Name: intramucosal inoculation of squamous cell carcinoma cells in mice for tumor immune profiling and treatment response assessment
Uploaded: 2019-04-22T14:00:00
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プロトコールに従った、承認機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) コロラド大学デンバー (プロトコル # 00250) の動物のすべてのプロシージャを行った。
1. 腫瘍細胞培養
注:B4B8、LY2 の細胞株は同所性同種各種腫瘍を生成に使用された: B4B8 腫瘍細胞が発がん性物質変換粘膜由来ケラチノ サイト (BALB/C マウス) から11から派生...

<ol>
	<li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worldwide+trends+in+incidence+rates+for+oral+cavity+and+oropharyngeal+cancers.">Worldwide trends in incidence rates for oral cavity and oropharyngeal cancers.</a> Journal of Clinical Oncology. 31 (36), 4550-4559 (2013).</li><li>Ang, K. K., Sturgis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+as+a+marker+of+the+natural+history+and+response+to+therapy+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Human papillomavirus as a marker of the natural history and response to therapy of head and neck squamous cell carcinoma.</a> Seminars in Radiation Oncology. 22 (2), 128-142 (2012).</li><li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eighth+Edition+AJCC+Cancer+Staging+Manual:+Continuing+to+build+a+bridge+from+a+population-based+to+a+more+&amp;#34;personalized&amp;#34;+approach+to+cancer+staging.">The Eighth Edition AJCC Cancer Staging Manual: Continuing to build a bridge from a population-based to a more &amp;#34;personalized&amp;#34; approach to cancer staging.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (2), 93-99 (2017).</li><li>Salley, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+carcinogenesis+in+the+cheek+pouch+of+the+Syrian+hamster.">Experimental carcinogenesis in the cheek pouch of the Syrian hamster.</a> Journal of Dental Research. 33 (2), 253-262 (1954).</li><li>Morris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+experimental+carcinogensis+in+the+hamster+cheek+pouch.">Factors influencing experimental carcinogensis in the hamster cheek pouch.</a> Journal of Dental Research. 40, 3-15 (1961).</li><li>MacDonald, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+epithelial+dysplasia+in+hamster+cheek+pouch+carcinogenesis+and+human+oral+mucosa.">Comparison of epithelial dysplasia in hamster cheek pouch carcinogenesis and human oral mucosa.</a> Journal of Oral Pathology &amp; Medicine. 10 (3), 186-191 (1981).</li><li>Hawkins, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4NQO+carcinogenesis:+a+mouse+model+of+oral+cavity+squamous+cell+carcinoma.">4NQO carcinogenesis: a mouse model of oral cavity squamous cell carcinoma.</a> Head &amp; Neck. 16 (5), 424-432 (1994).</li><li>Tang, X. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice.">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10 (1 Pt 1), 301-313 (2004).</li><li>Vered, M., Yarom, N., Dayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4NQO+oral+carcinogenesis:+animal+models,+molecular+markers+and+future+expectations.">4NQO oral carcinogenesis: animal models, molecular markers and future expectations.</a> Oral Oncology. 41 (4), 337-339 (2005).</li><li>Bornstein, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smad4+loss+in+mice+causes+spontaneous+head+and+neck+cancer+with+increased+genomic+instability+and+inflammation.">Smad4 loss in mice causes spontaneous head and neck cancer with increased genomic instability and inflammation.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (11), 3408-3419 (2009).</li><li>Thomas, G. R., Chen, Z., Oechsli, M. N., Hendler, F. J., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+expression+of+CD80+is+a+marker+for+increased+tumorigenicity+in+a+new+murine+model+of+oral+squamous-cell+carcinoma.">Decreased expression of CD80 is a marker for increased tumorigenicity in a new murine model of oral squamous-cell carcinoma.</a> International Journal of Cancer. 82 (3), 377-384 (1999).</li><li>Yuspa, S. H., Hawley-Nelson, P., Koehler, B., Stanley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+transformation+markers+in+differentiating+epidermal+cell+lines+in+culture.">A survey of transformation markers in differentiating epidermal cell lines in culture.</a> Cancer Research. 40 (12), 4694-4703 (1980).</li><li>Chen, Z., Smith, C. W., Kiel, D., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+variants+derived+following+in+vivo+tumor+progression+of+an+in+vitro+transformed+squamous+cell+carcinoma+line+acquire+a+differential+growth+advantage+requiring+tumor-host+interaction.">Metastatic variants derived following in vivo tumor progression of an in vitro transformed squamous cell carcinoma line acquire a differential growth advantage requiring tumor-host interaction.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 15 (5), 527-537 (1997).</li><li>Euhus, D. M., Hudd, C., LaRegina, M. C., Johnson, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+measurement+in+the+nude+mouse.">Tumor measurement in the nude mouse.</a> Journal of Surgical Oncology. 31 (4), 229-234 (1986).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Yushkevich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=User-guided+3D+active+contour+segmentation+of+anatomical+structures:+significantly+improved+efficiency+and+reliability.">User-guided 3D active contour segmentation of anatomical structures: significantly improved efficiency and reliability.</a> NeuroImage. 31 (3), 1116-1128 (2006).</li><li>Dutta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+tumour+necrosis,+tumour+proliferation,+local+and+systemic+inflammation,+microvessel+density+and+survival+in+patients+undergoing+potentially+curative+resection+of+oesophageal+adenocarcinoma.">The relationship between tumour necrosis, tumour proliferation, local and systemic inflammation, microvessel density and survival in patients undergoing potentially curative resection of oesophageal adenocarcinoma.</a> Britisch Journal of Cancer. 106 (4), 702-710 (2012).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+lines+and+human+tumors:+a+rational+approach+to+preclinical+model+selection.">Genomic analysis of head and neck squamous cell carcinoma cell lines and human tumors: a rational approach to preclinical model selection.</a> Molecular Cancer Research. 12 (4), 571-582 (2014).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionizing+radiation+sensitizes+tumors+to+PD-L1+immune+checkpoint+blockade+in+orthotopic+murine+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Ionizing radiation sensitizes tumors to PD-L1 immune checkpoint blockade in orthotopic murine head and neck squamous cell carcinoma.</a> OncoImmunology. 6 (10), e1356153 (2017).</li><li>Ferris, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Further+evaluations+of+nivolumab+(nivo)+versus+investigator&#8217;s+choice+(IC)+chemotherapy+for+recurrent+or+metastatic+(R/M)+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+(SCCHN):+CheckMate+141.">Further evaluations of nivolumab (nivo) versus investigator&#8217;s choice (IC) chemotherapy for recurrent or metastatic (R/M) squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN): CheckMate 141.</a> Journal of Clinical Oncology. 34, (2016).</li><li>Ferris, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nivolumab+for+Recurrent+Squamous-Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck.">Nivolumab for Recurrent Squamous-Cell Carcinoma of the Head and Neck.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1856-1867 (2016).</li><li>Harrington, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nivolumab+versus+standard,+single-agent+therapy+of+investigator's+choice+in+recurrent+or+metastatic+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+(CheckMate+141):+health-related+quality-of-life+results+from+a+randomised,+phase+3+trial.">Nivolumab versus standard, single-agent therapy of investigator's choice in recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (CheckMate 141): health-related quality-of-life results from a randomised, phase 3 trial.</a> The Lancet Oncology. 18 (8), 1104-1115 (2017).</li><li>Kiyota, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+open-label,+Phase+III+clinical+trial+of+nivolumab+vs.+therapy+of+investigator's+choice+in+recurrent+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck:+A+subanalysis+of+Asian+patients+versus+the+global+population+in+checkmate+141.">A randomized, open-label, Phase III clinical trial of nivolumab vs. therapy of investigator's choice in recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck: A subanalysis of Asian patients versus the global population in checkmate 141.</a> Oral Oncology. 73, 138-146 (2017).</li><li>Ling, D. C., Bakkenist, C. J., Ferris, R. L., Clump, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Immunotherapy+in+Head+and+Neck+Cancer.">Role of Immunotherapy in Head and Neck Cancer.</a> Seminars in Radiation Oncology. 28 (1), 12-16 (2018).</li><li>Perri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma:+Biological+bases+and+therapeutic+implications.">Radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma: Biological bases and therapeutic implications.</a> Head &amp; Neck. 37 (5), 763-770 (2015).</li><li>Yamamoto, V. N., Thylur, D. S., Bauschard, M., Schmale, I., Sinha, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Overcoming radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 63, 44-51 (2016).</li><li>Bonner, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+cetuximab+for+locoregionally+advanced+head+and+neck+cancer:+5-year+survival+data+from+a+phase+3+randomised+trial,+and+relation+between+cetuximab-induced+rash+and+survival.">Radiotherapy plus cetuximab for locoregionally advanced head and neck cancer: 5-year survival data from a phase 3 randomised trial, and relation between cetuximab-induced rash and survival.</a> The Lancet Oncology. 11 (1), 21-28 (2010).</li><li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+EphB4-Ephrin-B2+Signaling+Enhances+Response+to+Cetuximab-Radiation+Therapy+in+Head+and+Neck+Cancers.">Inhibition of EphB4-Ephrin-B2 Signaling Enhances Response to Cetuximab-Radiation Therapy in Head and Neck Cancers.</a> Clinical Cancer Research. 24 (18), 4539-4550 (2018).</li><li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+radiosensitization+in+EphB4+receptor-expressing+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinomas.">Enhancing radiosensitization in EphB4 receptor-expressing Head and Neck Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 6, 38792 (2016).</li><li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+radiation+and+immunotherapy:+a+new+systemic+therapy+for+solid+tumors?.">Combining radiation and immunotherapy: a new systemic therapy for solid tumors?.</a> Cancer Immunology Research. 2 (9), 831-838 (2014).</li><li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+radiotherapy+and+PD-L1+blockade+is+mediated+by+TIM-3+upregulation+and+regulatory+T-cell+infiltration.">Resistance to radiotherapy and PD-L1 blockade is mediated by TIM-3 upregulation and regulatory T-cell infiltration.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li></ol>

腫瘍微小環境の特性を厳密な解析から腫瘍の進行・転移のメカニズムの理解と効果的な治療法の開発のための重要な戦略を表しています。頭頸部がんは頭頸部領域内の複数の解剖学的サイトから発信することができます複雑な病気です。疾患のメカニズムを理解し、療法を改善する最大の障害は、人間 HNSCCs の積極的な転移の性質のようなマウスのマウス細胞の不足をしています。さらに、?...

各種は全世界で 5 番目に多い悪性腫瘍で、600,000 以上の患者と毎年診断1。化学療法と放射線療法 (RT) を含む積極的な治療にもかかわらずヒトパピ ローマ ウイルス (HPV) 感染なし各種患者全体の生存 (OS) 率 50% 以下 5 年2後も残ります。これは主に起因する非常に複雑な腫瘍微小環境、頬粘膜、舌、口、鼻腔、口腔、咽頭の底を含む頭頸部領域内でいくつかの異なる解剖学的サイトから腫瘍が発生することも、中咽頭・下咽頭。また、頭頸部領域高度血管柄付きし、3体のすべてのリンパ節の約半分が含まれています。頭頸部腫瘍の生物学を調査し、研究の大半は、腹部の腫瘍モデルに依存します。このようなモデルは、腫瘍組み込みメカニズムに洞察力を提供できるが、ネイティブの頭頸部微小環境不足かなりそのような所見の並進の可能性に影響を与えます。口腔腫瘍を誘導するために使用されている方法の 1 つは、発がん性物質 9, 10-ジメチル-1, 2-benzanthracene (DMBA)4への暴露を介してです。ただし、このメソッドに関連付けられている長いプロセスは、ラットとハムスターではなくマウスで腫瘍を誘発する、結果として得られる腫瘍分化 Scc5,6の組織学的特徴の多くを持っていません。Carcinogen4-ニトロキノリン 1-オキシド (4-NQO)、水溶性キノロン誘導体、マウス口腔腫瘍口頭で適用されたときに起因したが、また長い露出時間 (16 週) および限られたに苦しんでの導入率内およびバッチ間を取るマウス7,8,9。臨床的に関連するモデルを開発するためには、いくつかのグループにはドライバーの癌遺伝子や癌抑制遺伝子、TP53、TGFB、KRA、HRAS、SMAD4 の10の操作を含む遺伝子組み換えモデルが利用されています。これらのモデルは既知のドライバー遺伝子を腫瘍に洞察力を提供することができますが、人間 HNSCCs の複雑な不均一性を要約するだろうではないです。
この作品では、マウスで扁平上皮癌細胞の粘膜接種を実行する実現可能性を実証します。接種した細胞は注入から 1 週間以内積極的な腫瘍に発展します。人間 HNSCCs と同様に、腫瘍はリンパ節に転移します。病気の組織学的および臨床的特徴を特徴付ける、腫瘍免疫微小環境への洞察を提供しています。各種のこの直交異方性モデルががん生物学、腫瘍免疫学と臨床研究でのアプリケーションを持っていることを提案します。免疫回避、腫瘍の進行や治療抵抗性転移のメカニズムは提案されたモデルを使用して対処することができます臨床的意義の領域を表します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:991px;" width="991">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:327px;">Collagenase III</td>
			<td style="width:217px;">Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td style="width:120px;">LS004183</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNase I</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS006328</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fc Block (CD16/32)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553141</td>
			<td style="width:327px;">&#160;Clone 2.4G2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Flow Cytometry Staining Buffer</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-4222-26</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HBSS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td style="width:327px;">no calcium, no magnesium, no pheno red</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Helois mass cytometer</td>
			<td>Fluidigm</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel membrane matrix</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>CB-40234B</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MRI Scanner</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>NA</td>
			<td>7.4 Tesla</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RBC lysis buffer</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420301</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS002830</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intramucosal inoculation of squamous cell carcinoma cells in mice for tumor immune profiling and treatment response assessment

頭頸部扁平上皮癌 (各種) は、再発や治療の失敗の高い有病率と衰弱や致命的な病気です。良い治療戦略を開発し、治療抵抗性に貢献する腫瘍内微小環境因子の理解が重要です。疾患のメカニズムを理解し、療法を改善する最大の障害は、人間 HNSCCs の積極的な転移の性質のようなマウスの細胞の欠如をされています。さらに、マウス モデルの大多数は高血管密度や血管豊富なリンパ系、粘膜の常在菌を含む頭頸部領域の重要な生理機能を欠いている腫瘍の皮下した絵を採用しています。本研究の目的は、開発、各種の実験モデルの特徴です。我々 は 2 つの遺伝的に異なるマウスの細胞とマウスの頬の粘膜で確立された腫瘍を採用しています。我々 は、コラゲナーゼの消化法確立された腫瘍から単一セルの最適なリカバリを最適化します。紹介データは、リンパ節に転移する腫瘍は高度に血管をマウスに開発を示しています。単一セル多重質量フローサイトメトリー解析は、すべての免疫細胞の大半を表す骨髄細胞と多様な免疫集団の存在を示しています。本研究で提案するモデルは、がん生物学、腫瘍免疫学、新規治療薬の臨床開発のアプリケーションを持っています。ひと疾患の臨床的特徴を同所性モデルの類似性は強化された翻訳と患者のアウトカムを改善のためのツールを提供します。

LY2 と B4B8 の細胞増殖の in vitro における評価の結果、両方の細胞があると同様の 2 倍時間 (21 h と 23 h、それぞれ)。生体内で、両方の細胞 (図 1 a) 接種後 1 週間以内 1 つ、明白な質量を形成しました。LY2 腫瘍を有するマウスの顎は腫瘍の負担 (図 1 a) のための 3 週間によって転置されました。コントロール マウスの腫瘍細胞?...

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Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

頭頸部扁平上皮癌同所性同種モデルマウスを開発するための再現可能な方法をご紹介します。腫瘍免疫の浸潤、リンパ節転移、貧しい分化壊死を含む病気の臨床的病理組織学的機能について示します。担癌マウスでは、嚥下障害、顎の変位、減量など臨床的に関連する症状を起こします。

腫瘍免疫プロファイル用のマウスおよび治療応答評価における扁平上皮癌細胞の粘膜接種

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

頭頸部の癌は、ますます普及しつつある。しかし、この地域の腫瘍微小環境と治療抵抗のメカニズムに関する理解は限られています。この技術は、アクセス可能な方法で頭頸部腫瘍のネイティブ微小環境を再現するために使用することができ、ヒトに見られるものと同様の臨床症状を生成する。腫瘍細胞培養が70%の合流度に達したら、細胞を1回の洗浄で冷たいPBSで3回洗浄し、培養フラスコの底面を覆うのに十分な0.25%トリプシンで細胞を取り付ける。細胞培養インキュベーターで3〜4分後、軽い顕微鏡下で剥離を確認し、胎児ウシ血清を添加したDMEM F12培地の12ミリリットルでトリプシンを中和する。細胞懸濁液を50ミリリットルの円錐チューブに移し、反転によって細胞を3〜4回混合する。次いで遠心分離により細胞を採取し、血清中のペレットを再懸濁し、抗生物質を含まないDMEMを氷上の培地濃度の50マイクロリットル当たり6番目の腫瘍細胞に10回10回で再懸濁させる。注射の直前に、細胞を氷上の基質膜マトリックス比に懸濁させる腫瘍細胞を1個に1個に混合する。レシピエント動物1匹につき100マイクロリットルの細胞を備えた23ゲージの針を装備した1つの0.5ミリリットルの注射器をロードする。注射器を氷の上に置き、麻酔付きマウスのつまみへの応答の欠如を確認します。次に、口腔内にシリンジを平行に保ち、口腔内にシリンジを平行に保ち、5秒間にわたって細胞基膜マトリックス懸濁液の100マイクロリットル体積の完全な注入を容易にするために、口の両側の利用可能なオープンスペースを通して、右または左の頬領域に針を挿入する。注射器をそっと引き出す前に、すべての材料が注入されていることを確認するために、さらに5秒間シリンジを所定の位置に保ちます。腫瘍は約1週間でひどく見えるようになります。注射の1週間後、カリパーを使用して各腫瘍の長さと幅を測定し、週に1〜2回の腫瘍容積を決定する。そして、各動物の体重を測定して、腫瘍の増殖が摂食に及ぼす影響を評価する。適切な実験エンドポイントで、鋭いはさみと鈍い鉗子を使用して、首の正中線を通って皮膚を切開する。そして、腫瘍を覆う皮膚の下にそっとハサミを挿入し、はさみを横切って皮膚に押し込んでエアポケットを作ります。皮膚が腫瘍から十分に剥離したら、リンパ組織の存在によって腫瘍組織が混乱することを避けるために、排出リンパ節を切除し、全容が剥離するまで腫瘍の境界を切断する。下流の分析のために腫瘍を処理するには、腫瘍を1〜2ミリメートルの大きさに切り、コラゲラーゼ3、DNAs 1、トリプシン阻害剤を含む50ミリリットル円錐形チューブに入れる。腫瘍片を摂氏37度で30分間インキュベートした後、10分ごとに振盪し、20ミリリットルのHBSSをチューブに加え、70マイクロメートルを通してナイロンストレーナーを注ぐ。5ミリリットルのシリンジプランジャーを使用して、ストレーナーの腫瘍片をつぶし、ストレーナーを通してHBSSの10ミリリットルを追加します。遠心分離によって細胞をスピンダウンします。厳格なピペット処理で2〜3ミリリットルの赤血球リシスバッファーでペレットを再懸濁し、室温で2分後に新鮮なHBSSの20ミリリットルでリシスを中和する。その後、別の遠心分離のためにHBSSの追加20ミリリットルで細胞を再中断し、腫瘍細胞懸濁液から最終的な破片を除去するために40マイクロメートルの注ぎフィルターを介して細胞を緊張させる。LY2腫瘍はB4B8腫瘍と比較して、より高い割合で増殖する。そして、顎の変位を示すマウスは、嚥下障害のために急速に体重減少を発症する。また、LY2マウスの生存期間の中央値は、B4B8腫瘍を持つマウスに対して観察された半分以下である。腫瘍を持つマウスの磁気共鳴画像は、頬粘膜の内層に広がる十分に境界された腫瘍を示すが、舌または他の近くの器官には及んでいない。組織学的検査では、すべてのLY2腫瘍を持つマウスが分化不良の扁平上皮癌を発症し、B4B8腫瘍を有するマウスは適度に分化した扁平上皮癌を発症することを示している。すべてのLY2腫瘍を持つマウスも組織学的に確認された壊死を有し、大多数は中等度から重度の壊死を示す。本代表的実験では、LY2腫瘍を採取し、腫瘍細胞注射後3週間で処理した。CD45陽性免疫細胞は、腫瘍細胞集団全体の7.3%を表した。CD11b陽性骨髄細胞は、CD45陽性細胞の全ての37.8%を表し、その大部分はF480陽性マクロファージであると判断され、好中球および骨髄由来のサプレッサー細胞の集団も少ない。T細胞はCD45陽性免疫細胞集団の15.9%を占め、そのうち53.4%がCD4陽性FoxP3陽性調節性T細胞であった。ナチュラルキラー細胞は、すべてのCD45陽性細胞の2%未満で構成された。針とレシピエントマウスを保持し、動物の口を露出する自信と快適さを開発するために注射を練習することが重要です。処置が正常に行われると、腫瘍固有因子および微小環境因子の治療または評価に対する腫瘍応答の評価を含む実験が行われる。この技術は、頭頸部癌患者における放射線療法と抗PL1療法を組み合わせることの効果を評価し、研究者主導の臨床試験を設計する道を開いた。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

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オリジナル腫瘍の開発のマウス実験モデルと腹膜転移<em&gt;経由で</em卵巣癌細胞で&gt;同所接種

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

頭頸部扁平上皮癌における神経周囲の浸潤のためのモデル

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

ホルマリン固定パラフィン包埋ヒト卵黄扁平上皮癌試料におけるT細胞亜集団の四色蛍光免疫組織化学

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

腫瘍細胞の挙動および薬物応答の長期的研究のためのゼブラフィッシュ小児脳腫瘍の免疫適格宿主への移植

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

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生体内でPH、 pO2、酸化還元状態とリン酸濃度および腫瘍微小環境におけるグルタチオンの EPR 評価

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

治療の頭頸部扁平上皮癌に対する回転楕円体に基づく 3 D 細胞培養モデルのテスト

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

舌の細胞外マトリックスと舌扁平上皮癌生体外の再構成の作製

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

濃縮と確立された皮下マウス腫瘍における腫瘍免疫と免疫のない微小のキャラクタリゼーション

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells