Name: isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Dette arbejde er grundlagt af Odense Universitetshospital (11/31936), Center for Regenerativ Medicin (14/50427) og Kræftens Bekæmpelse.

Alle metoder beskrevet i protokollen er godkendt af Den Nationale Etiske Komité (nr. 37054), Sundhedsstyrelsen (EUDRA-CT-nummer 2013-004220-11) og Datatilsynet (2008-58-0035). Undersøgelsen blev registreret på ClinicalTrials.gov (NCT02240823). Studiet er udført i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen, som er overvåget af enheden for God Klinisk Praksis (GCP) på Odense Universitetshospital. ADRC-præparatet blev udført på et autoriseret vævscenter til håndtering af humane væv og celler på Odense Universitetshospital (Sundhedsstyrelsen, autorisationsnr. 29035).
1. Rekruttering af patient/deltagere
<ol><li>For at deltage i forsøget rekrutteres patienter, der opfylder følgende kriterier for inklusion.<ol>
<li>Rekruttere patienter, der er over 18 år, seksuelt aktive før RP og ikke inficeret med de seksuelt overførte sygdomme, f.eks. human immundefektvirusinfektion, syfilis eller hepatitis.</li>
		<li>Sørg for, at de lider af erektil dysfunktion efter en RP, som blev udført på grund af prostatakræft. BEMÆRK: I denne undersøgelse blev patienterne indskrevet i undersøgelsen 5-18 måneder efter RP og blev inkluderet uanset operationsmetoden: åben / robotassisteret eller nerveparing / ikke-nerveparing.</li>
		<li>Sørg for, at værdien af prostataspecifikt antigen (PSA) ikke kunne påvises ved den kliniske opfølgning efter RP.</li>
		<li>Sørg for, at patienterne var seksuelt aktive før RP og stadig udtrykte et ønske om at forblive seksuelt aktive efter RP. Sørg for, at farmakologisk intervention med en phosphodiesterase type 5-hæmmer (PDE5-hæmmer ) eller en syntetisk analog af prostaglandin E1 (PGE1) er blevet forsøgt før deltagelse og anses for utilstrækkelig.</li>
		<li>Sørg desuden for, at patienterne har nok subkutant fedt på maven eller låret.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ekskluder patienter fra forsøget, hvis der var alvorlige hændelser under anæstesi under RP, eller hvis de blev behandlet med antikoagulantia.</li>
</ol>2. Fedtsugning
BEMÆRK: Fedtsugning er en operation, der fjerner fedt eller lipocytter fra det subkutane område. Denne del af protokollen udføres som en standard fedtsugning, og proceduren udføres under sterile forhold på en operationsstue. Alle instrumenter, der anvendes under proceduren, skal være sterile, og kirurgen skal bære skrubber, steril kirurgisk kjole, sterile handsker, kirurgisk maske og hat.
<ol><li>Anæstesi patienten.<ol>
<li>Sørg for, at patienten er under generel anæstesi under proceduren, og denne del udføres af en anæstesiolog.</li>
		<li>Desinficere huden på maven og pungen med chlorhexidin 0,5% (clorhexidin spiritus, 96% ethanol medicineret chlorhexidin digluconat 77% W/W = 83% v/v). Brug en kirurgisk markør til at tegne de områder på maven, hvor fedtsugningen skal udføres. Området vil normalt være området mellem symfysen og navlestrengen.</li>
	</ol></li>
	<li>Lav to 6 mm brede snit i mavens hud med en skalpel (nummer 11). Placer snittene symmetrisk og lateralt fra det optrukne område af fedtsugning.<ol>
<li>Sæt lidt smøremiddel som vaselin på snittene for at sikre, at infiltrationskronylen glider let ind og ud af snittene under fedtsugningen.</li>
	</ol></li>
	<li>Indfør en størrelse 14 G infiltrationskanula gennem snittene i huden. Injicer modificeret Kleins-opløsning subkutant i de markerede områder parallelt med hudoverfladen. Injicer så meget af opløsningen, at det målrettede væv bliver hævet og fast eller tumescent. BEMÆRK: Den modificerede Kleins-opløsning består af en opløsning af 1.000 ml Ringers lactat og 1 mg adrenalin (adrenalin (1:1.000.000)). Æd ikke lokalbedøvelse til opløsningen, da det kan have en negativ indvirkning på ADRC'erne.<ol>
<li>Injicer et volumen modificeret Kleins-opløsning, der svarer til forholdet 1:1 til fedtvæv.</li>
		<li>Vent i 10 minutter for at maksimere effekten af adrenalin og reducere mængden af blod i høstet fedtvæv.</li>
	</ol></li>
	<li>Udfør en standard fedtsugning ved hjælp af en jetinfusionsfedtsugning for at høste 200-300 ml fedtvæv. Brug stumpe kanyler, der er hule, hvortil et infusionsrør og en dyse er integreret. Fastgør kanylen til en sugeanordning til fedtsugning. BEMÆRK: En kontinuerlig ventilatorformet vandinfusion løsner fedtvævet i fragmenter, der let kan suges ud gennem åbningen i kanylen.<ol>
<li>Indfør en 3 mm sprøjte med en stump spids gennem snittene på maven</li>
	</ol></li>
	<li>Saml fedtvævet i en lipo-samler for at bevare lipoaspiraten i et sterilt miljø. Lipoaspiraten begynder at adskille sig fra vandfasen.</li>
	<li>Brug 50 ml sterile sprøjter til at suge lipoaspiraten op fra lipoopsamleren.<ol>
<li>Minimer mængden af vand, der suges op i sprøjterne, og skru et stik på spidsen af sprøjterne for at holde fedtvævet sterilt.</li>
	</ol></li>
	<li>Anbring sprøjter med spidsen nedad i en steril plastpose for at starte adskillelsen af lipoaspirat fra vandfasen. Læg posen i steril beholder stadig med spidserne nedad for at fortsætte adskillelsen.<ol>
<li>Dæk beholderen med steril drapering for at sikre det sterile miljø under transport. BEMÆRK: I henhold til brugervejledningen til den maskine, der anvendes til isoleringen, kan lipoaspiraten opbevares i op til maksimalt 4 timer før isolering af ADRC'erne, men vi behandler den altid med det samme.</li>
	</ol></li>
	<li>Luk hudsnittene med kirurgernes foretrukne suturmateriale. Placer en kompressionsbeklædning, et abdominalt bindemiddel, rundt om maven for at reducere det postoperative ødem.</li>
	<li>Lav en penisblok ved at injicere 20 ml bupivacain 5 mg / ml indeholdende 5 μg adrenalin.<ol>
<li>Brug en 20 ml sprøjte og påfør med en 23 G nål, 1 1/4 inches lang.</li>
		<li>Påfør 5 ml bupivacain i hver kvadrant i subcutis.</li>
		<li>Injicer bupivacain på to steder, den ene placeret ventralt den anden dorsalt. Indfør nålen i hele dens længde i det subkutane væv, der peger nålen sideværts til højre, og injicer anæstesien, når nålen trækkes tilbage. Gentag injektionen, der peger nålen til venstre. BEMÆRK: Patienten kan nu vækkes fra den generelle anæstesi af anæstesiologen.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Isolering af ATDC'er
BEMÆRK: Isoleringsprocessen for ADRC'er udføres som beskrevet detaljeret i brugervejledningen efter enheden (se Materialetabel). Det er vigtigt, at proceduren udføres under sterile forhold for at sikre, at lipoaspiratet ikke udsættes for forurenende stoffer under rensningen af ADRC'erne. Den tid, det tager at isolere ADRC'er, afhænger af mængden af lipoaspirat, men hele proceduren vil tage ca. 2,5 timer ved hjælp af den halvautomatiske enhed som beskrevet her.
<ol><li>Placer alle forbrugsstoffer og enzymer aseptisk på et bord dækket af et sterilt engangskirurgisk håndklæde. BEMÆRK: Et proceduresæt indeholder alle nødvendige forbrugsstoffer og enzymer, der er nødvendige for isolering af ADRC'er fra en patient. Derudover skal der være tre 37-39 °C, en-liters infusionsposer med ammende ringere til rådighed sammen med sterilt tøj, handsker og håndklæder og ethanol til desinfektion. Noter alle partinumre af forbrugsstoffer og enzymer og også temperaturen på de lakterede ringere, når de er tilsluttet systemet.<ol>
<li>Tør enheden af med ethanol og følg producentens anvisninger</li>
		<li>Læg forbrugssættet på enheden, og tilslut en pose lakterede ringere til systemet.</li>
		<li>Udfør serien af halvautomatiske tests (systemkontrol og lækagetest), før du tilføjer lipoaspiraten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Lad lipoaspiraten stå i 50 ml rør, mens trinnene i 3.1 udføres. Dette vil gøre det muligt for fedtet at adskille sig fra den flydende fase. Noter den samlede mængde (i ml) fedtvæv, og brug dette til at sikre, at mængden af indlæst fedt vil være inden for enhedens kapacitet.</li>
	<li>Læg vævet i, når du bliver bedt om det af enheden. Maskinen vil nu dræne overskydende væske og veje mængden af fedtvæv, der er indlæst, før det vaskes med lacterede ringere.<ol>
<li>Når vævet er blevet vasket og tømt igen, skal du tilslutte en ny infusionspose med 37-39 °C lacterede ringere, når maskinen anmoder om det.</li>
		<li>Rekonstituer det kommercielt tilgængelige enzym indeholdende kollagenase og proteaseblanding i 5 ml lacterede ringere (et hætteglas med enzym er nok til fedtmængder op til 270 ml).</li>
		<li>Sørg for, at enheden viser mængden af enzym (baseret på vævsvægten), der skal injiceres i beholderen med fedtvævet. Når den er injiceret, vil den enzymatiske fordøjelse, der udføres under omrøring, vare omkring 20 minutter.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Efter vævsfordøjelse skal du lade omrøreren stoppe og kontrollere, at indholdet er adskilt i to faser: en øvre lipidholdig, gul fase og et nedre lyserødt lag, der indeholder ADNC'erne. Lad sidstnævnte lag dræne ind i cellebehandlingskammeret (der går ind i enhedens indbyggede centrifuge) af forbrugssættet, mens lipidlaget efterlades.</li>
	<li>Lad ADRC'er koncentrere sig i cellebehandlingskammeret under flere centrifugeringsrunder. Tilføj nu 10 ml Intravase (indeholder DNase, der hjælper med at undgå klumpning i den endelige ADRC-suspension), der er rekonstitueret i lacterede ringere. Den enzymatiske reaktion varer i 10 minutter, hvorefter ADRC'erne vaskes. BEMÆRK: Dette trin er fuldautomatisk, og maskinen informerer, når processen er færdig.</li>
	<li>Når isoleringen af ADRC'er er afsluttet, suspenderes cellerne igen i 5 ml Ringer Lactat. Aspirer opløsningen i en 5 ml sprøjte.</li>
	<li>Monter en 3-vejs stophane hun Luer-lås på 5 ml sprøjten indeholdende ADRC'erne, og aspirer 4 ml ADNC'er i en anden 5 ml steril sprøjte.</li>
	<li>Overfør de sidste 1 ml til en 1 ml sprøjte. Brug denne 1 ml til ADRC-karakterisering, f.eks. celleantal, cellelevedygtighed, analyse af overflademarkører ved flowcytometri og ADRC-differentieringsevne.</li>
	<li>Sæt en 25 G nål på 5 ml sprøjten indeholdende 4 ml ADRC'er, før den pakkes i en steril drapering. Brug ADRC'erne til injektion i modtageren. I dette tilfælde vil opløsningen af ADRC'er i gennemsnit indeholde 8,4-32,7 millioner celler.</li>
</ol>4. Implantation af ADRC'erne i corpora cavernosum
BEMÆRK: Dette er en steril procedure. Alle instrumenter skal være sterile, og den person, der injicerer opløsningen indeholdende stamcellerne i corpora cavernosum, skal bære sterile handsker. Patienten er vågen under denne procedure og vil modtage sine egne stamceller. ADRC'erne injiceres uden at tælle cellerne før injektionen.
<ol><li>Hold opløsningen af ADRC'er homogen ved at vippe sprøjten forsigtigt, indtil den injiceres i corpora cavernosum.</li>
	<li>Placer en blænde drapering over penis. Placer en tourniquet ved roden af penis ved hjælp af en silikonebeholdersløjfe. Stram løkken og fastgør den med tangbuet ærter. Gør turneringen stram nok til at stoppe blodgennemstrømningen fra penis.</li>
	<li>Brug to antiseptiske swaps til at desinficere penishuden på injektionsstedet (lateralt sted for corpora cavernosum). 1 ml af opløsningen indeholdende ADNC'er injiceres i en direkte vinkel i corpora cavernosum på højre side på to forskellige steder, gentag dette trin bagefter i venstre corpora cavernosum. Det samlede volumen af injicerede ADRC'er er 4 ml.</li>
	<li>Vent i 30 minutter, og fjern derefter turneringen.</li>
	<li>Aflad patienten efter 2 timers observation efter injektion af ADRC'er for at sikre, at patienten er godt genoprettet efter anæstesien.</li>
</ol>5. Postoperativ pleje
<ol><li>Anbefal patienten ikke at udføre nogen fysisk præstation, der kan hæve blodtrykket inden for den første uge for at forhindre udvikling af hæmatomer.</li>
	<li>Anbefal patienten at bære mavebindemidlet i 24 timer de første 14 dage efter operationen og herefter i 14 dage i dagtimerne.</li>
	<li>Behandle postkirurgiske smerter med oral acetaminophen (f.eks. Paracetamol; 1.000 mg, 4 gange om dagen) og oral antiinflammatorisk (f.eks. ibuprofen; 400 mg 3 gange om dagen).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1,+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats.">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li><li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction.">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li><li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+baseline:+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients'+perspective.">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li><li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy:+what+the+evidence+really+says.">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li><li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting:+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail.">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li><li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model.">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), 1391-1400 (2010).</li><li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells.">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), 89-98 (2010).</li><li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction.">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial.">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li><li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart.">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction.">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14 (2016).</li><li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal/stem+cells:+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+(IFATS)+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+(ISCT).">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial.">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203 (2018).</li><li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth.">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li><li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells:+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking.">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury.">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13 (2013).</li><li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia.">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li></ol>

Forfatteren Søren P. Sheikh er CEO hos Blue Cell Therapeutics, København, Danmark.

Den præsenterede procedure for isolering af ADRC'er er ikke begrænset til kun at blive anvendt til ED-terapi, men kan anvendes i flere andre former for behandling og eksperimenter. Vores forsøg viste, at autologe, friskisolerede ADRC'er er sikre at bruge, og behandlingen er godt tolerabel i en 12 måneders opfølgning.
Før proceduren anvendes, er der nogle overvejelser, der skal foretages. En ulempe ved denne procedure er, at patienten skal være under generel anæstesi under fedtsugningen. Fedtsugning er mulig at udføre under lokalbedøvelse, men et tidligere forsøg har vist, at en kombination af lokalbedøvelsesmidler og adrenalin kan have en negativ indvirkning på cellevæksten af fibroblaster20. Risikoen for at være under generel anæstesi er generelt lav, men et negativt resultat ses stadig. Denne risiko skal tages i betragtning, når patienter udvælges til behandlingen. Fedtsugning er en kirurgisk procedure og vil derfor altid medføre risiko for komplikationer. Som med alle andre kirurgiske procedurer er der risiko for postoperativ blødning, der resulterer i dannelse af hæmatomer og risiko for infektion. Nogle af vores patienter rapporterede også en forbigående nedsat følsomhed i mavehuden. En øjeblikkelig komplikation til fedtsugning er blødning. Det er kendt, at patienter risikerer at få systemiske komplikationer, når store mængder væv fjernes. Fedtsugningen i denne procedure var relativt lille og betragtes derfor ikke som en risikofaktor.
Komplikationer til injektion af celler rapporteres som forbigående rødme, ømhed og hæmatomer.
Den enhed, der anvendes til isolering af ADRC'erne, blev valgt, fordi systemet er CE-godkendt. I Danmark er det obligatorisk at anvende CE-godkendt udstyr, fordi myndighederne kategoriserer behandling med stamceller som et lægemiddeltestforsøg, når ADRC anvendes til injektion i mennesker.
Enheden har fordele, såsom at hele proceduren standardiseres og udføres i et lukket sterilt miljø uden at kræve et højt klassificeret laboratorium. Risikoen for forurening reduceres derfor. Dette sikrer, at proceduren er ensartet og reproducerbar, og at slutproduktets kvalitet altid er den samme hver gang (det afhænger dog også af inputvævets kvalitet). Det er let at udføre isoleringen på enheden og kræver ikke specialuddannede operatører.
En begrænsning af enheden er, at den mindste indgang til maskinen er 100 g drænet lipoaspirat. Da fedtsugningen er helt færdig, før cellebehandlingen starter (og i vores tilfælde på et andet sted, ikke i OR) efter vores erfaring, vil dette kræve, at mængden af lipoaspirat er mindst 125 ml ved hjælp af det grove mål for 50 ml sprøjter. Ellers er der risiko for, at der ikke er nok materiale til, at maskinen kan gå videre med. Brug af den øvre endegrænse (maks. Input er 425 ml) ville også resultere i en meget lang isolationsprocedure.
Voksne stamceller fra både fedtvæv og knoglemarv synes at have kapacitet til selvfornyelse og differentiering som embryonale stamceller. En af fordelene ved ADRC'er i forhold til hæmopoietiske stamceller er et 100-500 gange højere udbytte pr. vævsvolumen sammenlignet med knoglemarv21,22, og derfor behøver ADRC'er ikke at blive dyrket. Desuden er hæmopoietiske stamceller vanskeligere og mere smertefulde at høste fra patienten end fedtvæv. I mange situationer er fedtvæv bare et affaldsprodukt efter operationen. Det er muligt at dyrke stamceller for at give et højere udbytte, der er egnet til angiogenese, men friskisolerede ADRC'er kan have højere angiogent potentiale end dyrket23.

Stamceller har evnen til at differentiere sig til forskellige celletyper, og de udskiller parakrine faktorer, der menes at fremme helingsprocessen i beskadiget væv 1,2,3,4. De er derfor attraktive inden for regenerativ medicin, fordi de kan repræsentere en mulig helbredende behandling.
Radikal prostatektomi (RP) er den gyldne helbredende behandling til patienter med lav / mellemliggende risiko lokaliseret prostatakræft og en forventet levetid > 10 år. Formålet med operationen er udryddelse af kræften, men den har flere bivirkninger. Forekomsten af post-prostatektomi inkontinens varierer fra 2-60%, og erektil dysfunktion (ED) opleves af 20-90% af patienterne5. Nervebesparende teknik er en mulighed hos nogle patienter (Gleason score < 7, lav risiko for ekstrakapsulær sygdom)5. Denne teknik skåner nerverne, der er ansvarlige for erektion, men selvom dette er muligt, rapporterer mange patienter stadig ED postoperativt.
Behandlingsmuligheder for penisrehabilitering efter RP består primært af behandling med PDE-5-hæmmere, injektions- eller instillationsterapi og vakuumpumper. Lægemidler, der anvendes til penisrehabilitering, adskiller sig farmakologisk, men deres virkningsmekanisme omfatter afslapning af de glatte muskelceller i corpus cavernosum. Mange patienter oplever dog behandlingssvigt og opnår aldrig en effekt af medicinen, der muliggør samleje6.
ED, der opstår efter RP, menes at skyldes strukturelt irreversible ændringer7. Disse ændringer forekommer i det kavernøse væv og omfatter apoptose af de glatte muskel- og endotelceller og fibrose. Den veno-okklusive mekanisme, der er ansvarlig for en central del af erektionen, svækkes af ændringerne, hvilket resulterer i dårligere fyldning og hårdhed af penis7.
Mange af patienterne rapporterer, at den ED, de oplever, har en negativ indvirkning på deres livskvalitet8. De er ikke klar til at opgive deres seksuelle aktivitet efter operationen, og derfor er en helbredende terapi til ED attraktiv, når de andre tilgængelige behandlinger til penisrehabilitering mislykkes.
I tidligere forsøg, herunder dyreforsøg og små fase 1-forsøg på mennesker, har stamceller vist lovende resultater som en alternativ behandling for ED 2,9,10,11,12. Resultaterne viser, at det er sikkert at bruge ADRC'er, og at den erektile funktion forbedres signifikant efter en enkelt injektion i corpora cavernosum 2,9,10,11,12. Fedtafledte regenerative celler (ADRC'er) menes at understøtte vævsregenerering ved hjælp af parakrine mekanismer gennem frigørelse af flere hormoner, neurotrofiske og andre vækstfaktorer, cytokiner og muligvis mikro-RNA'er13. Derudover er ADRC'er i stand til at differentiere sig i flere modne celletyper, herunder endotel- og vaskulære muskelceller, bruskceller, osteocytter og neuroner14,15. Disse egenskaber gør stamceller interessante for at udvikle en permanent ny behandling for ED.
Stamceller er opdelt i flere grupper, dybest set dem, der stammer fra det tidlige embryo (embryonale stamceller) og dem fra voksent væv (voksne stamceller). Voksne stamceller omfatter mesenkymale stamceller (MSC), der er multipotente og kan findes i knoglemarv, fedtvæv, navlestrengsblod, moderkage og tandmasse17.
Stamceller fra fedtvævet er lette at få adgang til, i modsætning til stamceller afledt af knoglemarv. Høstning af stamceller fra knoglemarv er en risikabel og smertefuld procedure sammenlignet med fedtsugning. Antallet af celler, der er mulige at høste fra knoglemarv, vil være begrænset, mens kun patientens depoter af fedtvæv sætter grænsen for antallet af celler, der kan høstes. Det er derfor muligt at isolere en stor mængde stamceller fra fedtvævet uden efterfølgende behov for at dyrke cellerne for at opnå en tilfredsstillende mængde. De fedtafledte regenerative celler, også ofte omtalt som den stromale vaskulære fraktion (SFV), består af mange celletyper, herunder MSC'er, endotelceller, pericytter, immunceller og forfædre heraf18. Disse kan alle spille en rolle i den regenerative proces.
Formålet med denne undersøgelse er at undersøge stamcellernes virkning på ED efter RP ved at anvende 4 ml autologe ADRC'er isoleret fra friskhøstet fedtvæv efter injektion i corpora cavernosum.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liposuction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abdominal Binder</td>
			<td>Dale</td>
			<td></td>
			<td>Size depent of the patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhessive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adrenalin 1 mg/ml</td>
			<td>Amgros I/s</td>
			<td>74 44 23</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic OP supplies</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>97010873-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel blade 11</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhixidine Ethanol</td>
			<td>Faarborg Pharma</td>
			<td>5% colored</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable set Lipocollector 3</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>670200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension hoses</td>
			<td>Extrudan</td>
			<td></td>
			<td>5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaze Rags</td>
			<td>Barrier</td>
			<td>175201</td>
			<td>30x45 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jelonet</td>
			<td>Smith and Nephew Medical Ltd</td>
			<td>90509225</td>
			<td>10 x 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram</td>
			<td>Astra Zeneca</td>
			<td></td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesorb Bandage</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>677001</td>
			<td>10x13 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304622</td>
			<td>18 G + 23 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>04:00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer-lactat</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>330052065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gown</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>690103-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Marker</td>
			<td>Richard-Allan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Mask</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Codan Medical</td>
			<td>6,28,402</td>
			<td>50/60 ml cath tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>700016181</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>REF 500001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolation of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>REF 303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 way stopcock</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF 10554-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care AB</td>
			<td>REF 906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytori Celution 800IV device</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swaps</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>25G (0,5*25 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitril Gloves</td>
			<td>Abena</td>
			<td></td>
			<td>Powder free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OR drape Sheet, 2 layers</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher</td>
			<td>REF 33005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Lactate</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td>06756 (DK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Termometer</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td></td>
			<td>traceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aperture drape</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF1565-01</td>
			<td>75*90 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swap</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pean</td>
			<td>Leibinger</td>
			<td>32-01257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Vessel Loop</td>
			<td>Purple Surgical</td>
			<td>REF PS3203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Sempermed</td>
			<td></td>
			<td>Or Use your favorite</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy

Stamceller anvendes i mange forskningsområder inden for regenerativ medicin, dels fordi disse behandlinger kan være helbredende snarere end symptomatiske. Stamceller kan fås fra forskellige væv, og flere metoder til isolering er blevet beskrevet. Den præsenterede metode til isolering af fedtafledte regenerative celler (ADRC'er) kan anvendes inden for mange terapeutiske områder, fordi metoden er en generel procedure og derfor ikke begrænset til behandling af erektil dysfunktion (ED). ED er en almindelig og alvorlig bivirkning til radikal prostatektomi (RP), da ED ofte ikke behandles godt med konventionel terapi. Brug af ADRC'er som behandling for ED har tiltrukket stor interesse på grund af de indledende positive resultater efter en enkelt injektion af celler i corpora cavernosum. Metoden til isolering af ADRC'er er en enkel, automatiseret proces, der er reproducerbar og sikrer et ensartet produkt. Desuden sikres steriliteten af det isolerede produkt, fordi hele processen foregår i et lukket system. Det er vigtigt at minimere risikoen for forurening og infektion, da stamcellerne bruges til injektion hos mennesker. Hele proceduren kan udføres inden for 2,5-3,5 timer og kræver ikke et klassificeret laboratorium, hvilket eliminerer behovet for at sende væv til et off-site. Proceduren har dog nogle begrænsninger, da den mindste mængde drænet lipoaspirat for at isolationsanordningen kan fungere er 100 g.

Den præsenterede procedure er blevet anvendt til et åbent fase 1 klinisk forsøg med 21 patienter19. Det primære endepunkt for forsøget var sikkerheden ved brugen af ADRC'er hos mennesker, og sekundært endepunkt var ADRC's effekt på den erektile funktion.
21 mænd blev inkluderet i forsøget med en gennemsnitsalder på 60 år (interval 46-69) og en normal erektion og aktivt sexliv før RP på grund af prostatakræft. De led alle af ED efter RP, uden tegn på genopretning fra medicin til rådighed for penis rehabilitering. Seks mænd led af inkontinens som en bivirkning til RP. Alle mænd fik en enkelt intracavernøs injektion af ADRC'er isoleret med den præsenterede metode.
Alle 21 mænd blev fulgt op med 4 besøg i ambulatoriet 1,3,6 og 12 måneder efter injektionen. Den seksuelle funktion blev evalueret med validerede spørgeskemaer - International Index of Erectile Function-5 (IIEF-5) og Erektionshårdhedsscore (EHS) (Vedhæftet som bilag).
Der opstod ingen alvorlige hændelser i løbet af observationstiden. Otte mænd rapporterede forbigående rødme og hævelse på injektionsstederne, tre rapporterede reaktion i penisområdet. Otte oplevede reversible mindre hændelser relateret til fedtsugningen blev rapporteret, såsom let abdominal ubehag og mindre abdominale hæmatomer. Ingen patienter rapporterede ubehag ved 1 måneds opfølgning. Otte ud af femten (53%) i kontinentgruppen rapporterede, at erektilfunktionen var tilstrækkelig til samleje efter 12 måneder. Gruppen på 6 inkontinente mænd viste ingen forbedring af erektil funktion.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Kontinent</td>
			<td>Inkontinente</td>
		</tr>
<tr>
<td>Inkluderede patienter</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Signifikant effekt</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Tabellen viser forskellene i signifikant effekt af behandlingen mellem kontinentale og inkontinente patienter.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

Præcis offentliggørelse af metoder og protokoller er afgørende for en storstilet udbredelse af stamcelleterapier. Her præsenterer vi en protokol til isolering af fedtafledte regenerative celler, der anvendes til en enkelt intracavernøs injektion som behandling af erektil dysfunktion (ED) efter radikal prostatektomi (RP).

Isolering af fedtafledte regenerative celler til behandling af erektil dysfunktion efter radikal prostatektomi

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Denne isolationsteknik kan bruges til at undersøge, om fedtstamceller kan hjælpe patienter med at regenerere erektil funktion efter radikal prostatektomi. Denne metode er ikke begrænset til en bestemt sygdom. Det kan bruges inden for alle områder af fedtstamcelleforskning.De isolerede stamceller bruges til behandling af erektil dysfunktion, men isolationsteknikken er en generel procedure, og stamcellerne kan være nyttige på andre områder inden for stamcelleforskning. Begynd med at desinficere huden på maven og pungen med 0,5% chlorhexidin. Brug en kirurgisk markør til at tegne de områder på maven, hvor fedtsugningen skal udføres, normalt området mellem syntesen og navlestrengen.Lav to seks millimeter brede snit i mavens hud med en skalpel nummer 11. Placer snittene symmetrisk og lateralt fra det optrukne område af fedtsugning. Læg lidt smøremiddel på snittene for at sikre, at infiltrationskronylen glider let ind og ud af snittene under fedtsugningen.Indfør derefter en størrelse 14 gauge infiltrationskanula gennem snittene i huden. Injicer modificeret Klein-opløsning subkutant i de markerede områder parallelt med hudoverfladen, indtil det målrettede væv bliver hævet og fast eller tumescent. Injicer et volumen modificeret Klein-opløsning i et en-til-en-forhold til fedtvævet.Vent i 10 minutter for at maksimere virkningerne af adrenalin og reducere mængden af blod i det høstede fedtvæv. Udfør en standard jetinfusionsfedtsugning for at høste 200 til 300 millimeter fedtvæv. Brug stumpe kanyler, der er hule med et integreret infusionsrør og dyse.Fastgør kanylen til en sugeanordning til fedtsugning. Indfør en tre millimeter sprøjte med en stump spids gennem snittene på maven og saml fedtvævet i Lipo Collector for at bevare lipoaspiratet i et sterilt miljø. Lipoaspiraten begynder at adskille sig fra vandfasen.Brug 50 ml sterile sprøjter til at suge lipoaspiraten op fra LipoCollector, hvilket minimerer mængden af vand, der suges op i sprøjterne. Skru et stik på spidsen af sprøjterne for at holde fedtvævet sterilt. Anbring sprøjter med spidsen nedad i en steril plastpose for at starte adskillelsen af lipoaspirat fra vandfasen.Anbring derefter posen i en steril beholder. Dæk beholderen med et sterilt drapering for at sikre det sterile miljø under transport. Luk hudsnittene med kirurgens foretrukne suturmateriale.Placer en kompressionsbeklædning rundt om maven for at reducere postoperativt ødem. For at lave en penisblok skal du injicere bupivacainen på to steder, den ene placeret ventralt og den anden dorsalt. Indfør hele nålen i det subkutane væv, peg den sideværts til højre, og injicer anæstesien, når nålen trækkes tilbage.Gentag injektionen, og peg nålen til venstre. Læg alle forbrugsstoffer og enzymer aseptisk på bordet dækket af et sterilt engangskirurgisk håndklæde. Tør enheden af med ethanol, og læg forbrugssættet i.Tilslut derefter en pose lakterede ringere til systemet. Udfør serien af semiautomatiske tests, før du tilføjer lipoaspiraten. Mens enheden forberedes, lad lipoaspiraten stå i et 50 ml rør for at lade fedtet adskille sig fra væskefasen.Bemærk den samlede mængde fedtvæv, og brug dette til at sikre, at den samlede mængde indlæst fedt vil være inden for enhedens kapacitetsområde. Læg vævet i, når du bliver bedt om det af enheden. Maskinen dræner overskydende væske af.Vej mængden af fedtvæv og vask det med lakterede ringere. Når vævet er blevet vasket og drænet, skal du tilslutte en ny infusionspose med 37 til 39 grader Celsius lakterede ringere. Rekonstituer det kommercielt tilgængelige enzym indeholdende kollagenase og proteaseblanding i fem milliliter lakterede ringere.Sørg for, at enheden viser mængden af enzym, der skal injiceres i beholderen med fedtvævet. Når den er injiceret, vil den enzymatiske fordøjelse vare omkring 20 minutter. Efter vævsfordøjelse skal det kontrolleres, at indholdet er adskilt i et øvre lipid indeholdende gul fase og et nedre lyserødt lag, der indeholder fedtafledte regenerative celler eller ADNC'er.Lad det lyserøde lag dræne ind i cellebehandlingskammeret i forbrugssættet, og lad lipidlaget være bagved. Lad ADRC'erne koncentrere sig i cellebehandlingskammeret under flere centrifugeringsrunder. Tilsæt derefter 10 ml intrabase rekonstitueret i de lakterede ringere.Den enzymatiske reaktion varer i 10 minutter, og ADRC'erne vaskes bagefter. Når isoleringen af ADRC'er er afsluttet, suspenderes cellerne igen i fem milliliter Ringers laktat og aspirerer opløsningen til en sprøjte på fem milliliter. Monter en trevejs stophane kvindelig Luer-lås på sprøjten, og aspirer fire milliliter ADRC'er i en anden fem milliliter steril sprøjte.Overfør den sidste milliliter ADRC'er til en sprøjte på en milliliter. Brug denne alikvote til ADRC-karakteriseringsanalyser, såsom celleantal, cellelevedygtighed, analyse af overflademarkører ved flowcytometri og ADRC-differentieringsevne. Sæt en 25 gauge nål på den fem milliliter sprøjte, der indeholder de fire milliliter ADRC'er.Pak det derefter i en steril drapering. Denne opløsning af ADNC'er vil blive injiceret i modtageren og bør i gennemsnit indeholde 8,4 til 32,7 millioner celler. Sørg for, at opløsningen af ADRC'er forbliver homogen ved at vippe sprøjten forsigtigt, indtil den injiceres i corpora cavernosum.Placer en blænde drapering over penis. Og en tourniquet ved roden af penis med en silikonebeholdersløjfe. Stram løkken og fastgør den med tang, hvilket gør turneringen stram nok til at stoppe blodgennemstrømningen fra penis.Brug to antiseptiske vatpinde til at desinficere penishuden på injektionsstedet. Derefter injiceres en milliliter af ADRC-opløsningen i en direkte vinkel i corpora cavernosum på højre side på to forskellige steder. Gentag dette trin i venstre corpora cavernosum, og indsprøjt et samlet volumen på fire milliliter.Denne metode blev testet i et åbent fase et klinisk forsøg på 21 mænd med en gennemsnitsalder på 60 år og en normal erektion og aktivt sexliv før en radikal prostatektomi. Seks af mændene led også af inkontinens. Alle mænd fik en enkelt interkavernøs injektion af isolerede ADRC'er og blev efterfulgt af fire besøg i ambulatoriet 1, 3, 6 og 12 måneder efter injektionen.Der opstod ingen alvorlige hændelser i observationstiden. Otte mænd rapporterede forbigående rødme og hævelse på injektionsstederne, og tre rapporterede reaktion i penisområdet. Otte mænd oplevede reversible mindre hændelser relateret til fedtsugningen, såsom let abdominal ubehag og mindre abdominale hæmatomer.Ingen patienter rapporterede ubehag ved en måneds opfølgning. Deres seksuelle funktion blev evalueret med International Index of Erectile Function Five og Erection Hardness Score. Otte ud af 15 mænd i kontinentgruppen rapporterede, at deres erektil funktion var tilstrækkelig til samleje efter 12 måneder.Gruppen på seks inkontinente mænd viste ingen forbedring af erektil funktion Når du forsøger denne protokol, skal du huske på, at de enzymer, der anvendes under isolationsproceduren, skal tages ud af fryseren eller køleskabet to timer før proceduren startes. Resultaterne fra denne teknik har banet vejen for en RCT, hvor virkningerne af fedtstamceller udforskes i større skala.

Research

JoVE Journal

Medicine

Repair of a Critical-sized Calvarial Defect Model Using Adipose-derived Stromal Cells Harvested from Lipoaspirate

Reparation af en kritisk størrelse calvarial Defekt model ved hjælp af fedtvæv-afledte stromaceller høstet fra Lipoaspirate

Craniofacial skeletal repair and regeneration offers the promise of de novo tissue formation through a cell-based approach utilizing stem cells. ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolation, karakterisering og sammenlignende differentiering af humane Dental Pulp stamceller fra blivende tænder ved hjælp af to forskellige metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Afledt Cellekultur og isolering af CD133<sup&gt; +</sup&gt; Formodede kræftstamceller fra melanom

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

Kvantitative Multispektral Analyse Efter Fluorescent Tissue Transplant til visualisering af Cell Origins, typer, og interaktioner

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolation, Kryopræservering og dyrkning af humane amnion epitelceller ved kliniske anvendelser

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studere i bugspytkirtlen Kræft stamceller Karakteristik for udvikling af nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Oprettelse og Transplantation af et fedtholdigt-afledte stamceller (ASC) ark i en diabetisk sårheling Model

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Netværk Analyse af foramen ovale elektrode Optagelser i Drug-resistent TLE Patienter

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Intense Pulsed Light for the Treatment of Dry Eye Owing to Meibomian Gland Dysfunction

Intenst pulserende lys til behandling af tørre øjne som følge af meibomske kirtel dysfunktion

Dry eye disease (DED) is an increasingly common condition and one of the most common complaints of patients. The vast majority of DED is caused by the ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Mekanisk Micronization af Lipoaspirates for regenerativ terapi

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...