Name: isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Dette arbeidet er grunnlagt av Odense Universitetssykehus (11/31936), Det danske senter for regenerativ medisin (14/50427) og Dansk Kreftforening.

Alle metoder beskrevet i protokollen ble godkjent av Den danske nasjonale etiske komité (nr. 37054), Det danske helse- og legemiddeltilsynet (EUDRA-CT-nummer 2013-004220-11) og Det danske datatilsynet (2008-58-0035). Studien ble registrert ved ClinicalTrials.gov (NCT02240823). Studien ble utført i samsvar med Helsinkideklarasjonen overvåket av GCP-enheten (Good Clinical Practice) ved Odense universitetssykehus. ADRC-preparatet ble utført i et autorisert vevsetablissement for håndtering av humant vev og celler ved Odense Universitetssykehus (Dansk helse- og legemiddelmyndighet, autorisasjon nr. 29035).
1. Rekruttering av pasient/deltakere
<ol><li>Å delta i studien rekrutterer pasienter som oppfyller følgende kriterier for inkludering.<ol>
<li>Rekrutter pasienter som er over 18 år, seksuelt aktive før RP og ikke smittet med de seksuelt overførbare sykdommene, for eksempel virusinfeksjon med human immunsvikt, syfilis eller hepatitt.</li>
		<li>Forsikre deg om at de lider av erektil dysfunksjon etter en RP som ble utført på grunn av prostatakreft. MERK: I denne studien ble pasientene inkludert i studien 5-18 måneder etter RP og ble inkludert uavhengig av operasjonsmetoden: åpen/robotassistert eller nervesparende/ikke-nervesparende.</li>
		<li>Påse at verdien av prostata-spesifikt antigen (PSA) måtte være uoppdagelig ved klinisk oppfølging etter RP.</li>
		<li>Sørg for at pasientene var seksuelt aktive før RP, og uttrykker fortsatt et ønske om å forbli seksuelt aktive etter RP. Påse at farmakologisk inngrep med fosfodiesterase type 5-hemmer (PDE5-hemmer ) eller en syntetisk analog av prostaglandin E1 (PGE1) er forsøkt før du deltar og anses som utilstrekkelig.</li>
		<li>Sørg også for at pasientene har nok subkutant fett på magen eller låret.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ekskluder pasienter fra studien, hvis det var alvorlige hendelser under anestesi under RP eller hvis de ble behandlet med antikoagulantia.</li>
</ol>2. Fettsuging
MERK: Fettsuging er en operasjon som fjerner fett eller lipocytter fra det subkutane området. Denne delen av protokollen utføres som en standard fettsuging og prosedyren utføres under sterile forhold i et operasjonsteater. Alle instrumenter som brukes under prosedyren må være sterile og kirurgen må bruke skrubber, steril kirurgisk kjole, sterile hansker, kirurgisk maske og lue.
<ol><li>Bedøv pasienten.<ol>
<li>Forsikre deg om at pasienten er under generell anestesi under prosedyren, og denne delen utføres av en anestesiolog.</li>
		<li>Desinfiser huden i magen og pungen med klorhexidin 0,5% (clorhexidine ånd, 96% etanol medisinert klorhexidin digluconate 77% W / W = 83% v / v). Bruk en kirurgisk markør for å tegne opp områdene på magen hvis fettsugingen skal utføres. Området vil vanligvis være området mellom symfysen og navlestrengen.</li>
	</ol></li>
	<li>Lag to 6 mm brede snitt i magens hud med en skalpell (nummer 11). Plasser snittene symmetrisk og lateralt fra det opptrukket området av fettsuging.<ol>
<li>Sett litt smøremiddel slik petroleumjell på snittene, for å sikre at infiltrasjonskanylene glir lett inn og ut av snittene under fettsugingen.</li>
	</ol></li>
	<li>Introduser en størrelse 14 G infiltrasjonskanyle gjennom snittene i huden. Injiser modifisert Kleins-oppløsning subkutant i de merkede områdene parallelt med hudoverflaten. Injiser så mye av løsningen at det målrettede vevet blir hovent og fast, eller tumescent. MERK: Den modifiserte Kleins-løsningen består av en løsning på 1000 ml ringer laktat og 1 mg adrenalin (epinefrin (1:1,000,000)). Ikke ass lokalbedøvelse til løsningen, da det kan ha en negativ innvirkning på ADRC-ene.<ol>
<li>Injiser et volum modifisert Kleins-løsning som tilsvarer forholdet 1:1 til fettvev.</li>
		<li>Vent i 10 min for å maksimere effekten av adrenalin og redusere mengden blod i høstet fettvev.</li>
	</ol></li>
	<li>Utfør en standard fettsuging ved hjelp av en jetinfusjon fettsuging for å høste 200-300 ml fettvev. Bruk stumpe kanyler som er hule, som et infusjonsrør og en dyse er integrert. Fest kanylen til en sugeenhet for fettsuging. MERK: En kontinuerlig vifteformet vanninfusjon løsner fettvevet i fragmenter som lett kan suges ut gjennom åpningen i kanylen.<ol>
<li>Introduser en 3 mm sprøyte med en stump spiss gjennom snittene på magen</li>
	</ol></li>
	<li>Samle fettvevet i en liposamler for å bevare lipoaspiratet i et sterilt miljø. Lipoaspiratet vil begynne å skille seg fra vannfasen.</li>
	<li>Bruk 50 ml sterile sprøyter for å suge opp lipoaspiratet fra liposamleren.<ol>
<li>Minimer volumet av vann sugd opp i sprøytene og skru på en plugg på spissen av sprøytene for å holde fettvevet sterilt.</li>
	</ol></li>
	<li>Plasser sprøyter med spiss nedover i en steril plastpose for å starte separasjonen av lipoaspirat fra vannfasen. Legg posen i steril beholder fortsatt med spissene vendt nedover for å fortsette separasjonen.<ol>
<li>Dekk beholderen med steril gardin for å sikre det sterile miljøet under transport. MERK: I henhold til brukerhåndboken til maskinen som brukes til isolasjonen, kan lipoaspiratet lagres i opptil maksimalt 4 timer før isolering av ADRC-ene, men vi behandler det alltid umiddelbart.</li>
	</ol></li>
	<li>Lukk hudinnsnittene med kirurgene foretrukket suturmateriale. Legg et kompresjonsplagg, en abdominal bindemiddel, rundt magen for å redusere det postoperative ødem.</li>
	<li>Lag en penisblokk ved å injisere 20 ml bupivakain 5 mg/ml som inneholder 5 μg adrenalin.<ol>
<li>Bruk en 20 ml sprøyte og påfør med en 23 G kanyle, 1 1/4 tommer lang.</li>
		<li>Påfør 5 ml bupivakain i hver kvadrant i subcutis.</li>
		<li>Injiser bupivakain på to steder, den ene plassert ventrally den andre dorsalt. Introduser nålen i hele lengden i det subkutane vevet som peker nålen sidelengs til høyre og injiser anestesi når nålen trekkes tilbake. Gjenta injeksjonen som peker kanylen mot venstre. MERK: Pasienten kan nå vekkes fra anestesi av anestesiologen.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Isolering av ADRCer
MERK: Isolasjonsprosessen til ADRCer utføres som beskrevet i detalj i brukerhåndboken etter enheten (se Materialfortegnelser). Det er viktig at prosedyren utføres under sterile forhold for å sikre at lipoaspiratet ikke utsettes for forurensninger under rensing av ADRC-ene. Tiden det tar for isolering av ADRCer avhenger av volumet av lipoaspirat, men hele prosedyren vil omtrent ta 2,5 timer ved hjelp av den halvautomatiske enheten som beskrevet her.
<ol><li>Plasser alle forbruksvarer og enzymer aseptisk på et bord dekket av et sterilt kirurgisk håndkle til engangsbruk. MERK: Et prosedyresett inneholder alle nødvendige forbruksvarer og enzymer som trengs for å isolere ADRCer fra én pasient. Foruten dette må tre 37-39 °C, en-liters infusjonsposer med lakterte ringere være tilgjengelige sammen med sterile klær, hansker og håndklær og etanol for desinfeksjon. Legg merke til alle antall forbruksvarer og enzymer og også temperaturen på de lakterte ringerne, når de er koblet til systemet.<ol>
<li>Tørk av enheten med etanol og følg produsentens instruksjoner</li>
		<li>Legg forbrukssettet på enheten og koble en pose med lakterte ringer til systemet.</li>
		<li>Utfør serien med halvautomatiske tester (systemkontroll og lekkasjetest) før du legger til lipoaspiratet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>La lipoaspirat stå i 50 ml rør mens trinnene i 3.1 utføres. Dette vil tillate fettet å skille seg fra væskefasen. Legg merke til den totale mengden (i ml) fettvev og bruk dette for å sikre at mengden lastet fett vil være innenfor rekkevidden av enhetens kapasitet.</li>
	<li>Last inn vevet når du blir bedt om det av enheten. Maskinen vil nå drenere av overflødig væske og veie mengden fettvev lastet før den vaskes med lakterte ringer.<ol>
<li>Når vevet er vasket og drenert igjen, kobler du til en ny infusjonspose med 37-39 °C lakterte ringere når maskinen ber om det.</li>
		<li>Rekonstituer det kommersielt tilgjengelige enzymet som inneholder kollagenase og proteaseblanding i 5 ml lakterte ringer (ett hetteglass med enzym er nok for fettmengder på opptil 270 ml).</li>
		<li>Forsikre deg om at enheten viser mengden enzym (basert på vevsvekten) for å injisere i beholderen med fettvevet. Når den er injisert, vil den enzymatiske fordøyelsen som utføres under agitasjon vare rundt 20 minutter.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Etter vevsfordøyelse, la agitatoren stoppe og kontroller at innholdet er delt inn i to faser: en overle lipidholdig, gul fase og et nedre rosa lag som inneholder ADRC-ene. La det sistnevnte laget dreneres inn i cellebehandlingskammeret (som går inn i enheten innebygd sentrifuge) av forbrukssettet, samtidig som lipidlaget blir igjen.</li>
	<li>La ADRCer konsentrere seg i cellebehandlingskammeret under flere runder med sentrifugering. Legg nå til 10 ml Intravase (inneholder DNase, som bidrar til å unngå klumping i den endelige ADRC-suspensjonen) rekonstituert i Lakterte ringere. Den enzymatiske reaksjonen varer i 10 minutter hvoretter ADRCene vaskes. MERK: Dette trinnet er helautomatisk, og maskinen vil informere når prosessen er ferdig.</li>
	<li>Når isolasjonen av ADRCer er fullført, resuspend cellene i 5 ml ringer laktat. Aspirer oppløsningen i en 5 ml sprøyte.</li>
	<li>Monter en 3-veis stoppekran hunn Luer-lock på 5 ml sprøyten som inneholder ADRC-ene, og aspirer 4 ml ADRCer i en annen 5 ml steril sprøyte.</li>
	<li>Overfør de siste 1 ml til en 1 ml sprøyte. Bruk denne 1 ml for ADRC-karakterisering, for eksempel celleantall, celle levedyktighet, analyse av overflatemarkører ved strømningscytometri og ADRC-differensieringsevne.</li>
	<li>Sett på en 25 G nål på 5 ml sprøyten som inneholder 4 ml ADRCs før den pakkes i en steril gardin. Bruk ADRC-ene til injeksjon i mottakeren. I dette tilfellet vil løsningen av ADRCer i gjennomsnitt inneholde 8,4-32,7 millioner celler.</li>
</ol>4. Implantasjon av ADRC-ene i corpora cavernosum
MERK: Dette er en steril prosedyre. Alle instrumenter må være sterile, og personen som injiserer løsningen som inneholder stamcellene i corpora cavernosum må bruke sterile hansker. Pasienten er våken under denne prosedyren og vil motta sine egne stamceller. ADRC-ene injiseres uten å telle cellene før injeksjon.
<ol><li>Hold løsningen av ADRCer homogen ved å vippe sprøyten forsiktig til den injiseres i corpora cavernosum.</li>
	<li>Plasser en blendergardin over penis. Plasser en turniquet på roten av penis ved hjelp av en silikon kar sløyfe. Stram sløyfen og fest den med tang buet pean. Gjør turniquet stramt nok til å stoppe blodstrømmen fra penis.</li>
	<li>Bruk to antiseptiske bytter for å desinfisere penishuden på injeksjonsstedet (lateralt sted for corpora cavernosum). Injiser 1 ml av løsningen som inneholder ADRCer, i en direkte vinkel inn i corpora cavernosum på høyre side på to forskjellige steder, gjenta dette trinnet etterpå i venstre corpora cavernosum. Totalt volum av injiserte ADRCer er 4 ml.</li>
	<li>Vent i 30 min og fjern deretter turniquet.</li>
	<li>Utskriv pasienten etter 2 timers observasjon etter injeksjon av ADRC, for å sikre at pasienten er godt gjenopprettet etter anestesi.</li>
</ol>5. Postoperativ omsorg
<ol><li>Anbefal pasienten å ikke gjøre noen fysisk ytelse som kan øke blodtrykket i løpet av den første uken, for å forhindre utvikling av hematomer.</li>
	<li>Anbefal pasienten å bruke magebinderen i 24 timer de første 14 dagene etter operasjonen og deretter i 14 dager på dagtid.</li>
	<li>Behandle posturgisk smerte med oral acetaminophen (f.eks. paracetamol; 1000 mg, 4 ganger daglig) og oral antiinflammatorisk (f.eks. ibuprofen; 400 mg 3 ganger om dagen).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1,+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats.">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li><li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction.">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li><li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+baseline:+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients'+perspective.">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li><li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy:+what+the+evidence+really+says.">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li><li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting:+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail.">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li><li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model.">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), 1391-1400 (2010).</li><li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells.">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), 89-98 (2010).</li><li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction.">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial.">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li><li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart.">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction.">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14 (2016).</li><li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal/stem+cells:+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+(IFATS)+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+(ISCT).">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial.">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203 (2018).</li><li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth.">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li><li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells:+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking.">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury.">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13 (2013).</li><li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia.">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li></ol>

Forfatteren Søren P. Sheikh er administrerende direktør i Blue Cell Therapeutics, København, Danmark.

Den presenterte prosedyren for å isolere ADRCer er ikke begrenset til å brukes bare til ED-terapi, men kan brukes i flere andre former for behandling og eksperimenter. Vår studie viste at autologe, nyisolerte ADRCer er trygge å bruke, og behandlingen er godt utholdelig i en 12 måneders oppfølging.
Før prosedyren brukes, er det noen hensyn som må tas. En ulempe ved denne prosedyren er at pasienten må være under generell anestesi under fettsugingen. Fettsuging er mulig å utføre under lokalbedøvelse, men en tidligere studie har vist at en kombinasjon av lokalbedøvelse og adrenalin kan ha en negativ innvirkning på celleveksten av fibroblaster20. Risikoen for å være under generell anestesi er generelt lav, men et negativt utfall er fortsatt sett. Denne risikoen må tas i betraktning når pasienter velges ut til behandlingen. Fettsuging er en kirurgisk prosedyre og vil derfor alltid bære i fare for komplikasjoner. Som med alle andre kirurgiske prosedyrer, er det fare for postoperativ blødning som resulterer i dannelse av hematomer og risiko for infeksjon. Noen av pasientene våre rapporterte også om en forbigående redusert følsomhet i bukhuden. En umiddelbar komplikasjon til fettsuging er blødning. Det er kjent at pasienter risikerer å få systemiske komplikasjoner når store mengder vev fjernes. Fettsugingen i denne prosedyren var relativt liten og ble derfor ikke ansett som en risikofaktor.
Komplikasjoner til injeksjon av celler rapporteres som forbigående rødhet, ømhet og hematomer.
Enheten som brukes til isolering av ADRCene, ble valgt fordi systemet er CE-godkjent. I Danmark er det obligatorisk å bruke CE-godkjent utstyr fordi myndighetene kategoriserer behandling med stamceller som en legemiddeltestingsstudie, når ADRC brukes til injeksjon hos mennesker.
Enheten har fordeler som at hele prosedyren blir standardisert og utført i et lukket sterilt miljø uten å kreve et høyt klassifisert laboratorium. Risikoen for forurensning er derfor redusert. Dette sikrer at prosedyren er jevn og reproduserbar, og at kvaliteten på sluttproduktet alltid er den samme hver gang (det avhenger imidlertid også av kvaliteten på inngangsvevet). Det er enkelt å utføre isolasjonen på enheten og krever ikke spesialutdannede operatører.
En begrensning ved enheten er at minimumsinngangen til maskinen er 100 g drenert lipoaspirat. Ettersom fettsugingen er helt ferdig før cellebehandlingen starter (og i vårt tilfelle, på et annet sted, ikke i OR) etter vår erfaring, vil dette kreve at mengden lipoaspirat er minst 125 ml ved hjelp av det grove målet på 50 ml sprøyter. Ellers er det fare for at det ikke vil være nok materiale til at maskinen kan fortsette med. Bruk av øvre endegrense (maks inngang er 425 ml) vil også resultere i en veldig lang isolasjonsprosedyre.
Voksne stamceller fra både fettvev og benmarg ser ut til å ha kapasitet til selvfornyelse og differensiering som embryonale stamceller. En av fordelene med ADRCer over hemopoietiske stamceller er et 100-500 ganger høyere utbytte per vevsvolum sammenlignet med benmarg21,22, og derfor trenger adrcs ikke å bli dyrket. Videre er hemopoietiske stamceller vanskeligere og mer smertefulle å høste fra pasienten enn fettvev. I mange situasjoner er fettvev bare et avfallsprodukt etter operasjonen. Det er mulig å dyrke stamceller for å gi et høyere utbytte egnet for angiogenese, men nyisolerte ADRCs kan ha høyere angiogent potensial enn dyrket23.

Stamceller har evnen til å skille seg ut i forskjellige celletyper, og de skiller ut parakrinefaktorer som antas å fremme helbredelsesprosessen i skadet vev 1,2,3,4. De er derfor attraktive innen regenerativ medisin, fordi de kan representere en mulig kurativ behandling.
Radikal prostatektomi (RP) er den gylne kurative behandlingen for pasienter med lav/mellomliggende risiko lokalisert prostatakreft og forventet levealder > 10 år. Målet med operasjonen er utryddelse av kreft, men det har flere bivirkninger. Utbredelsen av post-prostatectomy inkontinens varierer fra 2-60% og erektil dysfunksjon (ED) oppleves av 20-90% av pasientene5. Nervesparende teknikk er et alternativ hos noen pasienter (Gleason score < 7, lav risiko for ekstracapsular sykdom)5. Denne teknikken sparer nervene som er ansvarlige for ereksjon, men selv om dette er mulig, rapporterer mange pasienter fortsatt ED postoperativt.
Behandlingsalternativer for penisrehabilitering etter RP består hovedsakelig av behandling med PDE-5-hemmere, injeksjons- eller instillasjonsterapi og vakuumpumper. Medicaments som brukes til penisrehabilitering varierer farmakologisk, men deres virkningsmekanisme inkluderer avslapning av de glatte muskelcellene i corpus cavernosum. Imidlertid opplever mange pasienter behandlingssvikt og oppnår aldri en effekt av medisinen som muliggjør samleie6.
ED som oppstår etter RP antas å skyldes strukturelt irreversible endringer7. Disse endringene forekommer i hulevevet og inkluderer apoptose av glatte muskel- og endotelceller og fibrose. Den veno-okklusive mekanismen som er ansvarlig for en sentral del av ereksjonen, svekkes av endringene, noe som resulterer i dårligere fylling og hardhet i penis7.
Mange av pasientene rapporterer at ED de opplever har en negativ innvirkning på livskvaliteten8. De er ikke klare til å gi opp sin seksuelle aktivitet etter operasjonen, og derfor er en kurativ terapi for ED attraktiv, når de andre tilgjengelige behandlingene for penis rehabilitering mislykkes.
I tidligere studier, inkludert dyre- og små fase 1-studier på mennesker, har stamceller vist lovende resultater som en alternativ behandling for ED 2,9,10,11,12. Resultatene viser at det er trygt å bruke ADRCer, og at erektilfunksjonen er betydelig forbedret etter en enkelt injeksjon i corpora cavernosum 2,9,10,11,12. Adipose-avledede regenerative celler (ADRCs) antas å støtte vev regenerering av parakrine mekanismer gjennom frigjøring av flere hormoner, nevrotrofiske- og andre vekstfaktorer, cytokiner og muligens mikro-RNAs13. I tillegg er ADRCer i stand til å skille seg ut i flere modne celletyper, inkludert endotel- og vaskulære muskelceller, bruskceller, osteocytter og nevroner14,15. Disse egenskapene gjør stamceller interessante for å utvikle en permanent ny behandling for ED.
Stamceller er delt inn i flere grupper, i utgangspunktet de som er avledet fra det tidlige embryoet (embryonale stamceller) og de fra voksent vev (voksne stamceller). Voksne stamceller inkluderer mesenchymale stamceller (MSC) som er multipotente og finnes i benmargen, fettvev, navlestrengsblod, morkake og tannmasse17.
Stamceller fra fettvevet er enkle å få tilgang til, i motsetning til stamceller avledet fra benmarg. Høsting av stamceller fra benmarg er en risikabel og smertefull prosedyre sammenlignet med fettsuging. Antall celler som er mulig å høste fra benmarg vil være begrenset, mens bare pasientens depoter av fettvev setter grensen for antall celler som kan høstes. Det er derfor mulig å isolere en stor mengde stamceller fra fettvevet uten et etterfølgende behov for å dyrke cellene for å oppnå en tilfredsstillende mengde. De adipose-avledede regenerative cellene, også ofte referert til som den stromale vaskulære fraksjonen (SFV), består av mange celletyper, inkludert MSCer, endotelceller, pericytter, immunceller og forfedre herav18. Disse kan alle spille en rolle i den regenerative prosessen.
Målet med den nåværende studien er å undersøke effekten av stamceller på ED etter RP ved å bruke 4 ml autologe ADRCer isolert fra fersk høstet fettvev etter injeksjon i corpora cavernosum.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liposuction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abdominal Binder</td>
			<td>Dale</td>
			<td></td>
			<td>Size depent of the patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhessive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adrenalin 1 mg/ml</td>
			<td>Amgros I/s</td>
			<td>74 44 23</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic OP supplies</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>97010873-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel blade 11</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhixidine Ethanol</td>
			<td>Faarborg Pharma</td>
			<td>5% colored</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable set Lipocollector 3</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>670200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension hoses</td>
			<td>Extrudan</td>
			<td></td>
			<td>5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaze Rags</td>
			<td>Barrier</td>
			<td>175201</td>
			<td>30x45 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jelonet</td>
			<td>Smith and Nephew Medical Ltd</td>
			<td>90509225</td>
			<td>10 x 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram</td>
			<td>Astra Zeneca</td>
			<td></td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesorb Bandage</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>677001</td>
			<td>10x13 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304622</td>
			<td>18 G + 23 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>04:00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer-lactat</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>330052065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gown</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>690103-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Marker</td>
			<td>Richard-Allan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Mask</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Codan Medical</td>
			<td>6,28,402</td>
			<td>50/60 ml cath tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>700016181</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>REF 500001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolation of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>REF 303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 way stopcock</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF 10554-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care AB</td>
			<td>REF 906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytori Celution 800IV device</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swaps</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>25G (0,5*25 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitril Gloves</td>
			<td>Abena</td>
			<td></td>
			<td>Powder free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OR drape Sheet, 2 layers</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher</td>
			<td>REF 33005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Lactate</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td>06756 (DK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Termometer</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td></td>
			<td>traceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aperture drape</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF1565-01</td>
			<td>75*90 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swap</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pean</td>
			<td>Leibinger</td>
			<td>32-01257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Vessel Loop</td>
			<td>Purple Surgical</td>
			<td>REF PS3203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Sempermed</td>
			<td></td>
			<td>Or Use your favorite</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy

Stamceller brukes på mange forskningsområder innen regenerativ medisin delvis fordi disse behandlingene kan være kurative i stedet for symptomatiske. Stamceller kan fås fra ulike vev og flere metoder for isolasjon er beskrevet. Den presenterte metoden for isolering av fettavledede regenerative celler (ADRCer) kan brukes innenfor mange terapeutiske områder fordi metoden er en generell prosedyre og derfor ikke begrenset til erektil dysfunksjon (ED) terapi. ED er en vanlig og alvorlig bivirkning av radikal prostatektomi (RP) siden ED ofte ikke er godt behandlet med konvensjonell terapi. Å bruke ADRCs som behandling for ED har tiltrukket seg stor interesse på grunn av de første positive resultatene etter en enkelt injeksjon av celler i corpora cavernosum. Metoden som brukes for isolering av ADRCs er en enkel, automatisert prosess, som er reproduserbar og sikrer et ensartet produkt. Videre sikres steriliteten til det isolerte produktet fordi hele prosessen foregår i et lukket system. Det er viktig å minimere risikoen for forurensning og infeksjon siden stamcellene brukes til injeksjon hos mennesker. Hele prosedyren kan gjøres innen 2,5-3,5 timer og krever ikke et klassifisert laboratorium som eliminerer behovet for frakt av vev til et eksternt sted. Prosedyren har imidlertid noen begrensninger siden minimumsmengden av drenert lipoaspirat for at isolasjonsenheten skal fungere er 100 g.

Den presenterte prosedyren er brukt til en åpen klinisk fase 1-studie, inkludert 21 pasienter19. Det primære endepunktet i studien var sikkerheten ved bruk av ADRCs hos mennesker, og sekundært endepunkt var effekten av ADRCs på erektilfunksjonen.
21 menn ble inkludert i studien med en gjennomsnittsalder på 60 år (område 46-69) og et normalt ereksjons- og aktivt sexliv før RP på grunn av prostatakreft. De led alle av ED etter RP, uten tegn på utvinning fra medisin tilgjengelig for penisrehabilitering. Seks menn led av inkontinens som en bivirkning til RP. Alle menn fikk en enkelt intracavernous injeksjon av ADRCs isolerte med den presenterte metoden.
Alle de 21 mennene ble fulgt opp med 4 besøk på poliklinikken 1,3,6 og 12 måneder etter injeksjonen. Den seksuelle funksjonen ble evaluert med validerte spørreskjemaer – International Index of Erectile Function-5 (IIEF-5) og Erection Hardness Score (EHS) (Vedlagt som vedlegg).
Ingen alvorlige hendelser skjedde i løpet av observasjonstidspunktet. Åtte menn rapporterte forbigående rødhet og hevelse på injeksjonsstedene, tre rapporterte reaksjoner i penisområdet. Åtte erfarne reversible mindre hendelser relatert til fettsuging ble rapportert som lett abdominal ubehag og mindre abdominal hematomer. Ingen pasienter rapporterte ubehag ved oppfølgingen av 1 måned. Åtte av femten (53 %) i kontinentgruppen rapporterte at erektilfunksjonen var tilstrekkelig for samleie etter 12 måneder. Gruppen på 6 inkontinente menn viste ingen forbedring av erektil funksjon.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Kontinent</td>
			<td>Inkontinent</td>
		</tr>
<tr>
<td>Inkluderte pasienter</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Betydelig effekt</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1: Tabellen viser forskjellene i signifikant effekt av behandlingen mellom kontinent og inkontinente pasienter.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

Presis avsløring av metoder og protokoller er avgjørende for storskala opptak av stamcellebehandlinger. Her presenterer vi en protokoll for å isolere adipose-avledede regenerative celler, som brukes til en enkelt intracavernous injeksjon som behandling av erektil dysfunksjon (ED) etter radikal prostatektomi (RP).

Isolering av adipose avledede regenerative celler for behandling av erektil dysfunksjon etter radikal prostatektomi

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Denne isolasjonsteknikken kan brukes til å undersøke om fettstammeceller kan hjelpe pasienter med å regenerere erektil funksjon etter radikal prostatektomi. Denne metoden er ikke begrenset for en bestemt sykdom. Det kan brukes innenfor alle områder av fett stamcelle forskning.De isolerte stamcellene brukes til å behandle erektil dysfunksjon, men isolasjonsteknikken er en generell prosedyre og stamcellene kan være nyttige på andre områder innen stamcelleforskning. Begynn med å desinfisere huden på magen og pungen med 0,5% klorhexidin. Bruk en kirurgisk markør for å tegne opp områdene på magen der fettsugingen skal utføres, vanligvis området mellom syntesen og navlestrengen.Lag to seks millimeter brede snitt i magens hud med en nummer 11 skalpell. Plasser snittene symmetrisk og lateralt fra det opptrukne fettsugingsområdet. Legg litt smøremiddel på snittene for å sikre at infiltrasjonskanylene glir lett inn og ut av snittene under fettsugingen.Introduser deretter en størrelse 14 gauge infiltrasjonskanyle gjennom snittene i huden. Injiser modifisert Klein-løsning subkutant i de merkede områdene parallelt med hudoverflaten til det målrettede vevet blir hovent og fast eller tumescent. Injiser et volum modifisert Klein-løsning med et en-til-en-forhold til fettvevet.Vent i 10 minutter for å maksimere effekten av adrenalin, og reduser mengden blod i høstet fettvev. Utfør en standard jetinfusjon fettsuging for å høste 200 til 300 millimeter fettvev. Bruk stumpe kanyler som er hule med et integrert infusjonsrør og dyse.Fest kanylen til en sugeenhet for fettsuging. Introduser en tre millimeter sprøyte med en stump spiss gjennom snittene på magen og samle fettvevet i Lipo Collector for å bevare lipoaspiratet i et sterilt miljø. Lipoaspiratet vil begynne å skille seg fra vannfasen.Bruk 50 milliliter sterile sprøyter for å suge opp lipoaspiratet fra LipoCollector, og minimer volumet av vann sugd opp i sprøytene. Skru en plugg på spissen av sprøytene for å holde fettvevet sterilt. Plasser sprøyter med spiss nedover i en steril plastpose for å starte separasjonen av lipoaspirat fra vannfasen.Legg deretter posen i en steril beholder. Dekk beholderen med et sterilt gardin for å sikre det sterile miljøet under transport. Lukk hudinnsnittene med kirurgens foretrukne suturmateriale.Legg et kompresjonsplagg rundt magen for å redusere postoperativt ødem. For å lage en penisblokk, injiser bupivakain på to steder, den ene plassert ventrally og den andre dorsalt. Introduser hele nålen i det subkutane vevet, pek den sidelengs mot høyre, og injiser anestesi når nålen trekkes tilbake.Gjenta injeksjonen, og pek kanylen mot venstre. Plasser alle forbruksvarer og enzymer aseptisk på bordet dekket av et sterilt kirurgisk håndkle til engangsbruk. Tørk av enheten med etanol og last inn forbrukssettet.Koble deretter en pose med lakterte ringer til systemet. Utfør serien med semiautomatiske tester før du legger til lipoaspirat. Mens enheten er forberedt, la lipoaspirate stå i et 50 milliliterrør for å la fettet skille seg fra væskefasen.Legg merke til den totale mengden fettvev og bruk dette for å sikre at den totale mengden lastet fett vil være innenfor rekkevidden av enhetens kapasitet. Last inn vevet når du blir bedt om det av enheten. Maskinen vil tømme overflødig væske.Vei mengden fettvev og vask det med lakterte ringer. Når vevet er vasket og drenert, koble til en ny infusjonspose med 37 til 39 grader Celsius lakterte ringer. Rekonstituer det kommersielt tilgjengelige enzymet som inneholder kollagenase og proteaseblanding i fem milliliter lakterte ringer.Forsikre deg om at enheten viser mengden enzym som skal injiseres i beholderen med fettvevet. Når injisert den enzymatiske fordøyelsen vil vare rundt 20 minutter. Etter vevsfordøyelse må du kontrollere at innholdet er delt inn i en overleppid som inneholder gul fase og et nedre rosa lag som inneholder de fettavledede regenerative cellene, eller ADRC-ene.La det rosa laget renne inn i cellebehandlingskammeret til forbrukssettet, og la lipidlaget ligge igjen. La ADRCene konsentrere seg i cellebehandlingskammeret under flere runder med sentrifugering. Tilsett deretter 10 milliliter intrabase rekonstituert i lakterte ringer.Den enzymatiske reaksjonen varer i 10 minutter og ADRCene vaskes etterpå. Når isolasjonen av ADRCer er fullført, må du suspendere cellene i fem milliliter av Ringers laktat og aspirere oppløsningen i en fem milliliter sprøyte. Monter en treveis stopcock kvinnelig Luer-lås på sprøyten og aspirer fire milliliter ADRCer i en annen fem milliliter steril sprøyte.Overfør den siste milliliter adrcs til en en milliliter sprøyte. Bruk denne aliquoten til ADRC-karakteriseringsanalyser, for eksempel celleantall, celle levedyktighet, analyse av overflatemarkører ved strømningscytometri og ADRC-differensieringsevne. Sett en 25 gauge nål på fem milliliter sprøyte som inneholder de fire milliliter ADRCs.Pakk den deretter i en steril gardin. Denne løsningen av ADRCer vil bli injisert i mottakeren og bør i gjennomsnitt inneholde 8,4 til 32,7 millioner celler. Pass på at løsningen av ADRCer forblir homogen ved å vippe sprøyten forsiktig til den injiseres i corpora cavernosum.Plasser en blendergardin over penis. Og en turniquet på roten av penis med en silikon kar sløyfe. Stram løkken og fest den med tang, noe som gjør turniqueten stram nok til å stoppe blodstrømmen fra penis.Bruk to antiseptiske vattpinner for å desinfisere penishuden på injeksjonsstedet. Injiser deretter en milliliter av ADRC-løsningen i en direkte vinkel inn i corpora cavernosum, på høyre side på to forskjellige steder. Gjenta dette trinnet i venstre corpora cavernosum, injisere et totalt volum på fire milliliter.Denne metoden ble testet i en åpen fase en klinisk studie på 21 menn med en gjennomsnittsalder på 60 år og et normalt ereksjons- og aktivt sexliv før en radikal prostatektomi. Seks av mennene led også av inkontinens. Alle menn fikk en enkelt inter cavernous injeksjon av isolerte ADRCs og ble etterfulgt med fire besøk i poliklinikken på 1, 3, 6 og 12 måneder etter injeksjonen.Ingen alvorlige hendelser skjedde i løpet av observasjonstidspunktet. Åtte menn rapporterte forbigående rødhet og hevelse på injeksjonsstedene, og tre rapporterte reaksjoner i penisområdet. Åtte menn opplevde reversible mindre hendelser relatert til fettsuging, for eksempel lett abdominal ubehag og mindre abdominal hematomer.Ingen pasienter rapporterte ubehag ved oppfølgingen av en måned. Deres seksuelle funksjon ble evaluert med Den internasjonale indeksen for erektil funksjon fem og ereksjon hardhet score. Åtte av 15 menn i kontinentgruppen rapporterte at deres erektilfunksjon var tilstrekkelig for samleie etter 12 måneder.Gruppen på seks inkontinente menn viste ingen forbedring av erektil funksjon Ved forsøk på denne protokollen, husk at enzymene som brukes under isolasjonsprosedyren, må tas ut av fryseren eller kjøleskapet to timer før prosedyren startes. Resultatene fra denne teknikken har banet vei for en RCT der effekten av fettstammeceller utforskes i større skala.

Research

JoVE Journal

Medicine

Repair of a Critical-sized Calvarial Defect Model Using Adipose-derived Stromal Cells Harvested from Lipoaspirate

Reparasjon av en kritisk størrelse Calvarial Defect Model Bruke adipose-avledet stromale cellene høstet fra Lipoaspirate

Craniofacial skeletal repair and regeneration offers the promise of de novo tissue formation through a cell-based approach utilizing stem cells. ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolasjon, karakterisering og Comparative Differensiering av Human tannpulpa stamceller hentet fra permanente tenner ved hjelp av to ulike metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Pasient avledet celle Kultur og Isolering av CD133<sup&gt; +</sup&gt; Antatte kreft stamceller fra melanom

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

Kvantitativ Multispectral Analyse Etter Fluorescent Tissue Transplant for visualisering av Cell Origins, Typer, og interaksjoner

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolasjon, Kryopreservering og kultur menneskerettighets amnion Epitelceller for kliniske anvendelser

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studerer Bukspyttkjertelkreft Stem Cell Kjennetegn for å utvikle nye behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Opprettelse og transplantasjon av en liggende under Adipose-avledet stilk cellen (ASC) ark i en diabetiker sårhelende modell

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Network Analyse av foramen ovale elektrode Recordings i resistent tinninglappen epilepsipasienter

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Intense Pulsed Light for the Treatment of Dry Eye Owing to Meibomian Gland Dysfunction

Intenst pulserende lys for behandling av tørre øyne på grunn av Meibomian kjertel dysfunksjon

Dry eye disease (DED) is an increasingly common condition and one of the most common complaints of patients. The vast majority of DED is caused by the ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Mekanisk Micronization av Lipoaspirates for regenerativ Therapy

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...