Name: remote laboratory management: respiratory virus diagnostics
Uploaded: 2019-04-06T14:30:00
Duration: 14 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics at JoVE.com

O conteúdo deste artigo não necessariamente reflete as opiniões ou políticas do nos departamento de saúde e serviços humanos ou das instituições afiliadas com os autores. Esta pesquisa foi apoiada por Paul G. Allen Family Foundation "Enhanced Zero-impacto, Pod inteligente de emergência". Agradecemos profundamente a todos os debates frutíferos e colaboração com os colegas de faculdade Baylor de medicina, saúde GSS, Johnson Space Center da NASA. Nós somos sinceramente gratos a Thermo Fisher Scientifics e seus representantes para um empréstimo de máquina a RT-PCR, centrífuga e pipetas automáticas para realizar um teste de diagnóstico de vírus respiratórios na instalação de laboratório remoto. Os autores são gratos a Marta Storl-Desmond e Sidney Stephen Sorrell por sua assistência na preparação de manuscrito e videografia.

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(63), e3998 (2012).</li></ol>

Baylor College of Medicine detém um pedido provisório de patente dos EUA de clínicas móveis (E.U. patente aplicação n. º 15/523.126, # 620078924). Os autores declaram que não têm nenhum interesse financeiro concorrente.

O recurso do laboratório remoto descrito acima é logisticamente orientada, expansível, rapidamente destacável, multifuncional e com base em conceitos de design centrado no humano que tem sido orientados para proteger a eficiência pessoal e espaço de trabalho de laboratório. O protocolo detalhado para diagnóstico e isolamento de vírus respiratório seguro e set-up rápido laboratório foi desenvolvido e apresentado.
Para funcionamento de equipamento ideal, as seguintes condições devem ser mantidas nas unidades laboratoriais: temperatura ambiente de 21 ± 2 ° C, temperatura admissível de 5 a 40 ° C, umidade de 14 ± 5% RH, umidade máxima admissível de 80% RH (sem condensação), e uma altitude entre 0 e 2.000 m acima do nível do mar.
Consumo de energia é um dos parâmetros mais importantes para a gestão de um laboratório fora da grade. Para equipamento de laboratório do núcleo, a eficiência de energia pode diferir 15-40%; no entanto, o consumo médio de energia é estimado aqui para entregar um serviço adequado. A maior taxa de alimentação (1.500-2.000 W) se relaciona com o condicionador de ar, o sistema de porta-luvas, a máquina PCR e o esterilizador autoclave. Considerando 8 horas de trabalho intensivo, realização do protocolo e 16 horas do laboratório de controle de ambiente, o consumo diário de energia de unidades de laboratório é de aproximadamente 36 kWh/dia para BSL-2, cerca de 43 kWh/dia para BSL-3 e 73 kWh/dia para os conectados BSL-2/BSL-3 + instalações. Para uma única unidade, recomenda-se fornecer uma fonte de energia elétrica com capacidade de poder correr/contínua ≥ 8 kW, impulso/arranque de potência ≥ 10 kW; para as instalações conectadas, poder correr/contínuo ≥12 kW e impulso/arranque ≥14 kW de potência. Observe, na instalação de laboratório BSL-3, que uma fonte de energia de backup é altamente recomendável para evitar queda de energia acidental e garantia de trabalho constante do sistema de pressão negativa e luvas durante um teste de diagnóstico.
Um gerador a gasolina psto elétrico é uma solução econômica para o fornecimento de energia de emergência. Suponha que a eficiência de combustível de um gerador a gasolina é aproximadamente 1,5 galões por hora, 100% de carga. Então, se o consumo diário médio de energia é carga de 8 horas de 40% e 16 horas de carga de 10%, exige que a unidade de laboratório BSL-2 ou BSL-3 7-9 galões de combustível por dia, correspondentemente, e as instalações conectada precisa ~ 15 galões/dia.
As unidades do laboratório remoto são projetadas para caber recursos de sistemas do painel solar da fora-grade. Os painéis solares não exigem combustível adicional e pode ser operados com alta produtividade em regiões tropicais e subtropicais da África, Ásia e América Latina devido a alta incidência de radiação solar. Atualmente, uma unidade de um sistema comercialmente disponível do painel solar permite um uso diário de energia de até 44 kWh/dia.
Independentemente do tipo de fonte de energia elétrica alternativa selecionado, filtros de eletricidade suja são fortemente recomendados e pré-instalado nas instalações de laboratório para melhorar a qualidade da energia e a proteger os equipamentos de laboratório. Manter o sistema PCR longe de fontes de radiação eletromagnética forte e não blindada porque forte radiação electromagnética pode interferir com o funcionamento do dispositivo. É também importante não use o sistema PCR, perto de forte vibração fontes, tais como uma centrífuga ou da bomba, porque vibração excessiva afetará o desempenho do instrumento. O equipamento de laboratório poderá ser instalado somente em um ambiente com poluentes não condutora, como partículas de poeira ou lascas de madeira. Certifique-se que o quarto é longe de quaisquer aberturas que podem expelir material particulado sobre os componentes do instrumento.
O uso de água de laboratório depende do número de testes de diagnóstico executando diariamente e o número de técnicos de laboratório que trabalham nas instalações. Água livre de nuclease é necessária para preparação de misturadores durante procedimento diagnóstico, incluindo a extração e teste PCR e deve ser entregues com antecedência como outros suprimentos e produtos químicos. Pelo menos 50 mL de água livre de nuclease é necessário para executar um teste de diagnóstico; o volume necessário de água livre de nuclease depende da carga de trabalho (ou seja, no número de amostras). Água destilada é necessária para executar o esterilizador autoclave. Consumo de água da autoclave em um ciclo é de 160-180 mL; a autoclave é recomendado para uso diário. A maioria dos plásticos (tubos, pontas de pipetas, etc.) são descartáveis, mas alguns são reutilizáveis e devem ser lavadas (grandes contentores, racks, etc.). Água corrente regular é usada para a lavagem de mãos entre procedimentos e seu volume mínimo é estimado em 15-20 L diariamente. A água precisa ser bombeado para a pressão; sistema de pré-filtro de sedimentos é recomendado para proteger os aparelhos de água do efeito prejudicial do sedimento e para melhorar a qualidade da água a correr.
Para armazenamento de frio, pelo menos uma geladeira de 5,1 pés cúbicos (+ 4 ° C) e um congelador de 4,9 pés cúbicos (-20 ° C a-30 ° C) são necessários em cada unidade do laboratório para armazenar amostras / RNA.
Descontaminação de laboratório inclui vários níveis: limpeza > anti-sepsia > desinfecção > esterilização. Simples limpeza pode ser realizada usando água e sabão enquanto esfrega com uma mão enluvada ou escova. Antisepsia inclui lavagem com líquido antimicrobiano química para inibir o crescimento e multiplicação de germes. Soluções de álcool (70%) pode ser usado como um líquido anti-séptico. Desinfecção é a aplicação de um produto químico líquido para eliminar quase todos os microorganismos patogênicos (exceto esporos bacterianos) em superfícies de trabalho e equipamentos. Tempo de exposição a substâncias químicas, temperatura e concentração de desinfetante são importantes. Solução de hipoclorito de sódio (0,5%), ou água sanitária, é um desinfetante eficaz em grande escala para a purificação da superfície de água e purificação. Ultravioleta irradiação germicida é um outro método de desinfecção. Uma lâmpada germicida produz luz UV-C e leva para a inativação de bactérias e vírus. Esterilização emprega um processo físico ou químico para destruir toda a vida microbiana, incluindo esporos bacterianos altamente resistentes. Esterilização pode ser realizada com um esterilizador autoclave.
Todos os resíduos de laboratório devem ser segregado no momento da geração. Lugar resíduos sólidos, não sustenido, infecciosos em sacos de lixo à prova de vazamento marcado como risco biológico. Se os resíduos gerados são nítido, devem ser colocado em recipientes resistente a perfurações. Recolha resíduos líquidos potencialmente infecciosos em recipientes de biohazard corretamente etiquetados para líquidos. Sacos e recipientes devem não ser preenchidos mais de 2/3 do volume. A eliminação de todos os produtos de lixívia deve ser classificada em seu próprio lixo designado. Resíduos de laboratório devem ser manuseado com cuidado para evitar a geração de aerossóis e ruptura dos sacos e contentores. Coleção sacos/caixas com resíduos de risco biológico deve ser seladas e externas superfícies descontaminadas após o uso com solução de hipoclorito de sódio 0,5%. Esterilizar todos os resíduos de laboratório em autoclave a 121 ° C por 30 minutos antes da incineração. Consulte o manual de funcionamento para o uso correto de autoclave. Se possível, adicione um indicador químico ou biológico para autoclave para garantir uma esterilização adequada. Todos os resíduos sólidos e líquidos autoclavado devem ser claramente rotulado como esterilizados com o ajuste, data, hora e operador. Os resíduos etiquetados então devem ser colocado em uma área segura e separada antes da incineração.
Como esperado, fluxo de trabalho de teste de diagnóstico depende da doença e o espécime. Se é recomendável para a identificação de vírus coletar amostras de sangue (por exemplo, Ebola19), alíquotas de amostra podem ser armazenadas a-20 ° C em vez de-80 ° C (necessário para vírus respiratórios). É sempre melhor levar mais de uma amostra quando a amostragem de um paciente que ao subdividir os espécimes mais tarde. Se possível, para cada tipo de amostra devem ser tomadas pelo menos duas amostras em tubos de amostra separada. Amostras devem ser subdivididas se amostragem adicional não é possível.
Se amostras alternativas não podem ser armazenadas a temperaturas adequadas (por exemplo, não congeladores estão disponíveis), cotonetes devem ser armazenadas em puro (100%) etanol ou 99% metílico (apenas aditivos de metanol). Neste caso, a ponta do cotonete deve ser colocada em um frasco com 1 a 2 mL de etanol. Observe que esses espécimes são adequados apenas para o PCR. Além disso, observe que um ensaio bem estabelecido é necessário para cada vírus específico diagnóstico8,23, e amostras de vírus desconhecidos devem ser enviadas aos laboratórios designados para mais investigações19,20, 21.
Requisitos obrigatórios e recomendados para a lista de equipamento de laboratório para testes de PCR diagnóstico do vírus respiratório devem ser reconhecidos. Tabela 3 ressalta básicos e minimamente avançados equipamentos (recomendado) e requisitos para o teste de diagnóstico de RT-PCR. Para práticas BSL-3, protecção de pressão extra negativa (por exemplo, caixa de luva) do pessoal é crucial e necessário.
Os módulos de laboratório conectado são preferíveis para aumentar o número de pessoal envolvido em testes laboratoriais e acelerar o tempo necessário para um único teste. Substituindo a extração de RNA manual demorada é possível com qPCR automatizado (por exemplo, QiaCube). Enquanto este instrumento é pesado (largura 65 cm, comprimento 62cm, altura 86 cm), pode caber no espaço de trabalho do laboratório móvel após rearranjo dos móveis em BSL-2 ou BSL-3 unidades.
Trabalho futuro será focado no desenvolvimento da realidade aumentada (AR) e treinamentos de realidade virtual (VR). Os óculos VR/AR serão usados para fornecer uma plataforma interativa para ensinar habilidades necessárias necessárias para se tornar um trabalhador de laboratório bem treinado. Dicas úteis para executar alguns procedimentos difícil, multipasso em testes de diagnóstico de laboratório serão incluídas na guia software. Esta abordagem para o treinamento de pessoal deveria melhorar a qualidade de desempenho de teste de diagnóstico e de gestão nas áreas de recursos restringida e instalações de laboratório remoto, especialmente remotas.

Diagnóstico rápido é um instrumento fundamental no controle da infecção viral oportuna, especialmente se a sintomatologia inicial é indistinguível de uma variedade de doenças de infecção. O recente surto de Ebola (2014-2015) na África Ocidental1,2, epidemias de vírus Zika (2015-2016) na Ásia e na América Latina,3,4, o surgimento do coronavirus de síndrome respiratória Oriente (MERS) infecções5,6e as epidemias de gripe invulgarmente mortal (gripe) (2017-2018) em os E.U.7,8 descobriram a necessidade de rapidamente destacáveis, instalações laboratoriais que abordam uma infinidade de problemas de comunicação, acesso, instalações, equipamentos e transporte.
Capacidade da fora-grade (poder autónomo e abastecimento de água, etc.) é crucial no rural, com recursos limitados de configurações globais de10,9,11. Nossa experiência em operações clínicas e programas globais no Baylor College of Medicine foi usada para projetar e construir um laboratório móvel baseada em recipiente com capacidade para facilitar a implantação, instalação e uso multifuncional (BSL-2 e BSL-3). Imagens desta instalação versátil, logisticamente aprimorado laboratório é mostrado na Figura 1.
Neste rapidamente destacáveis, a instalação de laboratório tem um design expansível semelhante para a clínica de contêiner descrito anteriormente (a ' emergência inteligente Pod')12,13,14, desenvolvido pela Baylor College of Medicine e patrocinado pela USAID. Uma única unidade embalada (no modo de transporte) tem as dimensões de 9 pés 9 polegadas x 8 pés x 8 pés (figura 1A, B) e se expande para uma área de 170 pés quadrados (15,75 m2) (Figura 1, D). A unidade pode ser implantada por duas a quatro pessoas em menos de dez minutos.
O laboratório remoto é construído para uma instalação de laboratório BSL-2 (Figura 2A), com um separado, modular, penhorável, unidade BSL-3 (Figura 2B) projetado para trabalho com agentes infecciosos que podem causar doenças graves ou potencialmente letais através da inalação 15. a conectividade dos módulos dois laboratório permite a otimização de fluxos de trabalho de experimentação, compartilhamento de recursos e custos (Figura 2-C-E).
Os módulos são estanques ao ar e à prova d'água para criar um confortável, abrigo móvel eficiente de energia. Aquecimento, ventilação e ar condicionado sistema (AVAC) é usado para unidades centralizadas e temperatura controlada. Em geral, o design das unidades de laboratório minimiza o consumo de energia pelo uso de suas próprias fontes de energia alternativas como painéis solares e/ou um gerador elétrico independente. Cada unidade inclui um coletor e estação de colírio, energia elétrica e conectores de água (Figura 3A-C). A plataforma de TIC oferece um opcional, baseado em tablet (telefone/Tablet Android ou iPhone/iPad) documentação app para abastecimento de acompanhamento e documentação de resultados de laboratório (Figura 3D) desenvolvido em parceria com a Baylor tecnologia da informação (TI) grupo de pesquisa que é bem experiente em trabalhar em ambientes remotos com conectividade limitada. O sistema pode funcionar usando sinais de celulares ou sem fios e permite a documentação sem conectividade, com reforços imediatos ou transmissão para um servidor baseado em nuvem segura quando a conectividade é restabelecida.
O laboratório conta com várias características de chave de controle de infecção, incluindo: (a) negativo pressão ar fluxo, (b) uma caixa de luva ou biossegurança do armário, (c) um gerenciamento de riscos de saúde sistema: um germicida ultravioleta (UV-C) sistema de iluminação usando 4 hierarquias de defesa comprovada para eliminar a 99,7% de agentes patogénicos que causam infecções relacionadas com cuidados de saúde. A instalação é facilmente desinfectada utilizando sistemas de hipoclorito de sódio (água sanitária) ou peróxido de hidrogênio para descontaminação eficiente e eficaz. 16
A garantia de resultados de laboratório de qualidade depende de um compromisso para avaliar todos os aspectos do processo de teste diagnóstico de totalidade. Aqui, apresentamos uma lista de verificação para o fluxo de trabalho laboratório BSL-2 e BSL-3 e um protocolo para teste de diagnóstico rápido de vírus respiratório. O diagnóstico proposto de doenças virais baseia-se na detecção de ADN ou RNA viral na amostra (lavagens nasais, sangue, fezes e urina, etc.) através da reação em cadeia da polimerase de reverso-transcrição em tempo real (RT-PCR). A capacidade de rapidamente estimar cargas virais em um espécime torna PCR uma ferramenta eficiente para doença viral triagem17,18. A implementação do romance, ensaios de diagnósticos moleculares permite expansão de capacidades de diagnóstico de vírus como o Ebola19,20,21, gripe8,22e tuberculose (TB )23.
O objetivo deste trabalho é validar uma instalação romance laboratório modular e rapidamente destacáveis e fornecer um guia de treinamento para pessoal de laboratório que trabalham em ambientes remotos, poucos recursos durante uma epidemia, desastres naturais ou outras emergências situação. Aqui, apresentamos um protocolo para diagnóstico de gripe respiratória neste laboratório inovador, portátil.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Autoclave Sterilizer &#39;BioClave&#39;</td>
			<td>Benchmark Scientific, Edison, NJ, USA</td>
			<td>B4000-16</td>
			<td>16 liter, Benchtop, Dims: 22x17.5x15.7 in, Fully automatic, Extremely Compact</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode Scanner</td>
			<td>Zebra Technologies ZIH Corp., Lincolnshire, IL, USA</td>
			<td>Symbol LS2208</td>
			<td>Handheld, lightweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breaker Box Panelboard Enclosure</td>
			<td>Square D (Schneider Electric), France&#160;</td>
			<td>MH62WP&#160;</td>
			<td>NEMA 3R/5/12, Dims: 20 W x 62 H x 6-1/2 in. D, Electrical distribution board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge - Microcentrifuge 17,000 x g</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75002440</td>
			<td>Holds 24 x1.5 or 2 ml tubes, Dims: 8.9x9.6x13.8 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Biological Safety Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-602-400</td>
			<td>4 Ft. Class II Type A2 Cage Changing Biological Safety Cabinet, 12&#34; Access Opening, HEPEX Pressure Duct&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class III Biological Safety Cabinet (Glove box)</td>
			<td>Germfree Laboratories, Ormond Beach, FL, USA</td>
			<td>Model #PGB-36, Serial #C-2937</td>
			<td>Glove box, Portable, 36&#34;, Class III BSC. Dims: 36x20x23.75 in, Includes 2 interior outlets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo Coolers</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-286</td>
			<td>0.5 or 1.5 ml tube benchtop coolers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer (30&#176;C freezer)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>Model ULT430A</td>
			<td>To occupy 4.9 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-126-300</td>
			<td>3 Ft. Vertical Laminar Airflow Cabinet, 8&#34; Access Opening, HEPA filter supply, 99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75004061</td>
			<td>Dims: 4.1x5.0x6.0 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>05-403-151</td>
			<td>Pipet 4-pack (2.5,10, 100 and 1,000&#956;L volume)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated &#39;Finnpipette&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4700880</td>
			<td>Pipet 4-pack (2, 20, 200 and 1,000&#956;L volume), Advanced Volume Gearing(AVG), Ultra durable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Generator</td>
			<td>Cummins Power Generation, Minneapolis, MN, USA</td>
			<td>C60 D6</td>
			<td>60 kW, 60 Hz, 1 Phase, 120/240V, Diesel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>BioMedical Solutions, Inc., Stafford, TX, USA</td>
			<td>BSI-HC-UCFS-0504W</td>
			<td>Standard Undercounter Refrigerators &#38; Freezers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>05LRAETSA&#160;</td>
			<td>To occupy&#160; 5.1 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR machine &#39;Step-one plus&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4376598</td>
			<td>Holds 96 samples, Dims: 9.7x16.8x20.2 in&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>88880017TS</td>
			<td>Dims: 6.1x8.3x3.3 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgPath-ID One-Step RT-PCR Reagents</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster City, CA, USA</td>
			<td>4387391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Koptec Pure 200 Proof</td>
			<td>Decon Labs, Inc., King of Prussia, PA, USA</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free Water</td>
			<td>Ambion, Inc., Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>AM9906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III Platinum One-Step qRT- PCR Kit</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>11732-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL cryogenic tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>03-337-7X&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>10025-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Neptune, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>Neptune, BT10XLS3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Multimax, BioExpress, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>MultiMax, P-3243-30X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>ART, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>ART, 2770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Phenix Research Products, Candler, NC, USA</td>
			<td>TS-059BR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AB custom probes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combitips</td>
			<td>Eppendorf, Hauppauge, NY, USA</td>
			<td>89232-972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrated DNA Technology (IDT) custom probes and primer</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>490003-978 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Reaction Tubes (8 tubes/strip)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4358293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical 8-Cap Strip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4323032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4311971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biohazard waste bags</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>14220-046</td>
			<td>20.3 x 30.5 cm Biohazard bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>Denville Scientific, Holliston, MA, USA</td>
			<td>G4162-250</td>
			<td>Small, meduim or large Nitrile or latex gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masks</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-663</td>
			<td>Advanced protection mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective shoes</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote laboratory management: respiratory virus diagnostics

Um pequeno aumento na recente sublinha pandemias (Ebola, Zika, MERS, gripe, etc.) a necessidade de um mais 'ágeis' coordenado resposta que aborda uma multiplicidade de questões que vão desde transporte, acesso, instalações, equipamentos e comunicação ao provedor formação. Para atender a essa necessidade, temos desenvolvido um mecanismo de laboratório inovadoras, escalável, logística avançada, móvel, para emergências e epidemias em configurações globais com recursos limitados. Utilizando um fundo em operações clínicas como um centro médico acadêmico, projetamos uma rapidamente destacáveis, modular BSL-2 e BSL-3 instalação com software de fácil utilização para monitoramento e gerenciamento de medicamentos e suprimentos em regiões remotas durante epidemias e surtos. Aqui, apresentamos nossas unidades intermodais, móvel, expansível contentor laboratório. O projeto do laboratório facilita o uso da fora-grade, minimizando o consumo de energia e permitindo que as fontes de água alternativas. Informações da unidade, plataforma de comunicação (TIC) fornece documentação baseada em tablet (i) user-friendly, (ii) aprimorado acompanhamento de pacientes e suprimentos e (iii) integrado no local de comunicação com recursos internos de Telessaúde. Para garantir qualidade em ambientes remotos, nós desenvolvemos uma lista de verificação para um fluxo de trabalho básico de laboratório e um protocolo para diagnóstico viral respiratório, usando a reação em cadeia da polimerase transcrição reversa (RT-PCR). Conforme descrito, esta abordagem inovadora e abrangente permite o fornecimento de capacidade de laboratório em ambientes globais de recursos limitados.

O objetivo deste estudo é demonstrar que as instalações de laboratório móvel de BSL-2 e BSL-3 propostas fornecem ambiente adequado permitindo testes de diagnóstico com resultados representativos vírus respiratório idêntico para testes realizados em alta qualidade laboratórios estacionários. As instalações do laboratório são projetadas para cumprir com os requisitos de teste dados nas recomendações de saúde ocupacional e segurança (SOS). Assim que a instalação do laboratório remoto é implantado (Figura 4) e todos os equipamentos e suprimentos são instalados (Figura 5), testes de laboratório podem ser executados.
Em conformidade com o laboratório os procedimentos operacionais padrão, PPE (jalecos, sapatos de proteção, luvas, avançado, máscara, óculos de proteção, etc.) adequadas para prática de BSL-2 é necessária. Para práticas BSL-3, o módulo do laboratório PCR de pressão negativa é equipado com uma caixa de luvas certificada. As unidades do laboratório são atualizadas pelo windows passagem externas para proteger o pessoal na etapa de recebimento de amostra. O processo de registro pode ser simplificado com previamente desenvolvido aplicativo baseado em tablet (Figura 3D). Outras aplicações aceitáveis que são executados em um computador portátil podem ser usadas também.
Esse teste de diagnóstico de vírus respiratórios em particular pode ser executado nos módulos de laboratório conectado para separar as etapas do processo de diagnóstico com o propósito de evitar a contaminação ou potencial interferência entre reagentes bioquímicos, que pode afetar o os resultados dos testes. Para maximizar a qualidade de diagnóstico, a prática de teste de diagnóstico rápido utiliza (i) tanto o laboratório básico BSL-2 e o quarto PCR transversal conectado (secção 3) ou (ii) os GB e PCR quartos conectados por janela pass-through (secção 4). O diagrama de fluxo de trabalho do laboratório proposto é apresentado na Figura 6 e enfatiza a proteção pessoal. O diagrama reconhece a importância de cada passo indicado para proteção de pessoal, especialmente se o pessoal de laboratório em áreas remotas é minimamente treinado.
O teste de diagnóstico rápido da gripe é realizado através da técnica de RT-PCR. O procedimento contém quatro etapas principais. Observe que os espaços de trabalho individuais são atribuídos para cada estágio do protocolo.
O primeiro passo é obter uma amostra e sub dividi-lo em várias alíquotas. As alíquotas podem ser marcadas com códigos de barras para melhorar a eficácia do controlo de dados e armazenadas no congelador para mais investigações. A segunda etapa é para inactivar uma amostra em tampão de Lise por centrifugação e aquecimento. As primeiras e segunda etapas devem ser efectuadas em armários de biossegurança. Utilize conjuntos de pipeta individual e equipamento. Um teste PCR é proposto a ser realizada na sala de PCR, se disponível. O terceiro passo é a documentação dos resultados. Quarto passo é a manutenção após o uso de equipamento e lembrete de proteção pessoal ao final do experimento.
Se o espécime é esperado para ser classificado como BSL-3 + (e.g.,Ebola, Zika, MERS, TB) a instalação de caixa de luva deve ser usada. No laboratório remoto, o quarto de GB tem sua própria passagem janela para receber amostras e um laptop ou tablet para o registo de amostra. A alíquota de amostra e inativação de vírus devem ser executadas na câmara de luvas. Iluminação UV-C é recomendada para evitar a contaminação durante o procedimento. Após a inativação de uma amostra, mais são etapas para protocolo semelhantes ao laboratório básico BSL-2 e teste de BSL-3 e segue lista de parte III (tabela 1, Figura 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig1.jpg"> Figura 1. Protótipo de instalações laboratoriais. (A, B) Modo de transporte; (C) modo implantados: lá fora; (D) modo implantados: interior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig2.jpg"> Figura 2 . Os esquemas. (A), o laboratório básico BSL-2; (B) a BSL-3 módulo inclui luvas e laboratórios PCR, que tem uma janela de passagem comum para transferência de amostra protegida; (C) instalações de laboratório conectado (A) e (B) com utilitários compartilhados. (D,E) Fotografias das unidades conectadas de lados opostos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig3.jpg"> Figura 3. (A) Interior da facilidade BSL-3 tem (1) uma janela pass-through, uma pia e (2) uma estação de colírio na entrada; (B) energia elétrica, conectores de água (C); (D) software baseado em Tablet para resultado de laboratório e controle de fornecimento de documentações. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2.jpg"> Figura 4 . Implantação das instalações laboratoriais. Instrução para painéis de desdobramento de um lado da unidade, conforme ilustrado (A-D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig5.jpg"> Figura 5 . Esquemas do laboratório conectável: (A) BSL-2 módulo 1; (B) luvas e PCR módulo 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig5large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig6.jpg"> Figura 6 . Fluxograma para um teste de RT-PCR de diagnóstico de vírus respiratórios na instalação de laboratório remoto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig6large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Laboratório remoto BSL-2</td>
			<td>Laboratório remoto BSL-3</td>
		</tr>
<tr>
<td>Parte I</td>
			<td>Parte I</td>
		</tr>
<tr>
<td>i. técnico de laboratório para entrar pela porta rotulado entrada e veste o jaleco, que está pendurado na prateleira ao lado da porta de entrada. Sapatos abertos são proibidos, avançada máscara e óculos de proteção são incentivados.</td>
			<td>i. técnico de laboratório de a olhar para a janela da caixa de luva de fora da unidade para segurar a pressão negativa é ativado. (Bola-de-rosa deve estar visível na unidade para mostrar que a pressão negativa está trabalhando).</td>
		</tr>
<tr>
<td>II. o analista de lavar as mãos na pia, Coloque luvas descartáveis e começar com a ingestão de amostras.</td>
			<td>II. se a pressão negativa está funcionando, técnico de laboratório para entrar pela única porta e vestir o jaleco, que está pendurado na prateleira ao lado da porta de entrada.  Sapatos abertos são proibidos, avançada máscara e óculos de proteção são desejáveis.</td>
		</tr>
<tr>
<td>III. as amostras que foram mergulhadas em banho de hipoclorito antes beija na janela de passagem estão sentados na passagem para o técnico de laboratório.</td>
			<td>III. laboratório técnico para lavar as mãos na pia, Coloque luvas descartáveis, EPI e começar com a ingestão de amostras.</td>
		</tr>
<tr>
<td>IV. recebido na recepção da amostra.</td>
			<td>IV. as amostras que foram previamente mergulhadas em banho de hipoclorito antes beija na passagem através da janela estão sentados na passagem para o técnico de laboratório.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Parte II</td>
			<td>v. recebido na recepção da amostra.</td>
		</tr>
<tr>
<td>v. dependendo do procedimento diagnóstico, espécimes mudou-se para o gabinete de biossegurança e inativada.</td>
			<td>Parte II</td>
		</tr>
<tr>
<td>vi. espécimes preparados para microscopia, centrifugação ou apodrece.</td>
			<td>vi. as amostras inactivadas no porta-luvas.</td>
		</tr>
<tr>
<td>executar testes de diagnóstico VII. apropriado.</td>
			<td>VII. executadas para isolamento de ácidos nucleicos de amostras.</td>
		</tr>
<tr>
<td>VIII. armazenar amostras em geladeira de 4° C ou congelador apropriado.</td>
			<td>VIII. após a extração, espécimes mudou-se para a janela de passagem.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Parte III</td>
			<td>IX. o analista entra pela entrada no lado do PCR da unidade (pressão positiva).</td>
		</tr>
<tr>
<td>IX. Use a pia para coloração & lavagem de itens.</td>
			<td>x. técnico de laboratório, vestir a bata de laboratório da prateleira ao lado da entrada, lave as mãos na pia, colocar as luvas.</td>
		</tr>
<tr>
<td>x. usar portátil & counterpace para realizar análises e documentação.</td>
			<td>XI. receber amostras de quarto de luvas em janela de passagem.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XI. Esterilize equipamentos executando autoclave.</td>
			<td>XII. se necessário amostras preparadas em fluxo Laminar.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XII. descarte de resíduos biológicos perigosos num recipiente de resíduos de risco biológico.</td>
			<td>XIII. apropriado diagnóstico testes executados.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XIII. lavar as mãos na pia.</td>
			<td>XIV. armazenar espécimes em refrigerador de 4° C ou no congelador apropriado.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XIV. Desligue jaleco volta na prateleira.</td>
			<td>Parte III</td>
		</tr>
<tr>
<td>XV. saia pela mesma porta.</td>
			<td>XV. Use a pia para coloração & lavagem de itens.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVI. usar portátil & counterpace para realizar análises e documentação.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVII. transferir os frascos para janela de passagem à sala PCR e esterilizar equipamentos executando autoclave.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVIII. descarte de resíduos biológicos perigosos num recipiente de resíduos de risco biológico.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XIX. lavar as mãos na pia.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XX. saia pela mesma porta de entrada.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 1. Lista de verificação para o fluxo de trabalho do diagnóstico PCR.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="3">Manutenção e calibração</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Sistemas PCR em tempo real</td>
			<td>Mensal</td>
			<td>Realizar calibrações de fundo todo mês</td>
		</tr>
<tr>
<td>18 meses</td>
			<td>Executar o plano de fundo, espacial e tingir calibrações em 18 meses deth</td>
		</tr>
<tr>
<td>Centrífuga</td>
			<td>1 ano</td>
			<td>Calibrar de rotações por minuto e temperatura através de serviços de calibração interno ou externo</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Caixa de luva</td>
			<td>Diário</td>
			<td>Inspecione visualmente os elementos, nomeadamente danos às superfícies expostas do HEPA Filtros, luvas, anéis e mangueiras. Certifique-se de grampos de duto são firme e no lugar. Realize teste de pressão de vazamento. Teste o alarme de pressão.</td>
		</tr>
<tr>
<td>6 meses</td>
			<td>Mudar o filtro HEPA</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 ano</td>
			<td>Calibrar o sistema</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Autoclave</td>
			<td>Semanal</td>
			<td>Limpar o tanque de água e racks com detergente neutro não abrasivo</td>
		</tr>
<tr>
<td>3 meses</td>
			<td>Calibrar o temporizador e bitolas</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 ano ou a cada 50 ciclos</td>
			<td>Inspecionar, limpe cuidadosamente, testar e calibrar</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Geladeira e Freeezer</td>
			<td>6 meses</td>
			<td>Verificar o motor, bobinas de evaporador ventilador, aspiração de bobinas de condensação e condensador filtros e substitua as pilhas conforme necessário</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 ano</td>
			<td>Calibrar o congelador através de serviços de calibração interna ou externa</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 2. Manutenção de equipamentos de PCR em tempo real.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Obrigatório</td>
			<td>Recomendado</td>
		</tr>
<tr>
<td>Jaleco, sapatos de proteção, luvas</td>
			<td>Jaleco, sapatos de proteção, luvas, máscaras, óculos</td>
		</tr>
<tr>
<td>Frigorífico congelador-20 ° C, 4 ° C</td>
			<td>Frigorífico 4 ° C, congelador-20 ° C, congelador-80 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>Um conjunto de pipetas automáticas</td>
			<td>Três conjuntos de pipetas automáticas</td>
		</tr>
<tr>
<td>Centrífuga, agitador, thermocycler</td>
			<td>Sistema robótico</td>
		</tr>
<tr>
<td>Máquina de RT-PCR, banho de gelo</td>
			<td>RT-PCR com controle de temperatura, livre de gelo do refrigerador</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sacos de resíduos de risco biológico</td>
			<td>Autoclave para eliminar resíduos de risco biológico</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 3. Requisitos mínimos para o vírus respiratório de RT-PCR diagnóstico teste BSL-2.

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Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

Um laboratório rapidamente destacáveis, fora da rede foi projetado e construído para configurações globais remotas, com recursos limitados. São explorados as características e aspectos críticos dos módulos de laboratório avançado logisticamente, expansível, multifuncional. Uma lista de verificação para um fluxo de trabalho básico de laboratório e um protocolo para um teste de diagnóstico viral respiratório são desenvolvidos e apresentados.

Gerenciamento remoto do laboratório: Diagnósticos de vírus respiratório

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

Um aumento nas recentes epidemias, como zika e ebola, destacou a necessidade de uma resposta mais coordenada e ágil em escala global. Para isso, projetamos uma unidade de laboratório inovadora, escalável e intramodal para ser usada em áreas restritas a recursos em todo o mundo durante esses surtos. Aqui apresentamos nossos laboratórios de contêineres intramodal, expansível e móvel.E no artigo a seguir, apresentamos nossa abordagem BSL-2 e BSL-3 para o diagnóstico do vírus da gripe respiratória. Diagnóstico rápido do vírus da influenza por RCT-PCR. Antes de se preparar para entrar na unidade de laboratório instalada, esteja ciente de que todos os requisitos de segurança BSL-2 devem ser contabilizados.Isso inclui vestir-se com equipamentos de proteção individual adequados, lavar as mãos, usar luvas e descontaminar quaisquer espaços de trabalho que você planeja usar. Note que, se você usar alvejante para descontaminar seu espaço de trabalho e suprimentos, você também deve usar 70% de etanol para limpar todas as áreas expostas ao alvejante, pois a alvejante pode se misturar com outros produtos químicos no espaço de trabalho para criar vapores tóxicos. Descarte todos os produtos alvejantes em sua própria lixeira designada.À medida que os amostras são retiradas dos pacientes, elas são transportadas para o laboratório do campo ou clínica e passadas para o técnico de laboratório através da janela de passagem. Esta janela não pode ser aberta de ambos os lados. Na janela de passagem BSL-2, a superfície externa dos tubos contendo amostras deve ser completamente desinfetada com alvejante e deixada sozinha para sentar por dois minutos.Abra a janela de passagem e colete as amostras a serem registradas. Limpe todas as amostras que tenham restos de alvejante, e limpe o interior da janela de passagem com alvejante, seguido de solução de 70% de etanol. Adicione códigos de barras a cada tubo de amostra e seus quatro tubos vazios designados para alíquotas.Mova suas amostras para o capô da ventilação. Escaneie o código de barras em cada tubo e certifique-se de que as informações adequadas de identificação da amostra são exibidas no sistema baseado em tablet ou na tela do laptop. Completar o processo de inscrição.Alíquota de amostra. Uma vez rotulados tubos de ensaio, use um armário de biossegurança classe II certificado e descontaminado para colher alíquotas de amostras. Ao tomar alíquotas, certifique-se de usar pipetas frescas estéreis ou descartáveis para cada amostra e descartá-las em recipientes de resíduos de risco biológico, a fim de evitar contaminação cruzada.Certifique-se de que todos os tubos estão bem selados e fechados. Utilize uma alíquota por amostra para extração imediata. Guarde quaisquer outras alíquotas no congelador para uso futuro.Antes de se deslocar para a estação de trabalho, limpe todas as superfícies e equipamentos do espaço de trabalho com alvejante seguido de solução de 70% de etanol. Uma vez que suas amostras de PCR com código de barras tenham sido alitadas, mova-as para uma estação de trabalho designada para extração. Prepare a mistura de RNA da operadora AVL tampão para a etapa de lise.A mistura mestre de amostra e tampão de lise deve ser mantida em temperatura ambiente. Rotule um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro. Coloque a ponta da pipeta em 560 microliters.Aplique uma ponta de pipeta limpa. Adicione um tampão de lise a cada tubo. Descarte a ponta no recipiente de resíduos.Em seguida, pegue sua amostra de alíquota de cpr. Coloque-o no tubo tampão de lise preparado designado para aliquot um, e repita isso para quaisquer amostras adicionais. Descarte a ponta da pipeta velha e aplique uma ponta de pipeta limpa.Aplique uma ponta de pipeta limpa. Adicione 140 microliters de um tampão ao tubo de controle. Feche cada tubo com segurança.Vórtice de pulso por 15 segundos. Repita com quaisquer alíquotas ou amostras adicionais. Microcentrifuugar cada amostra por cinco segundos.Incubar em temperatura ambiente por 10 minutos. Após 10 minutos, centrifufique brevemente seus tubos para remover quaisquer gotas do interior da tampa de cada tubo. Adicione 560 microliters de etanol a amostra.Troque sua ponta de pipeta. Repita com quaisquer amostras restantes ou adicionais. Feche cada tubo de amostra com segurança.Vórtice de pulso cada amostra por 15 segundos. Microcentrifuugar as amostras por cinco segundos. Obtenha um tubo de coleta de dois mililitros limpos.Adicione as colunas de giro. Rotule-as para combinar com suas amostras. Transfira 630 microliters da amostra para corresponder à coluna em conformidade.Segurem suas tampas. Mova-se para a centrífuga. Distribua uniformemente suas amostras na centrífuga.Centrifugar a 6000 g's por um minuto para remover o tampão de lise. Volte para a estação de trabalho. Substitua seus tubos de coleta.Adicione o tampão de lise restante e repita a etapa de centrifugação. Descarte os tubos originais de amostra de alíquota, após os quais, elimine o elunato e lave a coluna de giro com o buffer AW1. Repita este procedimento com cada amostra ou qualquer amostra adicional.Fixar as tampas em cada amostra e centrífuga a seis g's. Repita com o segundo tampão de lavagem AW2 a 20 g's. Por fim, coloque a coluna em um tubo limpo de 1,5 mililitro.Abra a coluna e adicione 60 microliters de ave tampão. Incubar em temperatura ambiente por um minuto e centrífuga a seis g's por um minuto. A amostra está pronta para análise de PCR.Sob as condições BSL-3, o protocolo experimental permanecerá o mesmo, mas as medidas de segurança terão precedentes acima de qualquer outra coisa. Antes de entrar no laboratório BSL-3, olhe através da janela transparente para ter certeza de que a pressão negativa foi estabelecida na unidade de porta-luvas. Será evidente que a pressão negativa foi estabelecida quando a bola na parede é visível.Uma vez estabelecida pressão negativa abra a porta e entre na unidade. Lave imediatamente as mãos e, em seguida, prossiga para a lista de verificação de EPI. Prossiga para colocar o EPI na seguinte ordem: sob luvas, vestido, capas de sapato, máscara, escudo facial, segundo par de luvas.Ligue a máquina e deixe a pressão no porta-luvas estabilizar. Use uma solução de spray de alvejante para descontaminar todas as áreas e suprimentos que você planeja usar dentro e fora do porta-luvas. Descarte quaisquer resíduos de alvejante em um recipiente somente para alvejante.Use uma solução de 70% de etanol para limpar em qualquer área onde o alvejante tenha sido usado. Transfira suas amostras pela janela de passagem. As amostras devem ter sido pulverizadas com solução de alvejante e deixadas sozinhas por pelo menos um minuto no pass-through antes de recebê-las dentro da unidade BSL-3.Em seguida, receba suas amostras dentro da unidade BSL-3 e limpe-as completamente antes de prosseguir para a etapa de registro e rotulagem. Uma vez que as amostras sejam registradas e os tubos sejam rotulados, coloque as amostras no porta-luvas através da bandeja da câmara de ar. Não abra as duas portas ao mesmo tempo.Abra e feche cada porta em duas etapas diferentes para precauções de segurança. Uma vez que as amostras tenham sido movidas com segurança para o interior do porta-luvas, siga os mesmos passos descritos anteriormente para criar alíquotas de amostra no porta-luvas. Uma vez que as amostras são aliquosas mova as amostras para o recipiente hermético.Solução de alvejante spray dentro do porta-luvas para descontaminar tubos e todas as outras superfícies. Espere cinco minutos e, em seguida, aplique 70% de solução de etanol para lavar o alvejante. Após a descontaminação completa, mova apenas as amostras necessárias para a análise do PCR para a lise, voltem para o porta-luvas.No porta-luvas realizar apenas a etapa de lise do procedimento de extração. Uma vez que as células tenham sido liseadas, sele firmemente as tampas de cada amostra e coloque-as na passagem de câmara de ar pressurizada. Descontaminar o porta-luvas novamente com alvejante seguido de solução de 70% de etanol.Mova as amostras para fora do porta-luvas e transfira-as para a estação de trabalho para as etapas restantes do procedimento de extração. Após a extração, transfira suas amostras para a janela de passagem para análise de PCR. Depois que as amostras tiverem sido removidas e transferidas, descontamine seu espaço de trabalho de laboratório fora do porta-luvas.Antes de remover seu EPI, aguarde até que a circulação de ar na unidade tenha atingido com segurança um número adequado de ciclos de filtragem antes de começar a remover seu EPI. Imediatamente após a remoção e eliminação de todos os EPI no recipiente de resíduos PPE, proceda à lavagem das mãos na pia do laboratório com água e sabão antes de sair da unidade. Amplificação e detecção do PCR.Remova as amostras de RNA extraídas da janela de passagem. Prepare uma mistura mestre em um tubo de 1,5 mililitro com os seguintes componentes para cada ensaio direcionado: água, primers e sondas, mistura de ataque e tampão 2X. Vórtice e gire sua mistura mestre, depois disso, aliquot a mistura mestre em cada um dos tubos de tira.Devolva o kit PCR ao armazenamento nas temperaturas recomendadas assim que a mistura principal tiver sido preparada. Adicione as amostras a cada um dos tubos de tira usando uma ponta separada entre cada tubo de tira. Gire as amostras a 1.500 rpm por um minuto, após a qual as amostras estão prontas para serem carregadas na unidade PCR em tempo real.Uma vez que as amostras são carregadas no instrumento PCR, leva aproximadamente 90 minutos para completar uma execução. O ensaio PCR em tempo real é um método sensível para detecção robusta do vírus. Isso pode ser visto na tabela rotulada:Resultados Analisados por PCR.Antes de coletar seus resultados e sair do laboratório, remova o EPI e descontamine adequadamente cada estação de trabalho em preparação para o próximo teste diagnóstico. Resultados representativos. O fluxo de trabalho laboratorial está representado no diagrama que enfatiza a proteção pessoal.O teste de diagnóstico rápido da gripe é realizado através da análise RT-PCR. O procedimento consiste em quatro etapas principais e espaços de trabalho individuais são atribuídos para cada etapa do protocolo. O objetivo deste projeto é validar uma nova instalação de laboratório modular rapidamente implantável e temos feito isso com sucesso, bem como desenvolver programas de treinamento para pessoal de laboratório que trabalha em ambientes de baixos recursos durante epidemias e surtos.

Research

JoVE Journal

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