Name: medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm
Uploaded: 2019-03-01T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Forfatterne vil gerne anerkende lab af Timo Strünker for kontrol med AR og DLE under deres ophold på hans lab. Desuden vil vi gerne takke vores kolleger på afdelingen for vækst og reproduktion, Rigshospitalet, Rigshospitalet for deres hjælp med opsætning af disse to assays. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra Danmarks innovationsfond (grant numre 005-2010-3 og 14-2013-4).

Indsamling og analyse af menneskelige sæd prøver i protokollerne følger retningslinjerne i den videnskabsetisk Komité for Region Hovedstaden. Alle sæd prøver har opnået efter informeret samtykke fra frivillige donorer. Efter levering, var prøverne fuldt anonymiseret. For deres ulejlighed modtaget hver donor et gebyr på 500 kr. (omkring $75 amerikanske. dollars) pr. prøve. Prøverne blev analyseret på dagen for levering og derefter destrueres straks efter laboratorieforsøg.
Bemærk:...

Den medium gennemløb Ca2 + signalering assay er baseret på målinger af fluorescens fra enkelt microwells indeholder omkring 250.000 sædceller. De tilfangetagne signal er i gennemsnit fra alle individuelle sædceller i brønden. Analysen giver således ingen geografisk information om, hvor specielt i den sædcelle [Ca2 +]jeg er ændret, i hvor stor en del af sædcellerne en ændring i [Ca2 +]jeg finder sted, eller hvor heterogene svaret er mellem de enkelte celler...

Formålet med de to assays beskrevet her er at undersøge virkningerne på Ca2 +-signalering og acrosome reaktion i menneskelige sædceller, som har været vist flere forbindelser i flere publikationer beskæftiger disse undersøgelser1,2, 3,4,5,6,7. Ca2 +-signalering og acrosome reaktion er afgørende for normale menneskelige sædceller cellefunktion og mandlige fertilitet.
Det overordnede mål med en menneskelig sædcelle er at befrugte ægget. For at være i stand til med succes og naturligvis befrugte ægget, skal funktioner af sædcellen være reguleret stramt under rejsen af sædcellen gennem den kvindelige forplantningsorganerne8,9. Mange af funktionerne sædcelle er reguleret via den intracellulære Ca2 +-koncentration [Ca2 +]jeg (fx, sperm motilitet, chemotaxis og acrosome reaktion)10. Også, en modningsproces, kaldet retsevne, som gengiver sædcellen i stand til at befrugte ægget, er delvis reguleret af [Ca2 +]jeg10. Ca2 +-ekstrudering af Ca2 +-ATPase pumper11 opretholde en cirka 20.000 fold Ca2 +-gradienten over menneskelige sædceller cellemembranen, med en hvilende [Ca2 +]jeg af 50-100 nM. Hvis Ca2 + er tilladt at krydse cellemembranen (f.eks. gennem åbningen af Ca2 +-kanaler), en betydelig tilstrømning af Ca2 + opstår, giver anledning til en højde af [Ca2 +],jeg. Dog sædcellen også bærer intracellulære Ca2 +-butikker, som kan frigive Ca2 + og derfor også giver anledning en udvidelse af [Ca2 +]i12. Interessant, alle kanal-medieret Ca2 +-tilstrømning i menneskelige sædceller er hidtil blevet fundet for at forekomme via CatSper (kationisk kanal SpeRM), som er kun udtrykt i sædceller11. I menneskelige sædceller, CatSper er aktiveret af endogene ligander progesteron og prostaglandiner gennem særskilte ligand bindende websteder13,14,15, fører til en hurtig Ca2 +-tilstrømning til sædcelle. To hovedkilder nær ægget giver høje niveauer af disse endogene ligander. En er den follikulære væske, der indeholder høje niveauer af progesteron16. Follikulært væsken er frigivet fra modne follikler sammen med æg på ægløsning og blander sig med væsken i æggelederne17. Den andre vigtigste kilde er de cumulus celler, der omgiver ægget og slip høje niveauer af progesteron og prostaglandiner. De progesteron-induceret Ca2 +-tilstrømning i sædceller har vist sig at mægle chemotaxis mod æg9,18, styre sperm motilitet19,20 og stimulere acrosome reaktion21. Udløsning af disse individuelle [Ca2 +]jeg-regulerede sperm funktioner i den rigtige rækkefølge og på det rigtige tidspunkt er afgørende for befrugtning af ægget8. I denne, en suboptimal progesteron-induceret Ca2 +-tilstrømning er blevet fundet at være associeret med reduceret mandlige fertilitet22,23,24,25,26 er vigtigt for mandlige fertilitet26,30,31,32, ,27,28,29 og funktionelle CatSper 33,34,35,36.
Da sædceller nå ægget, en sekvens af begivenheder skal finde sted for befrugtning forekommer: 1) sædcellerne skal trænge igennem de omkringliggende cumulus cellelag, 2) binder sig til zona pellucida, 3) exocytose acrosomal indhold, den såkaldte acrosome reaktion 37, 4) trænge igennem zona pellucida og 5) fuse med æg membranen at fuldføre befrugtning38. Hvis du vil være i stand til at gå gennem disse trin og befrugte ægget, skal sædcellen først gennemgå retsevne11, der begynder som sædcellerne forlade den sædvæske, der indeholder "decapacitating" faktorer39 og svømme ind i væsker for kvindelige forplantningsorganerne med høje niveauer af bikarbonat og albumin37. Retsevne gengiver i stand til at gennemgå hyperactivation, en form for motilitet med en kraftig slå fimrehår, og acrosome reaktion37sædceller. Hyperactivated motilitet kræves til penetration af zona pellucida40, og acrosome indeholder forskellige hydrolytiske enzymer, at støtte denne penetration proces41. Derudover gengiver acrosome reaktion sædceller i stand til at fusionere med ægget ved at udsætte specifikke Membranproteiner på sæd overfladen nødvendige for sperm-æg fusion42. Evnen til at gennemgå hyperactivation og acrosome reaktion er derfor både nødvendige for vellykket befrugtning af æg40,42. I modsætning til hvad er blevet set for musen sædceller43,44,45, kan kun menneskelige sædceller, der er acrosome-intakt binde til zona pellucida46. De skal gennemgå acrosome reaktion at trænge igennem zona pellucida41 og afdække specifikke Membranproteiner, der er nødvendige for fusion med æg38, når de menneskelige sædceller er bundet til zona pellucida. Timingen af acrosome reaktionen i menneskelige sædceller er således afgørende for befrugtning at forekomme.
Som beskrevet ovenfor, Ca2 +-signalering er af afgørende betydning for normale sæd celle funktion8, og det er derfor af stor interesse at skærmen stort antal forbindelser for effekter på Ca2 +-signalering i menneskelige sædceller. På samme måde, som kun menneskelige sædceller, der undergår acrosome reaktion på rette tid og sted kan trænge igennem zona pellucida og befrugte ægget46,47, det er også af stor interesse at kunne teste forbindelser for deres evne til at påvirke acrosome reaktionen i menneskelige sædceller. Til dette formål to medium-throughput screening-assays er beskrevet: 1) en analyse af virkninger på Ca2 +-signalering i menneskelige sædceller og 2) en analyse for evnen til at fremkalde acrosome reaktion i menneskelige sædceller.
Analyse 1 er en medium-overførselshastighed Ca2 +-signalering assay. Denne fluorescens plade reader-baseret teknik overvåger ændringer i fluorescens som funktion af tiden samtidig i flere brønde. Ca2 +-følsomme fluorescerende farvestof, Fluo-4 har en Kd for Ca2 +≈ 335 nM og er celle-permeant i AM (acetoxymethyl) ester form. Med Fluo-4, er det muligt at måle ændringer i [Ca2 +]jeg over tid og efter tilsætning af forbindelser af interesse for sædceller. Analysen blev udviklet af laboratoriet af Timo Strünker i 201113 og er siden blevet brugt i flere undersøgelser at skærmen stoffer for effekter på Ca2 +-signalering i menneskelige sædceller1,2,3, 4,5. Også har en lignende metode været anvendt til at screene flere drug kandidater48. Desuden, er denne analyse også nyttige til at vurdere den farmakologiske tilstand af aktion1,2,3,4,5, dosis-respons kurver1, 2,3,4,5, konkurrencedygtige hæmning1,2, additivity1,2og synergi3 af forbindelser af interesse.
Analysen 2 er en medium-overførselshastighed acrosome reaktion assay. Dette billede Flowcytometret-baseret teknik måler mængden af levedygtige acrosome reagerede sædceller i en prøve, ved hjælp af tre fluorescerende farvestoffer: propidium Iodid (PI), FITC-kombineret lektin Pisum sativum (FITC-PSA), og Hoechst-33342. Analysen blev ændret fra en lignende flow flowcytometri-baserede metode af Zoppino et al.49 og har været anvendt i flere undersøgelser6,7. For Ca2 +-signalering assay, denne acrosome reaktion assay kan også bruges til at vurdere dosis-respons-kurver, hæmning, additivity og synergi af forbindelser af interesse.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m pore filter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>296-4545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L measuring cylinder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>3662-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4 and 2 mL plastic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>30120086 and 0030120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4861000813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384 multi-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One, Germany</td>
			<td>781096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 and 50 mL platic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>0030122151 and 30122178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A2-slide</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>942-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic repeater pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4987000010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean wide-mouthed plastic container for semen sample</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-coupled lectin of Pisum sativum (FITC-PSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L0770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4 AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar OMEGA fluorescence microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose anhydrous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst-33342</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human serum albumin (HSA)</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>For addition to HTF+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilizing solution containing 0.6 M NaHCO3 and 0.37% (v/v) formaldehyde in distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Lactate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NC-3000 image cytometer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>970-3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes and piptting tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide (PI)</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack for placing 50 mL plastic tubes in 45&#176; angle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S100 buffer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP1-cassette</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>941-0006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumetric flasks of appropriate sizes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm

Ca2 +-signalering er afgørende for normal sæd cellefunktion og mandlige fertilitet. Ligeledes, acrosome reaktionen er afgørende for evne til menneskelige sædcellen trænger zona pellucida og befrugte ægget. Det er derfor af stor interesse at teste forbindelser (f.eks. Miljøkontaminanter eller lægemiddelkandidater) for deres effekt på Ca2 +-signalering og acrosome reaktion i menneskelige sædceller enten at undersøge de potentielle negative virkninger på menneskers sædcelle funktion eller at undersøge en mulig rolle som et præventionsmiddel. Her, to medium-overførselshastighed assays er beskrevet: 1) et fluorescens-baseret analyse til vurdering af virkninger på Ca2 +-signalering i menneskelige sædceller og 2) et billede cytometric analyse til vurdering af acrosome reaktion i menneskelige sædceller. Disse assays kan bruges til at screene et stort antal stoffer for effekter på Ca2 +-signalering og acrosome reaktion i menneskelige sædceller. Desuden, assays kan bruges til at generere meget specifikke dosis-respons kurver af enkelte forbindelser, bestemme potentielle additivity/synergi for to eller flere forbindelser og studere den farmakologiske virkningsmekanisme gennem konkurrencedygtige hæmning eksperimenter med CatSper hæmmere.

Repræsentant resultater fra et eksperiment teste effekten af 4 forbindelser (A, B, C og D) sammen med en positiv (progesteron) og negative (buffer) kontrol på [Ca2 +]jeg i menneskelige sædceller ved hjælp af medium-overførselshastighed Ca2 +-signalering analysen kan ses i figur 4a. I figur 4b, er en dosis responskurve af progesteron vist, som var afledt af peak ΔF/F0 (%) data indu...

Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays til vurdering af virkninger på Ca2 +-signalering og Acrosome reaktion i menneskelige sædceller

Her, to medium-overførselshastighed assays til vurdering af virkninger på Ca2 +-signalering og acrosome reaktion i menneskelige sædceller er beskrevet. Disse assays kan bruges til hurtigt og nemt skærmen store mængder af stoffer for effekter på Ca2 +-signalering og acrosome reaktion i menneskelige sædceller.

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

Vores analyser kan bruges til at teste forbindelser for deres virkninger på menneskers sædcellefunktion. Specifikt, disse metoder kan bruges til hurtigt og nemt at screene et stort antal forbindelser for deres virkninger på calcium signalering og akrosom reaktion i menneskelige sædceller. Visuelle demonstrationer af denne metode vil gøre det lettere for andre at oprette lignende eksperimenter i deres egne laboratorier.Begynd med at placere et 50 milliliterrør pr. milliliter råsængeprøve i et rørstativ i en vinkel på 45 grader og tilsættes fire milliliter 37 grader Celsius Human Tubal Fluid eller HTF positivt medium til hvert rør. Dernæst pipetters forsigtigt en milliliter flydende sædprøve til bunden af hvert rør og placere rørene ved 37 grader Celsius i en time. Ved slutningen af inkubationen anvendes en modificeret pipettespids, der holdes i en vinkel på 45 grader, til forsigtigt at overføre så meget af den øverste fraktion af motile sædceller, der indeholder HTF-positivt medium, som muligt til et nyt 15 milliliter plastrør.For at tælle de indsamlede sædceller fortyndes en 20 mikroliter aliquot til en faktor på 10, 20, 30, 50 eller 90 i S100 buffer i et rundt bund to milliliterrør i henhold til den forventede koncentration. Vortex de fortyndede sædceller i 10 sekunder ved 700 rotationer i minuttet. Derefter nedsænkes en SP1 kassette i prøven og trykke det hvide stempel helt ned for at aspirere en aliquot af prøven i kassetten.Derefter placere kassetten i billedet cytometer bakke og køre PI farvede menneskelige sædceller celle analyse i henhold til den anvendte fortynding faktor. For at måle ændringer i den frie intracellulære calciumkoncentration pipetteres sædprøven op og ned én gang og bruge en automatisk repeaterpipette til at aliquot 50 mikroliter fluorophore-farvede sædceller til 24 brønde i en række af en 384 mikro brøndplade. Anstær mikro godt plade i fluorescens pladelæser ved 30 grader Celsius og vælge den relevante protokol for fluorophore.Vælg en brønd i rækken af sædceller og juster forstærkningen til en målværdi på 20 %Start derefter målingen. Efter 10 baseline cyklusser, pause eksperimentet og skubbe skuffen med mikro godt plade. Ved hjælp af en 12-kanals pipette tilsættes hurtigt 25 mikroliter af de forberedte opløsninger af forbindelser og kontrol af interesse i de 12 dobbeltbode i rækken, og pladen returneres straks til læseren for at fortsætte målingen så hurtigt som muligt.Eventuelle ændringer i fluorescens som reaktion på tilsætning af forbindelser eller kontroller vil blive fanget af instrumentet. Til akrosom reaktionsanalyse blandes prøverne ved pipettering efter inkubation af de kapaciterede sædceller med de relevante fluorescerende farvestoffer, forbindelser eller kontroller ved at foretage pipettering og tilsættes 50 mikroliter af hver prøve til 100 mikroliter af immobiliserende opløsning. Prøverne blandes igen, og kamrene på et A2-dias pr. prøve anbringes med ca. 30 mikroslitere prøve pr. kammer.Placer derefter det første indlæste dias på bakken på billedets cytometer. Vælg FlexiCyte-protokollen, og tryk på Kør. Her repræsentative resultater fra et eksperiment test effekten af fire forbindelser, en positiv progesteron kontrol og en negativ buffer kontrol ved hjælp af medium gennemløb calcium signalering assay som påvist kan observeres.I denne graf vises en dosisresponskurve af progesteron, der er afledt af ændringer i de intracellulære frie calciumkoncentration, der er fremkaldt af serielt fortyndet koncentration af progesteron. Disse data illustrerer virkningerne af en negativ eller en af to positive kontroller på induktion af en amosom reaktion i kapaciterede humane sædceller i en medium gennemløb akrosom reaktion assay. For at undgå at gå glip af toppene af de inducerede signaler, er det afgørende at tilføje kemikalier hurtigt til replikat brønde og straks fortsætte målingen derefter.Ved at ændre typen af fluorophores og farvestoffer, kan vores analyser nemt ændres til at besvare forskellige videnskabelige spørgsmål. Disse analyser er allerede blevet brugt i flere undersøgelser for at teste store grupper af forbindelser for deres virkninger på menneskers sædfunktion.

Research

JoVE Journal

Biology

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

To typer af assays til påvisning af Frog Sperm Chemoattraction

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension ...

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualisering af Vascular Ca 2 + Signaling Triggered ved Paracrine Afledte ROS

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Kortlægning af eftervirkningerne af Theta brast Stimulation om den menneskelige auditive cortex med Functional Imaging

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Toxicological Assays for Testing Effects of an Epigenetic Drug on Development, Fecundity and Survivorship of Malaria Mosquitoes

Toksikologiske Analyser for Testing Virkninger af en epigenetisk Drug om Udvikling, Frugtbarhed og efterladte af Malariamyg

Insecticidal resistance poses a major problem for malaria control programs. Mosquitoes adapt to a wide range of changes in the environment quickly, making ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Metode til vurdering af effekter af en række bølgelængder og intensiteter af Rød / nær-infrarødt lys terapi på oxidativt stress<em&gt; In vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Kvantificering af endotelcelle Klæbeevne<em&gt; In vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Gap junktion intercellulær kommunikation: En funktionel biomarkør at vurdere negative virkninger af giftstoffer og toksiner, og Sundhedsmæssige fordele af Naturprodukter

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...