Name: isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

עבודה זו נוסדה על ידי בית החולים האוניברסיטאי אודנזה (11/31936), המרכז הדני לרפואה רגנרטיבית (14/50427) והאגודה הדנית לסרטן.

כל השיטות המתוארות בפרוטוקול אושרו על ידי ועדת האתיקה הלאומית הדנית (מס '37054), רשות הבריאות והתרופות הדנית (EUDRA-CT מספר 2013-004220-11) והסוכנות הדנית להגנה על נתונים (2008-58-0035). המחקר נרשם בכתובת ClinicalTrials.gov (NCT02240823). המחקר בוצע בהתאם להצהרת הלסינקי המנוטרת על ידי יחידת הפרקטיקה הקלינית הטובה (GCP) בבית החולים האוניברסיטאי אודנזה. הכנת ADRC בוצעה במפעל רקמות מורשה לטיפול ברקמות ותאים אנושיים בבית החולים האוניברסיטאי אודנזה (רשות הבריאות והתרופות הדנית, אישור מס '29035).
1. גיוס מטופלים/משתתפים
<ol><li>כדי להשתתף בניסוי לגייס חולים העומדים בקריטריונים הבאים להכללה.<ol>
<li>גייסו מטופלים מעל גיל 18, פעילים מינית לפני RP ואינם נגועים במחלות המועברות במגע מיני, למשל, זיהום בנגיף הכשל החיסוני האנושי, עגבת או הפטיטיס.</li>
		<li>ודא שהם סובלים מבעיות זיקפה לאחר RP אשר בוצע עקב סרטן הערמונית. הערה: במחקר זה, המטופלים נרשמו למחקר 5-18 חודשים לאחר ה- RP ונכללו ללא קשר לשיטת הניתוח: פתוח / רובוטי בסיוע או מורט עצבים / לא עצבים.</li>
		<li>ודא שהערך של אנטיגן ספציפי לערמונית (PSA) היה צריך להיות בלתי ניתן לגילוי במעקב הקליני לאחר ה- RP.</li>
		<li>ודא שהמטופלים היו פעילים מינית לפני ה- RP, ועדיין הביעו רצון להישאר פעילים מינית לאחר ה- RP. ודא כי התערבות פרמקולוגית עם מעכב פוספודיאסטראז מסוג 5 (מעכב PDE5 ) או אנלוגי סינתטי של פרוסטגלנדין E1 (PGE1) נוסו לפני ההשתתפות ונחשבו לא מספיקים.</li>
		<li>יתר על כן, ודא כי החולים יש מספיק שומן תת עורי על הבטן או הירך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להוציא חולים מהניסוי, אם היו אירועים חמורים תחת ההרדמה במהלך RP או אם הם טופלו עם נוגדי קרישה.</li>
</ol>2. שאיבת שומן
הערה: שאיבת שומן היא פעולה המסירה שומן או ליפוציטים מהאזור התת עורי. חלק זה של הפרוטוקול מבוצע כשאיבת שומן סטנדרטית וההליך מבוצע בתנאים סטריליים בחדר ניתוח. כל המכשירים המשמשים במסגרת ההליך חייבים להיות סטריליים ועל המנתח ללבוש קרצוף, שמלה כירורגית סטרילית, כפפות סטריליות, מסכה כירורגית וכובע.
<ol><li>להרדים את החולה.<ol>
<li>ודא כי החולה נמצא בהרדמה כללית במהלך ההליך, וחלק זה מבוצע על ידי רופא מרדים.</li>
		<li>יש לחטא את עור הבטן ושק האשכים עם כלורהקסידין 0.5% (רוח קלוהרקסידין, 96% אתנול תרופתי כלורהקסידין דיגלוקונט 77% W/W = 83% v/v). השתמש בסמן כירורגי כדי לצייר את האזורים על הבטן אם שאיבת שומן עומדת להתבצע. האזור יהיה בדרך כלל האזור שבין הסימפיזה לטבור.</li>
	</ol></li>
	<li>בצע שני חתכים ברוחב 6 מ"מ בעור הבטן עם אזמל (מספר 11). מקם את החתכים בצורה סימטרית ולרוחבית מהאזור המוגבר של שאיבת שומן.<ol>
<li>שים מעט חומר סיכה כזה ג'לי נפט על החתכים, כדי לוודא שצינורית הסינון גולשת פנימה והחוצה מהחתכים בקלות במהלך שאיבת השומן.</li>
	</ol></li>
	<li>הציגו צינורית חדירה בגודל 14 G דרך החתכים בעור. הזריקו תמיסת קלינס שונה באופן תת עורי באזורים המסומנים המקבילים לפני העור. להזריק כל כך הרבה מהתמיסה שהרקמה הממוקדת הופכת נפוחה ומוצקת, או מתפוררת. הערה: תמיסת Kleins שעברה שינוי מורכבת מתמיסה של 1,000 מ"ל רינגרים לקטט ו-1 מ"ג אדרנלין (אפינפרין (1:1,000,000)). אל תאשר הרדמה מקומית לפתרון, מכיוון שהיא עלולה להשפיע לרעה על ה- ADRCs.<ol>
<li>הזריקו נפח של תמיסת קלינס שונה התואמת את היחס 1:1 לרקמה השומן.</li>
		<li>המתן במשך 10 דקות כדי למקסם את השפעת האדרנלין ולהפחית את כמות הדם ברקמת השומן שנקטפה.</li>
	</ol></li>
	<li>בצע שאיבת שומן סטנדרטית באמצעות שאיבת שומן בעירוי סילון כדי לקצור 200-300 מ"ל של רקמת שומן. השתמש בצינוריות קהות שהן חלולות, שאליהן משולבים צינור אינפוזיה וזרבובית. חברו את הצינורית למכשיר יניקה לשאיבת שומן. הערה: עירוי מים רציף בצורת מאוורר משחרר את רקמת השומן לרסיסים שניתן לשאוב בקלות דרך הפתח בצינורית.<ol>
<li>הציגו מזרק 3 מ"מ עם קצה קהה דרך החתכים על הבטן</li>
	</ol></li>
	<li>אספו את רקמת השומן באספן ליפו כדי לשמר את הליפואספיראט בסביבה סטרילית. ה lipoaspirate יתחיל להיפרד משלב המים.</li>
	<li>השתמשו במזרקים סטריליים של 50 מ"ל כדי למצוץ את ליפו-אספן ה lipoaspirate מאספן הלופו.<ol>
<li>ממזערים את נפח המים הנשאבים במזרקים ומבריגים תקע בקצה המזרקים כדי לשמור על רקמת השומן סטרילית.</li>
	</ol></li>
	<li>מניחים מזרקים עם קצה כלפי מטה בשקית ניילון סטרילית כדי להתחיל בהפרדת ליפו-אספיראט משלב המים. מניחים את השקית במיכל סטרילי עדיין כשהקצוות פונים כלפי מטה כדי להמשיך בהפרדה.<ol>
<li>מכסים את המיכל עם וילון סטרילי כדי לאבטח את הסביבה הסטרילית במהלך ההובלה. הערה: על פי מדריך המשתמש של המכונה המשמשת לבידוד, ניתן לאחסן את lipoaspirate עד למקסימום של 4 שעות לפני בידוד של ADRCs עם זאת, אנו תמיד מעבדים אותו מיד.</li>
	</ol></li>
	<li>סגור את החתכים בעור עם חומר התפר המועדף על המנתחים. מניחים בגד דחיסה, קלסר בטן, סביב הבטן כדי להפחית את הבצקת שלאחר הניתוח.</li>
	<li>צור בלוק פין על ידי הזרקת 20 מ"ל bupivacaine 5 מ"ג / מ"ל המכיל 5 מיקרוגרם של אדרנלין.<ol>
<li>השתמשו במזרק של 20 מ"ל והגישו בקשה עם מחט של 23 גרם, באורך 1/4 אינץ'.</li>
		<li>יש למרוח 5 מ"ל של בופיוואקאין בכל רביע בתת-קוטים.</li>
		<li>הזריקו את הבופיוואקאין בשני אתרים, האחד ממוקם בגחון והשני באופן דורסני. מכניסים את המחט לכל אורכה ברקמה התת-עורית ומכוונים את המחט לרוחב ימינה ומזריקים את ההרדמה כשהמחט נסוגה לאחור. חזרו על ההזרקה המכוונת את המחט שמאלה. הערה: כעת ניתן להעיר את המטופל מההרדמה הכללית על ידי הרופא המרדים.</li>
	</ol></li>
</ol>3. בידוד של ADRCs
הערה: תהליך הבידוד של ADRCs מתבצע כמתואר בפירוט במדריך למשתמש הבא אחר ההתקן (ראה טבלת חומרים). חשוב כי ההליך מבוצע בתנאים סטריליים כדי להבטיח כי lipoaspirate אינו חשוף למזהמים כלשהם במהלך טיהור של ADRCs. הזמן שלוקח לבידוד של ADRCs תלוי בנפח של lipoaspirate, אבל ההליך כולו ייקח בערך 2.5 שעות באמצעות המכשיר החצי אוטומטי כפי שמתואר כאן.
<ol><li>הניחו את כל החומרים המתכלים והאנזימים באופן אספטי על שולחן מכוסה במגבת כירורגית חד פעמית סטרילית. הערה: ערכת פרוצדורה מכילה את כל החומרים המתכלים והאנזימים הדרושים לבידוד של ADRCs ממטופל אחד. מלבד זאת, שלוש שקיות עירוי של 37-39 מעלות צלצלים מניקים חייבות להיות זמינות יחד עם בגדים סטריליים, כפפות ומגבות ואתנול לחיטוי. שימו לב לכל המספרים הרבים של חומרים מתכלים ואנזימים וגם את הטמפרטורה של הצלצולים המניקים, כאשר הם מחוברים למערכת.<ol>
<li>נגבו את המכשיר באמצעות אתנול ופעלו לפי הוראות היצרן</li>
		<li>טענו את הסט המתכלה על המכשיר וחברו למערכת שקית של מצלצלים מניקים.</li>
		<li>בצע את סדרת הבדיקות החצי אוטומטיות (בדיקת מערכת ובדיקת דליפה) לפני הוספת lipoaspirate.</li>
	</ol>
</li>
	<li>תנו לליפואספיראט לעמוד בצינורות של 50 מ"ל בזמן שהצעדים ב-3.1 מבוצעים. זה יאפשר לשומן להיפרד מהשלב הנוזלי. שים לב לכמות הכוללת (במ"ל) של רקמת השומן והשתמש בה כדי להבטיח שכמות השומן הטעון תהיה בטווח קיבולת המכשיר.</li>
	<li>טען את הרקמה כאשר המכשיר התבקש לעשות זאת. המכונה תנקז כעת את הנוזל העודף ותשקול את כמות רקמת השומן הטעונה לפני שהיא נשטפת עם מצלצלים מניקים.<ol>
<li>כאשר הרקמה נשטפה ונוקזה שוב, חברו שקית עירוי חדשה עם 37-39 מעלות צלצולים מניקים כאשר תתבקשו על ידי המכונה.</li>
		<li>שחזרו את האנזים הזמין מסחרית המכיל תערובת קולגן ופרוטאז ב-5 מ"ל רינגרים מניקים (בקבוקון אחד של אנזים מספיק לכמויות שומן של עד 270 מ"ל).</li>
		<li>ודא שהמכשיר מציג את כמות האנזים (בהתבסס על משקל הרקמה) כדי להזריק לתוך המכל עם רקמת השומן. לאחר הזרקת, העיכול האנזימטי המתבצע תחת תסיסה יימשך כ -20 דקות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר עיכול הרקמות, תנו למתסיס לעצור ולבדוק שהתכולה מופרדת לשני שלבים: פאזה צהובה המכילה שומנים עליונים ושכבה ורודה תחתונה המכילה את ה-ADRCs. תנו לשכבה האחרונה להתנקז לתוך תא עיבוד התאים (שנכנס לצנטריפוגה המובנית של המכשיר) של הסט המתכלה, תוך השארת שכבת השומנים מאחור.</li>
	<li>תן ל-ADRCs להתרכז בתא עיבוד התאים במהלך סבבים מרובים של צנטריפוגה. כעת הוסיפו 10 מ"ל של Intravase (מכיל DNase, המסייע למנוע גושים בהשעיית ה-ADRC הסופית) המשוחזרת ב-Disabilited Ringers. התגובה האנזימטית נמשכת 10 דקות ולאחר מכן ה- ADRCs נשטפים. הערה: שלב זה הוא אוטומטי לחלוטין, והמכונה תודיע כאשר התהליך יסתיים.</li>
	<li>כאשר הבידוד של ADRCs הושלם, החייאת התאים ב -5 מ"ל של רינגר לקטט. שאפו את התמיסה למזרק של 5 מ"ל.</li>
	<li>הרכיבו נקבת לואר-לוק תלת-כיוונית על מזרק 5 מ"ל המכיל את ה-ADRCs, ושאפו 4 מ"ל של ADRCs למזרק סטרילי נוסף של 5 מ"ל.</li>
	<li>העבר את 1 מ"ל האחרונים למזרק של 1 מ"ל. השתמש ב-1 מ"ל זה לאפיון ADRC, למשל, ספירת תאים, כדאיות תאים, ניתוח סמני פני השטח לפי ציטומטריית זרימה ויכולת התמיינות ADRC.</li>
	<li>יש ללבוש מחט 25 גרם על מזרק 5 מ"ל המכיל את 4 מ"ל של ADRC לפני שהוא ארוז בוילון סטרילי. השתמש ב- ADRCs להזרקה למושתל. במקרה זה, הפתרון של ADRCs יכיל בממוצע 8.4-32.7 מיליון תאים.</li>
</ol>4. השתלת ה-ADRCs לתוך קורפורה cavernosum
הערה: זהו הליך סטרילי. כל המכשירים חייבים להיות סטריליים, והאדם המזריק את התמיסה המכילה את תאי הגזע לתוך קורפורה cavernosum חייב ללבוש כפפות סטריליות. החולה ער במהלך הליך זה ויקבל תאי גזע משלו. ה-ADRCs מוזרקים מבלי לספור את התאים לפני ההזרקה.
<ol><li>שמור על הפתרון של ADRCs הומוגני על ידי הטיית המזרק בעדינות עד שהוא מוזרק לתוך cavernosum corpora.</li>
	<li>מניחים עטיפת צמצם על הפין. הניחו חוסם עורקים בשורש הפין באמצעות לולאת כלי סיליקון. מהדקים את הלולאה ומהדקים אותה עם מלקחיים מעוקלים. הפוך את חוסם העורקים חזק מספיק כדי לעצור את זרימת הדם מהפין.</li>
	<li>השתמש בשתי החלפות חיטוי כדי לחטא את עור הפין באתר ההזרקה (אתר רוחבי של קורפורה cavernosum). הזריקו 1 מ"ל של התמיסה המכילה ADRCs, בזווית ישירה לתוך קורפורה cavernosum בצד ימין בשני מקומות שונים, לחזור על צעד זה לאחר מכן בקורפורה השמאלי cavernosum. הנפח הכולל של ADRCs מוזרקים הוא 4 מ"ל.</li>
	<li>המתן 30 דקות ולאחר מכן הסר את חוסם העורקים.</li>
	<li>שחררו את המטופל לאחר שעתיים של תצפית לאחר הזרקת ADRCs, כדי להבטיח שהחולה יתאושש היטב לאחר ההרדמה.</li>
</ol>5. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>ממליץ למטופל לא לבצע כל ביצוע פיזי שיכול להעלות את לחץ הדם בשבוע הראשון, כדי למנוע התפתחות של המטומות.</li>
	<li>ממליץ למטופל ללבוש את קלסר הבטן במשך 24 שעות במשך 14 הימים הראשונים לאחר הניתוח ולאחר מכן במשך 14 יום במהלך היום.</li>
	<li>טפל בכאבים פוסט-כירורגיים עם פרצטמול פומי (למשל, אקמול; 1,000 מ"ג, 4 פעמים ביום) ונוגדי דלקת דרך הפה (למשל, איבופרופן; 400 מ"ג 3 פעמים ביום).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1,+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats.">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li><li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction.">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li><li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+baseline:+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients'+perspective.">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li><li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy:+what+the+evidence+really+says.">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li><li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting:+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail.">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li><li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model.">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), 1391-1400 (2010).</li><li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells.">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), 89-98 (2010).</li><li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction.">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial.">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li><li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart.">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction.">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14 (2016).</li><li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal/stem+cells:+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+(IFATS)+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+(ISCT).">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial.">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203 (2018).</li><li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth.">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li><li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells:+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking.">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury.">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13 (2013).</li><li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia.">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li></ol>

המחבר סרן פ. שייח הוא מנכ"ל Blue Cell Therapeutics, קופנהגן, דנמרק.

ההליך המוצג לבידוד ADRCs אינו מוגבל לשימוש רק לטיפול ב- ED, אלא ניתן להשתמש בו בצורות רבות אחרות של טיפול וניסויים. הניסוי שלנו הראה כי ADRCs אוטולוגיים ומבודדים טריים בטוחים לשימוש, והטיפול נסבל היטב במעקב של 12 חודשים.
לפני השימוש בהליך יש כמה שיקולים שיש לעשות. החיסרון של הליך זה הוא כי המטופל חייב להיות תחת הרדמה כללית במהלך שאיבת שומן. ניתן לבצע שאיבת שומן בהרדמה מקומית, אך ניסוי קודם הראה כי שילוב של הרדמה מקומית ואדרנלין עשוי להשפיע לרעה על צמיחת התאים של פיברובלסטים20. הסיכון להיות תחת הרדמה כללית הוא בדרך כלל נמוך, אבל תוצאה שלילית עדיין נראה. יש לקחת בחשבון סיכון זה כאשר המטופלים נבחרים לטיפול. שאיבת שומן היא הליך כירורגי ולכן תמיד תישא בסיכון לסיבוכים. כמו בכל ההליכים הכירורגיים האחרים, קיים סיכון לדימום לאחר הניתוח וכתוצאה מכך להיווצרות המטומות וסיכון לזיהום. חלק מהמטופלים שלנו דיווחו גם על רגישות מופחתת חולפת של עור הבטן. סיבוך מיידי לשאיבת שומן הוא דימום. זה ידוע כי חולים מסתכנים מקבלים סיבוכים מערכתיים כאשר כמויות גדולות של רקמה מוסרת. שאיבת השומן בהליך זה הייתה קטנה יחסית ולכן לא נחשבה לגורם סיכון.
סיבוכים להזרקת תאים מדווחים כאדמומיות חולפת, רגישות והמטומות.
ההתקן המשמש לבידוד של ה- ADRCs, נבחר מכיוון שהמערכת מאושרת על ידי CE. בדנמרק, חובה להשתמש בציוד שאושר על ידי CE מכיוון שהרשויות מסווגות טיפול בתאי גזע כניסוי לבדיקת סמים, כאשר ה- ADRC משמש להזרקה בבני אדם.
למכשיר יש יתרונות כגון שכל ההליך מתוקנן ומבוצע בסביבה סטרילית סגורה ללא צורך במעבדה מסווגת ביותר. הסיכון לזיהום הוא, אם כן, מופחת. זה מבטיח כי ההליך הוא אחיד וניתן לשחזור, וכי איכות המוצר הסופי הוא תמיד זהה בכל פעם (עם זאת, זה גם תלוי באיכות של רקמת קלט). ביצוע הבידוד במכשיר הוא קל ואינו דורש מפעילים משכילים במיוחד.
מגבלה אחת של המכשיר היא שהקלט המינימלי למכונה הוא 100 גרם ליפואספיראט מרוקן. מכיוון ששאיבת שומן מסתיימת לחלוטין לפני תחילת עיבוד התא (ובמקרה שלנו, במיקום אחר, לא ב- OR) מניסיוננו, זה ידרוש שכמות lipoaspirate תהיה לפחות 125 מ"ל באמצעות המדידה הגסה של מזרקי 50 מ"ל. אחרת יש סיכון שלא יהיה מספיק חומר למכונה להמשיך איתו. כמו כן, שימוש במגבלת הקצה העליונה (הקלט המרבי הוא 425 מ"ל) יגרום להליך בידוד ארוך מאוד.
נראה כי לתאי גזע בוגרים הן מרקמת השומן והן ממח העצם יש יכולת להתחדשות עצמית והתמיינות כמו תאי גזע עובריים. אחד היתרונות של ADRCs על פני תאי גזע המופואיטיים הוא תפוקה גבוהה פי 100-500 לכל נפח רקמה בהשוואה למח עצם21,22, ולכן, ADRCs אינם צריכים להיות בתרבית. יתר על כן, תאי גזע המופואיטיים קשים וכואבים יותר לקטיף מהחולה מאשר רקמת שומן. במצבים רבים, רקמת השומן היא רק מוצר פסולת לאחר הניתוח. ניתן תרבית תאי גזע כדי לתת תשואה גבוהה יותר המתאימה לאנגיוגנזה, אולם ל-ADRC's המבודדים הטריים עשוי להיות פוטנציאל אנגיוגני גבוה יותר מאשרלתרבית 23.

לתאי גזע יש את היכולת להתמיין לסוגי תאים שונים, והם מפרישים גורמי פרקרין שנחשבים כמעודדים את תהליך הריפוי ברקמה פגומה 1,2,3,4. הם, אם כן, אטרקטיביים בתחום הרפואה הרגנרטיבית, משום שהם יכולים לייצג טיפול מרפא אפשרי.
כריתת ערמונית רדיקלית (RP) היא הטיפול המרפא הזהוב לחולים עם סרטן ערמונית מקומי בסיכון נמוך/בינוני ותוחלת חיים > 10 שנים. מטרת הניתוח היא מיגור הסרטן, אך יש לו מספר תופעות לוואי. השכיחות של בריחת שתן לאחר כריתת ערמונית נעה בין 2-60% ותפקוד לקוי של זיקפה (ED) נחווה על ידי 20-90% מהמטופלים5. טכניקה חוסכת עצבים היא אופציה אצל חלק מהחולים (ציון גליסון < 7, סיכון נמוך למחלה חוץ-קפסולרית)5. טכניקה זו חוסכת את העצבים האחראים על הזקפה, אך למרות שזה אפשרי, חולים רבים עדיין מדווחים על ED לאחר הניתוח.
אפשרויות הטיפול בשיקום הפין לאחר RP מורכבות בעיקר מטיפול במעכבי PDE-5, טיפול בהזרקה או החדרה ומשאבות ואקום. תרופות המשמשות לשיקום הפין נבדלות זו מזו מבחינה פרמקולוגית, אך מנגנון הפעולה שלהן כולל הרפיה של תאי השריר החלקים במערות קורפוס. עם זאת, מטופלים רבים חווים כישלון טיפולי ולעולם אינם משיגים השפעה של התרופה המאפשרת קיום יחסי מין6.
ה- ED המתרחש לאחר RP נחשב כנובע משינויים בלתי הפיכים מבחינה מבנית7. שינויים אלה מתרחשים ברקמת המערה וכוללים אפופטוזיס של תאי השריר והאנדותל החלקים ופיברוזיס. מנגנון הוונו-חסימתי האחראי על חלק מרכזי של הזקפה, נפגע על ידי השינויים, וכתוצאה מכך מילוי וקשיות גרועים יותר של הפין7.
רבים מהמטופלים מדווחים כי ל-ED שהם חווים יש השפעה שלילית על איכות חייהם8. הם אינם מוכנים לוותר על פעילותם המינית לאחר הניתוח, ולכן, טיפול מרפא עבור ED הוא אטרקטיבי, כאשר הטיפולים הזמינים האחרים לשיקום הפין נכשלים.
בניסויים קודמים, כולל ניסויים בבעלי חיים ובפאזה 1 קטנה בבני אדם, תאי גזע הראו תוצאות מבטיחות כטיפול חלופי ל-2,9,10,11,12 ED. התוצאות מראות כי בטוח להשתמש ב- ADRCs, וכי תפקוד הזיקפה משופר באופן משמעותי לאחר הזרקה אחת לתוך קורפורה cavernosum 2,9,10,11,12. תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן (ADRCs) נחשבים כתומכים בהתחדשות הרקמה על ידי מנגנוני פאראקרין באמצעות שחרור הורמונים מרובים, גורמי גדילה נוירוטרופיים ואחרים, ציטוקינים ואולי גם מיקרו-רנ"א13. בנוסף, ADRCs מסוגלים להתמיין למספר סוגי תאים בוגרים כולל תאי שריר אנדותל וכלי דם, תאי סחוס, אוסטוציטים ונוירונים14,15. תכונות אלה הופכות את תאי הגזע למעניינים לפיתוח טיפול חדש וקבוע עבור ED.
תאי גזע מחולקים למספר קבוצות, בעצם אלה שמקורן בעובר המוקדם (תאי גזע עובריים) ואלה מרקמה בוגרת (תאי גזע בוגרים). תאי גזע בוגרים כוללים תאי גזע מזנכימליים (MSC) שהם מולטיפוטנטיים וניתן למצוא אותם במח העצם, ברקמת השומן, בדם טבורי, בשליה ובמוך שיניים17.
קל לגשת לתאי גזע מרקמת השומן, בניגוד לתאי גזע שמקורם במח העצם. קצירת תאי גזע ממח עצם היא הליך מסוכן וכואב בהשוואה לשאיבת שומן. מספר התאים שניתן יהיה לקצור ממח העצם יהיה מוגבל, בעוד שרק מחסני רקמת השומן של המטופל קובעים את הגבול למספר התאים שניתן לקצור. ניתן, אם כן, לבודד כמות גדולה של תאי גזע מרקמת השומן ללא צורך לאחר מכן לתרבית את התאים כדי לקבל כמות משביעת רצון. התאים הרגנרטיביים שמקורם בשומן, המכונים לעתים קרובות גם שבר כלי הדם הסטרומלי (SFV), מורכבים מסוגי תאים רבים, כולל MSCs, תאי אנדותל, פריקטים, תאי מערכת החיסון ואבותאבותיהם 18. כל אלה עשויים למלא תפקיד בתהליך ההתחדשות.
מטרת המחקר הנוכחי היא לחקור את ההשפעה של תאי גזע על ED לאחר RP על ידי שימוש ב-4 מ"ל של ADRCs אוטולוגיים שבודדו מרקמת שומן שזה עתה נקטפה לאחר הזרקה לתוך קורפורה cavernosum.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liposuction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abdominal Binder</td>
			<td>Dale</td>
			<td></td>
			<td>Size depent of the patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhessive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adrenalin 1 mg/ml</td>
			<td>Amgros I/s</td>
			<td>74 44 23</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic OP supplies</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>97010873-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel blade 11</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhixidine Ethanol</td>
			<td>Faarborg Pharma</td>
			<td>5% colored</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable set Lipocollector 3</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>670200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension hoses</td>
			<td>Extrudan</td>
			<td></td>
			<td>5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaze Rags</td>
			<td>Barrier</td>
			<td>175201</td>
			<td>30x45 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jelonet</td>
			<td>Smith and Nephew Medical Ltd</td>
			<td>90509225</td>
			<td>10 x 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram</td>
			<td>Astra Zeneca</td>
			<td></td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesorb Bandage</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>677001</td>
			<td>10x13 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304622</td>
			<td>18 G + 23 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>04:00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer-lactat</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>330052065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gown</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>690103-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Marker</td>
			<td>Richard-Allan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Mask</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Codan Medical</td>
			<td>6,28,402</td>
			<td>50/60 ml cath tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>700016181</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>REF 500001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolation of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>REF 303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 way stopcock</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF 10554-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care AB</td>
			<td>REF 906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytori Celution 800IV device</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swaps</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>25G (0,5*25 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitril Gloves</td>
			<td>Abena</td>
			<td></td>
			<td>Powder free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OR drape Sheet, 2 layers</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher</td>
			<td>REF 33005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Lactate</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td>06756 (DK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Termometer</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td></td>
			<td>traceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aperture drape</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF1565-01</td>
			<td>75*90 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swap</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pean</td>
			<td>Leibinger</td>
			<td>32-01257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Vessel Loop</td>
			<td>Purple Surgical</td>
			<td>REF PS3203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Sempermed</td>
			<td></td>
			<td>Or Use your favorite</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy

תאי גזע משמשים בתחומי מחקר רבים ברפואה רגנרטיבית, בין השאר משום שטיפולים אלה יכולים להיות מרפאים ולא סימפטומטיים. ניתן לקבל תאי גזע מרקמות שונות ותוארו מספר שיטות לבידוד. השיטה המוצגת לבידוד של תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן (ADRCs) יכולה לשמש בתחומים טיפוליים רבים מכיוון שהשיטה היא הליך כללי, ולכן אינה מוגבלת לטיפול בבעיות זיקפה (ED). ED היא תופעת לוואי נפוצה וחמורה לכריתת ערמונית רדיקלית (RP) שכן ED לעתים קרובות אינו מטופל היטב עם טיפול קונבנציונלי. השימוש ב-ADRC's כטיפול ב-ED עורר עניין רב בשל התוצאות החיוביות הראשוניות לאחר הזרקה אחת של תאים לתוך הקורפורה cavernosum. השיטה המשמשת לבידוד של ADRC's היא תהליך פשוט, אוטומטי, הניתן לשחזור ומבטיח מוצר אחיד. יתר על כן, העקרות של המוצר המבודד מובטחת מכיוון שהתהליך כולו מתרחש במערכת סגורה. חשוב למזער את הסיכון לזיהום וזיהום מכיוון שתאי הגזע משמשים להזרקה בבני אדם. ההליך כולו יכול להיעשות תוך 2.5-3.5 שעות ואינו דורש מעבדה מסווגת אשר מבטלת את הצורך במשלוח רקמות לאתר מחוץ לאתר. עם זאת, להליך יש כמה מגבלות שכן הכמות המינימלית של lipoaspirate מנוקז עבור מכשיר הבידוד לתפקד היא 100 גרם.

ההליך שהוצג שימש לניסוי קליני שלב 1 עם תווית פתוחה הכולל 21 מטופליםבני 19. נקודת הסיום העיקרית של הניסוי הייתה בטיחות השימוש ב-ADRC's בבני אדם ונקודת הקצה המשנית הייתה ההשפעה של ADRC's על פונקציית הזיקפה.
21 גברים נכללו בניסוי עם גיל ממוצע של 60 שנה (טווח 46-69) וזקפה רגילה וחיי מין פעילים לפני ה- RP עקב סרטן הערמונית. כולם סבלו מ- ED לאחר ה- RP, ללא סימני החלמה מתרופות זמינות לשיקום הפין. שישה גברים סבלו מבריחת שתן כתופעת לוואי ל-RP. כל הגברים קיבלו זריקה תוך-מוחית אחת של ADRC's המבודדים בשיטה המוצגת.
כל 21 הגברים היו במעקב עם 4 ביקורים במרפאת החוץ ב-1,3,6 ו-12 חודשים לאחר ההזרקה. התפקוד המיני הוערך באמצעות שאלונים מאומתים – המדד הבינלאומי של תפקוד הזיקפה-5 (IIEF-5) וציון קשיות הזקפה (EHS) (מצורף כנספחים).
לא התרחשו אירועים חמורים בזמן התצפית. שמונה גברים דיווחו על אדמומיות חולפת ונפיחות באתרי ההזרקה, שלושה דיווחו על תגובה באזור הפין. דווח על שמונה אירועים קלים הפיכים שחוו הקשורים לשאיבת שומן, כגון אי נוחות קלה בבטן והמטומות בטן קלות. אף מטופל לא דיווח על אי נוחות במעקב של חודש אחד. שמונה מתוך 15 (53%) בקבוצה היבשתית דיווחו שתפקוד הזיקפה הספיק לקיום יחסי מין לאחר 12 חודשים. הקבוצה של 6 גברים חסרי שליטה לא הראתה כל שיפור בתפקוד הזיקפה.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>יבשת</td>
			<td>בריחת שתן</td>
		</tr>
<tr>
<td>כולל מטופלים</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>השפעה משמעותית</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: הטבלה מציגה את ההבדלים בהשפעה המשמעותית של הטיפול בין חולים יבשתיים לחולים בריחת שתן.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

גילוי מדויק של שיטות ופרוטוקולים הוא חיוני לקליטה בקנה מידה גדול של טיפולים בתאי גזע. כאן אנו מציגים פרוטוקול לבידוד תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן, המשמשים להזרקה תוך-תאית אחת כטיפול בבעיות זיקפה (ED) בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית (RP).

בידוד של תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן לטיפול בבעיות זיקפה בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

ניתן להשתמש בטכניקת בידוד זו כדי לחקור אם תאי גזע של שומן יכולים לסייע למטופלים לחדש את תפקוד הזיקפה לאחר כריתת ערמונית רדיקלית. שיטה זו אינה מוגבלת למחלה מסוימת. ניתן להשתמש בו בכל תחומי המחקר בתאי גזע השומן.תאי הגזע המבודדים משמשים לטיפול בבעיות זיקפה, אך טכניקת הבידוד היא הליך כללי ותאי הגזע יכולים להיות שימושיים בתחומים אחרים בחקר תאי גזע. התחילו בחיטוי עור הבטן ושק האשכים עם 0.5% כלורהקסידין. השתמש בסמן כירורגי כדי לצייר את האזורים על הבטן שבהם שאיבת שומן הולך להתבצע, בדרך כלל את האזור בין הסינתזה לבין הטבור.לעשות שני חתכים ברוחב שישה מילימטרים בעור הבטן עם מספר 11 אזמל. מקם את החתכים בצורה סימטרית ולרוחבית מהאזור המצויר למעלה של שאיבת שומן. מניחים מעט חומר סיכה על החתכים כדי לוודא שצינורית ההחדרה מחליקה פנימה והחוצה מהחתכים בקלות במהלך שאיבת השומן.לאחר מכן הציגו צינורית חדירה במד מידה 14 דרך החתכים בעור. הזריקו תמיסת קליין שונה באופן תת-עורי באזורים המסומנים המקבילים לפני העור עד שהרקמה הממוקדת הופכת לנפוחה ומוצקת או חמצמצית. הזריקו נפח של תמיסת קליין שעברה שינוי ביחס של אחד לאחד לרקמת השומן.המתן במשך 10 דקות כדי למקסם את ההשפעות של אדרנלין, ולהפחית את כמות הדם ברקמת השומן שנקטפה. בצע שאיבת שומן עירוי סילון סטנדרטית כדי לקצור 200 עד 300 מילימטרים של רקמת שומן. השתמש בצינוריות קהות שהן חלולות עם צינור עירוי משולב וזרבובית.חברו את הצינורית למכשיר יניקה לשאיבת שומן. הציגו מזרק של שלושה מילימטרים עם קצה קהה דרך החתכים בבטן ואספו את רקמת השומן באספן ליפו כדי לשמר את הליפואספיראט בסביבה סטרילית. ה lipoaspirate יתחיל להיפרד משלב המים.השתמשו במזרקים סטריליים של 50 מיליליטר כדי לשאוב את הליפואספיראט מה-LipoCollector, ובכך למזער את נפח המים הנשאבים במזרקים. הברג תקע בקצה המזרקים כדי לשמור על רקמת השומן סטרילית. מניחים מזרקים עם קצה כלפי מטה בשקית ניילון סטרילית כדי להתחיל בהפרדת ליפו-אספראט משלב המים.לאחר מכן מניחים את השקית במיכל סטרילי. כסו את המיכל בוילון סטרילי כדי לאבטח את הסביבה הסטרילית במהלך ההובלה. סגור את חתכי העור עם חומר התפר המועדף על המנתח.מניחים בגד דחיסה סביב הבטן כדי להפחית בצקת לאחר הניתוח. כדי ליצור בלוק פין, להזריק את bupivacaine בשני אתרים, אחד ממוקם גחון והשני dorsally. הכניסו את כל המחט לרקמה התת עורית, הצביעו עליה לרוחב ימינה, והזיקו את ההרדמה כשהמחט נסוגה.חזור על ההזרקה, והפנה את המחט שמאלה. הניחו את כל החומרים המתכלים והאנזימים באופן ספקני על השולחן המכוסה במגבת כירורגית חד פעמית סטרילית. נגבו את המכשיר עם אתנול וטענו את הסט המתכלה.לאחר מכן חברו שקית של מצלצלים מניקים למערכת. בצע את סדרת הבדיקות האוטומטיות למחצה לפני הוספת הליפופיאוראט. בזמן שהמכשיר מוכן, תנו לליפופאספיראט לעמוד בצינור 50 מיליליטר כדי לאפשר לשומן להיפרד מהפאזה הנוזלית.שים לב לכמות הכוללת של רקמת השומן והשתמש בה כדי להבטיח שהכמות הכוללת של השומן הטעון תהיה בטווח קיבולת המכשיר. טען את הרקמה כאשר המכשיר התבקש לעשות זאת. המכונה תנקז עודפי נוזלים.שקלו את כמות רקמת השומן ושטפו אותה עם צלצולים מניקים. לאחר שהרקמה נשטפה ונוקזה, חברו שקית עירוי חדשה עם צלצולים מניקים של 37 עד 39 מעלות צלזיוס. בנה מחדש את האנזים הזמין מסחרית המכיל תערובת קולגן ופרוטאזות בחמישה מיליליטרים מניקים.ודא שהמכשיר מציג את כמות האנזים כדי להזריק לתוך המכל עם רקמת השומן. לאחר הזרקת העיכול האנזימטי יימשך כ -20 דקות. לאחר עיכול רקמות, בדקו שהתכולה מופרדת לשומנים עליונים המכילים פאזה צהובה ולשכבה ורודה תחתונה המכילה את התאים הרגנרטיביים שמקורם בשומן, או ADRCs.תנו לשכבה הוורודה להתנקז לתוך תא עיבוד התאים של הסט המתכלה, והשאירו את שכבת השומנים מאחור. אפשרו ל-ADRCs להתרכז בתא עיבוד התאים במהלך סבבים מרובים של צנטריפוגה. לאחר מכן להוסיף 10 מיליליטרים של intrabase משוחזרים בצלצולים מניקים.התגובה האנזימטית נמשכת 10 דקות וה-ADRCs נשטפים לאחר מכן. כאשר הבידוד של ADRCs הושלם, להשעות מחדש את התאים בחמישה מיליליטרים של לקטט של רינגר ולשאוף את התמיסה למזרק של חמישה מיליליטר. הרכיבו מנעול נקבת לואר תלת-כיווני על המזרק ושאפו ארבעה מיליליטרים של ADRCs למזרק סטרילי נוסף של חמישה מיליליטרים.העבר את מיליליטר אחד האחרון של ADRCs למזרק מיליליטר אחד. השתמש באליקווט זה לניתוחי אפיון ADRC, כגון ספירת תאים, כדאיות תאים, ניתוח סמני פני השטח לפי ציטומטריית זרימה ויכולת התמיינות ADRC. שים מחט של 25 מדים על מזרק חמשת המיליליטרים המכיל את ארבעת המיליליטרים של ADRCs.לאחר מכן ארזו אותו בוילון סטרילי. תמיסה זו של ADRCs תוזרק למושתל ותכיל בממוצע 8.4 עד 32.7 מיליון תאים. וודאו שהתמיסה של ADRCs נשארת הומוגנית על ידי הטיית המזרק בעדינות עד שהוא מוזרק למערת קורפורה.מניחים עטיפת צמצם על הפין. וחוסם עורקים בשורש הפין עם לולאת כלי סיליקון. הידקו את הלולאה והדקו אותה עם מלקחיים, מה שהופך את חוסם העורקים חזק מספיק כדי לעצור את זרימת הדם מהפין.השתמש בשני ספוגיות חיטוי כדי לחטא את עור הפין באתר ההזרקה. לאחר מכן הזריקו מיליליטר אחד של תמיסת ה-ADRC בזווית ישירה לתוך הקורפורה cavernosum, בצד ימין בשני מקומות שונים. חזור על שלב זה במערות קורפורה השמאלית, תוך הזרקת נפח כולל של ארבעה מיליליטרים.שיטה זו נבחנה בניסוי קליני שלב 1 עם תווית פתוחה על 21 גברים עם גיל ממוצע של 60 שנה וזקפה רגילה וחיי מין פעילים לפני כריתת ערמונית רדיקלית. שישה מהגברים סבלו גם הם מבריחת שתן. כל הגברים קיבלו זריקה בין-מערותית אחת של ADRCs מבודדים ולאחר מכן הגיעו לארבעה ביקורים במרפאת החוץ בשעה 1, 3, 6 ו-12 חודשים לאחר ההזרקה.לא התרחשו אירועים חמורים בזמן התצפית. שמונה גברים דיווחו על אדמומיות ונפיחות חולפות באתרי ההזרקה, ושלושה דיווחו על תגובה באזור הפין. שמונה גברים חוו אירועים קלים הפיכים הקשורים לשאיבת שומן, כגון אי נוחות קלה בבטן והמטומות קלות בבטן.אף מטופל לא דיווח על אי נוחות במעקב של חודש אחד. התפקוד המיני שלהם הוערך עם המדד הבינלאומי של תפקוד הזיקפה חמש וציון קשיות הזקפה. שמונה מתוך 15 גברים בקבוצת היבשת דיווחו שתפקוד הזיקפה שלהם הספיק לקיום יחסי מין בגיל 12 חודשים.הקבוצה של שישה גברים חסרי שליטה לא הראתה כל שיפור בתפקוד הזיקפה בעת ניסיון פרוטוקול זה, יש לזכור כי האנזימים המשמשים במהלך הליך הבידוד יש להוציא מהמקפיא או המקרר שעתיים לפני תחילת ההליך. התוצאות של טכניקה זו סללו את הדרך ל-RCT שבו נחקרות ההשפעות של תאי גזע של שומן בקנה מידה גדול יותר.

Research

JoVE Journal

Medicine

Repair of a Critical-sized Calvarial Defect Model Using Adipose-derived Stromal Cells Harvested from Lipoaspirate

תיקון של דגם פגם Calvarial הקריטי בגודל תאי שומן באמצעות נגזרת סטרומה נקטפו מן Lipoaspirate

Craniofacial skeletal repair and regeneration offers the promise of de novo tissue formation through a cell-based approach utilizing stem cells. ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

תרבות מטופל נגזר סלולרי ובידוד של CD133<sup&gt; +</sup&gt; תאי גזע סרטני משוערים מלנומה

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

כמותיים Multispectral ניתוח בעקבות השתלת רקמות פלורסנט וליזואליזציה של מקורות ניידים, סוגים, ואינטראקציות

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

בידוד, Cryopreservation ותרבות של תאי אפיתל amnion אדם ליישומים קליניים

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

יצירת והשתלות של גיליון נגזר שומן בתאי גזע (ASC) במודל של ריפוי פצע סוכרתי

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

ניתוח רשת של הקלטות אלקטרודה foramen ovale בחולים עמידים בפני תרופות Temporal Lobe אפילפסיה

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Intense Pulsed Light for the Treatment of Dry Eye Owing to Meibomian Gland Dysfunction

אינטנסיבי פעמו אור לטיפול של עין יבשה בשל תפקוד לקוי של בלוטת Meibomian

Dry eye disease (DED) is an increasingly common condition and one of the most common complaints of patients. The vast majority of DED is caused by the ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Micronization מכני של Lipoaspirates לטיפול רגנרטיבית

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...