Name: isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Detta arbete har grundats av Odense Universitetssjukhus (11/31936), Danskt Centrum för Regenerativ Medicin (14/50427) och Danska Cancerfonden.

Alla metoder som beskrivs i protokollet godkändes av den danska nationella etikkommittén (nr 37054), den danska hälso- och läkemedelsmyndigheten (EUDRA-CT-nummer 2013-004220-11) och den danska dataskyddsmyndigheten (2008-58-0035). Studien registrerades vid ClinicalTrials.gov (NCT02240823). Studien utfördes i enlighet med Helsingforsdeklarationen som övervakas av enheten för god klinisk sed (GCP) vid Odense universitetssjukhus. ADRC-beredningen utfördes i en auktoriserad vävnadsinrättning för hantering av mänskliga vävnader och celler vid Odense universitetssjukhus (Danska hälso- och läkemedelsmyndigheten, auktorisation nr 29035).
1. Rekrytering av patient/deltagare
<ol><li>För att delta i studien rekrytera patienter som uppfyller följande kriterier för inkludering.<ol>
<li>Rekrytera patienter som är över 18 år, sexuellt aktiva före RP och inte infekterade med sexuellt överförbara sjukdomar, t.ex. humant immunbristvirusinfektion, syfilis eller hepatit.</li>
		<li>Se till att de lider av erektil dysfunktion efter en RP som utfördes på grund av prostatacancer. OBS: I denna studie inkluderades patienterna i studien 5-18 månader efter RP och inkluderades oavsett kirurgisk metod: öppen /robotassisterad eller nervsparande/ icke-nervsparande.</li>
		<li>Se till att värdet av prostataspecifikt antigen (PSA) måste vara odetekterbart vid den kliniska uppföljningen efter RP.</li>
		<li>Se till att patienterna var sexuellt aktiva före RP och fortfarande uttryckte en önskan att förbli sexuellt aktiva efter RP. Se till att farmakologisk intervention med en fosfodiesteras typ 5-hämmare (PDE5-hämmare ) eller en syntetisk analog av prostaglandin E1 (PGE1) har prövats innan den deltog och bedömts vara otillräcklig.</li>
		<li>Se dessutom till att patienterna har tillräckligt med subkutant fett på buken eller låret.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Uteslut patienter från studien, om det fanns allvarliga händelser under anestesi under RP eller om de behandlades med antikoagulantia.</li>
</ol>2. Fettsugning
OBS: Fettsugning är en operation som tar bort fett eller lipocyter från det subkutana området. Denna del av protokollet utförs som en standardfettsugning och proceduren utförs under sterila förhållanden i en operationssal. Alla instrument som används under proceduren måste vara sterila och kirurgen måste bära skrubb, steril kirurgisk klänning, sterila handskar, kirurgisk mask och hatt.
<ol><li>Bedöva patienten.<ol>
<li>Se till att patienten är under generell anestesi under proceduren, och denna del utförs av en anestesiolog.</li>
		<li>Desinficera huden i buken och pungen med klorhexidin 0,5% (klorhexidinsprit, 96% etanolmedicinerad klorhexidindiglukonat 77% W /W = 83% v / v). Använd en kirurgisk markör för att rita upp områdena på buken där fettsugningen kommer att utföras. Området kommer vanligtvis att vara området mellan symfysen och navelsträngen.</li>
	</ol></li>
	<li>Gör två 6 mm breda snitt i bukens hud med en skalpell (nummer 11). Placera snitten symmetriskt och i sidled från det uppritade fettsugningsområdet.<ol>
<li>Lägg lite smörjmedel sådan vaselin på snitten, för att se till att infiltrationskanylen glider in och ut ur snitten lätt under fettsugningen.</li>
	</ol></li>
	<li>Introducera en infiltrationskanyl i storlek 14 G genom snitten i huden. Injicera modifierad Kleins-lösning subkutant i de markerade områdena parallellt med hudytan. Injicera så mycket av lösningen att den riktade vävnaden blir svullen och fast eller tumescent. OBS: Den modifierade Kleins-lösningen består av en lösning av 1 000 ml Ringers laktat och 1 mg adrenalin (adrenalin (1: 1 000 000)). Ass inte lokalbedövning till lösningen, eftersom det kan ha en negativ inverkan på ADRC.<ol>
<li>Injicera en volym modifierad Kleins-lösning som motsvarar förhållandet 1:1 till fettvävnad.</li>
		<li>Vänta i 10 min för att maximera effekten av adrenalin och minska mängden blod i skördad fettvävnad.</li>
	</ol></li>
	<li>Utför en vanlig fettsugning med hjälp av en jetinfusionsfettsugning för att skörda 200-300 ml fettvävnad. Använd trubbiga kanyler som är ihåliga, till vilka ett infusionsrör och ett munstycke är integrerade. Fäst kanylen på en suganordning för fettsugning. OBS: En kontinuerlig fläktformad vatteninfusion lossar fettvävnaden i fragment som lätt kan sugas ut genom öppningen i kanylen.<ol>
<li>Introducera en 3 mm spruta med en trubbig spets genom snitten på buken</li>
	</ol></li>
	<li>Samla fettvävnaden i en lipo-samlare för att bevara lipoaspiratet i en steril miljö. Lipoaspiratet börjar separera från vattenfasen.</li>
	<li>Använd 50 ml sterila sprutor för att suga upp lipoaspiratet från lipouppsamlaren.<ol>
<li>Minimera volymen vatten som sugs upp i sprutorna och skruva på en plugg på sprutspetsen för att hålla fettvävnaden steril.</li>
	</ol></li>
	<li>Placera sprutor med spetsen nedåt i en steril plastpåse för att starta separationen av lipoaspirat från vattenfasen. Placera påsen i steril behållare fortfarande med spetsarna vända nedåt för att fortsätta separationen.<ol>
<li>Täck behållaren med sterilt draperi för att säkra den sterila miljön under transporten. OBS: Enligt användarhandboken för maskinen som används för isoleringen kan lipoaspiratet lagras i upp till högst 4 timmar före isolering av ADRC: erna, men vi behandlar det alltid omedelbart.</li>
	</ol></li>
	<li>Stäng hudsnitten med kirurgernas föredragna suturmaterial. Placera ett kompressionsplagg, ett bukbindemedel, runt buken för att minska det postoperativa ödemet.</li>
	<li>Gör ett penisblock genom att injicera 20 ml bupivakain 5 mg / ml innehållande 5 μg adrenalin.<ol>
<li>Använd en 20 ml spruta och applicera med en 23 G nål, 1 1/4 tum lång.</li>
		<li>Applicera 5 ml bupivakain i varje kvadrant i subcutis.</li>
		<li>Injicera bupivakain på två ställen, en placerad ventralt den andra dorsalt. Introducera nålen i hela sin längd i den subkutana vävnaden som pekar nålen i sidled åt höger och injicera anestesin när nålen dras tillbaka. Upprepa injektionen och peka nålen åt vänster. OBS: Patienten kan nu väckas från generell anestesi av anestesiologen.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Isolering av alternativa tvistlösningsöverenligande ämnen
OBS: Isoleringsprocessen för ADRC utförs enligt beskrivningen i detalj i användarhandboken efter enheten (se Materialtabell). Det är viktigt att proceduren utförs under sterila förhållanden för att säkerställa att lipoaspiratet inte utsätts för några föroreningar under reningen av ADRC. Den tid det tar för isolering av ADRC beror på volymen lipoaspirat, men hela proceduren tar ungefär 2,5 timmar med den halvautomatiska enheten som beskrivs här.
<ol><li>Placera alla förbrukningsvaror och enzymer aseptiskt på ett bord täckt av en steril engångshandduk. OBS: Ett procedurkit innehåller alla nödvändiga förbrukningsvaror och enzymer som behövs för isolering av ADRC från en patient. Förutom detta måste tre 37-39 ° C, en-liters infusionspåsar med lakterade ringare finnas tillgängliga tillsammans med sterila kläder, handskar och handdukar och etanol för desinfektion. Anteckna alla partier av förbrukningsvaror och enzymer och även temperaturen på de lakterade ringarna, när de är anslutna till systemet.<ol>
<li>Torka av enheten med etanol och följ tillverkarens instruktioner</li>
		<li>Ladda förbrukningsapparaten på enheten och anslut en påse med lakterade ringare till systemet.</li>
		<li>Utför serien av halvautomatiska tester (systemkontroll och läckagetest) innan du tillsätter lipoaspiratet.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Låt lipoaspiratet stå i 50 ml rör medan stegen i 3.1 utförs. Detta gör att fettet kan separeras från vätskefasen. Anteckna den totala mängden (i ml) fettvävnad och använd detta för att säkerställa att mängden laddat fett kommer att ligga inom intervallet för enhetens kapacitet.</li>
	<li>Ladda vävnaden när du uppmanas av enheten. Maskinen kommer nu att tömma bort överflödig vätska och väga mängden fettvävnad som laddas innan den tvättas med lakterade ringare.<ol>
<li>När vävnaden har tvättats och tömts igen, anslut en ny infusionspåse med 37-39 °C lakterade ringsignaler på begäran av maskinen.</li>
		<li>Rekonstituera det kommersiellt tillgängliga enzymet som innehåller kollagenas och proteasblandning i 5 ml lakterade ringare (en injektionsflaska med enzym räcker för fettmängder upp till 270 ml).</li>
		<li>Se till att enheten visar mängden enzym (baserat på vävnadsvikten) som ska injiceras i kapseln med fettvävnaden. När den har injicerats kommer den enzymatiska matsmältningen som utförs under omrörning att pågå i cirka 20 minuter.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Efter vävnadsförtunning, låt omröraren stanna och kontrollera att innehållet är uppdelat i två faser: en övre lipidinnehållande, gul fas och ett nedre rosa lager som innehåller ADRC. Låt det senare skiktet dräneras in i cellbearbetningskammaren (som går in i den inbyggda centrifugen) i förbrukningsapparaten, medan lipidskiktet lämnas bakom.</li>
	<li>Låt ADRC koncentreras i cellbearbetningskammaren under flera centrifugeringsrundor. Lägg nu till 10 ml Intravase (innehåller DNase, som hjälper till att undvika klumpning i den slutliga ADRC-suspensionen) rekonstituerad i lakterade ringare. Den enzymatiska reaktionen varar i 10 minuter varefter ADRC tvättas. OBS: Detta steg är helt automatiskt och maskinen kommer att informera när processen är klar.</li>
	<li>När isoleringen av ADRC är klar, återsuspendera cellerna i 5 ml Ringer Lactate. Aspirera lösningen i en 5 ml spruta.</li>
	<li>Montera ett 3-vägs stoppkran kvinnligt Luer-lås på 5 ml sprutan som innehåller ADRC: erna och aspirera 4 ml ADRC i en annan 5 ml steril spruta.</li>
	<li>Överför de sista 1 ml till en 1 ml spruta. Använd denna 1 ml för ADRC-karakterisering, t.ex. cellantal, cellviabilitet, analys av ytmarkörer genom flödescytometri och ADRC-differentieringsförmåga.</li>
	<li>Sätt på en 25 G nål på 5 ml sprutan som innehåller 4 ml ADRC innan den packas i ett sterilt draperi. Använd ADRC för injektion i mottagaren. I detta fall kommer lösningen av ADRC i genomsnitt att innehålla 8, 4-32, 7 miljoner celler.</li>
</ol>4. Implantation av ADRC i corpora cavernosum
OBS: Detta är ett sterilt förfarande. Alla instrument måste vara sterila, och den som injicerar lösningen som innehåller stamcellerna i corpora cavernosum måste bära sterila handskar. Patienten är vaken under denna procedur och kommer att få sina egna stamceller. ADRC injiceras utan att räkna cellerna före injektion.
<ol><li>Håll lösningen av ADRC homogen genom att luta sprutan försiktigt tills den injiceras i corpora cavernosum.</li>
	<li>Placera en bländardraperi över penis. Placera en turnering vid roten av penis genom att använda en silikonkärlslinga. Dra åt öglan och säkra den med pincett böjd ärt. Gör turneringen tillräckligt tät för att stoppa blodflödet från penis.</li>
	<li>Använd två antiseptiska byten för att desinficera penishuden på injektionsstället (lateralt stället för corpora cavernosum). Injicera 1 ml av lösningen innehållande ADRC, i en direkt vinkel i corpora cavernosum på höger sida på två olika ställen, upprepa detta steg efteråt i vänster corpora cavernosum. Den totala volymen injicerade ADRC är 4 ml.</li>
	<li>Vänta i 30 minuter och ta sedan bort turneringen.</li>
	<li>Skriv ut patienten efter 2 timmars observation efter injektion av ADRC, för att säkerställa att patienten är väl återhämtad efter anestesi.</li>
</ol>5. Postoperativ vård
<ol><li>Rekommendera patienten att inte göra någon fysisk prestation som kan höja blodtrycket inom den första veckan för att förhindra utveckling av hematom.</li>
	<li>Rekommendera patienten att bära bukbindemedlet i 24 timmar de första 14 dagarna efter operationen och hädanefter i 14 dagar under dagtid.</li>
	<li>Behandla postkirurgisk smärta med oral paracetamol (t.ex. paracetamol; 1000 mg, 4 gånger om dagen) och oral antiinflammatorisk (t.ex. ibuprofen; 400 mg 3 gånger om dagen).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cells+improve+erectile+function+partially+through+the+secretion+of+IGF-1,+bFGF+and+VEGF+in+aged+rats.">Adipose-derived stem cells improve erectile function partially through the secretion of IGF-1, bFGF and VEGF in aged rats.</a> Andrology. 6, 498-509 (2018).</li><li>Phillippou, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+for+postprostatectomy+erectile+dysfunction.">Penile rehabilitation for postprostatectomy erectile dysfunction.</a> Cochrane Database Systematic Review Issue 10. 012414, (2018).</li><li>Nelson, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Back+to+baseline:+erectile+function+recovery+after+radical+prostatectomy+from+the+patients'+perspective.">Back to baseline: erectile function recovery after radical prostatectomy from the patients' perspective.</a> Journal of Sex Medicine. 10, 1636-1643 (2013).</li><li>Fode, M., Ohl, D. A., Ralph, D., Sonksen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Penile+rehabilitation+after+radical+prostatectomy:+what+the+evidence+really+says.">Penile rehabilitation after radical prostatectomy: what the evidence really says.</a> British Journal of Urology International. 112 (7), 998-1008 (2013).</li><li>Johansson, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+quality-of-life+outcomes+after+radical+prostatectomy+or+watchfull+waiting:+the+Scandinavian+Prostate+Cancer+Group-4+randomised+trail.">Long-term quality-of-life outcomes after radical prostatectomy or watchfull waiting: the Scandinavian Prostate Cancer Group-4 randomised trail.</a> Lancet Oncology. 12, 891-899 (2011).</li><li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intracavernous+injection+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+on+hyperlipidemia-associated+erectile+dysfunction+in+a+rat+model.">The effect of intracavernous injection of adipose tissue-derived stem cells on hyperlipidemia-associated erectile dysfunction in a rat model.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (4), 1391-1400 (2010).</li><li>Garcia, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+erectile+dysfunction+in+the+obese+type+2+diabetic+ZDF+rat+with+adipose+tissue-derived+stem+cells.">Treatment of erectile dysfunction in the obese type 2 diabetic ZDF rat with adipose tissue-derived stem cells.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (1), 89-98 (2010).</li><li>Lin, C. S., Xin, Z., Dai, J., Huang, Y. C., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+therapy+for+erectile+dysfunction.">Stem-cell therapy for erectile dysfunction.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 13 (11), 1585-1597 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+and+Potential+Effect+of+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-Derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+Following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-Label+Phase+I+Clinical+Trial.">Safety and Potential Effect of a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-Derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy: An Open-Label Phase I Clinical Trial.</a> EBioMedicine. 5, 204-210 (2016).</li><li>Mirotsou, M., Jayawardena, T. M., Schmeckpebper, J., Gnecchi, M., Dzau, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+mechanisms+of+stem+cell+reparative+and+regenerative+actions+in+the+heart.">Paracrine mechanisms of stem cell reparative and regenerative actions in the heart.</a> Journal of Molecular Cellular Cardiology. 50 (2), 280-289 (2011).</li><li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+paracrine+actions+and+tissue+regeneration.">Stem cell paracrine actions and tissue regeneration.</a> Regenerative Medicine. 5 (1), 121-143 (2010).</li><li>Albersen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+adipose+tissue-derived+stem+cells+and+stem+cell+lysate+improve+recovery+of+erectile+function+in+a+rat+model+of+cavernous+nerve+injury.">Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury.</a> The Journal of Sexual Medicine. 7 (10), 3331-3340 (2010).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular Biology of the Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Gokce, A., Peak, T. C., Abdel-Mageed, A. B., Hellstrom, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells+for+the+Treatment+of+Erectile+Dysfunction.">Adipose Tissue-Derived Stem Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction.</a> Current Urology Reports. 17, 14 (2016).</li><li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+cultured+expanded+adipose+tissue-derived+stromal/stem+cells:+a+joint+statement+of+the+International+Frederation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+(IFATS)+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+(ISCT).">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and cultured expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Frederation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherpy. 15 (6), 641-648 (2013).</li><li>Haahr, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-month+Follow-up+after+a+Single+Intracavernous+Injection+of+Autologous+Adipose-derived+Regenerative+Cells+in+Patients+with+Erectile+Dysfunction+following+Radical+Prostatectomy:+An+Open-label+Phase+1+Clinical+Trial.">A 12-month Follow-up after a Single Intracavernous Injection of Autologous Adipose-derived Regenerative Cells in Patients with Erectile Dysfunction following Radical Prostatectomy: An Open-label Phase 1 Clinical Trial.</a> Urology. 121, 203 (2018).</li><li>Fedder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+exposure+of+human+fibroblasts+to+local+anesthetics+impairs+cell+growth.">In vitro exposure of human fibroblasts to local anesthetics impairs cell growth.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 162 (2), 280-288 (2010).</li><li>D'Andrea, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+human+adipose+tissue+from+stem+cells:+a+new+tool+for+regenerative+medicine+ad+tissue+banking.">Large-scale production of human adipose tissue from stem cells: a new tool for regenerative medicine ad tissue banking.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 14 (3), 233-242 (2008).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+therapeutic+effects+of+human+and+mouse+adipose-derived+stem+cells+in+a+murine+model+of+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury.">Comparison of the therapeutic effects of human and mouse adipose-derived stem cells in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury.</a> Stem Cell Research and Therapy. 4 (1), 13 (2013).</li><li>Yusuke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+freshly+isolated+adipose+tissue-derived+regenerative+cells+enhances+angiogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia.">Transplantation of freshly isolated adipose tissue-derived regenerative cells enhances angiogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Biomedical Research. 34 (1), 23-29 (2013).</li></ol>

Författaren Søren P. Sheikh är VD på Blue Cell Therapeutics, Köpenhamn, Danmark.

Det presenterade förfarandet för isolering av ADRC är inte begränsat till att endast användas för ED-terapi, men kan användas i flera andra former av behandling och experiment. Vår studie visade att autologa, nyligen isolerade ADRC är säkra att använda, och behandlingen är väl tolerabel i en 12 månaders uppföljning.
Innan förfarandet används finns det några överväganden att göra. En nackdel med denna procedur är att patienten måste vara under generell anestesi under fettsugningen. Fettsugning är möjlig att utföra under lokalbedövning, men en tidigare studie har visat att en kombination av lokalbedövningsmedel och adrenalin kan ha en negativ inverkan på celltillväxten av fibroblaster20. Risken att bli under generell anestesi är generellt låg, men ett negativt resultat ses fortfarande. Denna risk måste beaktas när patienter väljs ut för behandlingen. Fettsugning är ett kirurgiskt ingrepp och kommer därför alltid att medföra risk för komplikationer. Som med alla andra kirurgiska ingrepp finns det risk för postoperativ blödning som resulterar i bildning av hematom och risk för infektion. Några av våra patienter rapporterade också en övergående minskad känslighet i bukhuden. En omedelbar komplikation till fettsugning är blödning. Det är känt att patienter riskerar att få systemiska komplikationer när stora mängder vävnad tas bort. Fettsugningen i denna procedur var relativt liten och ansågs därför inte vara en riskfaktor.
Komplikationer vid injektion av celler rapporteras som övergående rodnad, ömhet och hematom.
Enheten som används för isolering av ADRC: erna valdes eftersom systemet är CE-godkänt. I Danmark är det obligatoriskt att använda CE-godkänd utrustning eftersom myndigheterna kategoriserar behandling med stamceller som en drogtestprövning, när ADRC används för injektion på människor.
Enheten har fördelar som att hela proceduren standardiseras och utförs i en sluten steril miljö utan att kräva ett högt klassificerat laboratorium. Risken för kontaminering minskar därför. Detta säkerställer att förfarandet är enhetligt och reproducerbart och att slutproduktens kvalitet alltid är densamma varje gång (det beror dock också på kvaliteten på den ingående vävnaden). Att utföra isoleringen på enheten är enkelt och kräver inte specialutbildade operatörer.
En begränsning av enheten är att minsta ingång i maskinen är 100 g dränerat lipoaspirat. Eftersom fettsugningen är helt klar innan cellbearbetningen börjar (och i vårt fall på en annan plats, inte i OR) enligt vår erfarenhet, kommer detta att kräva att mängden lipoaspirat är minst 125 ml med det grova måttet på 50 ml sprutorna. Annars finns det risk för att det inte finns tillräckligt med material för maskinen att gå vidare med. Att använda den övre ändgränsen (max ingång är 425 ml) skulle också resultera i en mycket lång isoleringsprocedur.
Vuxna stamceller från både fettvävnad och benmärg verkar ha kapacitet för självförnyelse och differentiering som embryonala stamceller. En av fördelarna med ADRC jämfört med hemopoietiska stamceller är ett 100-500 gånger högre utbyte per vävnadsvolym jämfört med benmärg21,22, och därför behöver ADRC inte odlas. Dessutom är hemopoietiska stamceller svårare och mer smärtsamma att skörda från patienten än fettvävnad. I många situationer är fettvävnad bara en avfallsprodukt efter operationen. Det är möjligt att odla stamceller för att ge ett högre utbyte som är lämpligt för angiogenes, men nyisolerade ADRC kan ha högre angiogen potential än odlade23.

Stamceller har förmågan att differentiera sig till olika celltyper, och de utsöndrar parakrina faktorer som tros främja läkningsprocessen i skadad vävnad 1,2,3,4. De är därför attraktiva inom regenerativ medicin, eftersom de kan representera en möjlig botande behandling.
Radikal prostatektomi (RP) är den gyllene botande behandlingen för patienter med låg / mellanliggande risk lokaliserad prostatacancer och en förväntad livslängd > 10 år. Syftet med operationen är att utrota cancern, men den har flera biverkningar. Förekomsten av postprostatektomiinkontinens varierar från 2-60% och erektil dysfunktion (ED) upplevs av 20-90% av patienterna5. Nervsparande teknik är ett alternativ hos vissa patienter (Gleason-poäng < 7, låg risk för extrakapsulär sjukdom)5. Denna teknik skonar nerverna som är ansvariga för erektion, men även om detta är möjligt rapporterar många patienter fortfarande ED postoperativt.
Behandlingsalternativ för penisrehabilitering efter RP består främst av behandling med PDE-5-hämmare, injektions- eller instillationsterapi och vakuumpumpar. Läkemedel som används för penisrehabilitering skiljer sig farmakologiskt, men deras verkningsmekanism innefattar avslappning av glattmuskelcellerna i corpus cavernosum. Många patienter upplever dock behandlingssvikt och uppnår aldrig en effekt av läkemedlet som möjliggör samlag6.
ED som inträffar efter RP tros bero på strukturellt irreversibla förändringar7. Dessa förändringar sker i den kavernösa vävnaden och inkluderar apoptos av glattmuskel- och endotelceller och fibros. Den veno-ocklusiva mekanismen som är ansvarig för en central del av erektionen, försämras av förändringarna, vilket resulterar i sämre fyllning och hårdhet i penis7.
Många av patienterna rapporterar att ED de upplever har en negativ inverkan på deras livskvalitet8. De är inte redo att ge upp sin sexuella aktivitet efter operationen och därför är en botande terapi för ED attraktiv när de andra tillgängliga behandlingarna för penisrehabilitering misslyckas.
I tidigare studier, inklusive djur- och små fas 1-studier på människor, har stamceller visat lovande resultat som en alternativ behandling för ED 2,9,10,11,12. Resultaten visar att det är säkert att använda ADRC, och att erektilfunktionen förbättras avsevärt efter en enda injektion i corpora cavernosum 2,9,10,11,12. Fett-härledda regenerativa celler (ADRC) tros stödja vävnadsregenerering genom parakrin mekanismer genom befrielse av flera hormoner, neurotrofiska och andra tillväxtfaktorer, cytokiner och eventuellt mikro-RNA13. Dessutom kan ADRC differentieras till flera mogna celltyper inklusive endotel- och vaskulära muskelceller, broskceller, osteocyter och neuroner14,15. Dessa egenskaper gör stamceller intressanta för att utveckla en permanent ny behandling för ED.
Stamceller är uppdelade i flera grupper, i princip de som härrör från det tidiga embryot (embryonala stamceller) och de från vuxen vävnad (vuxna stamceller). Vuxna stamceller inkluderar mesenkymala stamceller (MSC) som är multipotenta och finns i benmärgen, fettvävnaden, navelsträngsblodet, moderkakan och tandmassa17.
Stamceller från fettvävnaden är lätta att få tillgång till, till skillnad från stamceller som härrör från benmärg. Att skörda stamceller från benmärgen är ett riskabelt och smärtsamt förfarande jämfört med fettsugning. Antalet celler som är möjliga att skörda från benmärgen kommer att begränsas, medan endast patientens depåer av fettvävnad sätter gränsen för antalet celler som kan skördas. Det är därför möjligt att isolera en stor mängd stamceller från fettvävnaden utan att efterföljande behöva odla cellerna för att erhålla en tillfredsställande mängd. De fett-härledda regenerativa cellerna, även ofta kallade stroma vaskulära fraktionen (SFV), består av många celltyper inklusive MSC, endotelceller, pericyter, immunceller och förfäder härav18. Dessa kan alla spela en roll i den regenerativa processen.
Syftet med föreliggande studie är att undersöka effekten av stamceller på ED efter RP genom att använda 4 ml autologa ADRC isolerade från nyskördad fettvävnad efter injektion i corpora cavernosum.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liposuction</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abdominal Binder</td>
			<td>Dale</td>
			<td></td>
			<td>Size depent of the patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhessive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adrenalin 1 mg/ml</td>
			<td>Amgros I/s</td>
			<td>74 44 23</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic OP supplies</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>97010873-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Steel blade 11</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhixidine Ethanol</td>
			<td>Faarborg Pharma</td>
			<td>5% colored</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable set Lipocollector 3</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>670200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension hoses</td>
			<td>Extrudan</td>
			<td></td>
			<td>5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaze Rags</td>
			<td>Barrier</td>
			<td>175201</td>
			<td>30x45 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jelonet</td>
			<td>Smith and Nephew Medical Ltd</td>
			<td>90509225</td>
			<td>10 x 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram</td>
			<td>Astra Zeneca</td>
			<td></td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesorb Bandage</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>677001</td>
			<td>10x13 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>304622</td>
			<td>18 G + 23 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>04:00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer-lactat</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Gammex</td>
			<td>330052065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gown</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care</td>
			<td>690103-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Marker</td>
			<td>Richard-Allan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Mask</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Codan Medical</td>
			<td>6,28,402</td>
			<td>50/60 ml cath tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>700016181</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm</td>
			<td>Human Med</td>
			<td>REF 500001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolation of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>REF 303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 way stopcock</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF 10554-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive OP-towel</td>
			<td>M&#246;lnlycke Health Care AB</td>
			<td>REF 906677</td>
			<td>90x75 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytori Celution 800IV device</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swaps</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlance</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td>25G (0,5*25 mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitril Gloves</td>
			<td>Abena</td>
			<td></td>
			<td>Powder free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OR drape Sheet, 2 layers</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher</td>
			<td>REF 33005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Lactate</td>
			<td>Fresinus Kabi</td>
			<td>06756 (DK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gown</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise</td>
			<td>Cytori</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Termometer</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td></td>
			<td>traceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection of ADRC&#39;s</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aperture drape</td>
			<td>One Med</td>
			<td>REF1565-01</td>
			<td>75*90 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desinfection swap</td>
			<td>Mediq Danmark</td>
			<td>3340010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pean</td>
			<td>Leibinger</td>
			<td>32-01257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Vessel Loop</td>
			<td>Purple Surgical</td>
			<td>REF PS3203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile gloves</td>
			<td>Sempermed</td>
			<td></td>
			<td>Or Use your favorite</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of adipose derived regenerative cells for the treatment of erectile dysfunction following radical prostatectomy

Stamceller används inom många forskningsområden inom regenerativ medicin delvis för att dessa behandlingar kan vara botande snarare än symptomatiska. Stamceller kan erhållas från olika vävnader och flera metoder för isolering har beskrivits. Den presenterade metoden för isolering av fett-härledda regenerativa celler (ADRC) kan användas inom många terapeutiska områden eftersom metoden är ett allmänt förfarande och därför inte begränsat till erektil dysfunktion (ED) terapi. ED är en vanlig och allvarlig biverkning av radikal prostatektomi (RP) eftersom ED ofta inte behandlas väl med konventionell behandling. Att använda ADRC som behandling för ED har väckt stort intresse på grund av de initiala positiva resultaten efter en enda injektion av celler i corpora cavernosum. Metoden som används för isolering av ADRC är en enkel, automatiserad process som är reproducerbar och säkerställer en enhetlig produkt. Dessutom säkerställs steriliteten hos den isolerade produkten eftersom hela processen sker i ett slutet system. Det är viktigt att minimera risken för kontaminering och infektion eftersom stamcellerna används för injektion hos människor. Hela proceduren kan göras inom 2,5-3,5 timmar och kräver inte ett klassificerat laboratorium som eliminerar behovet av att skicka vävnad till en off-site. Förfarandet har emellertid vissa begränsningar eftersom den minsta mängden dränerat lipoaspirat för att isoleringsanordningen ska fungera är 100 g.

Det presenterade förfarandet har använts för en öppen klinisk fas 1-studie med 21 patienter19. Det primära effektmåttet för studien var säkerheten vid användning av ADRC hos människa och sekundärt effektmått var effekten av ADRC på erektilfunktionen.
Tjugoen män inkluderades i studien med en medelålder på 60 år (intervall 46-69) och en normal erektion och aktivt sexliv före RP på grund av prostatacancer. De led alla av ED efter RP, utan tecken på återhämtning från medicin tillgänglig för penisrehabilitering. Sex män drabbades av inkontinens som en bieffekt till RP. Alla män fick en enda intrakavernös injektion av ADRC isolerad med den presenterade metoden.
Samtliga 21 män följdes upp med 4 besök på polikliniken vid 1,3,6 och 12 månader efter injektionen. Den sexuella funktionen utvärderades med validerade frågeformulär - International Index of Erectile Function-5 (IIEF-5) och Erection Hardness Score (EHS) (Bifogad som bilagor).
Inga allvarliga händelser inträffade under observationstiden. Åtta män rapporterade övergående rodnad och svullnad vid injektionsställena, tre rapporterade reaktion i penisområdet. Åtta upplevda reversibla mindre händelser relaterade till fettsugningen rapporterades såsom lätt bukbesvär och mindre bukhamatom. Inga patienter rapporterade obehag vid 1 månads uppföljning. Åtta av femton (53%) i kontinentgruppen rapporterade att erektilfunktionen var tillräcklig för samlag vid 12 månader. Gruppen av 6 inkontinenta män visade ingen förbättring av erektil funktion.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Kontinent</td>
			<td>Inkontinent</td>
		</tr>
<tr>
<td>Inkluderade patienter</td>
			<td>15</td>
			<td>6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Betydande effekt</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1: Tabellen visar skillnaderna i signifikant effekt av behandlingen mellan kontinent- och inkontinenta patienter.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy at JoVE.com

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

Exakt avslöjande av metoder och protokoll är avgörande för storskalig användning av stamcellsterapier. Här presenterar vi ett protokoll för att isolera fett-härledda regenerativa celler, som används för en enda intrakavernös injektion som behandling av erektil dysfunktion (ED) efter radikal prostatektomi (RP).

Isolering av fetthärledda regenerativa celler för behandling av erektil dysfunktion efter radikal prostatektomi

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Denna isoleringsteknik kan användas för att undersöka om fettstamceller kan hjälpa patienter att regenerera erektil funktion efter radikal prostatektomi. Denna metod är inte begränsad för en specifik sjukdom. Det skulle kunna användas inom alla områden av fettstamcellsforskning.De isolerade stamcellerna används för att behandla erektil dysfunktion, men isoleringstekniken är ett generellt förfarande och stamcellerna kan vara användbara inom andra områden inom stamcellsforskningen. Börja med att desinficera huden i buken och pungen med 0,5% klorhexidin. Använd en kirurgisk markör för att rita upp de områden på buken där fettsugningen ska utföras, vanligtvis området mellan syntesen och navelsträngen.Gör två sex millimeter breda snitt i bukens hud med ett nummer 11 skalpell. Placera snitten symmetriskt och i sidled från det uppåtdragna fettsugningsområdet. Placera lite smörjmedel på snitten för att se till att infiltrationskanylen glider lätt in och ut ur snitten under fettsugningen.Introducera sedan en storlek 14 gauge infiltration kanyl genom snitten i huden. Injicera modifierad Klein-lösning subkutant i de markerade områdena parallellt med hudytan tills den riktade vävnaden blir svullen och fast eller tumescent. Injicera en volym modifierad Klein-lösning i ett en-till-ett-förhållande till fettvävnaden.Vänta i 10 minuter för att maximera effekterna av adrenalin och minska mängden blod i den skördade fettvävnaden. Utför en vanlig jetinfusionsfettsugning för att skörda 200 till 300 millimeter fettvävnad. Använd trubbiga kanyler som är ihåliga med ett integrerat infusionsrör och munstycke.Fäst kanylen på en suganordning för fettsugning. Introducera en tre millimeter spruta med en trubbig spets genom snitten på buken och samla fettvävnaden i Lipo Collector för att bevara lipoaspiratet i en steril miljö. Lipoaspiratet börjar separera från vattenfasen.Använd 50 ml sterila sprutor för att suga upp lipoaspiratet från LipoCollector, vilket minimerar volymen vatten som sugs upp i sprutorna. Skruva fast en plugg på sprutspetsen för att hålla fettvävnaden steril. Placera sprutor med spetsen nedåt i en steril plastpåse för att starta separationen av lipoaspirat från vattenfasen.Placera sedan påsen i en steril behållare. Täck behållaren med ett sterilt draperi för att säkra den sterila miljön under transporten. Stäng hudsnitten med kirurgens föredragna suturmaterial.Placera ett kompressionsplagg runt buken för att minska postoperativt ödem. För att göra ett penisblock, injicera bupivakain på två ställen, en placerad ventralt och den andra dorsalt. Introducera hela nålen i den subkutana vävnaden, peka den i sidled till höger och injicera anestesin när nålen dras tillbaka.Upprepa injektionen och peka nålen åt vänster. Placera alla förbrukningsvaror och enzymer aseptiskt på bordet täckt av en steril engångskirurgisk handduk. Torka av enheten med etanol och ladda förbrukningssatsen.Anslut sedan en påse med lakterade ringare till systemet. Utför serien av halvautomatiska tester innan du tillsätter lipoaspiratet. Medan enheten förbereds, låt lipoaspiratet stå i ett 50 ml rör så att fettet kan separeras från vätskefasen.Notera den totala mängden fettvävnad och använd detta för att säkerställa att den totala mängden laddat fett kommer att ligga inom enhetens kapacitet. Ladda vävnaden när du uppmanas av enheten. Maskinen dränerar bort överflödig vätska.Väg mängden fettvävnad och tvätta den med lakterade ringare. När vävnaden har tvättats och dränerats, anslut en ny infusionspåse med 37 till 39 grader Celsius lakterade ringare. Rekonstituera det kommersiellt tillgängliga enzymet som innehåller kollagenas och proteasblandning i fem milliliter lakterade ringare.Se till att enheten visar mängden enzym som ska injiceras i kapseln med fettvävnaden. När den enzymatiska matsmältningen har injicerats kommer den att pågå i cirka 20 minuter. Efter vävnadsförtunning, kontrollera att innehållet är separerat i en övre lipid som innehåller gul fas och ett nedre rosa lager som innehåller fetthärledda regenerativa celler eller ADRC.Låt det rosa skiktet rinna in i cellbearbetningskammaren i förbrukningsuppsättningen och lämna lipidskiktet bakom. Låt ADRC: erna koncentrera sig i cellbearbetningskammaren under flera centrifugeringsrundor. Tillsätt sedan 10 ml intrabas rekonstituerad i de lakterade ringarna.Den enzymatiska reaktionen varar i 10 minuter och ADRC tvättas efteråt. När isoleringen av ADRC har slutförts, suspendera cellerna i fem milliliter av Ringers laktat och aspirera lösningen i en fem milliliter spruta. Montera ett trevägs stoppkran kvinnligt Luer-lås på sprutan och aspirera fyra milliliter ADRC i ytterligare fem milliliter steril spruta.Överför den sista milliliter ADRC till en spruta på en milliliter. Använd denna alikvot för ADRC-karakteriseringsanalyser, såsom cellantal, cellviabilitet, analys av ytmarkörer genom flödescytometri och ADRC-differentieringsförmåga. Sätt en 25 gauge nål på fem milliliter sprutan som innehåller fyra milliliter ADRC.Packa sedan den i ett sterilt draperi. Denna lösning av ADRC kommer att injiceras i mottagaren och bör i genomsnitt innehålla 8,4 till 32,7 miljoner celler. Se till att lösningen av ADRC förblir homogen genom att luta sprutan försiktigt tills den injiceras i corpora cavernosum.Placera en bländardraperi över penis. Och en turnering vid roten av penis med en silikonkärlslinga. Dra åt öglan och säkra den med pincett, vilket gör turneringen tillräckligt tät för att stoppa blodflödet från penis.Använd två antiseptiska vattpinnar för att desinficera penishuden på injektionsstället. Injicera sedan en milliliter av ADRC-lösningen i en direkt vinkel i corpora cavernosum, på höger sida på två olika ställen. Upprepa detta steg i vänster corpora cavernosum, injicera en total volym på fyra milliliter.Denna metod testades i en öppen klinisk fas ett-studie på 21 män med en medelålder på 60 år och en normal erektion och aktivt sexliv före en radikal prostatektomi. Sex av männen led också av inkontinens. Alla män fick en enda interkarernös injektion av isolerade ADRC och följdes av fyra besök på polikliniken vid 1, 3, 6 och 12 månader efter injektionen.Inga allvarliga händelser inträffade under observationstiden. Åtta män rapporterade övergående rodnad och svullnad på injektionsställena, och tre rapporterade reaktion i penisområdet. Åtta män upplevde reversibla mindre händelser relaterade till fettsugning, såsom lätt bukbesvär och mindre buk hematom.Inga patienter rapporterade obehag vid en månads uppföljning. Deras sexuella funktion utvärderades med International Index of Erectile Function Five och Erection Hardness Score. Åtta av 15 män i kontinentgruppen rapporterade att deras erektilfunktion var tillräcklig för samlag vid 12 månader.Gruppen av sex inkontinenta män visade ingen förbättring av erektil funktion När du försöker detta protokoll, kom ihåg att enzymerna som används under isoleringsförfarandet måste tas ut ur frysen eller kylen två timmar innan proceduren startas. Resultaten från denna teknik har banat väg för en RCT där effekterna av fettstamceller utforskas i större skala.

Research

JoVE Journal

Medicine

Repair of a Critical-sized Calvarial Defect Model Using Adipose-derived Stromal Cells Harvested from Lipoaspirate

Reparation av en kritisk storlek Calvarial Defekt modell med fett-härledda stromaceller skördas från Lipoaspirate

Craniofacial skeletal repair and regeneration offers the promise of de novo tissue formation through a cell-based approach utilizing stem cells. ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolering, karakterisering och jämförande differentiering av mänskliga Dental celler Pulp Stem Härstammar från permanenta tänder med hjälp av två olika metoder

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture och isolering av CD133<sup&gt; +</sup&gt; Förmodade Cancer stamceller från melanom

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

Kvantitativ Multispectral Analys Efter Lysrör Tissue Trans för visualisering av Cell Origins, typer, och interaktioner

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolering, Frysförvaring och kultur för mänskliga amnion epitelceller för kliniska tillämpningar

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studera bukspottkörtelcancer Stem Cell egenskaper för att utveckla nya behandlingsstrategier

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Skapande och Transplantation av en Adipose-derived Stem Cell (ASC) blad i en diabetiker sårläkning modell

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Network Analys av foramen ovale Elektrodrecordings i Läkemedelsresistenta Temporallobsepilepsi Patienter

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Intense Pulsed Light for the Treatment of Dry Eye Owing to Meibomian Gland Dysfunction

Intensivt pulserande ljus för behandling av torra ögon på grund av Meibomian körtel dysfunktion

Dry eye disease (DED) is an increasingly common condition and one of the most common complaints of patients. The vast majority of DED is caused by the ...

Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy

Mekanisk Micronization av Lipoaspirates för regenerativ behandling

Stromal vascular fraction (SVF) has become a regenerative tool for various diseases; however, legislation strictly regulates the clinical application of ...