Name: remote laboratory management: respiratory virus diagnostics
Uploaded: 2019-04-06T14:30:00
Duration: 14 min 56 s
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이 문서의 내용을 반드시 플레이 또는의 미국 부의 보건 및 인적 서비스 또는 저자와 제휴 기관의 정책 반영 하지 않습니다. 이 연구는 폴 G. 앨런 가족 재단 "향상 된 영향, 비상 스마트 포드"에 의해 지원 되었다. 우리가 깊이 모든 유익한 토론 및 약의 Baylor 대학, GSS 건강, NASA의 존슨 우주 센터에서 동료 들과 협업을 주셔서 감사합니다. 우리는 열 피셔 Scientifics와 그것의 대표 RT-PCR 기계, 원심 분리기, 자동된 펫의 대출에 대 한 원격 실험실 시설에 호흡기 바이러스 진단 테스트를 수행 하 게 진심으 감사. 저자는 원고 준비 및 videography에 그들의 도움에 대 한 마르타 Storl-데스몬드와 시드니 스티븐 Sorrell에 감사.

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약의 Baylor 대학 모바일 클리닉 (미국 특허 응용 프로그램 번호 15/523,126, # 620078924)에 대 한 미국 임시 특허 출원을 보유 하고있다. 저자 들은 경쟁 금융 관심 선언 합니다.

위에서 설명한 원격 실험실 시설 이며 물류 중심, 확장, 신속 하 게 구축, 다기능, 실험실 직원 및 작업 효율을 보호 하기 위해 기어 드 인간 중심 디자인 개념에 따라. 빠른 실험실 설치 및 안전 호흡기 바이러스 격리 및 진단에 대 한 자세한 프로토콜 개발 및 제시.
최적의 장비 작동을 위해 다음 조건이 실험실 단위에서 유지 되어야 합니다: 21 ± 2 ° C, 5 ~ 40 ° C의 허용 온도, 허용 최대 상대 습도 (비응축), 80 %RH 14 ± 5 %RH 습도의 주위 온도 그리고 0과 해발 2000 m 사이의 고도.
에너지 소비는 오프-그리드 실험실의 관리에 대 한 가장 중요 한 매개 변수 중 하나입니다. 코어 실험실 장비, 전력 효율 15-40%; 다 수 있습니다. 그러나, 평균 에너지 소비 여기 적절 한 서비스를 제공으로 추정 된다. 높은 전력 율 (1500-2000 W) 에어컨, 글러브 시스템, PCR 기계 및 고압 소독 기에 관한. 프로토콜 및 실험실 환경 제어의 16 시간을 수행 하는 집중적인 작업의 8 시간을 고려 하면 실험실 단위의 일일 에너지 소비는 약 36 kWh/일 BSL-2, BSL-3, 약 43 kWh/일 및 연결에 대 한 73 kWh/일 BSL-2/BSL-3 + 시설. 하나의 단위로 실행/연속 전력 ≥8의 용량을 가진 전기 전원의 소스를 제공 좋습니다 kW, ≥10 kW; 전원 서 지/시작 연결 된 시설, 실행/연속 전력에 대 한 ≥12 kw 급, 그리고 서 지/시작 ≥14 kW 전력. Note, BSL-3 실험실 시설에 백업 에너지 소스 사고 정전을 방지 하 고 진단 테스트 중 장갑 상자 및 부정적인 압력 시스템의 꾸준한 작업 좋습니다.
가솔린 구동 전기 생성기는 비상 에너지 공급을 위한 비용 효율적인 솔루션입니다. 가솔린 발전기의 연료 효율을 100% 부하에서 시간 당 약 1.5 갤런 가정 합니다. 평균 일일 에너지 소비는 경우 40%의 8 시간 로드 및 10% 중 16 시간 실험실 단위 BSL-2 또는 BSL-3 7-9 일 당 연료의 갤런 필요 대응 하 게, 그리고 연결 된 시설 필요 ~ 15 분/일.
원격 실험실 단위 오프 그리드 태양 전지 패널 시스템의 기능에 맞게 설계 되었습니다. 태양 전지 패널 추가 연료를 필요로 하지 않는 하 고 높은 생산성 높은 태양 방사선으로 인해 아프리카, 아시아, 라틴 아메리카의 열 대와 아열대 지역에서 운영할 수 있다. 현재, 상용 태양 전지 패널 시스템에의 한 단위 수 최대 44 kWh/일의 일일 전력 사용량.
선택한 유형의 대체 전기 에너지 소스에 더러운 전기 필터는 강력 하 게 권장 하 고 실험실 시설 전력 품질을 개선 하 고 실험실 장비를 보호 하기 위해 미리 설치. 강한 전자파 장치의 올바른 작동을 방해할 수 있기 때문에 강력 하 고 비차폐 전자기 방사선의 근원에서 PCR 시스템을 유지. 그것은 또한 중요 한 강한 진동 근처 PCR 시스템 소스, 원심 펌프 등 과도 한 진동 장비 성능에 영향을 미칠 것입니다 때문에 하는 사용 하지 마십시오. 실험실 장비 먼지 입자 또는 나무 같은 절연체를 사용 오염 물질은 환경에만 설치할 수 있습니다. 객실은 기기 부품에 미 립 자 물자를 추방 수 있는 통풍구에서 확인 합니다.
실험실 물 사용량 실행 매일 진단 테스트의 수는 시설에서 근무 하는 실험실 기술자의 수에 따라 다릅니다. Nuclease 무료 물 추출 및 PCR 테스트를 포함 하 여 진단 절차 중 믹서의 준비를 위해 필요 하며 사전에 다른 물품과 화학 물질 전달 해야 합니다. Nuclease 무료 물 50 mL 이상 필요 한 진단 테스트; nuclease 무료 물이 필요한 볼륨 (즉, 샘플 수가)에 작업 부하에 따라 다릅니다. 증류수는 고압 소독 기를 위해서 필요 하다. 1 사이클에서 고압 물 소비량은 160-180 mL; 오토 클레이 브는 일상적인 사용을 위한 것이 좋습니다. 플라스틱 (튜브, 피 펫 팁, 등)의 대부분은 일회용, 하지만 일부 다시 사용할 수 있습니다 (대형 용기, 선반 등) 세척 될 필요가. 일반 실행 물 절차 사이 손 세척을 위해 사용 되 고 최소 볼륨 매일 15-20 L을 것으로 추정 된다. 물 압력;에 대 한 펌핑 될 필요가 토사의 파괴적인 효력에서 물 기기를 보호 하 고 상수도의 품질 향상, 침전 물 사전 필터 시스템에 것이 좋습니다.
저온 저장에 대 한 하나 이상의 5.1 입방 피트 냉장고 (+ 4 ° C) 및 하나의 4.9 입방 피트 (-20 ° C ~-30 ° C) 냉장고 필요 각 실험실 단위에서 샘플을 저장 하 / RNA.
여러 레벨을 포함 하는 실험실 오염: 청소 > antisepsis > 소독 > 살 균. 간단한 청소은 gloved 손 또는 브러쉬를 닦 고 비누와 물을 사용 하 여 수행할 수 있습니다. Antisepsis 성장 및 세균의 증식을 억제 하기 위해 액체 항균 화학으로 세척을 포함 합니다. 알코올 솔루션 (70%) 살 균 액체로 사용할 수 있습니다. 소독 작업 및 장비 (세균성 포자)를 제외 하 고 거의 모든 병원 성 미생물을 제거 하는 액체 화학 물질의 응용 프로그램입니다. 화학 노출 시간, 온도 및 소독 제의 농도 중요 하다. 염소 용액 (0.5%), 또는 표 백제, 표면 정화와 물 정화에 대 한 대규모에 효과적인 살 균 제 이다. 자외선 살 균 방사선 소독의 또 다른 방법입니다. 살 균 램프 Uv-c-빛을 생성 하 고 박테리아와 바이러스의 비활성화를 리드. 살 균 내성 세균 포자를 포함 하 여 모든 미생물 인생을 파괴 하는 물리적 또는 화학적 절차를 사용 합니다. 살 균 고압 소독 기도 수행할 수 있습니다.
모든 실험실 폐기물 생성 시점에서 분리 해야 합니다. 누출 방지 쓰레기 봉투에 장소 단단한, 비 샤 프, 전염 성 폐기물 생물으로 표시 됩니다. 생성 된 폐기물은 날카로운, 펑크 방지 용기에 배치 되어야 합니다. 액체에 대 한 레이블이 제대로 생물 컨테이너에 잠재적으로 전염 성 액체 폐기물을 수집 합니다. 컨테이너 및 가방 해야 하지 가득 2/3 이상의 볼륨. 모든 표 백제 제품의 처리는 그들의 자신의 지정된 폐기물 bin에 정렬 되어야 합니다. 실험실 폐기물을 생성 하는 어로 졸 및 가방/컨테이너의 파손을 피하기 위해 부드럽게 처리 되어야 합니다. 컬렉션 가방/생물 학적 쓰레기와 함께 쓰레기통 및 외부 표면 0.5% 염소 솔루션 사용 후 소독 해야 합니다. 모든 실험실 폐기물 멸 균 소 각 하기 전에 30 분 동안 121 ° C에 고압에. 압력솥의 적절 한 사용에 대 한 작동 설명서를 참조 하십시오. 가능 하면 적절 한 살 균 되도록 압력솥에 생화학 표시기를 추가 합니다. 설정, 날짜, 시간, 및 연산자와 소독으로 모든 압력가 고체와 액체 폐기물은 명확 하 게 표시 되어야 합니다. 레이블이 지정 된 폐기물 소 각 하기 전에 안전 하 고, 별도 영역에 다음 배치 합니다.
예상 대로 워크플로 진단 테스트의 질병 및 견본에 따라 달라 집니다. 바이러스 식별 (예: Ebola19) 혈액 샘플을 수집 하는 것이 좋습니다, 만약 샘플 aliquots-20 ° C-80 ° C (호흡기 바이러스에 대 한 필요한) 대신에 저장할 수 있습니다. 세분화 표본 나중 보다 환자에서 샘플링 하는 경우 하나 이상의 견본을 항상 낫다. 가능 하다 면, 각 유형의 견본 적어도 두 명의 표본은 별도 표본 튜브에서 이동 해야. 표본 추가 샘플링 가능 하지 않은 경우 하위 분할 해야 합니다.
다른 표본은 적절 한 온도에서 저장할 수 없는 경우 (예를 들어, 아니 냉동 고 사용할 수 있습니다), 면봉 순수한 (100%)에서 저장 되어야 한다 에탄올 또는 99% 메 틸을 섞은 정신 (메탄올 첨가제만). 이 경우에, 면봉 팁 에탄올의 1-2 mL와 함께 유리병에 넣어 해야 합니다. 참고 이러한 표본은 PCR에만 적합 합니다. 또한, 참고 잘 설립 분석 결과 각 특정 바이러스 진단8,23, 필요 하 고 알 수 없는 바이러스 샘플 추가 조사19,20, 할당 된 실험실으로 보내야 21.
필수 및 권장 요구 사항 목록에 호흡기 바이러스 진단 PCR 테스트를 위한 실험실 장비를 인식 해야 합니다. 표 3 밑줄 기본 및 최소로 고급 (권장된) 장비 및 RT-PCR 진단 테스트에 대 한 요구 사항. BSL-3 연습, 인원의 추가 부정적인 압력 보호 (예: 글로브 박스)은 매우 중요 하 고 필요한.
연결 된 실험실 모듈은 실험실 테스트 및 단일 테스트에 필요한 시간을 속도에 관련 된 인원의 수를 증가 하는 것이 좋습니다. 시간이 많이 걸리는 수동 RNA 추출 교체 자동된 정량 (예: QiaCube)로 가능 하다. 이 악기는 성가신 (폭 65 cm, 길이 62 cm, 높이 86cm), BSL-2 또는 BSL-3 단위 가구 재배치 후 모바일 실험실 작업 들어갈 수.
미래의 일 증강된 현실 (AR)의 개발에 초점을 맞춘 것입니다 및 가상 현실 (VR) 교육. AR/VR 안경은 잘 훈련 된 실험실 노동자 되기 위해 필요한 필요한 기술을 가르치는 인터랙티브 플랫폼을 제공에 사용 됩니다. 실험실 진단 테스트에 어려운, 다단계 절차 중 일부를 수행 하기 위해 유용한 팁 소프트웨어 가이드에 포함 됩니다. 직원 교육을이 이렇게 진단 테스트 성능 및 원격 실험실 시설, 특히 원격 관리 리소스 제약 분야의 품질을 개선 한다.

신속한 진단 초기 징후는 다양 한 감염 질환을 구별 하는 경우에 특히 적시 바이러스 감염 관리에 중요 한 악기 이다. 서 아프리카1,2, 아시아 및 라틴 아메리카3,4Zika 바이러스 전염병 (2015-2016 년), 중동 호흡기 증후군 (MERS) 코로나 바이러스의 출현에 최근 Ebola 발발 (2014-2015 년) 감염5,6, 그리고 미국7,8 에서 비정상적으로 치명적인 독감 (인플루엔자) 전염병 (2017-2018)의 무리는 빠르게-구축, 실험실 시설에 대 한 필요성을 발견 교통, 접근, 시설, 장비, 및 커뮤니케이션에서 문제가 발생 합니다.
오프-그리드 기능 (자치 전력 및 물 공급, 등)은 농촌, 리소스 제한 전역 설정9,,1011에 결정적 이다. 임상 작업과 베일 러 의과대학에서 글로벌 프로그램에 우리의 경험 설계 하 고 구축 쉽게 배포, 설치 및 다기능 사용 (BSL-2와 BSL-3)에 대 한 기능을 갖춘 컨테이너 기반 모바일 실험실 사용 되었다. 이 다재 다능 한, 물류 강화 된 실험실 시설의 이미지는 그림 1에 표시 됩니다.
이 빠르게-구축, 실험실 시설에는 확장 디자인이 비슷한 앞에서 설명한 컨테이너 클리닉 (' 비상 스마트 포드 ')12,13,14, 베일 러 대학의과 대학에 의해 개발 및 USAID 후원. (전송 모드)에서 단일 포장된 단위는 9 피트 9 인치 x 8 개 x 8의 크기 피트 (그림 1A, B), 170 평방 피트 (15.75 m2)의 영역을 확장 하 고 (그림 1 c, D). 단위는 10 분에 2 ~ 4 명으로 배포할 수 있습니다.
별도 모듈 연결 가능한, BSL-3 단위 (그림 2B) 설계 작업에 대 한 흡입을 통해 심각한 또는 잠재적으로 치명적인 질병을 일으킬 수 있는 전염 성 요원 BSL 2 lab 시설 (그림 2A)에 대 한 원격 실험실 내장 15. 두 개의 실험실 모듈의 연결 실험 워크플로, 리소스, 공유 및 비용 절감 (그림 2 C-E)의 최적화를 활성화.
모듈은 공기 빡 빡 하 고 편안 하 게, 에너지 효율적인 모바일 쉼터를 만들 수 꽉. 난방, 환기 및 공기 조화 (HVAC) 시스템 중앙된 및 온도 제어에 사용 됩니다. 일반적으로, 실험실 단위 디자인 그들의 자신의 태양 전지 패널 독립적인 전기 발전기 등 대체 전원의 사용 하 여 전력 소비를 최소화합니다. 각 단위는 싱크 및 눈 속임 역, 전력 및 물 커넥터 (그림 3A-C) 포함 되어 있습니다. ICT 플랫폼 제공 선택적, 태블릿 기반 (전화/태블릿 안 드 로이드 또는 아이폰/아이 패드) 제휴 베일 러의 정보 기술 (IT) 개발 공급 추적 및 실험실 결과 문서 (3D 그림)에 대 한 응용 프로그램 설명서 잘 제한 된 연결 원격 환경에서 작업에 경험이 연구 그룹. 시스템 셀룰러 또는 무선 신호를 사용 하 여 작동할 수 있습니다 그리고 즉각적인 백업 또는 전송 연결이 다시 설정 될 때 보안 클라우드 기반된 서버에 연결 하지 않은 문서를 수 있습니다.
실험실은 포함 하는 몇 가지 주요 감염 제어 기능: (a) 부정적인 압력 공기 흐름, (b)는 장갑 상자 또는 biosafety 내각, (c) 건강 위험 관리 시스템: 입증 된 방위의 4 계층 구조를 사용 하 여 살 균 자외선 (UV-C) 조명 시스템 의료 관련 감염을 일으키는 원인이 되는 병원 체의 99.7%를 제거 합니다. 시설은 쉽게 과산화 수소 또는 염소 (표 백제) 시스템을 사용 하 여 효율적이 고 효과적인 오염 제거에 대 한 소독은. 16
품질 실험실 결과 전체 진단 테스트 프로세스의 모든 측면을 평가 하는 지에 따라 달라 집니다. 여기, 선물이 BSL-2와 BSL-3 실험실 워크플로에 대 한 점검 및 신속한 호흡기 바이러스 진단 테스트에 대 한 프로토콜. 바이러스 성 질병의 제안 된 진단 실시간 리버스 전사 연쇄 반응 (RT-PCR)을 통해 견본 (비 강 세척, 혈액, 대변, 및 소변, 등)에서 바이러스 성 RNA 또는 DNA의 검출에 의존합니다. 빠르게는 견본에서 바이러스 부하를 추정 하 게 PCR17,18을 검사 하는 바이러스 성 질병에 대 한 효율적인 도구. 소설의 구현, 분자 진단 분석 실험 수 Ebola19,,2021, 인플루엔자8,22, 결핵 (결핵 등 바이러스 진단 기능 확장 )23.
이 작품의 목표는 새로운 모듈 및 신속 하 게 배포 가능한 실험실 시설을 확인 하 고 교육 가이드를 제공 하는 전염병, 자연 재해 또는 다른 긴급 구제 하는 동안 원격, 낮은 자원 환경에서 작업 하는 실험실 요원에 대 한 상황입니다. 여기, 선물이이 혁신적인 휴대용 실험실에서 호흡기 독감 진단에 대 한 프로토콜.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Autoclave Sterilizer &#39;BioClave&#39;</td>
			<td>Benchmark Scientific, Edison, NJ, USA</td>
			<td>B4000-16</td>
			<td>16 liter, Benchtop, Dims: 22x17.5x15.7 in, Fully automatic, Extremely Compact</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode Scanner</td>
			<td>Zebra Technologies ZIH Corp., Lincolnshire, IL, USA</td>
			<td>Symbol LS2208</td>
			<td>Handheld, lightweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breaker Box Panelboard Enclosure</td>
			<td>Square D (Schneider Electric), France&#160;</td>
			<td>MH62WP&#160;</td>
			<td>NEMA 3R/5/12, Dims: 20 W x 62 H x 6-1/2 in. D, Electrical distribution board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge - Microcentrifuge 17,000 x g</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75002440</td>
			<td>Holds 24 x1.5 or 2 ml tubes, Dims: 8.9x9.6x13.8 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Biological Safety Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-602-400</td>
			<td>4 Ft. Class II Type A2 Cage Changing Biological Safety Cabinet, 12&#34; Access Opening, HEPEX Pressure Duct&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class III Biological Safety Cabinet (Glove box)</td>
			<td>Germfree Laboratories, Ormond Beach, FL, USA</td>
			<td>Model #PGB-36, Serial #C-2937</td>
			<td>Glove box, Portable, 36&#34;, Class III BSC. Dims: 36x20x23.75 in, Includes 2 interior outlets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo Coolers</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-286</td>
			<td>0.5 or 1.5 ml tube benchtop coolers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer (30&#176;C freezer)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>Model ULT430A</td>
			<td>To occupy 4.9 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-126-300</td>
			<td>3 Ft. Vertical Laminar Airflow Cabinet, 8&#34; Access Opening, HEPA filter supply, 99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75004061</td>
			<td>Dims: 4.1x5.0x6.0 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>05-403-151</td>
			<td>Pipet 4-pack (2.5,10, 100 and 1,000&#956;L volume)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated &#39;Finnpipette&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4700880</td>
			<td>Pipet 4-pack (2, 20, 200 and 1,000&#956;L volume), Advanced Volume Gearing(AVG), Ultra durable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Generator</td>
			<td>Cummins Power Generation, Minneapolis, MN, USA</td>
			<td>C60 D6</td>
			<td>60 kW, 60 Hz, 1 Phase, 120/240V, Diesel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>BioMedical Solutions, Inc., Stafford, TX, USA</td>
			<td>BSI-HC-UCFS-0504W</td>
			<td>Standard Undercounter Refrigerators &#38; Freezers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>05LRAETSA&#160;</td>
			<td>To occupy&#160; 5.1 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR machine &#39;Step-one plus&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4376598</td>
			<td>Holds 96 samples, Dims: 9.7x16.8x20.2 in&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>88880017TS</td>
			<td>Dims: 6.1x8.3x3.3 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgPath-ID One-Step RT-PCR Reagents</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster City, CA, USA</td>
			<td>4387391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Koptec Pure 200 Proof</td>
			<td>Decon Labs, Inc., King of Prussia, PA, USA</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free Water</td>
			<td>Ambion, Inc., Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>AM9906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III Platinum One-Step qRT- PCR Kit</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>11732-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL cryogenic tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>03-337-7X&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>10025-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Neptune, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>Neptune, BT10XLS3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Multimax, BioExpress, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>MultiMax, P-3243-30X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>ART, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>ART, 2770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Phenix Research Products, Candler, NC, USA</td>
			<td>TS-059BR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AB custom probes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combitips</td>
			<td>Eppendorf, Hauppauge, NY, USA</td>
			<td>89232-972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrated DNA Technology (IDT) custom probes and primer</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>490003-978 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Reaction Tubes (8 tubes/strip)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4358293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical 8-Cap Strip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4323032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4311971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biohazard waste bags</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>14220-046</td>
			<td>20.3 x 30.5 cm Biohazard bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>Denville Scientific, Holliston, MA, USA</td>
			<td>G4162-250</td>
			<td>Small, meduim or large Nitrile or latex gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masks</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-663</td>
			<td>Advanced protection mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective shoes</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote laboratory management: respiratory virus diagnostics

최근 전염병 (에볼라, Zika, 메, 인플루엔자, 등) 밑줄에 uptick 필요는 더 많은 '민첩,' 조정 다양 한 공급자, 액세스, 시설, 장비, 교통과 통신에서 배열 하는 문제를 해결 하는 응답 훈련입니다. 이 필요를 해결 하기 위해 우리는 리소스 제한 전역 설정에서 비상사태 그리고 전염병에 대 한 혁신, 확장 가능, 물류 강화, 모바일, 실험실 시설을 개발 했습니다. 학문적 인 의료 센터 임상 작업에 배경을 활용 하 여, 우리 설계 되었습니다 신속 하 게 배포 가능한, 모듈형 BSL-2와 BSL-3 시설 추적 및 약물과 공급의 관리를 위한 사용자 친화적인 소프트웨어 원격 지역에서 전염병 동안 및 발생입니다. 여기, 우리는 우리의 협동, 모바일, 확장-컨테이너 실험실 단위 제시. 실험실의 설계 전력 소비를 최소화 하 고 대체 물 소스를 허용 하 여 오프-그리드 사용을 촉진 한다. 단위의 정보 통신 기술 (ICT) 플랫폼 (i) 사용자 친화적인 태블릿 기반 문서를 제공 (ii) 강화 된 환자 및 공급, 추적 하 고 (iii) 내장 원격 기능 통신 현장 통합. 원격 환경에서 품질을 보장 하기 위해, 우리는 기본적인 실험실 작업에 대 한 검사 목록 및 반전 전사 연쇄 반응 (RT-PCR)을 사용 하 여 호흡기 바이러스 진단에 대 한 프로토콜 개발 했습니다. 설명 했 듯이,이 혁신적이 고 포괄적인 접근 리소스 제한 글로벌 환경에서 실험실 기능 제공에 대 한 수 있습니다.

이 연구의 목표 설명 제안된 BSL-2와 BSL-3 모바일 실험실 시설 호흡기 바이러스 대표 결과 진단 테스트 테스트에서 높은-품질을 동일 있도록 적절 한 환경을 제공 하는 고정 된 실험실입니다. 실험실 시설 산업 보건 및 안전 (OHS) 권장 사항에 지정 된 테스트 요구 사항을 준수 하기 위해 설계 되었습니다. 최대한 빨리 원격 실험실 시설 배포 (그림 4)와 모든 장비 이며 용품 설치 되어 (그림 5), 실험실 테스트를 실행할 수 있습니다.
실험실에 따라 표준 운영 절차, PPE (실험실 코트, 보호 신발, 장갑, 마스크, 보호 안경, 등)에 BSL-2 연습 필요에 대 한 적절 한. BSL-3 연습에 대 한 부정적인 압력의 PCR 실험 모듈 인증된 장갑 상자 장비 된다. 실험실 단위 샘플 받기의 단계에서 직원을 보호 하기 위해 외부 통과 windows에서 업그레이드 됩니다. 등록 절차 이전 개발된 태블릿 기반 응용 프로그램 (그림 3D) 단순화 될 수 있습니다. 노트북에서 실행 하는 다른 허용 응용 프로그램은 또한 사용할 수 있습니다.
오염 또는 잠재적인 영향을 미칠 수 있는 생 화 확 적인 시 약 사이의 간섭을 방지 하는 목적에 진단 절차의 단계를 구분 하는 연결 된 실험실 모듈에서이 특정 호흡기 바이러스 진단 테스트를 수행할 수 있는 테스트 결과. 진단의 품질을 최대화 하려면 급속 한 진단 테스트 연습 활용 (i) 모두 기본적인 실험실 BSL-2와 연결 트래버스 PCR 방 (제 3) 또는 (ii) GB와 PCR 객실 통과 창 (제 4)로 연결 합니다. 제안 된 실험실 워크플로 다이어그램 그림 6 에 제시 하 고 개인 보호를 강조 한다. 다이어그램 원격 지역에서 실험실 직원은 최소한 훈련 하는 경우에 특히 인력 보호를 위한 각 표시 된 단계의 중요성을 인식 합니다.
인플루엔자의 급속 한 진단 테스트는 RT-PCR 기술을 통해 수행 됩니다. 절차는 4 가지 주요 단계를 포함합니다. 참고 개별 작업 영역 프로토콜의 각 단계에 대 한 할당 됩니다.
첫 번째 단계 샘플을 가져오고 하위 여러 aliquots 그것을 나눌 것입니다. aliquots 다음 데이터 컨트롤의 효과 개선 하기 위해 바코드 표시 하 고 추가 조사에 대 한 냉동 고에 저장 된 수 있습니다. 두 번째 단계 centrifuging와 열에 의해 세포의 용 해 버퍼에서 샘플을 비활성화 하는 것입니다. 첫 번째 및 두 번째 단계는 biosafety 캐비닛에 밖으로 실행 되어야 한다. 개별 피 펫 세트와 장비를 이용 한다. 사용 가능한 경우 PCR 테스트 PCR 룸에서 제시 된다. 세 번째 단계는 결과의 문서 이다. 단계 4 후 장비 사용, 그리고 실험의 끝에 인사 보호의 유지입니다.
만약 표본 BSL로 분류 될 것으로 예상 된다-3 + (e.g.,Ebola, Zika, 메, TB) 글러브 박스 시설을 사용 해야 합니다. 원격 실험실에서 기가바이트 룸 자체 통과 창 표본 및 노트북 이나 태블릿 샘플 등록을 받을 수 있다. 샘플 aliquot 및 바이러스 비활성화 모두 수행 되어야 합니다 장갑 상자 약 실에서. UV-C 조명 절차 중 오염을 방지 하는 것이 좋습니다. 샘플의 비활성화, 후 추가 프로토콜에 대 한 단계는 기본적인 실험실 BSL-2와 BSL-3 테스트 및 검사 목록 파트 III 다음과 비슷합니다 (표 1, 그림 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig1.jpg"> 그림 1. 실험실 시설 프로토 타입. (A, B) 전송 모드; (C) 배포 모드: 외부; (D) 배포 모드: 인테리어. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig2.jpg"> 그림 2 . 회로도. (A) 기본적인 실험실 BSL-2; (B) 글러브 박스와 보호 견본 전송;에 대 한 일반적인 통과 창 PCR 실험실 BSL-3 모듈 포함 (C) 연결 된 실험실 시설 (A)와 (B) 공유 유틸리티. (D,E) 반대편에서 연결 된 단위의 사진입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig3.jpg"> 그림 3. BSL-3의 (A) 인테리어는 (1) 통과 창, 싱크대 (2) 눈 속임 역 입구; (B) 전기 전원 커넥터, 커넥터 (C) 물; (D) 태블릿 기반 소프트웨어 공급 추적 및 실험실 결과 대 한 문서화. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2.jpg"> 그림 4 . 실험실 시설 배포. 패널 같이 단위의 1 개의 측에 전개 (A D)에 대 한 지시. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig5.jpg"> 그림 5 . 연결 실험실의 설계도: (A) BSL-2 모듈 1; (B) 글러브 박스와 PCR 모듈 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a> 
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig6.jpg"> 그림 6 . 원격 실험실 시설에 호흡기 바이러스 진단 RT-PCR 검사에 대 한 흐름 차트. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>원격 실험실 BSL-2</td>
			<td>원격 실험실 BSL-3</td>
		</tr>
<tr>
<td>제 1 부</td>
			<td>제 1 부</td>
		</tr>
<tr>
<td>i. 연구소 기술 문을 통해 입력 하 입구를 표시 하 고 랙 입구 문 옆에 걸려 연구실 코트를 입었다. 오픈 신발 금지, 고급 마스크와 보호 안경을 권장 된다.</td>
			<td>난 부정적인 압력을 보장 하기 위하여 단위 외부 장갑 상자 창에서 보고 실험실 기술 활성화 됩니다. (핑크 볼 부정적인 압력은 작동 표시 장치에 표시 됩니다).</td>
		</tr>
<tr>
<td>ii. 실험실 기술 싱크대에 손을 씻고, 일회용 장갑을 끼 샘플의 섭취와 함께 시작 하.</td>
			<td>ii. 부정적인 압력 작동, 유일한 문으로 들어가고 랙 입구 문 옆에 걸려 있는 실험실 외 투에 넣어 실험실 기술.  오픈 신발 금지, 고급 마스크와 보호 안경을 바람직한.</td>
		</tr>
<tr>
<td>iii. 차 아 염소 산 목욕 통과 창에 이전에 감소 된 샘플은 실험실 기술에 대 한 통과에 앉아 있다.</td>
			<td>ⅲ. 실험실 기술, 싱크대에서 손을 씻고 일회용 장갑, PPE에 넣고 샘플의 섭취로 시작.</td>
		</tr>
<tr>
<td>iv. 샘플 접수를 받았다.</td>
			<td>iv. 이전 차 아 염소 산 목욕 통과 창에 이전에 감소 된 샘플은 실험실 기술에 대 한 통과에 앉아 있다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>2 부</td>
			<td>v. 샘플 접수를 받았다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>v. 진단 절차에 따라 표본 biosafety 캐비닛을 이동 하 고 비활성화.</td>
			<td>2 부</td>
		</tr>
<tr>
<td>6. 표본 현미경, 원심 분리기, 또는 썩 어에 대 한 준비.</td>
			<td>6입니다. 표본 장갑 상자에 비활성화입니다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>7. 적절 한 진단 테스트를 실행합니다.</td>
			<td>7입니다. 표본 핵 산 격리에 대 한 실행입니다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>viii. 4 ° C 냉장고 또는 적절 한 냉장고에 견본을 저장 합니다.</td>
			<td>viii. 후 추출, 표본 통과 창으로 이동.</td>
		</tr>
<tr>
<td>3 부</td>
			<td>9. 실험실 기술 단위 (긍정적인 압력)의 PCR 측에 입구를 통해 들어간다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>9. 얼룩 및 항목의 세척에 대 한 싱크를 사용 합니다.</td>
			<td>랙 입구 옆에서 실험실 외 투에 넣어 실험실 기술, x. 장갑에 넣어 싱크대에 손을 씻으십시오.</td>
		</tr>
<tr>
<td>x. 노트북 & counterpace 수행 분석 및 문서를 사용 합니다.</td>
			<td>xi. 샘플 통과 창에서 글러브 박스 룸에서 받을 수 있습니다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>xi. 압력솥을 실행 하 여 장비를 소독.</td>
			<td>xii. 해당 되는 경우에 필요한 샘플 층 류 캐비닛에 준비.</td>
		</tr>
<tr>
<td>xii. 생물 학적 폐기물 컨테이너에서 어떤 유해 폐기물의 처분.</td>
			<td>13 세 한 적절 한 진단 테스트를 실행합니다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>xiii. 워시 싱크대에 손을.</td>
			<td>14 세. 4 ° C 냉장고 또는 적절 한 냉장고에서 견본을 저장 합니다.</td>
		</tr>
<tr>
<td>xiv. 만요 실험실 코트 백업 랙.</td>
			<td>3 부</td>
		</tr>
<tr>
<td>xv. 같은 문을 통해 종료 합니다.</td>
			<td>xv. 얼룩 및 항목의 세척에 대 한 싱크를 사용 합니다.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>16. 노트북 및 counterpace를 사용 수행할 분석 및 문서.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>17 세. PCR 방 통과 창으로 전송 튜브 고 압력솥을 실행 하 여 장비를 소독.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>18 세. 생물 학적 폐기물 컨테이너에서 어떤 유해 폐기물의 처분.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>xix. 싱크대에 손을 씻으십시오.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>xx. 동일한 입구 문을 통해 종료 합니다.</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1입니다. PCR 진단 워크플로우를 위한 점검 표입니다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="3">유지 보수 및 교정</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">실시간 PCR 시스템</td>
			<td>월별</td>
			<td>매달 마다 배경 교정 수행</td>
		</tr>
<tr>
<td>18 개월</td>
			<td>배경, 공간을 수행 하 고 염색 교정 18일 개월 마다</td>
		</tr>
<tr>
<td>원심 분리기</td>
			<td>1 년</td>
			<td>당 분 및 온도 외부 또는 내부 교정 서비스를 통해 혁명에 대 한 보정</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">글러브 박스</td>
			<td>매일</td>
			<td>시각 요소, 특히 HEPA 필터, 장갑, o-링 및 호스의 노출된 표면에 손상에 대 한 검사. 덕트 클램프는 빡 빡 하 고 장소에 다는 것을 확인 하십시오. 누출 압력 시험을 수행 합니다. 테스트 압력 경보.</td>
		</tr>
<tr>
<td>6 개월</td>
			<td>HEPA 필터 변경</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 년</td>
			<td>시스템 보정</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">오토 클레이 브</td>
			<td>주간</td>
			<td>약한 비 연마 세제를 사용 하 여 선반과 물 탱크 청소</td>
		</tr>
<tr>
<td>3 개월</td>
			<td>타이머 및 계기 보정</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 년 또는 모든 50 사이클</td>
			<td>검사 하 고, 철저 하 게 청소 하 고, 테스트 하 고 보정</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">냉장고 및 Freeezer</td>
			<td>6 개월</td>
			<td>팬 모터, 증발 기 코일, 집 광 코일과 콘덴서 필터 진공 청소기로 청소를 확인 하 고 필요에 따라 배터리를 교체</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 년</td>
			<td>내부 또는 외부 교정 서비스를 통해 냉장고를 보정</td>
		</tr>
</tbody></table>표 2입니다. 실시간 PCR 장비 유지 보수입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>필수</td>
			<td>권장</td>
		</tr>
<tr>
<td>실험실 외 투, 보호 신발, 장갑</td>
			<td>실험실 외 투, 보호 신발, 장갑, 마스크, 안경</td>
		</tr>
<tr>
<td>냉장고 4 ° C, 냉동-20 ° C</td>
			<td>냉장고 4 ° C,-20 ° C, 냉장고 냉장고-80 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>자동화 된 펫의 1 세트</td>
			<td>자동화 된 펫의 3 세트</td>
		</tr>
<tr>
<td>원심 분리기, 셰이 커, thermocycler</td>
			<td>로봇 시스템</td>
		</tr>
<tr>
<td>RT-PCR 기계, 얼음 목욕</td>
			<td>RT-PCR 온도 조절, 얼음 냉각기</td>
		</tr>
<tr>
<td>생물 학적 쓰레기 봉투</td>
			<td>생물 학적 폐기물 처분 압력솥</td>
		</tr>
</tbody></table>표 3입니다. RT-PCR 호흡기 바이러스 진단에 대 한 최소 요구 사항을 테스트 BSL-2.

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Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

신속 하 게 구축, 오프-그리드 실험실 설계 되었고 원격, 리소스 제한 전역 설정에 대 한 내장. 기능 및 물류 개선, 확장, 다기능 실험실 모듈의 중요 한 측면을 탐구 된다. 기본적인 실험실 작업에 대 한 점검 및 호흡기 바이러스 진단 테스트에 대 한 프로토콜 개발 이며 제시.

원격 실험실 관리: 호흡기 바이러스 진단

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

Zika와 에볼라 바이러스와 같은 최근 전염병의 업틱은 글로벌 규모에서 보다 조정되고 민첩한 반응의 필요성을 강조했습니다. 이를 위해 당사는 이러한 발병 시 전 세계적으로 자원이 제한된 지역에서 사용할 혁신적이고 확장 가능한 인모달 실험실 유닛을 설계했습니다. 여기에서 우리는 우리의 인트라 모달, 확장 가능한 모바일 선적 컨테이너 실험실을 제시합니다.그리고 다음 논문에서, 우리는 호흡 인플루엔자 바이러스 진단에 우리의 BSL-2 및 BSL-3 접근을 제시합니다. RCT-PCR에 의한 신속한 인플루엔자 바이러스 진단. 설치된 실험실 장치에 진입하기 전에 모든 BSL-2 안전 요구 사항을 고려해야 합니다.여기에는 적절한 개인 보호 장비가 있는 드레싱, 손 씻기, 장갑 착용, 사용하려는 작업 공간 제거 가 포함됩니다. 표백제를 사용하여 작업 공간과 소모품을 오염 제거하는 경우, 표백제가 작업 공간의 다른 화학 물질과 혼합하여 독성 연기를 만들 수 있으므로 70%의 에탄올을 사용하여 표백제에 노출된 모든 영역을 청소해야 합니다. 모든 표백제 제품을 자신의 지정된 쓰레기통에 보관하십시오.샘플 면봉은 환자에게서 취하면 현장이나 클리닉에서 실험실 시설로 이송되어 통과 창을 통해 실험실 기술자에게 전달됩니다. 이 창은 양쪽에서 열 수 없습니다. BSL-2 통과 창에서, 견본을 포함하는 관의 외부 표면은 표백제로 완전히 disindind및 2 분 동안 앉기 위하여 혼자 남겨두어야 합니다.통과 창을 열고 등록할 샘플을 수집합니다. 표백제잔해가 남아 있는 샘플을 닦아내고, 표백제로 통과 창 의 내부를 닦은 다음 70% 에탄올 용액을 닦아냅니다. 각 샘플 튜브에 바코드를 추가하고 알리쿼트로 지정된 4개의 빈 튜브를 추가합니다.샘플을 통풍구 후드로 이동합니다. 각 튜브의 바코드를 스캔하고 태블릿 기반 시스템 또는 랩톱 화면에 적절한 샘플 식별 정보가 나타나는지 확인합니다. 등록 절차를 완료합니다.샘플 알리쿼트. 테스트 튜브가 라벨이 붙으면 인증되고 오염되지 않은 클래스 II 생물 안전 캐비닛을 사용하여 시료를 알리쿼트로 채취하십시오. aliquots를 복용할 때는 각 샘플에 신선한 멸균 또는 일회용 파이펫을 사용하고 교차 오염을 방지하기 위해 생물 유해 폐기물 용기에 버려야 합니다.모든 튜브가 단단히 밀봉되고 닫혀 있는지 확인하십시오. 시편당 알리쿼트 1개를 활용하여 즉각적인 추출을 하십시오. 나중에 사용할 수 있는 냉동실에 다른 알리코를 보관하십시오.워크스테이션으로 이동하기 전에 표백제로 모든 작업 공간 표면과 장비를 청소한 다음 70%에탄올 용액을 세척합니다. 바코드 PCR 샘플이 알리인용되면 추출을 위해 지정된 워크스테이션으로 이동합니다. 용해 단계를 위해 완충액 AVL 담체 RNA 혼합물을 준비하십시오.샘플 및 리시스 버퍼 마스터 믹스는 실온에서 유지되어야 합니다. 1.5 밀리리터 원심분리기 튜브에 라벨을 부착하십시오. 파이펫 팁을 560 마이크로리터로 설정합니다.깨끗한 파이펫 팁을 바르습니다. 각 튜브에 리시스 버퍼를 추가합니다. 폐 용기에 팁을 버리십시오.다음으로 PCR 알리쿼트 샘플을 가져 가라. aliquot 하나에 지정된 준비된 용해 버퍼 튜브에 넣고 추가 샘플에 대해 반복합니다. 오래된 파이펫 팁을 버리고 깨끗한 파이펫 팁을 적용합니다.깨끗한 파이펫 팁을 바르습니다. 제어 튜브에 버퍼 140 마이크로리터를 추가합니다. 각 튜브를 안전하게 닫습니다.15초 동안 펄스 소용돌이. 추가 알리쿼트 또는 샘플과 함께 반복합니다. 5초 동안 각 시료를 미세원심분리합니다.실온에서 10분 동안 배양하세요. 10 분 후 간략하게 원심 분리하여 각 튜브 뚜껑 의 내부에서 방울을 제거하십시오. 샘플에 560 마이크로리터의 에탄올을 추가합니다.파이펫 팁을 변경합니다. 남은 샘플이나 추가 샘플과 함께 반복합니다. 각 샘플 튜브를 안전하게 닫습니다.펄스 소용돌이 각 샘플은 15초 동안. 미세 원심 분리는 5 초 동안 샘플을 분리합니다. 깨끗한 2 밀리리터 수집 튜브를 가져옵니다.스핀 열을 추가합니다. 샘플에 맞게 레이블을 지정합니다. 그에 따라 컬럼에 맞게 샘플의 630 마이크로리터를 전송합니다.캡을 보호합니다. 원심분리기로 이동합니다. 원심분리기에 샘플을 균등하게 분배합니다.6000 g의 원심분리기는 1분 동안 리시스 버퍼를 제거합니다. 워크스테이션으로 돌아갑니다. 수집 튜브를 교체합니다.나머지 리시스 버퍼를 추가하고 원심 분리 단계를 반복합니다. 원래 알리쿼트 샘플 튜브를 폐기한 후 용액을 폐기하고 완충액 AW1로 스핀 컬럼을 세척합니다. 모든 샘플 또는 추가 샘플과 함께 이 절차를 반복합니다.각 샘플의 캡과 원심분리기를 6g으로 고정합니다. 20g에서 두 번째 세척 버퍼 AW2로 반복하십시오. 마지막으로, 깨끗한 1.5 밀리리터 튜브에 열을 놓습니다.컬럼을 열고 60 마이크로리터의 완충AVE. 실온에서 1분 동안 인큐베이션을 추가하고 1분 동안 6g의 원심분리기를 넣습니다. 이제 샘플이 PCR 분석을 위한 준비가 되었습니다.BSL-3 조건하에서 실험 프로토콜은 동일하게 유지되지만 안전 조치는 다른 어떤 것보다선 선례를 취할 것입니다. BSL-3 실험실에 들어가기 전에 투명 창을 통해 확인하여 글러브박스 장치에 음압이 확립되었는지 확인합니다. 벽에 있는 공이 보이면 부정적인 압력이 확립되었음을 알 수 있습니다.음의 압력이 설정되면 문을 열고 장치를 입력합니다. 즉시 손을 씻은 다음 PPE 체크리스트로 진행하십시오. 장갑, 가운, 신발 커버, 마스크, 얼굴 방패, 장갑 두 번째 쌍 : 다음 순서로 PPE에 넣어 진행합니다.기계를 켜고 장갑상자의 압력이 안정화되도록 합니다. 표백제 스프레이 솔루션을 사용하여 모든 영역을 오염제거하고 글러브박스 안팎에서 사용할 수 있는 물품을 공급합니다. 표백제 폐기물을 표백제 전용 용기에 넣습니다.70% 에탄올 용액을 사용하여 표백제가 사용된 모든 영역에 대해 청소하십시오. 통과 창을 통해 샘플을 전송합니다. 샘플은 표백제 용액으로 분사되고 BSL-3 유닛 내부에 들어가기 전에 통과시 적어도 1 분 동안 혼자 남겨두어야합니다.다음으로, BSL-3 장치 내부에 샘플을 수신하고 등록 및 라벨링 단계로 진행하기 전에 철저하게 청소하십시오. 샘플이 등록되고 튜브에 레이블이 지정되면 에어록 트레이를 통해 샘플을 글러브박스에 넣습니다. 한 번에 두 문을 열지 마십시오.안전 예방 조치를 위해 두 단계로 각 문을 열고 닫습니다. 샘플이 글러브박스 내부로 안전하게 이동되면 글러브박스에 샘플 알리쿼트를 만들기 위해 이전에 설명한 것과 동일한 단계를 따르십시오. 샘플이 알리인용되면 샘플을 밀폐 용기로 이동합니다.글로브박스 내에 표백제 용액을 분사하여 튜브 및 기타 모든 표면을 오염제거합니다. 5분간 기다린 다음 70% 에탄올 용액을 적용하여 표백제를 세척합니다. 철저한 오염 제거 후 용해가 글러브 박스로 다시 단계로 돌아 간 PCR 분석에 필요한 샘플만 이동합니다.글러브박스에서 추출 절차의 리시스 단계만 수행합니다. 세포가 용해되면 각 샘플의 캡을 단단히 밀봉하여 가압 된 에어록 통로에 넣습니다. 70%에탄올 용액이 표백제로 글러브박스를 다시 오염 제거합니다.샘플을 글러브박스 밖으로 옮기고 추출 절차의 나머지 단계를 위해 워크스테이션으로 옮습니다. 추출 후 샘플을 PCR 분석을 위한 통과 창으로 전송합니다. 샘플을 제거하고 옮김한 후, 글러브박스 외부의 실험실 작업 공간을 오염제거합니다.PPE를 제거하기 전에 PPE를 제거하기 전에 장치의 공기 순환이 적절한 수의 필터링 주기에 안전하게 도달 할 때까지 기다립니다. PPE 폐기물 용기에 모든 PPE를 제거하고 폐기한 직후, 장치를 종료하기 전에 비누와 물로 실험실 싱크대에 손을 씻는다. PCR 증폭 및 검출.통과 창에서 추출된 RNA 샘플을 제거합니다. 물, 프라이머 및 프로브, 공격 혼합물 및 2X 버퍼 : 각 대상 분석기다음 구성 요소와 1.5 밀리리터 튜브에서 마스터 믹스를 준비합니다. 소용돌이와 마스터 믹스를 회전, 그 후, 스트립 튜브의 각각에 마스터 믹스를 알리 쿼트.마스터 믹스가 준비되면 PCR 키트를 권장 온도에서 보관하도록 반환합니다. 각 스트립 튜브 사이에 별도의 팁을 사용하여 각 스트립 튜브에 샘플을 추가합니다. 샘플을 1, 500 rpm에서 1분 동안 회전하면 샘플을 실시간 PCR 장치에 로드할 수 있습니다.샘플이 PCR 기기에 로드되면 한 번의 실행을 완료하는 데 약 90분이 걸립니다. 실시간 PCR 분석법은 바이러스의 강력한 검출을 위한 민감한 방법입니다. 이는 다음과 같은 표에서 볼 수 있습니다:PCR 분석 결과.결과를 수집하고 실험실을 떠나기 전에 PPE를 제거하고 다음 진단 테스트를 준비하기 위해 각 워크스테이션을 적절하게 오염 제거합니다. 대표적인 결과. 실험실 워크플로우는 개인 보호를 강조하는 다이어그램에 표시됩니다.인플루엔자의 신속한 진단 시험은 RT-PCR 분석을 통해 수행됩니다. 절차는 네 가지 주요 단계로 구성되며 프로토콜의 각 단계에 대해 개별 작업 영역이 할당됩니다. 이 프로젝트의 목표는 새로운 모듈형 빠르게 배포 가능한 실험실 시설을 검증하는 것이며, 전염병 및 발병 시 자원이 부족한 환경에서 일하는 실험실 직원을 위한 교육 프로그램을 성공적으로 개발했습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

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연구

의학

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