Name: remote laboratory management: respiratory virus diagnostics
Uploaded: 2019-04-06T14:30:00
Duration: 14 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics at JoVE.com

Der Inhalt dieses Artikels spiegelt nicht unbedingt die Ansichten oder die Richtlinien von uns Department of Health And Human Services oder der Organe verbunden mit den Autoren. Diese Forschung wurde von Paul G. Allen Family Foundation "Enhanced Zero-Impact, Notfall-Smart-Pod" unterstützt. Wir schätzen die konstruktive Gespräche und Zusammenarbeit mit den Kollegen vom Baylor College of Medicine, GSS Gesundheit, NASA Johnson Space Center. Wir sind aufrichtig dankbar Thermo Fisher Scientific und seinen Vertretern für ein Darlehen von der RT-PCR-Maschine, Zentrifuge und automatisierte Pipetten zur Durchführung eines respiratorischen Virus diagnostischen Tests in der abgelegenen Laboreinrichtung. Die Autoren sind dankbar, dass Marta Storl-Desmond und Sidney Stephen Sorrell für ihre Unterstützung bei der Vorbereitung Manuskript und Videografie.

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Baylor College of Medicine hält eine provisorische Patentanmeldung US für Mobile Kliniken (US-Patent Anwendung Nr. 15/523.126, # 620078924). Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierendes finanzielles Interesse haben.

Die entfernten Laboreinrichtung oben beschriebenen ist logistisch orientierte, erweiterbar, schnell einsetzbare, multifunktionale und basierend auf Human-centered Design-Konzepte, die zum Schutz der Labor-Personal und Arbeitsbereich Effizienz ausgerichtet haben. Das ausführliche Protokoll für schnelle Labor auf- und sichere Atemwege Virusisolierung und Diagnose entwickelt und vorgestellt.
Für optimale Geräte funktionieren, die folgenden Bedingungen eingehalten werden, in den Laboreinheiten: Umgebungstemperatur 21 ± 2 ° C, zulässigen Temperatur von 5 bis 40 ° C, Luftfeuchtigkeit von 14 ± 5 % RH, zulässige maximale Relative Luftfeuchtigkeit von 80 % RH (noncondensing), und einer Höhe von 0 bis 2.000 m über dem Meeresspiegel.
Energieverbrauch ist eines der wichtigsten Parameter für die Verwaltung von einem off-Grid-Labor. Für Kern-Laborgeräte kann die Energieeffizienz 15-40 % variieren. durchschnittlichen Energieverbrauch dürfte jedoch hier um einen entsprechenden Service zu liefern. Die höchste macht Rate (1.500-2.000 W) bezieht sich auf die Klimaanlage, Glovebox System, die PCR-Maschine und der Autoklav Sterilisator. Wenn man 8 Stunden intensiver Arbeit, die Durchführung des Protokolls und 16 Stunden des Kontrollstreifens Labor-Umgebung ist der täglichen Energieverbrauch von Laborgeräten ca. 36 kWh/Tag für BSL-2, ca. 43 kWh pro Tag für BSL-3 und 73 kWh/Tag für die angeschlossenen BSL-2/BSL-3 + Einrichtungen. Für eine Einheit empfehlen wir, die eine Stromquelle mit Kapazität von laufen/Dauerleistung ≥8 kW, Überspannungsschutz/Start Leistung ≥10 kW; für die angeschlossenen Anlage, laufen/Dauerleistung ≥12 kW und Überspannungsschutz/Start Leistung ≥14 kW. Beachten Sie jedoch, dass in der BSL-3 Laboreinrichtung eine backup Energiequelle wird dringend empfohlen, zur Vermeidung versehentlichen Stromausfall und garantieren stetige Arbeit der Glove-Box und Unterdruck-System während eines diagnostischen Tests.
Eine benzinbetriebene Stromgenerator ist eine kostengünstige Lösung für Notenergieversorgung. Davon ausgehen Sie, dass Kraftstoffeffizienz von einem Benzin-Generator ca. 1,5 Gallonen pro Stunde bei 100 % Last. Dann, wenn der durchschnittliche tägliche Energieverbrauch ist 8 Stunden 40 % geladen und 16 Stunden 10 % Last, Laborgerät BSL-2 oder BSL-3 erfordert 7-9 Gallonen Kraftstoff pro Tag, entsprechend, und die angeschlossene Anlage braucht ~ 15 gal/Tag.
Die entfernten Laboreinheiten sollen Möglichkeiten der off-Grid Solar-Panel-Systeme passen. Sonnenkollektoren benötigen keine zusätzlichen Treibstoff und mit hoher Produktivität in den tropischen und subtropischen Regionen Afrikas, Asiens und Lateinamerikas aufgrund der hohen Sonneneinstrahlung betrieben werden können. Derzeit ermöglicht eine Einheit eines im Handel erhältlichen Solar-Panel-Systems eine tägliche Stromverbrauch von bis zu 44 kWh/Tag.
Unabhängig von der gewählten Art der alternative elektrische Energiequelle sind schmutzigen Strom Filter dringend empfohlen und vorinstalliert in den Laboreinrichtungen zur Verbesserung der Netzqualität und Labor-Ausrüstung zu schützen. Quellen starker und ungeschirmte elektromagnetischer Strahlung fernhalten Sie das PCR-System denn starke elektromagnetischer Strahlung mit den ordnungsgemäßen Betrieb des Geräts beeinträchtigen könnten. Es ist auch wichtig verwenden Sie nicht das PCR-System in der Nähe von starken Vibrationen wie eine Zentrifuge oder Pumpe Quellen weil übermäßige Vibrationen Geräteleistung beeinträchtigen wird. Die Laborausstattung kann nur in einer Umgebung installiert werden, Stulpenhandschuhe Schadstoffe wie Staubpartikel oder Hackschnitzel verfügt. Sicherzustellen Sie, dass das Zimmer vom Lüftungsschlitze, die partikuläre Material auf die Instrument-Komponenten vertreiben könnte.
Die Labor-Wasserverbrauch richtet sich nach Anzahl diagnostischer Tests laufen täglich und Laboranten in der Anlage arbeiten. Nuklease freies Wasser für Vorbereitung von Mischern während der diagnostischen Verfahren einschließlich der Extraktion und PCR-Test ist erforderlich und muss im Voraus andere Zubehör und Chemikalien geliefert werden. Mindestens 50 mL des freien Wassers Nuklease ist notwendig, um einen Diagnosetest ausführen; das erforderliche Volumen des freien Wassers Nuklease richtet sich nach Belastung (z. B. auf Anzahl der Proben). Destilliertes Wasser ist zum Ausführen des Autoklav Sterilisators erforderlich. Autoklaven Wasserverbrauch pro Zyklus beträgt 160-180 mL; der Autoklav ist für den täglichen Gebrauch empfohlen. Die meisten Kunststoffe (Rohre, Pipettenspitzen, etc.) sind Einweg, aber einige sind wiederverwendbar und müssen gereinigt werden (große Behälter, Regale usw.). Regelmäßige fließendes Wasser dient zum Händewaschen zwischen den Eingriffen und die minimale Lautstärke ist schätzungsweise 15-20 L täglich. Das Wasser muss für Druck gepumpt werden; Sediment-Vorfilter-System wird die Wasser-Geräte vor die schädigende Wirkung von Sedimenten zu schützen und zur Verbesserung der Qualität von fließendem Wasser empfohlen.
Für die Kühllagerung, mindestens 5,1 Kubikfuß kühl-(+ 4 ° C) und eine 4,9 Kubikfuß (-20 ° C bis-30 ° C) sind in jedem Laborgerät zum Proben speichern erforderlich / RNA.
Labor-Dekontamination umfasst mehrere Ebenen: Reinigung > Antisepsis > Desinfektion > Sterilisation. Einfache Reinigung kann mit Seife und Wasser beim Schrubben mit einem behandschuhten Hand oder einer Bürste durchgeführt werden. Antisepsis beinhaltet waschen mit flüssigen antimikrobielle chemische um das Wachstum und die Vermehrung der Keime zu hemmen. Alkoholische Lösungen (70 %) kann als eine antiseptische Flüssigkeit verwendet werden. Desinfektion ist die Anwendung von flüssigen Chemikalien, fast alle pathogene Mikroorganismen (mit Ausnahme von Bakteriensporen) auf Arbeitsflächen und Geräte zu beseitigen. Exposition gegenüber chemischen Stoffen Zeit, Temperatur und Konzentration des Desinfektionsmittels sind wichtig. Natriumhypochlorit-Lösung (0,5 %) oder Bleichmittel, ist ein effektives Desinfektionsmittel in großem Maßstab für Oberflächen Reinigung und Wasseraufbereitung. Keimtötende UV-Bestrahlung ist eine weitere Methode der Desinfektion. Eine keimtötende Lampe UV-C Licht produziert und führt zur Inaktivierung von Bakterien und Viren. Sterilisation beschäftigt eine physikalische oder chemische Verfahren, alle mikrobielles Leben--einschließlich hochresistente bakterielle-Sporen zu zerstören. Sterilisation erfolgt mit einem Autoklav Sterilisator.
Alle Labor-Abfälle muss zum Zeitpunkt der Erzeugung getrennt werden. Platz solide, nicht scharf, infektiöse Abfälle in auslaufsicheren Müllbeutel als Biohazard gekennzeichnet. Wenn Abfallaufkommen scharf ist, muss es in pannensicher Container platziert werden. Sammeln Sie potentiell infektiösen flüssigen Abfällen in ordentlich beschrifteten Biohazard Behälter für Flüssigkeiten. Behältnisse und Taschen sollten nicht mehr als 2/3 des Volumens gefüllt werden. Die Entsorgung aller Bleichmittel Produkte muss in ihr eigenes dafür vorgesehenen Abfallbehälter sortiert werden. Labor Abfall muss vorsichtig behandelt werden, um zu vermeiden, Erzeugung von Aerosolen und Bruch der Taschen/Container. Taschen/Sammelbehälter mit Biohazard Abfälle müssen versiegelt und Außenflächen, die nach Gebrauch mit 0,5 % Natriumhypochlorit-Lösung dekontaminiert werden. Alle Labor Abfälle sterilisieren im Autoklaven bei 121 ° C für 30 Minuten vor der Verbrennung. Finden Sie funktionierende Handbuch für die ordnungsgemäße Verwendung der Autoklav. Wenn möglich, fügen Sie einen chemischen oder biologischen Indikator den Autoklaven zur ordnungsgemäßen Sterilisation zu gewährleisten hinzu. Alle autoklaviert fester und flüssiger Abfälle muss eindeutig gekennzeichnet sein, wie mit der Einstellung, Datum, Uhrzeit und Betreiber sterilisiert. Die beschriftete Abfälle muss dann in einem sicheren, separaten Bereich vor der Verbrennung platziert werden.
Wie erwartet, hängt Workflow diagnostischen Tests von der Krankheit und Probe. Wenn es für Virus Identifikation Blutproben (z. B. Ebola-19) sammeln empfohlen wird, können Probe Aliquote bei-20 ° C anstelle von-80 ° C (erforderlich für respiratorische Viren) gespeichert werden. Es ist immer besser, mehr als eine Probe zu nehmen, bei der Probennahme von einem Patienten als zu unterteilen Exemplare später. Wenn möglich, für jede Art von Muster müssen mindestens zwei Exemplare in separaten Probe Rohren getroffen werden. Proben müssen unterteilt werden, wenn zusätzliche Probenahme nicht möglich ist.
Wenn alternative Exemplare bei entsprechenden Temperaturen gelagert werden können (z. B. keine Gefrierschränke sind vorhanden), Tupfer sollten gespeichert werden, in reinen (100 %) Ethanol oder 99 % Methylalkohol (Methanol Additive nur). In diesem Fall muss ein Fläschchen mit 1-2 mL Ethanol Tupfer Tipp umgesetzt werden. Beachten Sie, dass solche Exemplare nur für PCR geeignet sind. Darüber hinaus beachten Sie, dass ein gut etablierter Assay ist notwendig für jeden bestimmten Virus Diagnose8,23, unbekannte Virusproben erfolgen und ist an zugewiesenen Laboratorien für weitere Untersuchungen19,20, 21.
Obligatorischen und empfohlenen Anforderungen zur Liste von Laborgeräten für respiratorische Viren diagnostische PCR Tests müssen erkannt werden. Tabelle 3 unterstreicht aus- und minimal (empfohlen) Ausrüstung und Anforderungen für die RT-PCR-Diagnosetest. Für die Praxis BSL-3 ist zusätzliche negative Druck Schutz (z. B. Glove-Box) des Personals wichtig und notwendig.
Die angeschlossenen Labormodule sind vorzuziehen, die Zahl der Mitarbeiter in Labortests und beschleunigen Sie den Zeitaufwand für einen einzigen Test. Ersetzen die zeitraubende manuelle RNA-Extraktion ist möglich mit automatisierten qPCR (z. B. QiaCube). Während dieses Instrument umständlich ist (Breite 65 cm, Länge 62 cm, Höhe 86 cm), es kann den mobilen Labor-Arbeitsbereich nach Umstellung der Möbel in BSL-2 oder BSL-3 Einheiten passen.
Zukünftige Arbeit richtet sich auf die Entwicklung von augmented Reality (AR) und virtuelle Realität (VR) Trainings. AR/VR-Brille werden verwendet, eine interaktive Plattform erforderliche Fähigkeiten, um ein gut ausgebildetes Labor Arbeiter werden zu lehren. Hilfreiche Tipps, um einige der schwierigen, mehrstufigen Verfahren in diagnostischen Laboruntersuchungen durchführen werden in der Software-Guide aufgenommen werden. Dieser Ansatz zur Schulung des Personals sollte die Verbesserung der diagnostischen Test Performance und Management in abgelegenen Laboreinrichtungen, besonders abgelegenen und Ressourcen eingeschränkt.

Schnelldiagnostik ist ein kritischer Instrument rechtzeitig virale Infektion Kontrolle, vor allem, wenn frühe Symptomatik eine Vielzahl von Infektionskrankheiten nicht zu unterscheiden ist. Die jüngsten Ebola-Ausbruch (2014-2015) in Westafrika1,2, Zika-Virus-Epidemien (2015-2016) in Asien und Lateinamerika3,4, die Entstehung des Nahen Osten respiratorische Syndrom (MERS) coronavirus Infektionen5,6, und die ungewöhnlich tödlichen Grippe (Influenza) Epidemien (2017-2018) in der US-7,8 deckte die Notwendigkeit schnell einsetzbaren, Laboreinrichtungen, die eine Vielzahl von Adresse Fragen von Transport, Zugang, Einrichtungen, Geräte und Kommunikation.
Off-Grid-Fähigkeit (autark mit Strom und Wasser-Versorgung, etc.) ist entscheidend in ländlichen, ressourcenbeschränkte globale Einstellungen9,10,11. Unsere Erfahrung im klinischen Betrieb und globale Programme am Baylor College of Medicine wurde entworfen und erstellt ein Container-basierte mobile Labor mit Funktionen für die einfache Bereitstellung, Einrichtung und multifunktionale Nutzung (BSL-2 und BSL-3) verwendet. Bilder von dieser vielseitigen, logistisch verbessert Laboreinrichtung ist in Abbildung 1dargestellt.
Diesem schnell einsetzbaren, Laboreinrichtung hat eine erweiterbare Design ähnlich wie die zuvor beschriebenen Container-Klinik (der "Emergency Smart Pod")12,13,14, entwickelt von Baylor College of Medicine und gesponsert von USAID. Eine verpackte Einheit (im Transportmodus) hat die Abmessungen von 9 9 Zoll x 8 Feet x 8 Fuß (Abb. 1A, B), und baut auf einer Fläche von 170 qm (15,75 m2) (Abbildung 1, D). Das Gerät kann von zwei bis vier Personen in weniger als zehn Minuten bereitgestellt werden.
Entfernte Labor ist für BSL-2 Lab Facility (Abbildung 2A) gebaut, mit einer separaten, modular, aufsteckbar, BSL-3-Einheit (Abb. 2 b) für die Arbeit mit Infektionserregern entworfen, die schweren oder lebensgefährlichen Krankheit durch Inhalation verursachen 15. die Verbindung der beiden Labormodule ermöglicht die Optimierung der Experimente Abläufe, gemeinsame Nutzung von Ressourcen und Kosten sparen (Abbildung 2 C-E).
Die Module sind luftdicht und wasserdicht, einen komfortablen, Energie effizienten mobilen Unterstand zu schaffen. Heizungs-, Lüftungs- und Klimaanlage (HVAC) dient zur zentralisierten und temperaturgeführte Einheiten. Im Allgemeinen wird das Design der Labor-Geräte Stromverbrauch durch die Verwendung von eigenen Alternativen Stromquellen wie Sonnenkollektoren und/oder einen unabhängigen elektrischen Generator minimiert. Jede Einheit beinhaltet ein Waschbecken und Augenwischerei-Station, Strom und Wasser Anschlüsse (Abb. 3A-C). Die IKT-Plattform bietet eine optionale Tablet-basierte (Android Handy/Tablet oder iPhone/iPad) Dokumentation app für Lieferung Tracking und Labor-Ergebnis-Dokumentation (Abbildung 3D) entwickelt in Partnerschaft mit Baylor Information Technology (IT) Forschungsgruppe, die erfahrene mit eingeschränkter Konnektivität in remote-Umgebungen arbeiten. Das System funktioniert mit dem Mobilfunk- oder WLAN-Signale und ermöglicht die Dokumentation ohne Konnektivität mit sofortige Sicherung oder Übertragung zu einem secure Cloud basierte Server wenn die Verbindung wieder hergestellt ist.
Das Labor hat mehrere wichtige Infektionskontrolle Eigenschaften einschließlich: (a) negative Druck Air Flow, (b) ein Handschuhfach oder biologische Sicherheit, (c) ein Risiko Gesundheitsmanagement Schranksystem: eine keimtötende UV (UV-C) Beleuchtungssystem, mit 4 Hierarchien der Verteidigung erwiesen 99,7 % der Krankheitserreger zu beseitigen, die gesundheitsbezogenen Infektionen verursachen. Die Anlage ist leicht mit Wasserstoffperoxid oder Natriumhypochlorit (Chlorid) Systeme für effiziente und effektive Dekontamination desinfiziert. 16
Die Sicherung der Qualität der Laborergebnisse hängt ein Bekenntnis zu allen Aspekten der Gesamtheit diagnostische Testverfahren zu beurteilen. Hier präsentieren wir eine Checkliste für den BSL-2 und3 BSL Labor-Workflow und ein Protokoll für schnellen Atemwege Virus diagnostischen Test. Die vorgeschlagenen Diagnose Viruserkrankungen beruht auf dem Nachweis von viraler RNA oder DNA-Probe (Nasenspülflüssigkeit, Blut, Stuhl und Urin, etc.) durch Echtzeit-Reverse Transkription Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR). Die Fähigkeit, schnell zu schätzen Viruslast in einem Exemplar macht PCR ein effizientes Werkzeug für Viruserkrankung screening-17,18. Die Umsetzung des Romans, molekulare Diagnostik-Assays erlaubt Erweiterung der diagnostischen Möglichkeiten für Viren wie Ebola-19,20,21, Grippe8,22und Tuberkulose (TB )23.
Das Ziel dieser Arbeit ist es, eine neuartige modulare und schnell einsetzbaren Laboreinrichtung zu validieren und bieten einen Trainingsleitfaden für Laborpersonal in abgelegenen, ressourcenschonende Umgebungen arbeiten, während einer Epidemie, Naturkatastrophen oder anderen Nothilfe Lage. Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll für die Atemwege Grippe-Diagnose in diesem innovativen, mobilen Labor.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Autoclave Sterilizer &#39;BioClave&#39;</td>
			<td>Benchmark Scientific, Edison, NJ, USA</td>
			<td>B4000-16</td>
			<td>16 liter, Benchtop, Dims: 22x17.5x15.7 in, Fully automatic, Extremely Compact</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode Scanner</td>
			<td>Zebra Technologies ZIH Corp., Lincolnshire, IL, USA</td>
			<td>Symbol LS2208</td>
			<td>Handheld, lightweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breaker Box Panelboard Enclosure</td>
			<td>Square D (Schneider Electric), France&#160;</td>
			<td>MH62WP&#160;</td>
			<td>NEMA 3R/5/12, Dims: 20 W x 62 H x 6-1/2 in. D, Electrical distribution board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge - Microcentrifuge 17,000 x g</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75002440</td>
			<td>Holds 24 x1.5 or 2 ml tubes, Dims: 8.9x9.6x13.8 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Biological Safety Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-602-400</td>
			<td>4 Ft. Class II Type A2 Cage Changing Biological Safety Cabinet, 12&#34; Access Opening, HEPEX Pressure Duct&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class III Biological Safety Cabinet (Glove box)</td>
			<td>Germfree Laboratories, Ormond Beach, FL, USA</td>
			<td>Model #PGB-36, Serial #C-2937</td>
			<td>Glove box, Portable, 36&#34;, Class III BSC. Dims: 36x20x23.75 in, Includes 2 interior outlets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo Coolers</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-286</td>
			<td>0.5 or 1.5 ml tube benchtop coolers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer (30&#176;C freezer)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>Model ULT430A</td>
			<td>To occupy 4.9 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-126-300</td>
			<td>3 Ft. Vertical Laminar Airflow Cabinet, 8&#34; Access Opening, HEPA filter supply, 99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75004061</td>
			<td>Dims: 4.1x5.0x6.0 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>05-403-151</td>
			<td>Pipet 4-pack (2.5,10, 100 and 1,000&#956;L volume)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated &#39;Finnpipette&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4700880</td>
			<td>Pipet 4-pack (2, 20, 200 and 1,000&#956;L volume), Advanced Volume Gearing(AVG), Ultra durable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Generator</td>
			<td>Cummins Power Generation, Minneapolis, MN, USA</td>
			<td>C60 D6</td>
			<td>60 kW, 60 Hz, 1 Phase, 120/240V, Diesel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>BioMedical Solutions, Inc., Stafford, TX, USA</td>
			<td>BSI-HC-UCFS-0504W</td>
			<td>Standard Undercounter Refrigerators &#38; Freezers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>05LRAETSA&#160;</td>
			<td>To occupy&#160; 5.1 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR machine &#39;Step-one plus&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4376598</td>
			<td>Holds 96 samples, Dims: 9.7x16.8x20.2 in&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>88880017TS</td>
			<td>Dims: 6.1x8.3x3.3 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgPath-ID One-Step RT-PCR Reagents</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster City, CA, USA</td>
			<td>4387391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Koptec Pure 200 Proof</td>
			<td>Decon Labs, Inc., King of Prussia, PA, USA</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free Water</td>
			<td>Ambion, Inc., Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>AM9906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III Platinum One-Step qRT- PCR Kit</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>11732-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL cryogenic tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>03-337-7X&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>10025-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Neptune, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>Neptune, BT10XLS3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Multimax, BioExpress, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>MultiMax, P-3243-30X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>ART, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>ART, 2770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Phenix Research Products, Candler, NC, USA</td>
			<td>TS-059BR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AB custom probes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combitips</td>
			<td>Eppendorf, Hauppauge, NY, USA</td>
			<td>89232-972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrated DNA Technology (IDT) custom probes and primer</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>490003-978 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Reaction Tubes (8 tubes/strip)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4358293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical 8-Cap Strip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4323032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4311971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biohazard waste bags</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>14220-046</td>
			<td>20.3 x 30.5 cm Biohazard bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>Denville Scientific, Holliston, MA, USA</td>
			<td>G4162-250</td>
			<td>Small, meduim or large Nitrile or latex gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masks</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-663</td>
			<td>Advanced protection mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective shoes</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote laboratory management: respiratory virus diagnostics

Einen Aufwärtstrend in den letzten Pandemien (Ebola, Zika, MERS, Grippe, etc.) betont die Notwendigkeit für eine weitere "flink" koordinierte Reaktion, die befasst sich mit eine Vielzahl von Themen von Transport, Zugang, Einrichtungen, Geräte und Kommunikation bis hin zu Anbieter Ausbildung. Zu diesem Zweck haben wir eine innovative, skalierbare, Logistik erweitert, mobile, Laboreinrichtung für Notfälle und Epidemien in den globalen Einstellungen ressourcenbeschränkte entwickelt. Nutzen einen Hintergrund im klinischen Betrieb als ein akademisches medizinisches Zentrum, wir eine schnell einsetzbaren, modulare BSL-2 und BSL-3 Anlage mit benutzerfreundlicher Software für Verfolgung und Verwaltung von Medikamenten und Verbrauchsmaterialien in abgelegenen Regionen während der Epidemien entworfen und Ausbrüche. Hier präsentieren wir Ihnen unsere intermodalen, mobil, erweiterbare Versandbehälter Laborgeräten. Das Design des Labors erleichtert Netznutzung durch Minimierung von Stromverbrauch und ermöglicht alternative Wasserquellen. Geräteinformationen Kommunikations-Technologie (IKT)-Plattform (i) benutzerfreundliches Tablet-basierte Dokumentation bietet (Ii) verstärkte Verfolgung von Patienten und Lieferungen und (Iii) Kommunikation vor Ort mit eingebauten Telehealth-Funktionen integriert. Um Qualität in remote-Umgebungen zu gewährleisten, haben wir eine Checkliste für einen Labor-Workflow und ein Protokoll für die Atemwege virale Diagnose mit Reverse Transkription Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) entwickelt. Wie beschrieben, ermöglicht dieses innovativen und umfassenden Ansatz für die Bereitstellung von Labor-Fähigkeit in globalen Umgebungen beschränkten Ressourcen.

Das Ziel dieser Studie soll zeigen, dass die vorgeschlagenen BSL-2 und BSL-3 mobiles Labor ein angemessenes Umfeld ermöglicht respiratorischen Virus diagnostische Tests mit repräsentativen Ergebnisse identisch mit Prüfungen in hoher Qualität bieten stationäre Laboratorien. Die Laborräume dienen zur Einhaltung der Prüfanforderungen in Occupational Health and Safety (OHS) Empfehlungen gegeben. Sobald der remote Laboreinrichtung eingesetzt (Abbildung 4) und alle Geräte ist und Zubehör installiert sind (Abbildung 5), Labor-Tests ausgeführt werden können.
Gemäß Labor geeigneten operativen Standardverfahren, PSA (Kittel, Sicherheitsschuhe, Handschuhe, erweiterte Maske, Schutzbrille, etc.) für BSL-2 Praxis erforderlich ist. Für die Praxis BSL-3 ist die PCR-Labormodul der Unterdruck mit einem zertifizierten Handschuhfach ausgestattet. Die Laboreinheiten werden von Pass-Through-Außenfenster zum Schutz des Personals bei der Probe Empfang aktualisiert. Die Registrierung kann mit zuvor entwickelten Tablet-basierte Anwendung (Abbildung 3D) vereinfacht werden. Andere annehmbaren Anwendungen, die auf einem Laptop können auch verwendet werden.
Dieser bestimmten Atemwegserkrankungen Virus diagnostischen Test kann durchgeführt werden, in der angeschlossenen Labormodule schieden Schritte des diagnostischen Verfahrens mit Absicht, um Verunreinigungen oder potenziellen Interferenzen zwischen biochemische Reagenzien zu vermeiden, die zu beeinträchtigen die Testergebnisse. Um die Qualität der Diagnose zu maximieren, nutzt die diagnostische Schnelltests Praxis (i) sowohl die grundlegenden Labor BSL-2 und die Traverse verbunden PCR Raum (Abschnitt 3) oder (Ii) die GB und PCR Zimmer durch Pass-through-Fenster (Abschnitt 4) verbunden. Das Diagramm des vorgeschlagenen Labor Workflows auf Abbildung 6 dargestellt und Personenschutz, betont. Das Diagramm erkennt die Bedeutung der einzelnen angegebenen Schritte für Personenschutz, vor allem wenn Laborpersonal in abgelegenen Gebieten minimal ausgebildet ist.
Der rasche diagnostische Test der Influenza wird über die RT-PCR-Technik erreicht. Die Prozedur enthält vier Hauptschritte. Beachten Sie, dass einzelne Arbeitsbereiche für jede Phase des Protokolls zugeordnet sind.
Der erste Schritt ist es, eine Probe und unterteilen es in mehrere Aliquote. Die Aliquote können dann mit Barcodes zur Verbesserung der Wirksamkeit des Daten-Steuerelement markiert und gespeichert in den Gefrierschrank für weitere Untersuchungen. Der zweite Schritt ist, eine Probe im Lyse Puffer zu inaktivieren, durch Zentrifugieren und Heizung. Die erste und zweite Schritte müssen in biologischen Sicherheit Schränke durchgeführt werden. Nutzen Sie individuelle Pipette Sets und Ausrüstung. Ein PCR-Test wird vorgeschlagen, in der PCR-Raum durchgeführt werden, falls vorhanden. Der dritte Schritt ist die Dokumentation der Ergebnisse. Der vierte Schritt ist die Pflege nach der Nutzung, und die Erinnerung an Personenschutz am Ende des Experiments.
Wenn die Probe wird voraussichtlich als BSL eingestuft werden-3 + (e.g.,Ebola, Zika, MERS, TB) die Handschuhfach-Anlage verwendet werden muss. Im abgelegenen Labor hat das GB-Zimmer ein eigenen Pass-through-Fenster zu Proben und ein Laptop oder Tablet für Probe-Registrierung zu erhalten. Die Probe aliquoten und Virus-Inaktivierung müssen alle in der Glove-Box Kammer ausgeführt werden. UV-C Licht empfiehlt sich zur Vermeidung von Kontaminationen während der Prozedur. Nach Inaktivierung einer Probe, weitere Schritte für Protokoll sind ähnlich wie die grundlegenden Labor BSL-2 und BSL-3 Test und folgt Checkliste Teil III (Tabelle 1, Abbildung 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig1.jpg"> Abbildung 1. Labor Einrichtung Prototyp. (A, B) Transport-Modus; (C) Modus bereitgestellt: außen festgelegt werden. (D) Modus bereitgestellt: Innenraum. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig2.jpg"> Abbildung 2 . Schaltpläne. (A) die grundlegenden Labor BSL-2; (B) die BSL-3 Modul enthält die Glove-Box und PCR-Labore, die ein gemeinsames Pass-Through-für geschützte Probe übertragen Fenster; (C) angeschlossenen Laboreinrichtungen (A) und (B) mit gemeinsamen Versorgungsunternehmen. (D,E) Fotos von der angeschlossenen Geräte von entgegengesetzten Seiten. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig3.jpg"> Abbildung 3. (A) Innenraum der BSL-3 Anlage (1) hat ein Pass-through-Fenster, ein Waschbecken und (2) eine Augenwischerei-Station am Einlass; (B) elektrische Stromanschlüsse, (C) Wasser Anschlüsse; (D) Tablet-basierte Software für Lieferung Tracking und Labor-Ergebnis Dokumentationen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2.jpg"> Abbildung 4 . Bereitstellung von der Laboreinrichtung. Anleitung für Panels entfaltet sich auf der einen Seite des Gerätes wie abgebildet (A-D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a> 
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig5.jpg"> Abbildung 5 . Schaltpläne der anschließbaren Labor: (A) BSL-2 Modul 1; (B) Glove-Box und PCR-Modul 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig5large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a> 
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig6.jpg"> Abbildung 6 . Flussdiagramm für eine RT-PCR-Diagnosetest respiratorischen Viren in den abgelegenen Laboreinrichtung. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig6large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Entfernten Labor BSL-2</td>
			<td>Entfernten Labor BSL-3</td>
		</tr>
<tr>
<td>Teil I</td>
			<td>Teil I</td>
		</tr>
<tr>
<td>i. Lab Tech durch Tür eintreten Eingang beschriftet und Kittel, die an Rack neben Eingangstür hängt aufsetzen. Offene Schuhe sind verboten, erweiterte Masken und Schutzbrillen sind erwünscht.</td>
			<td>i. Lab Tech untersuchen Glove-Box Fenster aus außerhalb der Einheit, Unterdruck zu versichern ist aktiviert. (Rosa Ball sollte in der Einheit zu zeigen, dass der Unterdruck funktioniert sichtbar sein).</td>
		</tr>
<tr>
<td>II. Lab Tech Hände im Waschbecken zu waschen, Einweg-Handschuhe anziehen und mit Aufnahme von Proben beginnen.</td>
			<td>II. Wenn Unterdruck arbeitet, Lab Tech, treten durch die einzige Tür und legte auf Kittel, die an Rack neben Eingangstür hängt.  Offene Schuhe sind verboten, erweiterte Masken und Schutzbrillen sind erwünscht.</td>
		</tr>
<tr>
<td>III. Beispiele, die in Hypochlorit Bad vor dem Herunterfallen auf Pass-through-Fenster eingetaucht waren sitzen im Pass-through für Lab Tech.</td>
			<td>III. Lab Tech, Hände im Waschbecken zu waschen auf Einweg-Handschuhe, PSA und beginnen mit der Einnahme von Proben.</td>
		</tr>
<tr>
<td>IV. erhielt Probenannahme.</td>
			<td>IV. Proben, die vorher in Hypochlorit Bad vor dem Herunterfallen auf Pass-through-Fenster getaucht waren sitzen im Pass-through für Lab Tech.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Teil II</td>
			<td>v. erhielt Probenannahme.</td>
		</tr>
<tr>
<td>v. je nach diagnostischen Verfahren Proben nach Biosafety Kabinett und inaktiviert.</td>
			<td>Teil II</td>
		</tr>
<tr>
<td>VI. Proben vorbereitet für Mikroskopie, Zentrifuge oder verrottet.</td>
			<td>VI. Proben im Handschuhfach inaktiviert.</td>
		</tr>
<tr>
<td>VII. geeignete diagnostische Tests laufen.</td>
			<td>VII. Muster für Nukleinsäure-Isolierung ausgeführt.</td>
		</tr>
<tr>
<td>VIII. Lagern Sie Exemplare in 4° C Kühl- oder entsprechende Gefrierschrank.</td>
			<td>VIII. nach der Extraktion zog Proben auf Pass-through-Fenster.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Teil III</td>
			<td>IX. Lab Tech tritt durch Eingang in PCR-Seite des Gerätes (Überdruck).</td>
		</tr>
<tr>
<td>IX. verwenden Sie Spüle für Färbung & Waschen von Elementen.</td>
			<td>x. Lab Tech aus Regal neben Eingang Laborkittel anziehen waschen Sie Hände in Waschbecken, Handschuhe anziehen.</td>
		</tr>
<tr>
<td>x. verwenden Sie x. Laptop & Counterpace, Analysen und Dokumentation durchzuführen.</td>
			<td>XI. erhalten Sie Proben von Glove-Box Zimmer im Pass-through-Fenster.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XI. sterilisieren Sie Ausrüstung durch Ausführen von Autoklaven.</td>
			<td>XII. wenn notwendige Proben in Laminar-Flow Kabinett vorbereitet.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XII. biogefährlichen Abfall in Biohazard Abfallbehälter entsorgen.</td>
			<td>XIII. geeignete Diagnosetests ausführen.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XIII. Waschen Sie Hände im Waschbecken.</td>
			<td>XIV. Lagern Sie Exemplare in 4° C Kühl- oder entsprechende Gefrierschrank.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XIV. Legen Sie Laborkittel zurück auf Gestell auf.</td>
			<td>Teil III</td>
		</tr>
<tr>
<td>Verlassen Sie XV durch dieselbe Tür.</td>
			<td>XV. verwenden Sie Spüle für Färbung & Waschen von Elementen.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVI. verwenden Sie Laptop & Counterpace, Analysen und Dokumentation durchzuführen.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVII. Fläschchen in Pass-through-Fenster auf PCR Raum übertragen und Ausrüstung durch Ausführen von Autoklaven sterilisieren.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVIII. biogefährlichen Abfall in Biohazard Abfallbehälter entsorgen.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XIX. Waschen Sie Hände im Waschbecken.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Verlassen Sie XX durch dieselbe Tür.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabelle 1. Checkliste für den PCR-Diagnostik-Workflow.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="3">Wartung und Kalibrierung</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Echtzeit-PCR-Systeme</td>
			<td>Monatliche</td>
			<td>Führen Sie Hintergrund Kalibrierungen jeden Monat</td>
		</tr>
<tr>
<td>18 Monate</td>
			<td>Führen Sie Hintergrund, räumliche und färben Sie Kalibrierungen alle 18 Monateth</td>
		</tr>
<tr>
<td>Zentrifuge</td>
			<td>1 Jahr</td>
			<td>Umdrehungen pro Minute und Temperatur durch externe oder interne Kalibrierung kalibrieren</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Glove-Box</td>
			<td>Tägliche</td>
			<td>Überprüfen Sie die Elemente, insbesondere für Schäden, die Sichtflächen der HEPA-Filter, Handschuhe, o-Ringe und Schläuche. Stellen Sie sicher, Rohr-Schellen fest und vorhanden sind. Durchführen Sie Leck-Druckprüfung. Testen Sie den Druck-Alarm.</td>
		</tr>
<tr>
<td>6 Monate</td>
			<td>Ändern Sie den HEPA-filter</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 Jahr</td>
			<td>Das System kalibrieren</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Autoklaven</td>
			<td>Wöchentliche</td>
			<td>Reinigen Sie den Wassertank und Regale mit einem milden nicht scheuernden Reinigungsmittel</td>
		</tr>
<tr>
<td>3 Monate</td>
			<td>Zeitschaltuhr und Messgeräte zu kalibrieren</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 Jahr oder alle 50 Zyklen</td>
			<td>Inspizieren, reinigen, prüfen und kalibrieren</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Kühlschrank und Freeezer</td>
			<td>6 Monate</td>
			<td>Überprüfen Sie motor, Verdampfer Gebläsekonvektoren, Staubsaugen kondensierende Spulen und Kondensator Filter und ersetzen Sie Batterien nach Bedarf</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 Jahr</td>
			<td>Kalibrieren Sie, Gefrierschrank durch interne oder externe Kalibrierdienste</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabelle 2. Real-Time PCR Gerätewartung.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Obligatorische</td>
			<td>Empfohlen</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kittel, Sicherheitsschuhe, Handschuhe</td>
			<td>Kittel, Sicherheitsschuhe, Handschuhe, Masken, Brillen</td>
		</tr>
<tr>
<td>Kühlschrank 4 ° C,-20 ° C Gefrierschrank</td>
			<td>Kühlschrank 4 ° C,-20 ° C, Gefrierschrank Gefriertruhe-80 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>Eine Reihe von automatischen Pipetten</td>
			<td>Drei Sätze von automatischen Pipetten</td>
		</tr>
<tr>
<td>Zentrifuge, Shaker, thermocycler</td>
			<td>Robot-system</td>
		</tr>
<tr>
<td>RT-PCR-Maschine, Eisbad</td>
			<td>RT-PCR mit Temperaturregelung, eisfreien Kühler</td>
		</tr>
<tr>
<td>Biohazard Müllbeutel</td>
			<td>Autoklaven, Biohazard Abfall zu entsorgen</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabelle 3. Mindestanforderungen für die RT-PCR respiratorischen Virus diagnostischen test BSL-2.

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Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

Ein schnell einsetzbaren, off-Grid Labor wurde entworfen und für abgelegene, ressourcenbeschränkte globale Einstellungen gebaut. Die Eigenschaften und kritische Aspekte der logistisch verbessert, erweiterbar, multifunktionale Labormodule werden erforscht. Eine Checkliste für einen Labor-Workflow und ein Protokoll für die Atemwege virale diagnostischer Test entwickelt und vorgestellt.

Entfernten Labor Management: Respiratorischen Virus-Diagnostik

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

Ein Anstieg der jüngsten Epidemien wie Zika und Ebola-Virus haben die Notwendigkeit einer koordinierteren und flinkeren Reaktion auf globaler Ebene deutlich gemacht. Um dies zu erreichen, haben wir eine innovative, skalierbare, intramodale Laboreinheit entwickelt, die bei solchen Ausbrüchen weltweit in ressourcenbeschränkten Gebieten eingesetzt werden kann. Hier stellen wir Ihnen unsere intramodalen, erweiterbaren, mobilen Versandcontainerlabore vor.Und im folgenden Papier stellen wir unseren BSL-2- und BSL-3-Ansatz zur Diagnose von Atemwegs-Influenzavirus vor. Schnelle Influenza-Virus-Diagnose durch RCT-PCR. Beachten Sie vor der Vorbereitung auf den Einbau in die installierte Laboreinheit, dass alle BSL-2-Sicherheitsanforderungen berücksichtigt werden müssen.Dazu gehören das Ankleiden mit der richtigen persönlichen Schutzausrüstung, das Händewaschen, das Tragen von Handschuhen und die Dekontaminierung aller Arbeitsbereiche, die Sie verwenden möchten. Beachten Sie, wenn Sie Bleichmittel verwenden, um Ihren Arbeitsbereich und Ihre Vorräte zu dekontaminieren, müssen Sie auch 70% Ethanol verwenden, um alle Bereiche zu reinigen, die Bleichmittel ausgesetzt sind, da Bleichen sich mit anderen Chemikalien im Arbeitsbereich mischen kann, um giftige Dämpfe zu erzeugen. Entsorgen Sie alle Bleichmittel in ihrer eigenen Abfalltonne.Da Probentupfer von Patienten entnommen werden, werden sie vom Feld oder der Klinik in die Laboreinrichtung transportiert und über das Durchgangsfenster an den Labortechniker weitergeleitet. Dieses Fenster kann nicht von beiden Seiten geöffnet werden. Im BSL-2 Pass-Through-Fenster muss die Außenfläche von Probenproben vollständig mit Bleichmittel desinfiziert und zwei Minuten lang allein gelassen werden.Öffnen Sie das Pass-Through-Fenster, und sammeln Sie die zu registrierenden Proben. Wischen Sie alle Proben ab, die Bleichmittelreste haben, und wischen Sie das Innere des Durchgangsfensters mit Bleichmittel ab, gefolgt von einer 70%ethanol-Lösung. Fügen Sie jedem Probenröhrchen Und Ihren vier leeren Rohren, die für Aliquots bestimmt sind, Barcodes hinzu.Bewegen Sie Ihre Proben auf die Entlüftungshaube. Scannen Sie den Barcode auf jeder Röhre, und stellen Sie sicher, dass die richtigen Probenidentifikationsinformationen auf dem Tablet-basierten System- oder Laptopbildschirm angezeigt werden. Schließen Sie den Registrierungsprozess ab.Beispiel aliquot. Sobald die Reagenzgläser gekennzeichnet sind, verwenden Sie einen zertifizierten und dekontaminierten Biosicherheitsschrank der Klasse II, um Aliquots von Proben zu entnehmen. Achten Sie bei der Einnahme von Aliquots darauf, für jede Probe frische sterile oder Einwegpipetten zu verwenden und sie in biogefährliche Abfallbehälter zu entsorgen, um kreuzkontaminationen zu vermeiden.Stellen Sie sicher, dass jedes Rohr dicht und geschlossen ist. Verwenden Sie ein Aliquot pro Probe für die sofortige Extraktion. Bewahren Sie alle anderen Aliquots für die zukünftige Verwendung im Gefrierschrank auf.Reinigen Sie vor dem Umzug zum Arbeitsplatz alle Arbeitsbereichsoberflächen und -geräte mit Bleichmittel, gefolgt von einer 70%ethanol-Lösung. Sobald Ihre BARCODE-PCR-Proben aliquoted wurden, verschieben Sie sie auf eine Arbeitsstation, die für die Extraktion bestimmt ist. Bereiten Sie Ihren Puffer AVL Träger RNA Mischung für die Lyse Schritt.Die Proben- und Lysepuffer-Mastermischung sollte bei Raumtemperatur gehalten werden. Etikettieren Sie ein 1,5-Milliliter-Zentrifugenrohr. Stellen Sie die Pipettenspitze auf 560 Mikroliter ein.Tragen Sie eine saubere Pipettenspitze auf. Fügen Sie jedem Rohr einen Lysepuffer hinzu. Entsorgen Sie die Spitze im Abfallbehälter.Nehmen Sie als Nächstes Ihre PCR-Aliquot-Probe. Legen Sie es in das vorbereitete Lyse-Pufferrohr, das für aliquot one bestimmt ist, und wiederholen Sie dies für alle zusätzlichen Proben. Entsorgen Sie die alte Pipettenspitze und tragen Sie eine saubere Pipettenspitze auf.Tragen Sie eine saubere Pipettenspitze auf. Fügen Sie 140 Mikroliter eines Puffers in das Steuerrohr. Schließen Sie jedes Rohr sicher.Pulswirbel für 15 Sekunden. Wiederholen Sie dies mit zusätzlichen Aliquots oder Proben. Mikrozentrifugieren Sie jede Probe für fünf Sekunden.10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Nach 10 Minuten zentrieren Sie Ihre Rohre kurz, um tropfen aus der Innenseite des Deckels der einzelnen Rohre zu entfernen. Fügen Sie 560 Mikroliter Ethanol die Probe ein.Ändern Sie Ihre Pipettenspitze. Wiederholen Sie dies mit allen verbleibenden oder zusätzlichen Proben. Schließen Sie jedes Probenrohr sicher.Pulswirbel pro Probe für 15 Sekunden. Mikrozentrifugieren Sie die Proben für fünf Sekunden. Erhalten Sie ein sauberes Zwei-Milliliter-Sammelrohr.Fügen Sie die Spinspalten hinzu. Beschriften Sie sie entsprechend Ihren Beispielen. Übertragen Sie 630 Mikroliter der Probe entsprechend der Spalte.Sichern Sie Ihre Kappen. Wechseln Sie zur Zentrifuge. Verteilen Sie Ihre Proben gleichmäßig in der Zentrifuge.Zentrifugieren Bei 6000 g für eine Minute, um den Lysepuffer zu entfernen. Kehren Sie zur Arbeitsstation zurück. Ersetzen Sie Ihre Sammelrohre.Fügen Sie den verbleibenden Lysepuffer hinzu und wiederholen Sie den Zentrifugationsschritt. Entsorgen Sie Ihre originalen Aliquot-Probenröhrchen, danach entsorgen Sie das Eluat und waschen Sie die Spinsäule mit dem Puffer AW1. Wiederholen Sie diesen Vorgang mit jeder Probe oder weiteren Proben.Sichern Sie die Kappen an jeder Probe und Zentrifuge bei sechs g. Wiederholen Sie dies mit dem zweiten Waschpuffer AW2 bei 20 g. Legen Sie die Säule schließlich in ein sauberes 1,5-Milliliter-Rohr.Öffnen Sie die Säule und fügen Sie 60 Mikroliter Puffer AVE hinzu. Inkubieren Sie bei Raumtemperatur für eine Minute und Zentrifuge bei sechs g für eine Minute. Das Beispiel ist nun für die PCR-Analyse bereit.Unter den BSL-3-Bedingungen wird das Versuchsprotokoll gleich bleiben, aber Die Sicherheitsmaßnahmen werden vor allem einen Präzedenzfall erwirken. Vor dem Betreten des BSL-3-Labors sollten Sie sich durch das transparente Fenster umsehen, dass in der Handschuhbox-Einheit ein Negativdruck festgestellt wurde. Es wird offensichtlich sein, dass Unterdruck festgestellt wurde, wenn der Ball in der Wand sichtbar ist.Sobald unterdruck festgestellt wurde, öffnen Sie die Tür und betreten Sie das Gerät. Waschen Sie sich sofort die Hände und fahren Sie dann mit Ihrer PPE-Checkliste fort. Fahren Sie mit dem Anlegen der PSA in der folgenden Reihenfolge fort: unter Handschuhen, Kleid, Schuhbezügen, Maske, Gesichtsschild, zweitem Paar Handschuhe.Schalten Sie die Maschine ein und lassen Sie den Druck in der Handschuhbox stabilisieren. Verwenden Sie eine Bleichsprühlösung, um alle Bereiche und Vorräte zu dekontaminieren, die Sie innerhalb und außerhalb der Handschuhbox verwenden möchten. Entsorgen Sie Bleichabfälle in einem Behälter, in dem Sie nur Bleichmittel verwenden.Verwenden Sie 70% Ethanol-Lösung, um über alle Bereiche zu reinigen, in denen Bleichmittel verwendet wurde. Übertragen Sie Ihre Proben über das Pass-Through-Fenster. Die Proben sollten mit Bleichlösung besprüht und mindestens eine Minute im Durchgang allein gelassen werden, bevor sie innerhalb der BSL-3-Einheit empfangen wurden.Als Nächstes erhalten Sie Ihre Proben innerhalb der BSL-3-Einheit und reinigen Sie sie gründlich, bevor Sie mit dem Registrierungs- und Etikettierungsschritt fortfahren. Sobald Proben registriert und Rohre beschriftet sind, legen Sie die Proben über das Airlock-Tray in den Handschuhkasten. Öffnen Sie nicht beide Türen auf einmal.Öffnen und schließen Sie jede Tür in zwei verschiedenen Schritten für Sicherheitsvorkehrungen. Nachdem die Proben sicher in das Inneninnere der Handschuhbox verschoben wurden, führen Sie die gleichen Schritte wie zuvor beschrieben aus, um Proben-Aliquots in der Handschuhbox zu erstellen. Sobald Proben aliquoted werden, bewegen Sie die Proben in den luftdichten Behälter.Sprühbleichlösung in der Handschuhbox, um Rohre und alle anderen Oberflächen zu dekontaminieren. Warten Sie fünf Minuten und wenden Sie dann 70% Ethanol-Lösung an, um die Bleichmittel zu waschen. Nach gründlicher Dekontamination bewegen Sie nur die Proben, die für die PCR-Analyse für die Lyse benötigt werden, wieder in die Handschuhbox.Führen Sie im Handschuhkasten nur den Lyseschritt des Extraktionsverfahrens durch. Sobald die Zellen lysiert sind, versiegeln Sie die Kappen an jeder Probe fest und legen Sie sie in den Druckluftschleusendurchgang. Dekontaminieren Sie den Handschuhkasten wieder mit Bleichmittel, gefolgt von 70%Ethanol-Lösung.Verschieben Sie die Proben aus der Handschuhbox und übertragen Sie sie für die verbleibenden Schritte des Extraktionsvorgangs auf die Arbeitsstation. Nach der Extraktion übertragen Sie Ihre Proben zur PCR-Analyse in das Pass-Through-Fenster. Nachdem Proben entfernt und übertragen wurden, dekontaminieren Sie Ihren Laborarbeitsplatz außerhalb der Handschuhbox.Bevor Sie Ihre PSA entfernen, warten Sie, bis die Luftzirkulation im Gerät eine ordnungsgemäße Anzahl von Filterzyklen sicher erreicht hat, bevor Sie beginnen, Ihre PSA zu entfernen. Unmittelbar nach dem Entfernen und Entsorgen aller PSA in den PSA-Abfallbehälter, waschen Sie Ihre Hände im Laborwaschbecken mit Seife und Wasser, bevor Sie das Gerät verlassen. PCR-Verstärkung und -Erkennung.Entfernen Sie die extrahierten RNA-Proben aus dem Durchgangsfenster. Bereiten Sie eine Master-Mischung in einem 1,5-Milliliter-Rohr mit den folgenden Komponenten für jeden Zieltest vor: Wasser, Primer und Sonden, Angriffsmischung und 2X-Puffer. Vortex und drehen Sie Ihre Master-Mix, nach dem, aliquot die Master-Mix in jedem der Streifenrohre.Bringen Sie das PCR-Kit bei den empfohlenen Temperaturen wieder in den Speicher, sobald der Master-Mix vorbereitet wurde. Fügen Sie die Proben zu jedem der Streifenrohre mit einer separaten Spitze zwischen den einzelnen Streifenrohren hinzu. Drehen Sie die Proben bei 1.500 U/min für eine Minute, danach können die Proben auf die Echtzeit-PCR-Einheit geladen werden.Sobald Samples auf das PCR-Instrument geladen sind, dauert es etwa 90 Minuten, um einen Durchlauf abzuschließen. Der Echtzeit-PCR-Assay ist eine empfindliche Methode zur robusten Erkennung des Virus. Dies kann in der Tabelle mit der Bezeichnung:PCR Analysierte Ergebnisse angezeigt werden.Bevor Sie Ihre Ergebnisse sammeln und das Labor verlassen, entfernen Sie PSA und dekontaminieren Sie jeden Arbeitsplatz in Vorbereitung auf den nächsten Diagnosetest angemessen. Repräsentative Ergebnisse. Der Laborworkflow ist in dem Diagramm dargestellt, das den persönlichen Schutz betont.Der schnelldiagnostische Influenzatest wird mittels RT-PCR-Analyse durchgeführt. Das Verfahren besteht aus vier Hauptschritten und einzelnen Arbeitsbereichen werden für jede Phase des Protokolls zugewiesen. Ziel dieses Projekts ist es, eine neuartige modulare, schnell einsetzbare Laboreinrichtung zu validieren, und wir haben dies erfolgreich durchgeführt und Schulungsprogramme für Laborpersonal entwickelt, das während Epidemien und Ausbrüchen in ressourcenarmen Umgebungen arbeitet.

Research

JoVE Journal

Medicine

Surgical Management of Meatal Stenosis with Meatoplasty

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Forschung

Medizin

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