Name: automated measurements of sleep and locomotor activity in mexican cavefish
Uploaded: 2019-03-21T14:00:00
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Questo lavoro è stato supportato da premio NIGMS GM127872 ACK, NINDS award 105072 ERD e ACK e NSF award 1656574 di ACK.

Nota: Impostare sistemi per il monitoraggio del comportamento in larve e adulti.
1. costruzione di un sistema di sonno per le larve
Nota: Il sistema di monitoraggio per il rilevamento larvale attraverso i pesci giovani di età compresa tra 4 giorni post fertilizzazione (dpf) attraverso 30 dpf a. mexicanus richiede più pezzi di attrezzature tra cui illuminazione a infrarossi (IR), diffusori di luce acrilico IR, automatizzato luce controlli (t...

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	<li>Keene, A. C., Duboue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+and+evolution+of+sleep.">The origins and evolution of sleep.</a> The Journal of Experimental Biology. , (2018).</li><li>Joiner, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+Evolutionary+Determinants+of+Sleep.">Unraveling the Evolutionary Determinants of Sleep.</a> Current Biology. 26 (20), R1073-R1087 (2016).</li><li>Allada, R., Siegel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unearthing+the+phylogenetic+roots+of+sleep.">Unearthing the phylogenetic roots of sleep.</a> Current biology. 18, R670-R679 (2008).</li><li>Sehgal, A., Mignot, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+sleep+and+sleep+disorders.">Genetics of sleep and sleep disorders.</a> Cell. 146, 194-207 (2011).</li><li>Campbell, S. S., Tobler, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+sleep:+a+review+of+sleep+duration+across+phylogeny.">Animal sleep: a review of sleep duration across phylogeny.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 8, 269-300 (1984).</li><li>Raizen, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lethargus+is+a+Caenorhabditis+elegans+sleep-like+state.">Lethargus is a Caenorhabditis elegans sleep-like state.</a> Nature. 451, 569-572 (2008).</li><li>Geissmann, Q., Rodriguez, L. G., Beckwith, E. J., French, A. S., Jamasb, A. R., Gilestro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethoscopes:+An+Open+Platform+For+High-Throughput+Ethomics.">Ethoscopes: An Open Platform For High-Throughput Ethomics.</a> bioRxiv. , 113647 (2017).</li><li>Garbe, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Context-specific+comparison+of+sleep+acquisition+systems+in+Drosophila.">Context-specific comparison of sleep acquisition systems in Drosophila.</a> Biology Open. 4 (11), (2015).</li><li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila.">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li><li>Gilestro, G. F., Cirelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PySolo:+A+complete+suite+for+sleep+analysis+in+Drosophila.">PySolo: A complete suite for sleep analysis in Drosophila.</a> Bioinformatics. 25, 1466-1467 (2009).</li><li>Swierczek, N. A., Giles, A. C., Rankin, C. H., Kerr, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+behavioral+analysis+in+C.+elegans.">High-throughput behavioral analysis in C. elegans.</a> Nature Methods. 8 (7), 592-598 (2011).</li><li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila.">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6, 451-457 (2009).</li><li>Rihel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+behavioral+profiling+links+drugs+to+biological+targets+and+rest/wake+regulation.">Zebrafish behavioral profiling links drugs to biological targets and rest/wake regulation.</a> Science (New York, N.Y.). 327, 348-351 (2010).</li><li>Yoshizawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+genetic+architecture+underlies+the+emergence+of+sleep+loss+and+prey-seeking+behavior+in+the+Mexican+cavefish.">Distinct genetic architecture underlies the emergence of sleep loss and prey-seeking behavior in the Mexican cavefish.</a> BMC Biology. 13, (2015).</li><li>Chiu, C. N., Prober, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+zebrafish+sleep+and+arousal+states:+current+and+prospective+approaches.">Regulation of zebrafish sleep and arousal states: current and prospective approaches.</a> Frontiers in Neural Circuits. 7 (April), 58 (2013).</li><li>Elbaz, I., Foulkes, N. S., Gothilf, Y., Appelbaum, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+clocks,+rhythmic+synaptic+plasticity+and+the+sleep-wake+cycle+in+zebrafish.">Circadian clocks, rhythmic synaptic plasticity and the sleep-wake cycle in zebrafish.</a> Frontiers in Neural Circuits. 7, (2013).</li><li>Dubou&#233;, E. R., Keene, A. C., Borowsky, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+convergence+on+sleep+loss+in+cavefish+populations.">Evolutionary convergence on sleep loss in cavefish populations.</a> Current Biology. 21, 671-676 (2011).</li><li>Beale, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+Mexican+blind+cavefish+Astyanax+mexicanus+in+the+lab+and+in+the+field.">Circadian rhythms in Mexican blind cavefish Astyanax mexicanus in the lab and in the field.</a> Nature Communications. 4, 2769 (2013).</li><li>Keene, A. C., Yoshizawa, M., McGaugh, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology and Evolution of the Mexican Cavefish. , (2015).</li><li>Jeffery, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regressive+evolution+in+Astyanax+cavefish.">Regressive evolution in Astyanax cavefish.</a> Annual Review of Genetics. 43, 25-47 (2009).</li><li>Gross, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+complex+origin+of+Astyanax+cavefish.">The complex origin of Astyanax cavefish.</a> BMC Evolutionary Biology. 12, 105 (2012).</li><li>Aspiras, A., Rohner, N., Marineau, B., Borowsky, R., Tabin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocortin+4+receptor+mutations+contribute+to+the+adaptation+of+cavefish+to+nutrient-poor+conditions.">Melanocortin 4 receptor mutations contribute to the adaptation of cavefish to nutrient-poor conditions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (31), 9688 (2015).</li><li>Jaggard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lateral+line+confers+evolutionarily+derived+sleep+loss+in+the+Mexican+cavefish.">The lateral line confers evolutionarily derived sleep loss in the Mexican cavefish.</a> Journal of Experimental Biology. 220 (2), (2017).</li><li>Jaggard, J. B., Stahl, B. A., Lloyd, E., Prober, D. A., Duboue, E. R., Keene, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypocretin+underlies+the+evolution+of+sleep+loss+in+the+Mexican+cavefish.">Hypocretin underlies the evolution of sleep loss in the Mexican cavefish.</a> eLife. , e32637 (2018).</li><li>Hinaux, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Developmental+Staging+Table+for+Astyanax+mexicanus+Surface+Fish+and+Pacho+&#180;n+Cavefish.">A Developmental Staging Table for Astyanax mexicanus Surface Fish and Pacho &#180;n Cavefish.</a> Zebrafish. 8 (4), 155-165 (2011).</li><li>Bill, B. R., Petzold, A. M., Clark, K. J., La Schimmenti, ., Ekker, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+primer+for+morpholino+use+in+zebrafish.">A primer for morpholino use in zebrafish.</a> Zebrafish. 6 (1), 69-77 (2009).</li><li>Bilandzija, H., Ma, L., Parkhurst, A., Jeffery, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+potential+benefit+of+albinism+in+Astyanax+cavefish:+downregulation+of+the+oca2+gene+increases+tyrosine+and+catecholamine+levels+as+an+alternative+to+melanin+synthesis.">A potential benefit of albinism in Astyanax cavefish: downregulation of the oca2 gene increases tyrosine and catecholamine levels as an alternative to melanin synthesis.</a> Plos One. 8 (11), e80823 (2013).</li><li>Yokogawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+sleep+in+zebrafish+and+insomnia+in+hypocretin+receptor+mutants.">Characterization of sleep in zebrafish and insomnia in hypocretin receptor mutants.</a> PLoS Biology. 5, 2379-2397 (2007).</li><li>Appelbaum, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep-wake+regulation+and+hypocretin-melatonin+interaction+in+zebrafish.">Sleep-wake regulation and hypocretin-melatonin interaction in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 21942-21947 (2009).</li><li>Singh, C., Oikonomou, G., Prober, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norepinephrine+is+required+to+promote+wakefulness+and+for+hypocretin-induced+arousal+in+zebrafish.">Norepinephrine is required to promote wakefulness and for hypocretin-induced arousal in zebrafish.</a> eLife. 4 (September), (2015).</li><li>Elipot, Y., Hinaux, H., Callebert, J., R&#233;taux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+shift+from+fighting+to+foraging+in+blind+cavefish+through+changes+in+the+serotonin+network.">Evolutionary shift from fighting to foraging in blind cavefish through changes in the serotonin network.</a> Current Biology. 23 (1), 1-10 (2013).</li><li>Bell, M. A., Foster, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The evolutionary biology of the threespine stickleback. 584, (1994).</li><li>Seehausen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=African+cichlid+fish:+a+model+system+in+adaptive+radiation+research.">African cichlid fish: a model system in adaptive radiation research.</a> Proceedings of Biological Sciences/The Royal Society. 273 (1597), 1987-1998 (1597).</li><li>Basolo, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+preference+predates+the+evolution+of+the+sword+in+swordtail+fish.">Female preference predates the evolution of the sword in swordtail fish.</a> Science. 250, 808-810 (1990).</li></ol>

Questo protocollo descrive un sistema personalizzato per quantificare il sonno e l'attività locomotrice in caverna larvale e adulto. Caverna è emersi come un modello di punta per studiare l'evoluzione del sonno che può essere utilizzato per studiare la base genetica e neurale di sonno regolamento1. I passaggi critici nel presente protocollo comprendono l'ottimizzazione dell'illuminazione e qualità video al fine di assicurare il monitoraggio accurato che è necessario quantificare il sonno. Il ...

Sonno è altamente conservata in tutto il Regno animale ai livelli fisiologici, funzionali e comportamentali1,2,3. Mentre il sonno in animali da laboratorio dei mammiferi in genere è valutato utilizzando gli elettroencefalogrammi, registrazioni elettrofisiologiche sono meno pratiche sistemi di piccolo modello geneticamente suscettibili e così sonno in genere viene misurata in base il comportamento3 , 4. caratteristiche comportamentali associate con il sonno sono altamente conservate in tutto il Regno animale e comprendono la soglia di risveglio aumentato, reversibilità con stimolazione e prolungata quiescenza comportamentale5. Queste misure possono essere utilizzate per caratterizzare il sonno negli animali che vanno dal worm del nematode c. elegans, attraverso gli esseri umani6.
L'uso di quiescenza comportamentale per la caratterizzazione di sonno richiede il software di rilevamento automatizzato. Con software di monitoraggio, periodi di immobilità e di attività sono determinati su un numero di giorni, e lunghi periodi di inattività sono classificati come dormire7,8. Negli ultimi anni, sono stati sviluppati molteplici sistemi di monitoraggio per l'acquisizione di dati relativi all'attività tra una diversità di sistemi piccolo modello geneticamente suscettibili; tra cui vermi, moscerini della frutta e pesce9,10,11. Questi programmi sono accompagnati da software che consente il rilevamento automatizzato del comportamento animale, tra cui sia opensource freeware e software disponibili in commercio7,12,13,14 . Questi sistemi si differenziano per la loro flessibilità e consentono lo screening efficiente e caratterizzazione dei fenotipi di sonno nei numerosi modelli geneticamente modificabili.
Indagine genetica di sonno in zebrafish, Danio rerio, ha portato all'identificazione di numerosi geni e circuiti neurali che regolano il sonno15,16. Mentre questo ha fornito un potente sistema per indagare le basi neurali di sonno in un animale di laboratorio vertebrati, tanto meno è conosciuto circa come si evolve il sonno e come naturale variazione contribuisce a dormire regolamento. La caverna messicano, Astyanax mexicanus (A. mexicanus), si sono evolute le differenze drammatiche nel sonno, attività locomotrice e ritmi circadiani17,18. Questi pesci esistano come popolazioni intorno alla regione della Sierra Del Abra del Messico nord-orientale19,20,21di eyed fish superficiale che abitano i fiumi del Messico e Texas meridionale e almeno 29 cave. Sorprendentemente, molte differenze comportamentali, tra cui la perdita di sonno, sembrano sono emerse in modo indipendente in più caverna popolazioni14,22. Di conseguenza, caverna fornisce un modello per studiare l'evoluzione convergente di sonno, circadiano e i comportamenti sociali.
Questo protocollo descrive un sistema per misurare il sonno e il comportamento motorio nell'A. mexicanus larve e adulti. Un sistema di registrazione su misura basati su infrarossi permette per la registrazione video di animali in condizioni di luce e buio. Software disponibile in commercio può essere utilizzato per misurare l'attività e le macro personalizzate vengono utilizzate per quantificare i diversi aspetti di inattività e determinare i periodi di sonno. Questo protocollo descrive anche le modifiche sperimentali per la verifica dell'attività di più animali all'interno di un serbatoio, con la possibilità di esaminare le interazioni tra il sonno e i comportamenti sociali. Questi sistemi possono essere applicati a misura sonno, comportamento circadiano e attività locomotrice in specie ittiche aggiuntive tra cui zebrafish e Spinarelli.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>12V power adaptor</td>
			<td>Environmental Lights</td>
			<td>24 Watt 12 VDC Power Supply</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylic dividers (adults)</td>
			<td>TAP Plastic</td>
			<td></td>
			<td>Order sheets in sizes as needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adult infrared light power source</td>
			<td>Environmnental Lights 24 Watt 12 VDC Power Supply</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Battery pack</td>
			<td>CyberPower</td>
			<td>CP850PFCLCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera lens (adult)</td>
			<td>Navitar Zoom 7000</td>
			<td>Zoom 7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera lens (larval)</td>
			<td>Fujian 35mm f/1.7</td>
			<td>B01CHX7668</td>
			<td>Purchase on Amazon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera lens adapter</td>
			<td>d</td>
			<td>1524219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera mount</td>
			<td>CowboyStudio Super Clamp</td>
			<td>B002LV7X1K</td>
			<td>Purchase on Amazon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish tank</td>
			<td>Deep Blue Professional</td>
			<td>ADB11006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat sink (adult)</td>
			<td>M-D Building products</td>
			<td>SKU: 61085</td>
			<td>Cut to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat sink (larval)</td>
			<td>M-D Building products</td>
			<td>SKU: 57000</td>
			<td>Cut to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared lights (adults)</td>
			<td>Environmental Lights Infrared 850 nm 5050 LED strip</td>
			<td>irrf850-5050-60-reel</td>
			<td>Cut to fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infrared lights (larval)</td>
			<td>LED World</td>
			<td>B00MO9H7H4</td>
			<td>Purchase on Amazon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR-diffusing acrylic</td>
			<td>TAP Plastic</td>
			<td></td>
			<td>Order sheets in sizes as needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laptop/computer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any laptop will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED light</td>
			<td>Chanzon 10 High Power Led Chip 3W White (6000K-6500K/600mA-700mA/DC 3V-3.4V/3 Watt)</td>
			<td>B06XKTRSP7</td>
			<td>Use with Chanzon 25pcs 1W 3W 5W LED Heat Sink (2 pin Black) Aluminum Base Plate Panel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>light timer</td>
			<td>Century 24 Hour Plug-in Mechanical Timer Grounded</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic wall mount for IR</td>
			<td>Everbilt Plastic pegboard</td>
			<td>Model # 17961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power cable</td>
			<td>BNTECHGO 22 Gauge Silicone Wire</td>
			<td>B01K4RPE0Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power source</td>
			<td>Rapid LED</td>
			<td>MOONLIGHT DRIVER (350MA)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td colspan="2">12-well (FB012928) 24-well (FB012929)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod Ball head</td>
			<td>Demon DB-44</td>
			<td>B00TQ54CZO</td>
			<td>Purchase on Amazon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB Hardrive</td>
			<td>Seagate 3TB backup</td>
			<td>STDT3000100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB Webcam</td>
			<td>Microsoft LifeCam</td>
			<td>Q2F-00014</td>
			<td>Purchase on Amazon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wall mount for camera</td>
			<td>LDR Industries 1/2&#34; Steel pipe</td>
			<td>307 12X36</td>
			<td>Mounted on wall with Flange and 90 degree pipe elbow. Could also use a tripod to hold camera.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

automated measurements of sleep and locomotor activity in mexican cavefish

Attraverso phyla, sonno è caratterizzata da altamente conservate caratteristiche comportamentali che includono la soglia di eccitazione elevata, rimbalzo dopo privazione di sonno e consolidato periodi di immobilità del comportamento. La caverna messicano, Astyanax mexicanus (a. mexicanus), è un modello per studiare l'evoluzione del tratto in risposta a perturbazioni ambientali. A. mexicanus esiste come in eyed superficie-abitazione forme e popolazioni di caverne ciechi multiple che sono robuste differenze morfologiche e comportamentali. Si è verificato la perdita di sonno in popolazioni multiple, caverna si è evoluta in modo indipendente. Questo protocollo descrive una metodologia per quantificare il sonno e attività locomotrice in grotta a. mexicanus e pesci di superficie. Un conveniente sistema di monitoraggio video consente per l'imaging del comportamento del pesce adulto o larvale individualmente-ospitato per periodi di una settimana o più. Il sistema può essere applicato a pescare invecchiato 4 giorni post fecondazione fino all'età adulta. L'approccio può essere adattato anche per misurare gli effetti delle interazioni sociali sul sonno registrando più pesce in una singola arena. A seguito del comportamento registrazioni, dati vengono analizzati utilizzando automated software di monitoraggio e analisi del sonno viene elaborata utilizzando script personalizzati che quantificare più variabili di sonno inclusi durata, lunghezza di bout e incontro. Questo sistema può essere applicato a misura sonno, comportamento circadiano e attività locomotrice in quasi ogni specie di pesci tra cui zebrafish e Spinarelli.

Età di larve 4-30 dpf può essere attendibilmente registrato nel sistema chiuso personalizzati descritto nella Figura 1. Il sistema comprende IR e illuminazione visibile per consentire le registrazioni in condizioni di luce e buia, sotto diverse condizioni di luce visibile (Figura 1A). I video sono poi analizzati utilizzando il software di monitoraggio (Figura 1BC) e post-elaborazio...

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Automated Measurements of Sleep and Locomotor Activity in Mexican Cavefish

Questo protocollo dettaglia la metodologia per quantificare il comportamento motorio e sonno nella caverna messicano. Le analisi precedenti vengono estesi per misurare questi comportamenti socialmente Accasata pesce. Questo sistema può essere ampiamente applicato per lo studio di sonno e attività in altre specie di pesci.

Misure automatizzate di sonno e di attività locomotrice in caverna messicano

Across phyla, sleep is characterized by highly conserved behavioral characteristics that include elevated arousal threshold, rebound following sleep ...

Questo protocollo può essere utilizzato per quantificare il sonno e l'attività in qualsiasi popolazione ittica e ha il potenziale per espandere il numero di sistemi modello utilizzati per studiare la regolazione del sonno. Il vantaggio di questa tecnica è la sua flessibilità. Ad esempio, i pesci possono essere monitorati in una varietà di dimensioni dell'arena o in esperimenti ospitati singolarmente o ospitati in gruppo.Un punto di forza nella misurazione del sonno in questo sistema è la misurabilità del metodo per il farmaco ad alta produttività o lo screening genetico. Abbiamo applicato questo metodo allo studio dell'evoluzione del sonno in due diverse popolazioni di pesci grotta che dimostrano fenotipi del sonno drammaticamente diversi. Sebbene possa essere difficile stabilire un sistema per l'imaging comportamentale, il nostro sistema fornisce un metodo conveniente per lo studio dei pesci larvali e adulti.Per costruire il sistema per tracciare con precisione il comportamento locomotore per lo studio del sonno e dei ritmi circadiani nel larvale A.mexicanus, usa l'acrilico del segno bianco spesso 0,33 centimetri per costruire una piattaforma per il sistema di tracciamento larvale. Posizionare la piattaforma di registrazione sopra il dissipatore di calore quadrato illuminato su cui risiederanno arene contenenti pesci durante gli esperimenti di tracciamento comportamentale e posizionare un secondo acrilico all'interno della scatola tra le luci nell'alloggiamento degli animali per diffondere l'infrarosso per un'illuminazione e un contrasto ottimali. Posizionare l'intera fase di tracciamento larvale e l'illuminazione impostata all'interno di un tubo di plastica chiuso.Utilizzare uno strumento rotativo per rimuovere l'obiettivo da una webcam adatta sperimentalmente. Rimuovere le piccole viti sul retro della fotocamera per rimuovere l'alloggiamento interno e rimuovere le piccole viti all'interno del corpo della fotocamera per allentare il resto dell'obiettivo. Utilizzare un piccolo cacciavite per rimuovere eventuali parti dell'alloggiamento dell'obiettivo lasciate dopo aver tagliato l'obiettivo.E rimuovere il diodo blu che emette luce sulla parte superiore del dispositivo accoppiato alla carica o dell'alloggiamento CCD. Quindi, riportare l'alloggiamento interno al suo orientamento originale prima di avvitare le due viti esterne nelle loro posizioni originali. Utilizzare una piccola sega per instradare l'interno della fotocamera per consentire alla fotocamera di essere dotata di un bit di instradamento di plastica arrotondato che leviga la plastica extra fino a quando non può accompagnare un adattatore per obiettivo.Installare un filtro passa infrarosso all'interno della fotocamera il più vicino possibile al CCD senza entrare in contatto diretto con la fotocamera e avvitare l'adattatore di un obiettivo fisso di 35 millimetri nella parte anteriore della fotocamera nella parte posteriore dell'obiettivo. Quindi posizionare la fotocamera e l'obiettivo nel foro praticato nel coperchio nella parte superiore del tubo che ospita il palco e le luci e collegare l'USB al computer su cui verranno registrati gli animali. Per costruire un sistema di sonno per pesci adulti, tagliare prima le strisce infrarosse a intervalli di circa 46 centimetri.E posizionare un foglio acrilico di segno bianco 46 per cinque per 0,32 centimetri e 9%leggero direttamente davanti a ogni striscia luminosa infrarossa per diffondere la luce infrarossa. Quindi posizionare tutti i serbatoi su un rack che supporta l'illuminazione a infrarossi montata sul retro e utilizzare divisori in plastica opachi e serbatoi di vetro da 10 litri per creare arene individuali. Per registrare l'attività locomotoria del tetra pesce messicano, posizionare il giorno da quattro a sei pesci post-fecondazione in singoli pozzi di una piastra tissutale da 24 pozzi e giorni da 20 a 30 post-fecondazione in singoli pozzi di una piastra tissutale a sei pozzi.Per registrare il sonno e l'attività tetra adulti in una casa di ambiente sociale fino a cinque adulti per serbatoio da 10 litri con o senza i divisori. In questo esperimento rappresentativo i pesci larvali di tre popolazioni indipendenti di pesci delle caverne hanno mostrato una significativa riduzione del sonno rispetto ai pesci di superficie. Questa produzione di sonno è coerente in tutte le età testate poiché il sonno è stato significativamente ridotto anche nei pesci delle caverne adulti Pachon, Molino e Tinaja rispetto ai pesci di superficie.In particolare, l'edilizia popolare riduceva notevolmente il sonno nei pesci di superficie senza influire sul sonno nei pesci delle caverne di Pacho probabilmente a causa di un effetto seminterrato nelle popolazioni di pesci delle caverne. Durante la registrazione del pesce si deve fare attenzione a garantire che l'illuminazione della fotocamera sia ottimale per migliorare il segnale del pesce rispetto allo sfondo. Per questo protocollo è necessaria una codifica della riga di comando di base che è completamente descritta nel testo e deve essere adattabile a qualsiasi impostazione del lab.Questo protocollo ha portato a numerose domande sull'evoluzione del sonno ed è attualmente utilizzato per schermi di farmaci, tenere traccia del comportamento del sonno e capire come il comportamento sociale influisce sul sonno.

Research

JoVE Journal

Behavior

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Ricerca

Comportamento

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