موت الخلايا المبرمج للخلايا الملساء والبطانية والتليف. آلية انسداد الوريد المسؤولة عن جزء مركزي من الانتصاب ، تضعف بسبب التغييرات ، مما يؤدي إلى ملء وصلابة القضيب7.
يفيد العديد من المرضى أن الضعف الجنسي الذي يعانون منه له تأثير سلبي على نوعية حياتهم8. إنهم ليسوا مستعدين للتخلي عن نشاطهم الجنسي بعد الجراحة ، وبالتالي ، فإن العلاج العلاجي للضعف الجنسي جذاب ، عندما تفشل العلاجات الأخرى المتاحة لإعادة تأهيل القضيب.
في التجارب السابقة ، بما في ذلك التجارب على الحيوانات والمرحلة الأولى الصغيرة على البشر ، أظهرت الخلايا الجذعية نتائج واعدة كعلاج بديل ل ED 2,9,10,11,12. تظهر النتائج أنه من الآمن استخدام ADRCs ، وأن وظيفة الانتصاب تتحسن بشكل كبير بعد حقنة واحدة في الجسم الكهفي2،9،10،11،12. يعتقد أن الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون (ADRCs) تدعم تجديد الأنسجة بواسطة آليات paracrine من خلال تحرير الهرمونات المتعددة ، وعوامل النمو العصبية وغيرها ، والسيتوكينات ، وربما الحمض النووي الريبي الصغير13. بالإضافة إلى ذلك ، فإن ADRCs قادرة على التمايز إلى عدة أنواع من الخلايا الناضجة بما في ذلك خلايا العضلات البطانية والوعائية وخلايا الغضاريف والخلايا العظمية والخلايا العصبية14,15. هذه الخصائص تجعل الخلايا الجذعية مثيرة للاهتمام لتطوير علاج جديد دائم لضعف الانتصاب.
تنقسم الخلايا الجذعية إلى عدة مجموعات، أساسا تلك المشتقة من الجنين المبكر (الخلايا الجذعية الجنينية) وتلك من الأنسجة البالغة (الخلايا الجذعية البالغة). تشمل الخلايا الجذعية البالغة الخلايا الجذعية الوسيطة (MSC) متعددة القدرات ويمكن العثور عليها في نخاع العظم والأنسجة الدهنية ودم الحبل السري والمشيمة ولب الأسنان17.
من السهل الوصول إلى الخلايا الجذعية من الأنسجة الدهنية ، على عكس الخلايا الجذعية المشتقة من نخاع العظام. حصاد الخلايا الجذعية من نخاع العظم هو إجراء محفوف بالمخاطر ومؤلم مقارنة بشفط الدهون. سيكون عدد الخلايا التي يمكن حصادها من نخاع العظم محدودا ، في حين أن مستودعات المريض فقط من الأنسجة الدهنية تحدد الحد الأقصى لعدد الخلايا التي يمكن حصادها. لذلك ، من الممكن عزل كمية كبيرة من الخلايا الجذعية من الأنسجة الدهنية دون الحاجة اللاحقة إلى زراعة الخلايا للحصول على كمية مرضية. تتكون الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون ، والتي يشار إليها أيضا باسم الجزء الوعائي اللحمي (SFV) ، من العديد من أنواع الخلايا بما في ذلك MSCs والخلايا البطانية والخلايا المحيطة والخلايا المناعية والأسلاف هنا18. قد تلعب كل هذه دورا في عملية التجديد.
الهدف من هذه الدراسة هو التحقيق في تأثير الخلايا الجذعية على الضعف الجنسي بعد RP باستخدام 4 مل من ADRCs الذاتية المعزولة من الأنسجة الدهنية التي تم حصادها حديثا بعد الحقن في الجسم الكهفي.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liposuction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abdominal Binder</td>
			<td>Dale</td>
			<td></td>
			<td>Size depent of the patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhessive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adrenalin 1 mg/ml</td>
			<td>Amgros I/s</td>
			<td>74 44 23</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic OP supplies</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>97010873-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel blade 11</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhixidine Ethanol</td>
			<td>Faarborg Pharma</td>
			<td>5% colored</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable set Lipocollector 3</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>670200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension hoses</td>
			<td>Extrudan</td>
			<td></td>
			<td>5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaze Rags</td>
			<td>Barrier</td>
			<td>175201</td>
			<td>30x45 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jelonet</td>
			<td>Smith and Nephew Medical Ltd</td>
			<td>90509225</td>
			<td>10 x 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram</td>
			<td>Astra Zeneca</td>
			<td></td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesorb Bandage</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>677001</td>
			<td>10x13 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304622</td>
			<td>18 G + 23 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>04:00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer-lactat</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>330052065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gown</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>690103-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Marker</td>
			<td>Richard-Allan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Mask</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Codan Medical</td>
			<td>6,28,402</td>
			<td>50/60 ml cath tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>700016181</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>REF 500001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolation of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>REF 303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 way stopcock</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF 10554-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care AB</td>
			<td>REF 906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytori Celution 800IV device</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swaps</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>25G (0,5*25 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitril Gloves</td>
			<td>Abena</td>
			<td></td>
			<td>Powder free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OR drape Sheet, 2 layers</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher</td>
			<td>REF 33005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Lactate</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td>06756 (DK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Termometer</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td></td>
			<td>traceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aperture drape</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF1565-01</td>
			<td>75*90 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swap</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pean</td>
			<td>Leibinger</td>
			<td>32-01257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Vessel Loop</td>
			<td>Purple Surgical</td>
			<td>REF PS3203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Sempermed</td>
			<td></td>
			<td>Or Use your favorite</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy

تستخدم الخلايا الجذعية في العديد من مجالات البحث في الطب التجديدي جزئيا لأن هذه العلاجات يمكن أن تكون علاجية بدلا من أعراضها. يمكن الحصول على الخلايا الجذعية من أنسجة مختلفة وقد تم وصف عدة طرق للعزل. يمكن استخدام الطريقة المقدمة لعزل الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون (ADRCs) في العديد من المجالات العلاجية لأن الطريقة هي إجراء عام ، وبالتالي ، لا تقتصر على علاج ضعف الانتصاب (ED). الضعف الجنسي هو أحد الآثار الجانبية الشائعة والخطيرة لاستئصال البروستاتا الجذري (RP) لأن الضعف الجنسي غالبا ما لا يتم علاجه بشكل جيد مع العلاج التقليدي. وقد اجتذب استخدام ADRC كعلاج للضعف الجنسي اهتماما كبيرا بسبب النتائج الإيجابية الأولية بعد حقن واحد من الخلايا في الجسم الكهفي. الطريقة المستخدمة لعزل ADRC هي عملية بسيطة وآلية ، قابلة للتكرار وتضمن منتجا موحدا. علاوة على ذلك ، يتم ضمان عقم المنتج المعزول لأن العملية برمتها تتم في نظام مغلق. من المهم تقليل خطر التلوث والعدوى لأن الخلايا الجذعية تستخدم للحقن في البشر. يمكن إجراء الإجراء بأكمله في غضون 2.5-3.5 ساعات ولا يتطلب مختبرا سريا يلغي الحاجة إلى شحن الأنسجة إلى خارج الموقع. ومع ذلك ، فإن الإجراء لديه بعض القيود لأن الحد الأدنى لكمية الشحميات المستنزفة لجهاز العزل ليعمل هو 100 جم.

تم استخدام الإجراء المقدم لتجربة سريرية مفتوحة التسمية للمرحلة 1 بما في ذلك 21 مريضا19. كانت نقطة النهاية الأساسية للتجربة هي سلامة استخدام ADRC في البشر وكانت نقطة النهاية الثانوية هي تأثير ADRC على وظيفة الانتصاب.
تم تضمين واحد وعشرين رجلا في التجربة بمتوسط عمر 60 عاما (يتراوح بين 46 و 69) وانتصاب طبيعي وحياة جنسية نشطة قبل RP بسبب سرطان البروستاتا. لقد عانوا جميعا من الضعف الجنسي بعد RP ، مع عدم وجود علامات على الشفاء من الأدوية المتاحة لإعادة تأهيل القضيب. عانى ستة رجال من سلس البول كأثر جانبي ل RP. تلقى جميع الرجال حقنة واحدة داخل الكهف من ADRC المعزولة بالطريقة المقدمة.
تمت متابعة جميع الرجال ال 21 ب 4 زيارات في العيادة الخارجية في 1،3،6 و 12 شهرا بعد الحقن. تم تقييم الوظيفة الجنسية من خلال استبيانات تم التحقق منها - المؤشر الدولي لوظيفة الانتصاب -5 (IIEF-5) ودرجة صلابة الانتصاب (EHS) (المرفقة كملاحق).
لم تقع أي أحداث خطيرة خلال وقت الملاحظة. أبلغ ثمانية رجال عن احمرار وتورم عابرين في مواقع الحقن ، وأبلغ ثلاثة منهم عن رد فعل في منطقة القضيب. تم الإبلاغ عن ثمانية أحداث طفيفة قابلة للانعكاس تتعلق بشفط الدهون مثل عدم الراحة الخفيفة في البطن والأورام الدموية البسيطة في البطن. لم يبلغ أي مريض عن عدم الراحة في متابعة شهر 1. أفاد ثمانية من أصل خمسة عشر (53٪) في مجموعة القارة أن وظيفة الانتصاب كانت كافية للجماع في 12 شهرا. لم تظهر المجموعة المكونة من 6 رجال مصابين بسلس البول أي تحسن في وظيفة الانتصاب.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>قارة</td>
			<td>سلس البول</td>
		</tr>
<tr>
<td>المرضى المشمولون</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>تأثير كبير</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: يوضح الجدول الاختلافات في التأثير الكبير للعلاج بين مرضى القارة ومرضى سلس البول.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

يعد الكشف الدقيق عن الأساليب والبروتوكولات أمرا بالغ الأهمية لاستيعاب علاجات الخلايا الجذعية على نطاق واسع. هنا ، نقدم بروتوكولا لعزل الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون ، والتي تستخدم لحقن واحد داخل الكهف كعلاج لضعف الانتصاب (ED) بعد استئصال البروستاتا الجذري (RP).

عزل الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون لعلاج ضعف الانتصاب بعد استئصال البروستاتا الجذري

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

يمكن استخدام تقنية العزل هذه لاستكشاف ما إذا كانت الخلايا الجذعية الدهنية يمكن أن تساعد المرضى على تجديد وظيفة الانتصاب بعد استئصال البروستاتا الجذري. هذه الطريقة لا تقتصر على مرض معين. يمكن استخدامه في جميع مجالات أبحاث الخلايا الجذعية الدهنية.تستخدم الخلايا الجذعية المعزولة لعلاج ضعف الانتصاب، ولكن تقنية العزل هي إجراء عام ويمكن أن تكون الخلايا الجذعية مفيدة في مجالات أخرى ضمن أبحاث الخلايا الجذعية. ابدأ بتطهير جلد البطن وكيس الصفن بنسبة 0.5٪ من الكلورهيكسيدين. استخدم علامة جراحية لرسم المناطق الموجودة على البطن حيث سيتم إجراء شفط الدهون ، وعادة ما تكون المنطقة الواقعة بين التوليف والسرة.قم بعمل شقين بعرض ستة ملليمترات في جلد البطن باستخدام مشرط رقم 11. ضع الشقوق بشكل متماثل وجانبي من المنطقة المسحوبة لأعلى من شفط الدهون. ضع القليل من مواد التشحيم على الشقوق للتأكد من أن قنية التسلل تنزلق داخل وخارج الشقوق بسهولة أثناء شفط الدهون.ثم أدخل قنية تسلل بحجم 14 مقياسا من خلال الشقوق في الجلد. حقن محلول كلاين المعدل تحت الجلد في المناطق المحددة الموازية لسطح الجلد حتى يصبح النسيج المستهدف منتفخا وثابتا أو منتفخا. حقن حجم من محلول كلاين المعدل بنسبة واحد إلى واحد إلى واحد إلى الأنسجة الدهنية.انتظر لمدة 10 دقائق لزيادة آثار الأدرينالين إلى أقصى حد ، وتقليل كمية الدم في الأنسجة الدهنية التي يتم حصادها. قم بإجراء شفط الدهون بالتسريب النفاث القياسي لحصاد 200 إلى 300 ملم من الأنسجة الدهنية. استخدم القنية الحادة المجوفة مع أنبوب ضخ وفوهة مدمجين.قم بتوصيل القنية بجهاز شفط لشفط الدهون. أدخل حقنة بثلاثة ملليمترات مع طرف حاد من خلال الشقوق الموجودة على البطن وجمع الأنسجة الدهنية في Lipo Collector للحفاظ على الشحم الشحمي في بيئة معقمة. سيبدأ الشحم الشحمي في الانفصال عن مرحلة الماء.استخدم محاقن معقمة سعة 50 ملليلتر لامتصاص الشحميات من LipoCollector ، مما يقلل من حجم الماء الممتص في المحاقن. قم بربط قابس على طرف المحاقن للحفاظ على الأنسجة الدهنية معقمة. ضع المحاقن مع طرف لأسفل في كيس بلاستيكي معقم لبدء فصل الشحوم الشحمية عن مرحلة الماء.ثم ضع الكيس في وعاء معقم. قم بتغطية الحاوية بستارة معقمة لتأمين البيئة المعقمة أثناء النقل. أغلق شقوق الجلد بمادة الخياطة المفضلة لدى الجراح.ضع ثوبا ضاغطا حول البطن لتقليل الوذمة بعد العملية الجراحية. لصنع كتلة القضيب ، حقن بوبيفاكايين في موقعين ، أحدهما يوضع بطنيا والآخر ظهريا. أدخل الإبرة بأكملها في الأنسجة تحت الجلد ، ووجهها أفقيا إلى اليمين ، وحقن التخدير أثناء سحب الإبرة.كرر الحقن ، مع توجيه الإبرة إلى اليسار. ضع جميع المواد الاستهلاكية والإنزيمات بشكل معقم على الطاولة المغطاة بمنشفة جراحية معقمة يمكن التخلص منها. امسح الجهاز بالإيثانول وقم بتحميل المجموعة الاستهلاكية.ثم قم بتوصيل كيس من الرنين المرضع بالنظام. قم بإجراء سلسلة من الاختبارات شبه التلقائية قبل إضافة lipoaspirate. أثناء إعداد الجهاز ، دع الشحوم الشحمية تقف في أنبوب 50 ملليلتر للسماح للدهون بالانفصال عن المرحلة السائلة.لاحظ الكمية الإجمالية للأنسجة الدهنية واستخدمها للتأكد من أن إجمالي كمية الدهون المحملة سيكون في نطاق سعة الجهاز. قم بتحميل الأنسجة عندما يطلب منك الجهاز ذلك. سوف تستنزف الماكينة السوائل الزائدة.وزن كمية الأنسجة الدهنية وغسلها مع الرنين المرضعات. عندما يتم غسل الأنسجة وتصريفها ، قم بتوصيل كيس تسريب جديد ب 37 إلى 39 درجة مئوية من الرنينات المرضعة. أعد تشكيل الإنزيم المتاح تجاريا الذي يحتوي على مزيج الكولاجيناز والبروتياز في خمسة ملليلتر من الرنين المرضع.تأكد من أن الجهاز يعرض كمية الإنزيم المراد حقنه في العلبة بالأنسجة الدهنية. بمجرد حقن الهضم الأنزيمي سيستمر حوالي 20 دقيقة. بعد هضم الأنسجة ، تحقق من فصل المحتوى إلى دهون عليا تحتوي على مرحلة صفراء وطبقة وردية سفلية تحتوي على الخلايا التجديدية المشتقة من الدهون ، أو ADRCs.دع الطبقة الوردية تستنزف في غرفة معالجة الخلايا في المجموعة الاستهلاكية ، تاركة طبقة الدهون وراءها. اسمح ل ADRCs بالتركيز في غرفة معالجة الخلايا أثناء جولات متعددة من الطرد المركزي. ثم أضف 10 ملليلتر من داخل القاعدة المعاد تشكيلها في الحلقات المرضعة.يستمر التفاعل الأنزيمي لمدة 10 دقائق ويتم غسل ADRCs بعد ذلك. عندما يكتمل عزل ADRCs ، أعد تعليق الخلايا في خمسة ملليلترات من لاكتات رينجر واستنشق المحلول في حقنة سعة خمسة ملليلترات. قم بتركيب قفل Luer أنثى ثلاثي الاتجاهات على المحقنة وقم بشفط أربعة ملليلترات من ADRCs في حقنة معقمة أخرى بسعة خمسة ملليلترات.انقل آخر ملليلتر من ADRCs إلى حقنة ملليلتر واحدة. استخدم هذا المصطلح لتحليلات توصيف ADRC ، مثل عدد الخلايا ، وجدوى الخلية ، وتحليل علامات السطح بواسطة قياس التدفق الخلوي ، وقدرة تمايز ADRC. ضع إبرة قياس 25 على حقنة خمسة ملليلتر تحتوي على أربعة ملليلترات من ADRCs.ثم قم بتعبئتها في ستارة معقمة. سيتم حقن هذا المحلول من ADRCs في المتلقي ويجب أن يحتوي في المتوسط على 8.4 إلى 32.7 مليون خلية. تأكد من أن محلول ADRCs يظل متجانسا عن طريق إمالة المحقنة بلطف حتى يتم حقنها في الجسم الكهفي.ضع ستارة فتحة فوق القضيب. وعاصبة في جذر القضيب مع حلقة وعاء سيليكون. شد الحلقة وثبتها بملقط ، مما يجعل العاصبة ضيقة بما يكفي لوقف تدفق الدم من القضيب.استخدم مسحتين مطهرتين لتطهير جلد القضيب في موقع الحقن. ثم حقن ملليلتر واحد من محلول ADRC بزاوية مباشرة في الجسم الكهفي ، على الجانب الأيمن في مكانين مختلفين. كرر هذه الخطوة في الجسم الكهفي الأيسر ، مع حقن حجم إجمالي قدره أربعة ملليلترات.تم اختبار هذه الطريقة في المرحلة الأولى من التجارب السريرية المفتوحة على 21 رجلا بمتوسط عمر 60 عاما وانتصاب طبيعي وحياة جنسية نشطة قبل استئصال البروستاتا الجذري. كما عانى ستة من الرجال من سلس البول. تلقى جميع الرجال حقنة كهفية واحدة من ADRCs المعزولة وتبعتهم أربع زيارات في العيادة الخارجية في 1 و 3 و 6 و 12 شهرا بعد الحقن.لم تقع أي أحداث خطيرة خلال وقت الملاحظة. أبلغ ثمانية رجال عن احمرار وتورم عابرين في مواقع الحقن ، وأبلغ ثلاثة عن رد فعل في منطقة القضيب. عانى ثمانية رجال من أحداث طفيفة قابلة للانعكاس تتعلق بشفط الدهون ، مثل عدم الراحة الخفيفة في البطن والأورام الدموية البسيطة في البطن.لم يبلغ أي مريض عن عدم ارتياحه في متابعة شهر واحد. تم تقييم وظيفتهم الجنسية مع المؤشر الدولي لوظيفة الانتصاب خمسة ودرجة صلابة الانتصاب. أفاد ثمانية من أصل 15 رجلا في مجموعة القارة أن وظيفة الانتصاب لديهم كانت كافية للجماع في 12 شهرا.لم تظهر المجموعة المكونة من ستة رجال مصابين بسلس البول أي تحسن في وظيفة الانتصاب عند محاولة هذا البروتوكول ، ضع في اعتبارك أن الإنزيمات التي يتم استخدامها أثناء إجراء العزل يجب إخراجها من الفريزر أو الثلاجة قبل ساعتين من بدء الإجراء. وقد مهدت نتائج هذه التقنية الطريق لإجراء التجارب العشوائية المضبوطة حيث يتم استكشاف آثار الخلايا الجذعية الدهنية على نطاق أوسع.

Research

JoVE Journal

Medicine

Repair of a Critical-sized Calvarial Defect Model Using Adipose-derived Stromal Cells Harvested from Lipoaspirate

إصلاح نموذج الحرجة الحجم عيب قبي طريق الدهنية المشتقة من الخلايا اللحمية المقطوع Lipoaspirate

Craniofacial skeletal repair and regeneration offers the promise of de novo tissue formation through a cell-based approach utilizing stem cells. ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

زراعة الخلايا المشتقة المريض وعزل CD133<sup&gt; +</sup&gt; خلايا الجذعية السرطانية المزعومين من الميلانوما

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

تحليل الكمي متعددة الأطياف وبعد زرع الأنسجة نيون لتصور أصول الخليوي، وأنواع، والتفاعلات

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

إنشاء وزرع للخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (ASC) ورقة في نموذج التئام السكري

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

تحليل شبكة الثقبة البيضوية الكهربائي تسجيلات في الفص الصدغي الصرع المرضى المقاوم للأدوية

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Intense Pulsed Light for the Treatment of Dry Eye Owing to Meibomian Gland Dysfunction

نابض ضوء لعلاج العين الجافة نظراً للخلل في الغدة الميبوميه

Dry eye disease (DED) is an increasingly common condition and one of the most common complaints of patients. The vast majority of DED is caused by the ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

الميكانيكية ميكرونيزيشن من ليبواسبيراتيس للعلاج بالتجدد

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...