Name: intramucosal inoculation of squamous cell carcinoma cells in mice for tumor immune profiling and treatment response assessment
Uploaded: 2019-04-22T14:00:00
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모든 동물 절차는 승인된 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 프로토콜 대학의 콜로라도 덴버 (프로토콜 # 00250)에 따라 수행 했다.
1. 종양 세포 배양
참고: B4B8 및 LY2 셀 라인 orthotopic HNSCC 종양을 생성 하는 데 사용 했다: B4B8 종양 세포 (BALB/C 마우스)에서 발암 물질 변형 막 keratinocytes11에서 파생 되었다. LY2 종양 세포는 저절?...

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	<li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worldwide+trends+in+incidence+rates+for+oral+cavity+and+oropharyngeal+cancers.">Worldwide trends in incidence rates for oral cavity and oropharyngeal cancers.</a> Journal of Clinical Oncology. 31 (36), 4550-4559 (2013).</li><li>Ang, K. K., Sturgis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+as+a+marker+of+the+natural+history+and+response+to+therapy+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Human papillomavirus as a marker of the natural history and response to therapy of head and neck squamous cell carcinoma.</a> Seminars in Radiation Oncology. 22 (2), 128-142 (2012).</li><li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eighth+Edition+AJCC+Cancer+Staging+Manual:+Continuing+to+build+a+bridge+from+a+population-based+to+a+more+&amp;#34;personalized&amp;#34;+approach+to+cancer+staging.">The Eighth Edition AJCC Cancer Staging Manual: Continuing to build a bridge from a population-based to a more &amp;#34;personalized&amp;#34; approach to cancer staging.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (2), 93-99 (2017).</li><li>Salley, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+carcinogenesis+in+the+cheek+pouch+of+the+Syrian+hamster.">Experimental carcinogenesis in the cheek pouch of the Syrian hamster.</a> Journal of Dental Research. 33 (2), 253-262 (1954).</li><li>Morris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+experimental+carcinogensis+in+the+hamster+cheek+pouch.">Factors influencing experimental carcinogensis in the hamster cheek pouch.</a> Journal of Dental Research. 40, 3-15 (1961).</li><li>MacDonald, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+epithelial+dysplasia+in+hamster+cheek+pouch+carcinogenesis+and+human+oral+mucosa.">Comparison of epithelial dysplasia in hamster cheek pouch carcinogenesis and human oral mucosa.</a> Journal of Oral Pathology &amp; Medicine. 10 (3), 186-191 (1981).</li><li>Hawkins, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4NQO+carcinogenesis:+a+mouse+model+of+oral+cavity+squamous+cell+carcinoma.">4NQO carcinogenesis: a mouse model of oral cavity squamous cell carcinoma.</a> Head &amp; Neck. 16 (5), 424-432 (1994).</li><li>Tang, X. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice.">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10 (1 Pt 1), 301-313 (2004).</li><li>Vered, M., Yarom, N., Dayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4NQO+oral+carcinogenesis:+animal+models,+molecular+markers+and+future+expectations.">4NQO oral carcinogenesis: animal models, molecular markers and future expectations.</a> Oral Oncology. 41 (4), 337-339 (2005).</li><li>Bornstein, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smad4+loss+in+mice+causes+spontaneous+head+and+neck+cancer+with+increased+genomic+instability+and+inflammation.">Smad4 loss in mice causes spontaneous head and neck cancer with increased genomic instability and inflammation.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (11), 3408-3419 (2009).</li><li>Thomas, G. R., Chen, Z., Oechsli, M. N., Hendler, F. J., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+expression+of+CD80+is+a+marker+for+increased+tumorigenicity+in+a+new+murine+model+of+oral+squamous-cell+carcinoma.">Decreased expression of CD80 is a marker for increased tumorigenicity in a new murine model of oral squamous-cell carcinoma.</a> International Journal of Cancer. 82 (3), 377-384 (1999).</li><li>Yuspa, S. H., Hawley-Nelson, P., Koehler, B., Stanley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+transformation+markers+in+differentiating+epidermal+cell+lines+in+culture.">A survey of transformation markers in differentiating epidermal cell lines in culture.</a> Cancer Research. 40 (12), 4694-4703 (1980).</li><li>Chen, Z., Smith, C. W., Kiel, D., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+variants+derived+following+in+vivo+tumor+progression+of+an+in+vitro+transformed+squamous+cell+carcinoma+line+acquire+a+differential+growth+advantage+requiring+tumor-host+interaction.">Metastatic variants derived following in vivo tumor progression of an in vitro transformed squamous cell carcinoma line acquire a differential growth advantage requiring tumor-host interaction.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 15 (5), 527-537 (1997).</li><li>Euhus, D. M., Hudd, C., LaRegina, M. C., Johnson, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+measurement+in+the+nude+mouse.">Tumor measurement in the nude mouse.</a> Journal of Surgical Oncology. 31 (4), 229-234 (1986).</li><li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+(nude)+mice.">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li><li>Yushkevich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=User-guided+3D+active+contour+segmentation+of+anatomical+structures:+significantly+improved+efficiency+and+reliability.">User-guided 3D active contour segmentation of anatomical structures: significantly improved efficiency and reliability.</a> NeuroImage. 31 (3), 1116-1128 (2006).</li><li>Dutta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+tumour+necrosis,+tumour+proliferation,+local+and+systemic+inflammation,+microvessel+density+and+survival+in+patients+undergoing+potentially+curative+resection+of+oesophageal+adenocarcinoma.">The relationship between tumour necrosis, tumour proliferation, local and systemic inflammation, microvessel density and survival in patients undergoing potentially curative resection of oesophageal adenocarcinoma.</a> Britisch Journal of Cancer. 106 (4), 702-710 (2012).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+analysis+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+lines+and+human+tumors:+a+rational+approach+to+preclinical+model+selection.">Genomic analysis of head and neck squamous cell carcinoma cell lines and human tumors: a rational approach to preclinical model selection.</a> Molecular Cancer Research. 12 (4), 571-582 (2014).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionizing+radiation+sensitizes+tumors+to+PD-L1+immune+checkpoint+blockade+in+orthotopic+murine+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Ionizing radiation sensitizes tumors to PD-L1 immune checkpoint blockade in orthotopic murine head and neck squamous cell carcinoma.</a> OncoImmunology. 6 (10), e1356153 (2017).</li><li>Ferris, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Further+evaluations+of+nivolumab+(nivo)+versus+investigator&#8217;s+choice+(IC)+chemotherapy+for+recurrent+or+metastatic+(R/M)+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+(SCCHN):+CheckMate+141.">Further evaluations of nivolumab (nivo) versus investigator&#8217;s choice (IC) chemotherapy for recurrent or metastatic (R/M) squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN): CheckMate 141.</a> Journal of Clinical Oncology. 34, (2016).</li><li>Ferris, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nivolumab+for+Recurrent+Squamous-Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck.">Nivolumab for Recurrent Squamous-Cell Carcinoma of the Head and Neck.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1856-1867 (2016).</li><li>Harrington, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nivolumab+versus+standard,+single-agent+therapy+of+investigator's+choice+in+recurrent+or+metastatic+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+(CheckMate+141):+health-related+quality-of-life+results+from+a+randomised,+phase+3+trial.">Nivolumab versus standard, single-agent therapy of investigator's choice in recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (CheckMate 141): health-related quality-of-life results from a randomised, phase 3 trial.</a> The Lancet Oncology. 18 (8), 1104-1115 (2017).</li><li>Kiyota, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+open-label,+Phase+III+clinical+trial+of+nivolumab+vs.+therapy+of+investigator's+choice+in+recurrent+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck:+A+subanalysis+of+Asian+patients+versus+the+global+population+in+checkmate+141.">A randomized, open-label, Phase III clinical trial of nivolumab vs. therapy of investigator's choice in recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck: A subanalysis of Asian patients versus the global population in checkmate 141.</a> Oral Oncology. 73, 138-146 (2017).</li><li>Ling, D. C., Bakkenist, C. J., Ferris, R. L., Clump, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Immunotherapy+in+Head+and+Neck+Cancer.">Role of Immunotherapy in Head and Neck Cancer.</a> Seminars in Radiation Oncology. 28 (1), 12-16 (2018).</li><li>Perri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma:+Biological+bases+and+therapeutic+implications.">Radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma: Biological bases and therapeutic implications.</a> Head &amp; Neck. 37 (5), 763-770 (2015).</li><li>Yamamoto, V. N., Thylur, D. S., Bauschard, M., Schmale, I., Sinha, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Overcoming radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 63, 44-51 (2016).</li><li>Bonner, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+cetuximab+for+locoregionally+advanced+head+and+neck+cancer:+5-year+survival+data+from+a+phase+3+randomised+trial,+and+relation+between+cetuximab-induced+rash+and+survival.">Radiotherapy plus cetuximab for locoregionally advanced head and neck cancer: 5-year survival data from a phase 3 randomised trial, and relation between cetuximab-induced rash and survival.</a> The Lancet Oncology. 11 (1), 21-28 (2010).</li><li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+EphB4-Ephrin-B2+Signaling+Enhances+Response+to+Cetuximab-Radiation+Therapy+in+Head+and+Neck+Cancers.">Inhibition of EphB4-Ephrin-B2 Signaling Enhances Response to Cetuximab-Radiation Therapy in Head and Neck Cancers.</a> Clinical Cancer Research. 24 (18), 4539-4550 (2018).</li><li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+radiosensitization+in+EphB4+receptor-expressing+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinomas.">Enhancing radiosensitization in EphB4 receptor-expressing Head and Neck Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 6, 38792 (2016).</li><li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+radiation+and+immunotherapy:+a+new+systemic+therapy+for+solid+tumors?.">Combining radiation and immunotherapy: a new systemic therapy for solid tumors?.</a> Cancer Immunology Research. 2 (9), 831-838 (2014).</li><li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+radiotherapy+and+PD-L1+blockade+is+mediated+by+TIM-3+upregulation+and+regulatory+T-cell+infiltration.">Resistance to radiotherapy and PD-L1 blockade is mediated by TIM-3 upregulation and regulatory T-cell infiltration.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li></ol>

엄격한 분석 및 종양 microenvironment의 종양 개발, 진행, 전이의 메커니즘을 이해 하 고 효과적인 치료의 개발에 대 한 중요 한 전략을 나타냅니다. 머리와 목 암은 머리와 목 지역 내의 여러 해 부 사이트에서 발생 한 수 있습니다 복잡 한 질병 이다. 질병 메커니즘을 이해 하 고 치료를 개선 하는 주요 장애물이 인간 HNSCCs의 공격적이 고 전이성 자연 닮은 murine 마우스 셀 라인의 부족 했습니다. 또한, ?...

HNSCC 다섯 번째 가장 일반적인 종은 세계적으로, 매년 진단 이상 600000 환자와1. 적극적인 화학 요법과 방사선 (RT) 치료, 치료에도 불구 하 고 인간 유 두 종 바이러스 (HPV) 감염 없이 HNSCC 환자에 대 한 전반적인 생존 (OS) 율25 년 후 50% 미만 남아 있다. 이것은 크게에 기인 매우 복잡 한 종양 microenvironment 종양 볼 점 막, 혀, 구강, 비 강, 구강, 인 두의 바닥을 포함 한 머리와 목 지역 내의 여러 가지 해 부 사이트에서 발생 한 수로 oropharynx, 그리고 hypopharynx입니다. 또한, 머리와 목 지역 높은 나가도록 하 고 몸3에 모든 림프절의 거의 절반을 포함. 머리와 목 종양 생물학 조사 연구의 대다수는 측면 지역에서 종양 모델에 의존 합니다. 이러한 모델 종양 내장 메커니즘에 대 한 통찰력을 제공할 수 있습니다 하지만 기본 머리와 목 microenvironment의 부족 같은 결과의 변환 가능성 영향 크게 수 있습니다. 구강 종양을 유발 하는 데 사용 되었습니다 하나의 방법은 발암 물질 9, 10-디 메 틸-1, 2-benzanthracene (DMBA)4에 노출을 통해 이다. 그러나,이 메서드는 연결 된 마우스에만 쥐 및 햄스터 종양을 유도 하는 과정, 그리고 결과 종양의 차별화 된 Scc5,6조직학 특징의 많은가지고 있지 않습니다. Carcinogen4-nitroquinoline 1-산화물 (4-NQO), 수용 성 quinolone 파생, 마우스 구강 종양 구두로 적용 하는 경우에 발생 하지만 또한 긴 노출 시간 (16 주)와 제한 된에서 고통 소개 걸릴 시간과 일괄 처리 사이 속도 쥐7,,89. 임상 관련 모델을 개발 하기 위해서는 여러 그룹 드라이버 oncogenes 또는 종양 억제기 유전자, TP53, TGFB, KRA, HRA, 및 SMAD410등의 조작에 관련 된 유전자 조작된 모델을 활용 합니다. 이러한 모델 알려진된 드라이버 유전자와 종양에 대 한 통찰력을 제공할 수 있지만 인간 HNSCCs의 복잡 한이 정리 하지 않습니다.
이 작품에서 편평 세포 암 종 세포의 intramucosal 접종 생쥐에서 수행의 타당성을 설명 합니다. 접종된 세포 주입의 1 주 안에 공격적인 종양으로 발전. 인간의 HNSCCs와 마찬가지로 종양 지역 림프절에 전이. 우리는 질병의 조직학 및 임상 기능을 특성화 하 고 종양 면역 microenvironment에 대 한 통찰력을 제공. 우리는 HNSCC의이 orthotopic 모델 암 생물학, 종양 면역학, 및 전 임상 연구에 응용 프로그램을 제안 합니다. 면역 회피, 종양 진행, 치료 저항, 및 전이 메커니즘 제안 된 모델을 사용 하 여 해결 될 수 있는 임상 의미의 영역을 나타냅니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:991px;" width="991">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:327px;">Collagenase III</td>
			<td style="width:217px;">Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td style="width:120px;">LS004183</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DNase I</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS006328</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fc Block (CD16/32)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553141</td>
			<td style="width:327px;">&#160;Clone 2.4G2&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Flow Cytometry Staining Buffer</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-4222-26</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">HBSS</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td style="width:327px;">no calcium, no magnesium, no pheno red</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Helois mass cytometer</td>
			<td>Fluidigm</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel membrane matrix</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>CB-40234B</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MRI Scanner</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>NA</td>
			<td>7.4 Tesla</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RBC lysis buffer</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420301</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp.</td>
			<td>LS002830</td>
			<td style="width:327px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intramucosal inoculation of squamous cell carcinoma cells in mice for tumor immune profiling and treatment response assessment

머리와 목 편평 상피 세포 암 (HNSCC)은 치료 실패와 재발의 높은 보급으로 쇠 약하게 하 고 치명적인 질병 이다. 더 나은 치료 전략을 개발 하기 위하여 종양 microenvironmental 요소 이해 치료 저항에 기여 하는 중요 하다. 질병 메커니즘을 이해 하 고 치료를 개선 하는 주요 장애물이 인간 HNSCCs의 공격적이 고 전이성 자연 닮은 murine 셀 라인의 부족 했습니다. 또한, murine 모델의 대다수 종양 머리와 목 지역, 높은 혈관 밀도, 광범위 한 림프 맥 관 구조, 상주 점 막 식물 등의 중요 한 생리 기능을 부족의 피하 implantations를 사용 합니다. 이 연구의 목적은 개발 하 고 HNSCC의 orthotopic 모델의 특성입니다. 우리는 두 유전자 별개 murine 셀 라인 및 설립된 종양 생쥐의 뺨 점 막에 사용합니다. 우리는 콜라 기반 종양 소화 방법이 설립된 종양에서 단일 세포의 최적의 복구를 최적화합니다. 여기에 제시 된 데이터 표시 마우스 지역 림프절에 전이 매우 vascularized 종양 개발. 단일 셀 multiparametric 대량 cytometry 분석 모든 면역 세포의 대다수를 대표 하는 골수성 세포와 다양 한 면역 인구의 존재를 보여줍니다. 이 연구에서 제안 된 모델이 있다 암 생물학, 종양 면역학, 및 새로운 치료제의 전 임상 개발에 응용 프로그램. 인간 질병의 임상 특징 orthotopic 모델의 닮은 향상 된 번역 및 향상 된 환자 결과 대 한 도구를 제공 합니다.

LY2 및 B4B8 세포 증식의 생체 외에서 평가 했다 두 셀 라인 비슷한 두 배로 시간을가지고 (21h와 23 h, 각각). Vivo에서 두 셀 라인 접종 (그림 1A)의 1 주 안에 단일, 표시, 및 만져 서 질량을 형성. LY2 종양 방위 쥐, 턱 종양 부담 (그림 1A) 때문에 3 주에 의해 전치 되었다. 종양 세포에는 영향을 받지 않은 통제 쥐 팬 들은 예상 대로 종양?...

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Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

여기 우리는 머리와 목 편평 상피 세포 암의 orthotopic murine 모델 개발에 대 한 재현 방법 제시. 종양 괴 사, 불 쌍 한 차별화, 꾸벅꾸벅 졸 기 전이 및 면역 침투를 포함 하 여 질병의 임상 관련 histopathological 기능을 보여 줍니다. 부전 실어증, 턱 변위, 및 체중 감소를 포함 한 임상 관련 증상을 개발 하는 종양 방위 쥐.

종양 면역 프로 파일링에 대 한 쥐 및 치료 반응 평가에 편평 세포 암 종 세포의 intramucosal 접종

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

머리와 목 부위의 암이 점점 더 널리 퍼지고 있습니다. 그러나 종양 미세 환경과 이 지역에서 치료 저항 메커니즘에 대한 제한된 이해가 있습니다. 이 기술은 접근 가능한 방식으로 머리/목 종양의 토착 미세 환경을 재구성하는 데 사용할 수 있으며 인간에서 볼 수 있는 것과 유사한 임상 증상을 생성합니다.종양 세포 배양은 70%에 도달하면 세척당 감기 PBS로 세포를 세 번 세척하고 배양 플라스크의 바닥 표면을 덮기 위해 충분한 0.25%의 트립신으로 세포를 부착한다. 세포 배양 인큐베이터에서 3~4분 후, 광 현미경으로 분리를 확인하고 태아 소 혈청으로 보충된 DMEM F12 배지의 12밀리리터로 트립신을 중화시한다. 세포 현탁액을 50 밀리리터 원판 튜브로 옮기고 반전으로 세포를 3~4회 혼합합니다.그런 다음 원심분리에 의해 세포를 수집하고 얼음에 대한 중간 농도의 50 마이크로리터 당 6 번째 종양 세포에 10 번 10에 혈청 및 항생제없는 DMEM에서 펠릿을 다시 중단합니다. 주입 직전에, 얼음에 지하 막 매트릭스 비율에 1 - 1 종양 세포 현탁액에 세포를 혼합. 수령동물 당 100마이크로리터의 23게이지 바늘을 장착한 0.5 밀리리터 주사기 1개를 적재한다.주사기를 얼음 위에 놓고 마취 된 마우스에 발가락 핀치에 대한 반응이 부족한지 확인합니다. 다음으로, 5초 동안 전지 지하 막 매트릭스 현탁액의 전체 100 마이크로리터 부피의 주입을 용이하게 하기 위해 구강 내부에 있는 동안 구강 부위와 평행하게 주사기를 유지하는 입의 양쪽에 있는 사용 가능한 열린 공간을 통해 오른쪽 또는 왼쪽 buccal 영역에 바늘을 삽입한다. 주사기를 5초 동안 제자리에 두어 주사기를 부드럽게 인출하기 전에 모든 재료가 주입되었는지 확인합니다.종양은 약 1 주일 에서 심하게 볼 수 있게 될 것입니다. 주사 후 1 주일, 캘리퍼를 사용하여 각 종양의 길이와 폭을 측정하여 일주일에 1 ~ 2 번 종양 부피를 결정합니다. 및 각 동물의 무게를 측정하여 종양 성장이 먹이에 미치는 영향을 평가합니다.적절한 실험적 엔드포인트에서 날카로운 가위와 무딘 집게를 사용하여 목의 중간선을 통해 피부 절개를 합니다. 그리고 가위를 종양을 덮고 있는 피부 아래에 부드럽게 삽입하여 가위를 피부로 밀어 공기 주머니를 만듭니다. 일단 피부가 종양에서 충분히 분리되면, 종양 조직이 림프 조직의 존재에 의해 혼동되는 것을 피하기 위해 배수 림프절을 소비하고 전체 부피가 분리 될 때까지 종양의 경계를 통해 절단.다운스트림 분석을 위해 종양을 처리하려면 종양을 1~2mm 크기의 조각으로 자르고 콜라게나아제 3개, DNA 1 및 트립신 억제제가 들어 있는 50밀리리터 원뿔튜브에 조각을 배치합니다. 종양 조각을 섭씨 30도에서 30분 동안 배양한 후, 10분마다 흔들리는 후, 20밀리리터의 HBSS를 튜브에 추가하고 70 마이크로미터를 통해 종양 조각을 함유한 현탁액을 70 마이크로미터 부어 나일론 스트레이너를 통과한다. 5 밀리리터 주사기 플런저를 사용하여 스트레이너의 종양 조각을 분쇄하고 여과기를 통해 HBSS의 10 밀리리터를 추가합니다.원심분리로 세포를 회전시합니다. 엄격한 파이펫팅으로 적혈구 용해 버퍼의 2~3밀리리터에서 펠릿을 다시 일시 중단하여 실온에서 2분 후 신선한 HBSS 20 밀리리터로 용액을 중화시합니다. 그런 다음 다른 원심분리를 위해 HBSS의 추가 20 밀리리터에서 세포를 다시 중단하고 종양 세포 현탁액에서 최종 이물질을 제거하기 위해 40 마이크로미터 부어 필터를 통해 세포를 변형시한다.LY2 종양은 B4B8 종양에 비해 더 높은 비율로 증가합니다. 그리고 턱 변위를 나타내는 마우스는 난이증으로 인해 체중 감소를 급속히 개발합니다. LY2 마우스의 중간 생존은 또한 B4B8 종양 베어링 마우스를 위해 관찰된 반 이하입니다.종양 을 낳는 마우스의 자기 공명 화상 진찰은 buccal 점막의 내층으로 확장하는 잘 경계한 종양을 보여줍니다, 그러나 혀 또는 그밖 가까운 기관으로. 히스토럴 검사에 따르면 모든 LY2 종양 베어링 마우스는 제대로 분화된 편평상피 세포 암이 발생하며 B4B8 종양을 가진 마우스는 적당히 분화된 편평상피 세포 암이 발생합니다. 모든 LY2 종양 베어링 마우스는 또한 조직학적으로 확인된 괴사를 가지고 있으며, 대다수는 중등도에서 중증 괴사를 입증합니다.본 대표적인 실험에서, LY2 종양은 부칼 영역 종양 세포 주입 후 3주 후에 수확및 처리되었다. CD45 양성 면역 세포는 전체 종양 세포 집단의 7.3%를 나타냈다. CD11b 양성 골수성 세포는 모든 CD45 양성 세포의 37.8%를 나타내며, 그 중 대부분은 호중구및 골수성 유래 억제제 세포의 작은 집단과 함께 F480 양성 대식세포로 결정되었다.T 세포는 CD45 양성 면역 세포 집단의 15.9%를 구성했으며, 그 중 53.4%는 CD4 양성 FoxP3 양성 조절 T 세포였다. 자연 킬러 세포는 모든 CD45 양성 세포의 2% 미만으로 구성되었습니다. 바늘과 받는 사람 마우스를 잡고 동물의 입을 노출에 자신감과 편안함을 개발하기 위해 주사를 연습하는 것이 중요하다.일단 절차가 성공적으로 수행되면 종양 내성 및 미세 환경 적 요인의 치료 또는 평가에 대한 종양 반응의 평가를 포함하는 실험을 수행 할 수 있습니다. 이 기술은 조사자가 시작한 임상 시험을 설계하는 길을 열어 주부 암 환자에서 방사선 요법과 항 PL1 요법을 결합하는 효과를 평가했습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이<em&gt;를 통해</em난소 암 세포에&gt; 동소 이식 접종

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

연구

암 연구학

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

머리와 목 편평 ​​세포 암에서 신경초 침략을위한 모델

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

포르말린 - 고정, 파라핀 - 임베디드 인간 구강 성 편평 세포 암종 샘플에서의 T 세포 아군의 4 색 형광 면역 조직 화학

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Transplantation of Zebrafish Pediatric Brain Tumors into Immune-competent Hosts for Long-term Study of Tumor Cell Behavior and Drug Response

종양 세포의 행동과 약물 반응에 대한 장기 연구를 위해 면역 능력이있는 숙주 내로 Zebrafish Pediatric Brain 종양을 이식

Tumor cell transplantation is an important technique to define the mechanisms controlling cancer cell growth, migration, and host response, as well as to ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Vivo에서 PH, pO2, 산화 환 원 상태, 고 농도의 인산 염 및 종양 Microenvironment에 티의 EPR 평가

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

머리와 목 편평 상피 세포 암에 대 한 회전 타원 체 기반 3D 셀 문화 모델에서 테스트 하는 치료

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

혀 기질과 혀 편평 세포 암 종에서 생체 외에서 의 재구성의 제조

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

농축 및 설립된 피하 Murine 종양에서 종양 면역 및 비 면역 Microenvironments의 특성

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells