Name: remote laboratory management: respiratory virus diagnostics
Uploaded: 2019-04-06T14:30:00
Duration: 14 min 56 s
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El contenido de este artículo no reflejan necesariamente las opiniones o políticas de la nosotros Departamento de salud y servicios humanos o de las instituciones afiliadas con los autores. Esta investigación fue apoyada por Paul G. Allen Family Foundation "Mejorado cero impacto, Pod inteligente de emergencia". Agradecemos profundamente todas las discusiones fructíferas y colaboración con los colegas de Baylor College of Medicine, GSS salud, Johnson Space Center de la NASA. Estamos sinceramente agradecidos a Thermo Fisher científicos y sus representantes para un préstamo de la máquina de RT-PCR, centrífuga y pipetas automáticas para llevar a cabo una prueba de diagnóstico de virus respiratorios en las instalaciones del laboratorio remoto. Los autores están agradecidos a Marta Storl-Desmond y Sidney Stephen Sorrell por su ayuda en la preparación del manuscrito y la videografía.

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Baylor College of Medicine posee una solicitud de patente provisional de los Estados Unidos para la clínica móvil (los E.E.U.U. patente aplicación no. 15/523.126, 620078924 #). Los autores declaran que ellos no tienen ningún interés financiero competencia.

La instalación de laboratorios remotos descrita anteriormente es logísticamente orientado, ampliable, rápidamente desplegable, multifuncional y en base a conceptos de diseño centrado en humanos que han sido orientados para proteger la eficacia personal y espacio de trabajo de laboratorio. El protocolo detallado de configuración de laboratorio rápido y aislamiento de virus respiratorio seguro y diagnóstico fue desarrollado y presentado.
Equipo óptimo funcionamiento, las unidades de laboratorio deben mantenerse las siguientes condiciones: temperatura de 21 ± 2 ° C, temperatura permitida de 5 a 40 ° C, humedad de 14 ± 5% hr, humedad relativa máxima permitida de 80% RH (sin condensación), y una altitud entre 0 y 2.000 m sobre el nivel del mar.
Consumo de energía es uno de los parámetros más importantes para la gestión de un laboratorio fuera de la red. Para equipo de laboratorio la base, la eficiencia de energía puede variar 15-40%; sin embargo, consumo de energía promedio se estima aquí para ofrecer un servicio adecuado. La tasa más alta de potencia (1.500-2.000 W) se relaciona con el acondicionador de aire, el sistema de la guantera, la máquina PCR y el Esterilizador autoclave. Teniendo en cuenta 8 horas de trabajo intensivo, llevando a cabo el protocolo y 16 horas del laboratorio de control de medio ambiente, el consumo diario de unidades de laboratorio es de aproximadamente 36 kWh/día para BSL-2, unos 43 kWh/día para BSL-3 y 73 kWh/día para la conexión BSL-2/BSL-3 + instalaciones. Para una sola unidad, recomendamos proporcionar una fuente de energía eléctrica con capacidad de poder correr continuo ≥8 kW, oleada/a partir de energía ≥ 10 kW; para la instalación conectada, energía funcionamiento continuo ≥12 kW y a partir la oleada/≥14 kilovatio de la energía. Tenga en cuenta, en las instalaciones del laboratorio BSL-3, que una fuente de energía de copia de seguridad se recomienda evitar apagón accidental y garantizar el trabajo estable de la guantera y el sistema de presión negativa durante una prueba de diagnóstico.
Un generador eléctrico de motor con gasolina es una solución rentable para el suministro de energía de emergencia. Asumen que la eficiencia de combustible de un generador gasolina es aproximadamente 1,5 galones por hora al 100% de carga. Entonces, si el consumo diario promedio es 8 horas de 40% de la carga y 16 horas de carga de 10%, requiere de la unidad de laboratorio BSL-2 o BSL-3 7-9 galones de combustible por día, correspondientemente, y la instalación conectada necesita ~ 15 gal/día.
Las unidades de laboratorio remoto están diseñadas para adaptarse a las capacidades de los sistemas de la apagado-rejilla solar panel. Paneles solares no requieren combustible adicional y puede ser operados con alta productividad en las regiones tropicales y subtropicales de África, Asia y América Latina debido a la alta irradiación solar. En la actualidad, una unidad de un sistema de paneles solares disponibles en el mercado permite un uso diario de energía de hasta 44 kWh/día.
Independientemente del tipo de selección de fuente alternativa de energía eléctrica, electricidad sucia filtros son fuertemente recomendados y previamente en las instalaciones de laboratorio para mejorar la calidad de la energía y proteger el equipo de laboratorio. Mantener el sistema PCR lejos de fuentes de radiación electromagnética, fuerte y sin protección debido a fuerte radiación electromagnética puede interferir con el correcto funcionamiento del dispositivo. También es importante no utilizar el sistema de polimerización en cadena cerca de vibración fuerte fuentes, como una centrífuga o bomba debido a la vibración excesiva afectará el desempeño del instrumento. El equipo de laboratorio sólo puede instalarse en un entorno que tiene contaminantes, como partículas de polvo o virutas de madera. Asegúrese de que la habitación está lejos de cualquier tomas de aire que pueden expulsar partículas de material en los componentes del instrumento.
El uso de agua de laboratorio depende del número de pruebas de diagnóstico ejecutar diariamente y el número de técnicos de laboratorio trabajan en la instalación. Agua libre de nucleasa es necesario para la preparación de los mezcladores durante procedimiento de diagnóstico incluyendo extracción y prueba de PCR y debe ser entregado por adelantado como otros materiales y productos químicos. Al menos 50 mL de agua libre de nucleasa se necesita para ejecutar una prueba de diagnóstico; el volumen requerido de agua libre de nucleasa depende de la carga de trabajo (es decir, el número de muestras). Agua destilada es necesario ejecutar el Esterilizador autoclave. Consumo de agua del autoclave en un ciclo es de 160-180 mL; la autoclave se recomienda para uso diario. La mayoría de los plásticos (tubos, pipetas, etc.) es desechable, pero algunos son reutilizables y necesitan ser lavada (grandes contenedores, estantes, etcetera). Se utiliza agua corriente para lavarse las manos entre los procedimientos y su volumen mínimo se estima que diariamente 15-20 L. El agua debe ser bombeada para presión; sistema de prefiltro de sedimentos se recomienda proteger los aparatos de agua de los efectos dañinos de sedimentos y mejorar la calidad del agua.
Para almacenamiento en frío, por lo menos un 5,1 pies cúbicos refrigerador (+ 4 ° C) y un congelador de 4,9 pies cúbicos (-20 ° C a-30 ° C) se requieren en cada unidad del laboratorio para almacenar muestras / RNA.
Descontaminación del laboratorio incluye varios niveles: limpieza > antisepsia > desinfección > esterilización. Fácil limpieza puede realizarse utilizando agua y jabón y frotando con un cepillo o mano enguantada. La antisepsia incluye lavado con producto químico líquido antimicrobiano para inhibir el crecimiento y la multiplicación de gérmenes. Soluciones de alcohol (70%) puede ser utilizado como un antiséptico líquido. Desinfección es la aplicación de un producto químico líquido para eliminar los microorganismos patógenos casi todos (excepto esporas bacterianas) en las superficies de trabajo y equipo. Tiempo de exposición química, temperatura y concentración de desinfectante son importantes. Solución de hipoclorito de sodio (0.5%), o cloro, es un desinfectante eficaz a gran escala para la purificación del agua y purificación superficial. La irradiación germicida ULTRAVIOLETA es otro método de desinfección. Una lámpara germicida UV-C luz y lleva a la inactivación de bacterias y virus. La esterilización emplea un procedimiento físico o químico para destruir toda la vida microbiana, incluyendo esporas bacterianas altamente resistentes. Puede realizarse la esterilización con un esterilizador de la autoclave.
Todos los desechos de laboratorio deben estar separados en el punto de generación. Residuos sólidos, no aguda, infecciosa lugar en bolsas de basura a prueba de fugas marcan como biohazard. Si los residuos generados es agudo, se colocarán en envases resistentes a la punción. Recoger residuos potencialmente infecciosos líquidos en envases correctamente etiquetados biohazard para líquidos. Bolsas y contenedores no se deben rellenar más de 2/3 del volumen. La disposición de todos los productos blanqueadores debe ser clasificada en su propio cubo de basura designado. Los desechos de laboratorio deben ser manipulado con cuidado para evitar la generación de aerosoles y rotura de bolsas o contenedores. Colección bolsas/recipientes con residuos de riesgo biológico debe ser selladas y externas superficies descontaminadas después de su uso con solución de hipoclorito de sodio al 0,5%. Esterilizar todos los desechos de laboratorio en autoclave a 121 ° C durante 30 minutos antes de la incineración. Consulte el manual de funcionamiento para el uso correcto del autoclave. Si es posible, añadir un indicador químico o biológico a la autoclave para esterilización adecuada. Todos los residuos sólidos y líquidos autoclave deben etiquetarse claramente como esterilizado con el establecimiento, fecha, hora y operador. Luego se colocarán los residuos etiquetado en un área seguro y separado antes de la incineración.
Como era de esperar, flujo de trabajo de prueba de diagnóstico depende de la enfermedad y la muestra. Si se recomienda para que la identificación de virus a obtener muestras de sangre (por ejemplo, Ebola,19), partes alícuotas de la muestra pueden almacenarse a-20 ° C en lugar de-80 ° C (necesaria para virus respiratorios). Siempre es mejor tomar más de un ejemplar al muestreo de un paciente que al subdividir a muestras más adelante. Si es posible, para cada tipo de muestra se debe por lo menos dos muestras en tubos de muestras separadas. Las muestras deben estar subdivididas si muestreo adicional no es posible.
Si muestras alternativas no debe almacenarse a temperaturas adecuadas (por ejemplo, no congeladores están disponibles), hisopos deben almacenarse en puro (100%) etanol o 99% alcohol desnaturalizado (sólo aditivos de metanol). En este caso, se debe poner la punta del hisopo en un frasco con 1-2 mL de etanol. Tenga en cuenta que estas muestras son convenientes solamente para PCR. También, tenga en cuenta que un ensayo bien establecido es necesario para cada virus en particular diagnóstico8,23, y muestras de virus desconocidos deben enviarse a los laboratorios asignados para más investigaciones19,20, 21.
Requisitos obligatorios y recomendados a la lista de equipo de laboratorio para pruebas de PCR diagnóstico virus respiratorio deben ser reconocidos. Tabla 3 pone de relieve básico y mínimamente avanzado equipo (recomendado) y los requisitos para la prueba de diagnóstico de RT-PCR. Para la práctica de BSL-3, protección de presión extra negativa (por ejemplo, guantera) del personal es fundamental y necesario.
Los módulos de laboratorio conectado están preferibles aumentar el número de personal involucrado en las pruebas de laboratorio y acelerar el tiempo necesario para una sola prueba. Sustitución de la extracción de RNA manual desperdiciador de tiempo es posible con qPCR automatizado (por ejemplo, QiaCube). Mientras que este instrumento es engorroso (ancho 65 cm, largo 62 cm, altura de 86 cm), que cabe el espacio de trabajo de laboratorio móvil después de cambio de muebles en BSL-2 o BSL-3 unidades.
Trabajo futuro se centrará en el desarrollo de realidad aumentada (AR) y entrenamiento de realidad virtual (VR). Las gafas de AR/VR se utilizará para proporcionar una plataforma interactiva para enseñar habilidades necesarias para convertirse en un trabajador capacitado del laboratorio. Consejos útiles para realizar algunos de los procedimientos difíciles, varios pasos en pruebas de laboratorio de diagnóstico se incluirán en la guía de software. Este enfoque de formación del personal debe mejorar la calidad de la prueba de diagnóstico de desempeño y gestión en las instalaciones de laboratorios remotos, especialmente remotas y áreas de recursos limitados.

Diagnóstico rápido es un instrumento fundamental en el control de la infección viral oportuna, especialmente si la sintomatología temprana es comparable con una variedad de enfermedades de infección. El reciente brote de Ébola (2014-2015) en África occidental1,2, epidemias de virus Zika (2015-2016) en Asia y América Latina3,4, la aparición del coronavirus del síndrome respiratorio Oriente (MERS) infecciones5,6y las epidemias inusualmente mortal gripe (influenza) (2017-2018) en los Estados Unidos7,8 descubrieron la necesidad de instalaciones de laboratorio rápidamente desplegables, que se ocupan de una multitud de temas de transporte, acceso, instalaciones, equipos y comunicación.
Capacidad fuera de la red (potencia autónoma y suministro de agua, etc.) es crucial en la configuración global rural, con recursos limitados9,10,11. Nuestra experiencia en operaciones clínicas y programas globales en el Baylor College of Medicine fue utilizado para diseñar y construir un laboratorio móvil basada en contenedores con capacidades de fácil implementación, configuración y uso de múltiples funciones (BSL-2 y BSL-3). Imágenes de esta instalación versátil, logísticamente mejorado de laboratorio se muestra en la figura 1.
Este rápidamente desplegables, laboratorio tiene un diseño extensible similar a la clínica de envase previamente descritos (la ' emergencia inteligente Pod')12,13,14, desarrollado por el Colegio Baylor de medicina y patrocinado por USAID. Una sola unidad embalada (en modo de transporte) tiene las dimensiones de 9 pies 9 pulgadas x 8 pies x 8 pies (figura 1A, B) y se expande a un área de 170 pies cuadrados (15,75 m2) (figura 1, D). La unidad puede implementarse de dos a cuatro personas en menos de diez minutos.
El laboratorio fue creado para una instalación de laboratorio BSL-2 (figura 2A) con un separado, modular, acoplables, BSL-3 unidad (figura 2B) diseñada para trabajo con agentes infecciosos que pueden causar enfermedad grave o potencialmente letal por inhalación 15. la conectividad de los módulos de dos laboratorio permite la optimización de flujos de trabajo de experimentación, intercambio de recursos y ahorro (Figura 2C-E).
Los módulos son herméticas y estancas para crear un cómodo, refugio móvil eficiente de energía. Calefacción, ventilación y aire acondicionado (HVAC) sistema se utiliza para las unidades centralizadas y temperatura controlada. En general, el diseño de las unidades de laboratorio minimiza el consumo de energía por el uso de sus propias fuentes de energía alternativa como paneles solares y un generador eléctrico independiente. Cada unidad incluye un lavabo y estación Lavaojos, energía eléctrica y conexiones de agua (Figura 3A-C). La plataforma de las TIC ofrece un opcional, basado en el tablet (phone/Tablet Android o iPhone/iPad) documentación de aplicación para el seguimiento de la fuente y documentación del resultado de laboratorio (figura 3D) desarrollado en colaboración con la tecnología de información de Baylor (IT) Grupo de investigación que es bien experimentado en el trabajo en entornos remotos con conectividad limitada. El sistema puede funcionar mediante señales de celulares o inalámbricas y permite documentación sin conexión, con copia de seguridad inmediata o transmisión a un servidor basado en nube segura cuando la conexión se restablece.
El laboratorio cuenta con varias características clave de control de infecciones, incluyendo: (a) negativo de presión flujo, (b) una caja de guante o bioseguridad gabinete, (c) una gestión de riesgos de salud sistema de aire: un germicida ULTRAVIOLETA (UV-C) alumbrado usando 4 jerarquías de defensa probada para eliminar el 99,7% de los patógenos causantes de infecciones relacionadas con el cuidado de la salud. La instalación se desinfecta fácilmente utilizando peróxido de hidrógeno o hipoclorito de sodio (lejía) sistemas de descontaminación eficiente y eficaz. 16
El aseguramiento de la calidad de resultados de laboratorio depende de un compromiso para evaluar todos los aspectos del proceso de pruebas de diagnóstico conjunto. Aquí, presentamos una lista de control para el flujo de trabajo de laboratorio BSL-2 y BSL-3 y un protocolo para prueba de diagnóstico rápido de virus respiratorios. El proyecto diagnóstico de enfermedades virales se basa en la detección de ARN o del ADN viral en muestras (lavado nasal, sangre, heces y orina, etc.) a través de la reacción en cadena de polimerasa de transcripción inversa en tiempo real (RT-PCR). La habilidad para estimar rápidamente la carga viral en una muestra hace PCR una herramienta eficaz para la enfermedad viral detección17,18. La aplicación de la novela, ensayos de diagnóstico moleculares permite la expansión de las capacidades de diagnóstico para virus como el Ebola19,20,21,8,de influenza22y tuberculosis (TB )23.
El objetivo de este trabajo es validar una instalación del nuevo laboratorio modular y despliegue rápido y proporcionar a una guía de entrenamiento para el personal de laboratorio trabajan en entornos remotos, de bajos recursos durante una epidemia, desastre natural u otra emergencia situación. Aquí, presentamos un protocolo para el diagnóstico de gripe respiratoria en este laboratorio portátil, innovador.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Autoclave Sterilizer &#39;BioClave&#39;</td>
			<td>Benchmark Scientific, Edison, NJ, USA</td>
			<td>B4000-16</td>
			<td>16 liter, Benchtop, Dims: 22x17.5x15.7 in, Fully automatic, Extremely Compact</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode Scanner</td>
			<td>Zebra Technologies ZIH Corp., Lincolnshire, IL, USA</td>
			<td>Symbol LS2208</td>
			<td>Handheld, lightweight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Breaker Box Panelboard Enclosure</td>
			<td>Square D (Schneider Electric), France&#160;</td>
			<td>MH62WP&#160;</td>
			<td>NEMA 3R/5/12, Dims: 20 W x 62 H x 6-1/2 in. D, Electrical distribution board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge - Microcentrifuge 17,000 x g</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75002440</td>
			<td>Holds 24 x1.5 or 2 ml tubes, Dims: 8.9x9.6x13.8 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II Biological Safety Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-602-400</td>
			<td>4 Ft. Class II Type A2 Cage Changing Biological Safety Cabinet, 12&#34; Access Opening, HEPEX Pressure Duct&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class III Biological Safety Cabinet (Glove box)</td>
			<td>Germfree Laboratories, Ormond Beach, FL, USA</td>
			<td>Model #PGB-36, Serial #C-2937</td>
			<td>Glove box, Portable, 36&#34;, Class III BSC. Dims: 36x20x23.75 in, Includes 2 interior outlets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo Coolers</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-286</td>
			<td>0.5 or 1.5 ml tube benchtop coolers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer (30&#176;C freezer)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>Model ULT430A</td>
			<td>To occupy 4.9 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Cabinet</td>
			<td>NuAire, Inc., Plymouth, MN, USA</td>
			<td>NU-126-300</td>
			<td>3 Ft. Vertical Laminar Airflow Cabinet, 8&#34; Access Opening, HEPA filter supply, 99.99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>75004061</td>
			<td>Dims: 4.1x5.0x6.0 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>05-403-151</td>
			<td>Pipet 4-pack (2.5,10, 100 and 1,000&#956;L volume)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes automated &#39;Finnpipette&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4700880</td>
			<td>Pipet 4-pack (2, 20, 200 and 1,000&#956;L volume), Advanced Volume Gearing(AVG), Ultra durable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Generator</td>
			<td>Cummins Power Generation, Minneapolis, MN, USA</td>
			<td>C60 D6</td>
			<td>60 kW, 60 Hz, 1 Phase, 120/240V, Diesel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>BioMedical Solutions, Inc., Stafford, TX, USA</td>
			<td>BSI-HC-UCFS-0504W</td>
			<td>Standard Undercounter Refrigerators &#38; Freezers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>05LRAETSA&#160;</td>
			<td>To occupy&#160; 5.1 Cubic feet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RT-PCR machine &#39;Step-one plus&#39;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4376598</td>
			<td>Holds 96 samples, Dims: 9.7x16.8x20.2 in&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>88880017TS</td>
			<td>Dims: 6.1x8.3x3.3 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AgPath-ID One-Step RT-PCR Reagents</td>
			<td>Applied Biosystems, Foster City, CA, USA</td>
			<td>4387391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol Koptec Pure 200 Proof</td>
			<td>Decon Labs, Inc., King of Prussia, PA, USA</td>
			<td>V1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free Water</td>
			<td>Ambion, Inc., Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>AM9906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Viral RNA Mini Kit</td>
			<td>Qiagen, Hilden, Germany</td>
			<td>52906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript III Platinum One-Step qRT- PCR Kit</td>
			<td>Invitrogen, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>11732-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL cryogenic tubes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>03-337-7X&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>10025-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Neptune, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>Neptune, BT10XLS3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Multimax, BioExpress, VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>MultiMax, P-3243-30X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>ART, Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>ART, 2770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Phenix Research Products, Candler, NC, USA</td>
			<td>TS-059BR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AB custom probes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Combitips</td>
			<td>Eppendorf, Hauppauge, NY, USA</td>
			<td>89232-972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrated DNA Technology (IDT) custom probes and primer</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom probes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>490003-978 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Fast Reaction Tubes (8 tubes/strip)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4358293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical 8-Cap Strip</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4323032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA</td>
			<td>4311971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biohazard waste bags</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>14220-046</td>
			<td>20.3 x 30.5 cm Biohazard bags</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>Denville Scientific, Holliston, MA, USA</td>
			<td>G4162-250</td>
			<td>Small, meduim or large Nitrile or latex gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab coat</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masks</td>
			<td>VWR, Radnor, PA, USA</td>
			<td>414004-663</td>
			<td>Advanced protection mask</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective shoes</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Customizable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote laboratory management: respiratory virus diagnostics

Un aumento reciente destaca las pandemias (Ébola, Zika, MERS, gripe, etc.) la necesidad de un más 'ágil,' coordinada respuesta que aborda una multitud de cuestiones que van desde transporte, acceso, instalaciones, equipos y comunicación al proveedor formación. Para abordar esta necesidad, hemos desarrollado un centro de laboratorio innovadoras, escalables, logística mejorada, móvil, para emergencias y epidemias en configuración global con recursos limitados. Utilizando un fondo en operaciones clínicas como un centro médico académico, hemos diseñado un despliegue rápido, modular BSL-2 y BSL-3 instalaciones con fácil de usar software para seguimiento y administración de medicamentos y suministros en regiones remotas durante las epidemias y brotes. Aquí, presentamos nuestras unidades de laboratorio contenedor intermodal, móvil y extensible. El diseño del laboratorio facilita el uso fuera de la red minimizando el consumo de energía y permitiendo que las fuentes de agua alternas. Información de la unidad plataforma de la comunicación (TIC) proporciona documentación basados en tablet i fácil de usar, (ii) mejora el seguimiento de los pacientes y suministros y (iii) integrado en el sitio comunicación con telesalud incorporado capacidades. Para asegurar la calidad en entornos remotos, hemos desarrollado una lista de verificación para un flujo de trabajo de laboratorio básico y un protocolo para el diagnóstico viral respiratoria mediante reacción en cadena de polimerasa de transcripción inversa (RT-PCR). Como se describe, permite que este enfoque innovador e integral para la provisión de capacidad de laboratorio en entornos globales de recursos limitados.

El objetivo de este estudio es demostrar que las instalaciones de laboratorio móvil BSL-2 y BSL-3 propuestas proporcionan un ambiente adecuado que permite virus respiratorio pruebas diagnósticas con resultados representativos idéntica a pruebas realizadas en alta calidad Laboratorios fijos. Las instalaciones del laboratorio están diseñadas para cumplir con los requisitos de la prueba dados en las recomendaciones de salud ocupacional y seguridad (OHS). Tan pronto como la instalación de laboratorios remotos es desplegada (figura 4) y todo el equipo y suministros están instalados (figura 5), se pueden ejecutar pruebas de laboratorio.
Según laboratorio procedimientos operativos estándar, PPE (batas de laboratorio, calzado de seguridad, guantes, avanzada de la mascarilla, gafas protectoras, etc.) apropiado para práctica de BSL-2 se requiere. Práctica BSL-3, el módulo de laboratorio PCR de presión negativa está equipado con una caja de guante certificada. Las unidades de laboratorio se actualizan por windows paso externos para proteger al personal en la etapa de recepción de la muestra. El proceso de registro se puede simplificar con la aplicación previamente desarrollada de tableta (figura 3D). Otras aplicaciones aceptables que se ejecutan en un ordenador portátil se pueden utilizar también.
Esta prueba de diagnóstico de virus respiratorios en particular se puede realizar en los módulos de laboratorio conectados para separar los pasos del procedimiento de diagnóstico a propósito para evitar contaminación o potencial interferencia entre reactivos bioquímicos, que pueden afectar la resultados de la prueba. Para maximizar la calidad del diagnóstico, la práctica de la prueba de diagnóstico rápido utiliza (i) tanto el laboratorio básico BSL-2 y la habitación PCR de travesía conectado (sección 3) o (ii) las habitaciones GB y PCR conectadas por ventana de paso a través (sección 4). El diagrama de flujo de trabajo de laboratorio propuesto se presenta en la figura 6 y enfatiza la protección personal. El esquema reconoce la importancia de cada paso indicado para la protección del personal, especialmente si el personal de laboratorio en áreas remotas es mínimamente entrenado.
La prueba de diagnóstico rápido de influenza se logra mediante la técnica de RT-PCR. El procedimiento contiene cuatro pasos principales. Tenga en cuenta que los espacios de trabajo individuales se asignan para cada etapa del protocolo.
El primer paso es obtener una muestra y subdividir en varias alícuotas. Las alícuotas pueden ser marcadas con códigos de barras para mejorar la eficacia del control de datos y almacenadas en el congelador para posteriores investigaciones. El segundo paso es desactivar una muestra en tampón de lisis por centrifugación y calefacción. Los pasos primeros y segundo deben llevarse a cabo en gabinetes de bioseguridad. Utilizar la pipeta individual y aparatos. Se propone una prueba PCR que se realizará en la sala de la polimerización en cadena, si está disponible. El tercer paso es la documentación de los resultados. Paso cuatro es el mantenimiento después del uso del equipo y recordatorio de la protección personal al final del experimento.
Si la muestra debe ser clasificado como BSL-3 + (e.g.,Ebola, Zika, MERS, TB) la instalación de la caja de guante debe ser utilizada. En el laboratorio, la sala de GB tiene su propia ventana de paso a través para recibir muestras y un ordenador portátil o tablet para el registro de la muestra. La alícuota de muestra y la inactivación del virus deben realizarse en el compartimiento de la guantera. Luz UV-C se recomienda para evitar la contaminación durante el procedimiento. Después de la inactivación de una muestra, más pasos de protocolo son similares a los del laboratorio básico BSL-2 y BSL-3 test y sigue lista parte III (tabla 1, figura 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig1.jpg"> Figura 1. Prototipo de laboratorio centro. (A, B) Modo de transporte; (C) modo de desplegar: exterior; (D) modo de desplegar: interior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig2.jpg"> Figura 2 . Esquemas. (A) del laboratorio básico BSL-2; (B) módulo de la BSL-3 incluye la guantera y laboratorios de PCR, que tienen una ventana de paso común para la transferencia del espécimen protegido; (C) laboratorios conectado (A) y (B) con servicios compartidos. (D,E) Fotografías de los aparatos conectados desde lados opuestos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig3.jpg"> Figura 3. (A) Interior de las instalaciones del BSL-3 tiene (1) una ventana de paso, un fregadero y (2) una estación de lavaojos en la entrada; (B) conectores de corriente eléctrica, conectores de agua (C); (D) software basado en la tableta para suministro de resultado de laboratorio y seguimiento de documentación. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2.jpg"> Figura 4 . Implementación de las instalaciones del laboratorio. Instrucción para los paneles de despliegue en un lado de la unidad como se muestra (A, D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig4v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> 
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig5.jpg"> Figura 5 . Esquemas del laboratorio conectable: (A) BSL-2 módulo 1; Modulo de guantera (B) y la PCR 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> 
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59188/59188fig6.jpg"> Figura 6 . Diagrama de flujo para una prueba de RT-PCR diagnóstico de virus respiratorios en las instalaciones del laboratorio remoto. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59188/59188fig6large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Laboratorio remoto BSL-2</td>
			<td>Laboratorio remoto BSL-3</td>
		</tr>
<tr>
<td>Parte I</td>
			<td>Parte I</td>
		</tr>
<tr>
<td>i. tecnología de laboratorio entrar por la puerta con la etiqueta de entrada y en bata de laboratorio, que cuelga en la rejilla junto a la puerta de entrada. Están prohibidos los zapatos abiertos, avanzada de la mascarilla y gafas protectoras se anima.</td>
			<td>i. tecnología de laboratorio buscar en la ventana de la caja de guante de fuera de la unidad para asegurar la presión negativa se activa. (Bola rosa debería ser visible en la unidad para mostrar que la presión negativa está funcionando).</td>
		</tr>
<tr>
<td>II. laboratorio lavarse las manos en el fregadero, colóquese guantes desechables y comenzar con la toma de muestras.</td>
			<td>II. Si la presión negativa está funcionando, tecnología de laboratorio entra por la única puerta y ponerse la bata de laboratorio, que cuelga en la rejilla junto a la puerta de entrada.  Están prohibidos los zapatos abiertos, avanzada de la máscara y gafas protectoras son deseables.</td>
		</tr>
<tr>
<td>III. las muestras que se sumergieron en el baño de hipoclorito antes de haber caído en la ventana de paso a través se sientan en paso a través de tecnología de laboratorio.</td>
			<td>III. laboratorio lavarse las manos en el fregadero, colóquese guantes desechables, PPE y comenzar con la toma de muestras.</td>
		</tr>
<tr>
<td>IV. recibido en la recepción de la muestra.</td>
			<td>IV. las muestras que fueron previamente sumergidas en baño de hipoclorito antes de haber caído en el paso a través de la ventana están sentados en paso a través de tecnología de laboratorio.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Parte II</td>
			<td>v. recibido en la recepción de la muestra.</td>
		</tr>
<tr>
<td>v. según el procedimiento de diagnóstico, las muestras se trasladó a gabinete de bioseguridad e inactivo.</td>
			<td>Parte II</td>
		</tr>
<tr>
<td>VI. las muestras preparado para microscopia, centrífuga o pudriciones.</td>
			<td>VI. las muestras inactivadas en guantera.</td>
		</tr>
<tr>
<td>ejecutan pruebas diagnóstico VII. adecuadas.</td>
			<td>VII. las muestras para aislamiento de ácidos nucleicos.</td>
		</tr>
<tr>
<td>VIII. almacenar las muestras en 4° C refrigerador o congelador apropiada.</td>
			<td>VIII. después de la extracción, las muestras se trasladó a paso ventana.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Parte III</td>
			<td>tecnología IX. laboratorio entra a través de la entrada en lateral de la polimerización en cadena de unidad (presión positiva).</td>
		</tr>
<tr>
<td>IX. usar el fregadero para tinción y lavado de artículos.</td>
			<td>x. tecnología de laboratorio para poner en bata del estante junto a la entrada, lávese las manos en el fregadero, colóquese guantes.</td>
		</tr>
<tr>
<td>x. utilizar laptop & counterpace para realizar análisis y documentación.</td>
			<td>XI. recibir las muestras de guantera habitación en ventana de paso a través.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XI. esterilizar el equipo mediante la ejecución de autoclave.</td>
			<td>XII. Si muestras necesarias preparado en gabinete de Flujo Laminar.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XII. disponer de los residuos con riesgo biológico en el contenedor de residuos de riesgo biológico.</td>
			<td>ejecutan pruebas de diagnóstico XIII. apropiado.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XIII. Lávese las manos en el fregadero.</td>
			<td>XIV. almacenar las muestras en 4° C refrigerador o congelador apropiada.</td>
		</tr>
<tr>
<td>XIV. colgar bata nuevamente sobre la rejilla.</td>
			<td>Parte III</td>
		</tr>
<tr>
<td>XV. salir por la misma puerta.</td>
			<td>XV. utilizar el fregadero para tinción y lavado de artículos.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVI. utilizar laptop & counterpace para realizar análisis y documentación.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVII. transferencia de viales en la ventana de paso a la habitación PCR y esterilizar equipo ejecutando el autoclave.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XVIII. desechar los residuos con riesgo biológico en el contenedor de residuos de riesgo biológico.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XIX. Lávese las manos en el fregadero.</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>XX. salir por la misma puerta de entrada.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 1. Lista de verificación para el flujo de trabajo de diagnóstico PCR.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="3">Mantenimiento y calibraciones</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Sistemas PCR en tiempo real</td>
			<td>Mensual</td>
			<td>Realizar calibraciones de fondo cada mes</td>
		</tr>
<tr>
<td>18 meses</td>
			<td>Realizar fondo espacial y calibraciones del tinte cada 18 meses deth</td>
		</tr>
<tr>
<td>Centrifugadora</td>
			<td>1 año</td>
			<td>Calibrar para las revoluciones por minuto y temperatura a través de servicios de calibración interna o externa</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Caja de guante</td>
			<td>Diario</td>
			<td>Inspeccione visualmente los elementos, particularmente por los daños a las superficies expuestas de los filtros HEPA, guantes, empaques y mangueras. Asegúrese de que las abrazaderas de conducto son ajustadas y en su lugar. Realizar prueba de presión de fuga. Prueba de la alarma de presión.</td>
		</tr>
<tr>
<td>6 meses</td>
			<td>Cambiar el filtro HEPA</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 año</td>
			<td>Calibrar el sistema</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Autoclave</td>
			<td>Semanal</td>
			<td>Limpiar el tanque de agua y rejillas con un detergente suave no abrasivo</td>
		</tr>
<tr>
<td>3 meses</td>
			<td>Calibrar el contador de tiempo e indicadores</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 año o cada 50 ciclos</td>
			<td>Inspeccionar, limpiar, probar y calibrar</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">Refrigerador y frigobar</td>
			<td>6 meses</td>
			<td>Comprobar las bobinas del evaporador motor, ventilador, aspirar filtros de condensador y bobinas de condensación y reemplace las pilas según sea necesario</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 año</td>
			<td>Calibrar el congelador a través de servicios de calibración interna o externa</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 2. Mantenimiento de equipo de PCR en tiempo real.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Obligatorio</td>
			<td>Recomienda</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bata de laboratorio, calzado de seguridad, guantes</td>
			<td>Bata de laboratorio, calzado de seguridad, guantes, mascarillas, gafas</td>
		</tr>
<tr>
<td>Refrigerador 4 ° C, congelador-20 ° C</td>
			<td>Refrigerador 4 ° C, congelador-20 ° C, congelador de-80 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>Un juego de pipetas automáticas</td>
			<td>Tres sistemas de pipetas automáticas</td>
		</tr>
<tr>
<td>Centrífuga, agitador, termociclador</td>
			<td>Sistema robótico</td>
		</tr>
<tr>
<td>Máquina de RT-PCR, baño de hielo</td>
			<td>RT-PCR con control de temperatura, sin hielo refrigerador</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bolsas de residuos biopeligrosos</td>
			<td>Autoclave para eliminar residuos de riesgo biológico</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 3. Requisitos mínimos para el virus respiratorio de RT-PCR diagnóstico prueba de BSL-2.

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Tenga en cuenta que, si utiliza lejía para descontaminar su espacio de trabajo y suministros, también debe usar 70%etanol para limpiar todas las áreas expuestas a la lejía, ya que la lejía puede mezclarse con otros productos químicos en el espacio de trabajo para crear humos tóxicos. Deseche todos los productos de lejía en su propia papelera designada.A medida que se toman hisopos de muestra de los pacientes, se transportan a las instalaciones del laboratorio desde el campo o la clínica y se pasan al técnico de laboratorio a través de la ventana de paso. Esta ventana no se puede abrir desde ambos lados. En la ventana de paso BSL-2, la superficie externa de los tubos que contienen muestras debe desinfectarse completamente con lejía y dejarse sola para que se siente durante dos minutos.Abra la ventana de paso a través y recoja los ejemplos que se van a registrar. Limpie las muestras que tengan restos de lejía y limpie el interior de la ventana de paso con lejía, seguido de una solución de etanol al 70%. Agregue códigos de barras a cada tubo de muestra y sus cuatro tubos vacíos designados para las alícuotas.Mueva sus muestras a la campana de ventilación. Escanee el código de barras en cada tubo y asegúrese de que la información de identificación de muestra adecuada aparezca en el sistema basado en tabletas o en la pantalla del portátil. Complete el proceso de registro.Muestra alícuota. Una vez etiquetados los tubos de ensayo, utilice un gabinete de bioseguridad de clase II certificado y descontaminado para tomar alícuotas de muestras. Al tomar alícuotas, asegúrese de utilizar pipetas estériles o desechables frescas para cada muestra y desechelas en contenedores de residuos biopeligrosos para evitar la contaminación cruzada.Asegúrese de que todos los tubos estén herméticamente sellados y cerrados. Utilice una alícuota por espécimen para la extracción inmediata. Almacene cualquier otra alícuota en el congelador para su uso futuro.Antes de pasar a la estación de trabajo, limpie todas las superficies y equipos del espacio de trabajo con lejía seguido de una solución de etanol al 70%. Una vez que sus muestras de PCR con código de barras hayan sido alícuotas, muévalas a una estación de trabajo designada para su extracción. Prepare la mezcla de ARN portadorA AVL del tampón para el paso de la lelisis.La mezcla maestra del tampón de muestra y de la lesis debe mantenerse a temperatura ambiente. Etiquetar un tubo centrífugo de 1,5 mililitros. Ajuste la punta de la pipeta a 560 microlitros.Aplique una punta de pipeta limpia. Agregue un búfer de lysis a cada tubo. Deseche la punta en el contenedor de residuos.A continuación, tome su muestra de alícuota de PCR. Colóquelo en el tubo tampón de lelisis preparado designado para aliquot uno, y repita esto para cualquier muestra adicional. Deseche la punta de pipeta vieja y aplique una punta de pipeta limpia.Aplique una punta de pipeta limpia. Agregue 140 microlitros de un tampón al tubo de control. Cierre cada tubo de forma segura.Pulso-vórtice durante 15 segundos. Repita con cualquier alícuota o muestra adicional. Microcentrífuga cada muestra durante cinco segundos.Incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después de 10 minutos centrifugar brevemente los tubos para retirar cualquier gota del interior de la tapa de cada tubo. Añadir 560 microlitros de etanol el de la muestra.Cambia la punta de la pipeta. Repita con cualquier muestra restante o adicional. Cierre cada tubo de muestra de forma segura.Pulso-vórtice cada muestra durante 15 segundos. Microcentrífuir las muestras durante cinco segundos. Obtenga un tubo de recogida limpio de dos mililitros.Agregue las columnas de giro. Etiquétalos para que coincidan con tus muestras. Transfiera 630 microlitros de la muestra para que coincidan con la columna en consecuencia.Aseguren sus gorras. Muévete a la centrífuga. Distribuya uniformemente sus muestras en la centrífuga.Centrifugar a 6000 g durante un minuto para eliminar el búfer de lelisis. Vuelva a la estación de trabajo. Sustituya los tubos de recogida.Agregue el búfer de lelisis restante y repita el paso de centrifugación. Deseche los tubos de muestra alícuota originales, después de lo cual, deseche el eluido y lave la columna de centrifugado con el tampón AW1. Repita este procedimiento con cada muestra o cualquier muestra adicional.Asegure las tapas de cada muestra y centrífuga a seis g. Repita con el segundo tampón de lavado AW2 a 20 g. Por último, coloque la columna en un tubo limpio de 1,5 mililitros.Abra la columna y añada 60 microlitros de TAMPón AVE. Incubar a temperatura ambiente durante un minuto y centrifugar a seis g durante un minuto. La muestra ya está lista para el análisis de PCR.Bajo las condiciones BSL-3 el protocolo experimental seguirá siendo el mismo, pero las medidas de seguridad tendrán precedentes por encima de cualquier otra cosa. Antes de entrar en el laboratorio BSL-3, mire a través de la ventana transparente para asegurarse de que se ha establecido presión negativa en la unidad de guantera. Será evidente que se ha establecido una presión negativa cuando la bola en la pared es visible.Una vez establecida la presión negativa, abra la puerta y entre en la unidad. Lávese inmediatamente las manos y luego proceda a su lista de verificación de EPI. Proceda a ponerse el EPP en el siguiente orden: debajo de guantes, bata, fundas de zapatos, máscara, protector facial, segundo par de guantes.Encienda la máquina y deje que la presión de la guantera se estabilice. Utilice una solución de rociado de lejía para descontaminar todas las áreas y suministros que planea usar dentro y fuera de la guantera. Deseche cualquier producto de desecho de lejía en un recipiente solo para lejía.Utilice una solución de 70% de etanol para limpiar sobre cualquier área donde se haya utilizado lejía. Transfiera sus muestras a través de la ventana de paso a través. Las muestras deben haber sido rociadas con solución de lejía y dejarlas solas durante al menos un minuto en el paso antes de recibirlas dentro de la unidad BSL-3.A continuación, reciba sus muestras dentro de la unidad BSL-3 y límpielos a fondo antes de continuar con el paso de registro y etiquetado. Una vez que las muestras estén registradas y los tubos hayan sido etiquetados, coloque las muestras en la guantera a través de la bandeja de la esclusa. No abra ambas puertas a la vez.Abra y cierre cada puerta en dos pasos diferentes para las precauciones de seguridad. Una vez que las muestras se hayan movido de forma segura al interior de la guantera, siga los mismos pasos descritos anteriormente para crear alícuotas de muestra en la guantera. Una vez que las muestras estén alíotas, mueva las muestras al recipiente hermético.Rocíe la solución de lejía dentro de la guantera para descontaminar los tubos y todas las demás superficies. Espere cinco minutos y luego aplique una solución de 70% de etanol para lavar la lejía. Después de la descontaminación completa mover sólo las muestras necesarias para el análisis de PCR para la lysis volver a la guantera.En la guantera realice sólo el paso de lysis del procedimiento de extracción. Una vez que las células han sido lanizadas, selle firmemente las tapas de cada muestra y colóquelas en el pasaje de la esclusa presurizada. Descontamine la guantera de nuevo con lejía seguida de una solución de etanol al 70%.Saque las muestras de la guantera y transfiéralas a la estación de trabajo para los pasos restantes del procedimiento de extracción. Después de la extracción, transfiera sus muestras a la ventana de paso a través para el análisis de PCR. Después de que las muestras hayan sido retiradas y transferidas, descontamine el espacio de trabajo del laboratorio fuera de la guantera.Antes de retirar el EPP, espere hasta que la circulación de aire en la unidad haya alcanzado de forma segura un número adecuado de ciclos de filtrado antes de comenzar a extraer el EPP. Inmediatamente después de retirar y desechar todo el EPP en el contenedor de residuos de EPI, proceda a lavarse las manos en el fregadero del laboratorio con agua y jabón antes de salir de la unidad. Amplificación y detección de PCR.Retire las muestras de ARN extraídas de la ventana de paso a través. Prepare una mezcla maestra en un tubo de 1,5 mililitros con los siguientes componentes para cada ensayo dirigido: agua, imprimaciones y sondas, mezcla de ataque y tampón 2X. Vórtice y girar su mezcla maestra, después de lo cual, aliquot la mezcla maestra en cada uno de los tubos de tira.Vuelva a colocar el kit de PCR en el almacenamiento a las temperaturas recomendadas una vez preparada la mezcla maestra. Agregue las muestras a cada uno de los tubos de tira utilizando una punta separada entre cada tubo de tira. Gire las muestras a 1.500 rpm durante un minuto, después de lo cual las muestras están listas para ser cargadas en la unidad de PCR en tiempo real.Una vez que las muestras se cargan en el instrumento PCR, se tarda aproximadamente 90 minutos en completar una ejecución. El ensayo de PCR en tiempo real es un método sensible para la detección robusta del virus. Esto se puede ver en la tabla etiquetada: Resultados analizados PCR.Antes de recoger los resultados y salir del laboratorio, retire el EPP y descontamine adecuadamente cada estación de trabajo como preparación para la siguiente prueba de diagnóstico. Resultados representativos. El flujo de trabajo de laboratorio se representa en el diagrama que hace hincapié en la protección personal.La prueba de diagnóstico rápido de la gripe se realiza mediante el análisis RT-PCR. El procedimiento consta de cuatro pasos principales y se asignan espacios de trabajo individuales para cada etapa del protocolo. El objetivo de este proyecto es validar una nueva instalación modular de laboratorio de despliegue rápido y lo hemos hecho con éxito, así como desarrollar programas de capacitación para el personal de laboratorio que trabaja en entornos de bajos recursos durante epidemias y brotes.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Investigación

Medicina

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