Name: medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm
Uploaded: 2019-03-01T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Forfatterne ønsker å erkjenne laboratoriet av Timo Strünker tilsyn AR og DLE under sitt opphold på laboratoriet sitt. Videre ønsker vi å takke våre kolleger på avdelingen av vekst og reproduksjon, København universitetssykehus, Rigshospitalet for deres hjelp med å sette opp disse to analyser. Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra Innovation fondet Danmark (grant tall 005-2010-3 og 14-2013-4).

Innsamling og analyse av menneskelig sæd prøver i protokoller følger retningslinjene for etikk for forskning hovedstaden regionen av Danmark. Alle sæd prøver har vært innhentet etter samtykke fra frivillige donorer. Etter levering, var prøvene fullt anonymiseres. Deres ulemper fått hver giver et gebyr på 500 DKK (ca $75 dollar) per prøve. Prøvene ble analysert ved levering og deretter ødelagt umiddelbart etter laboratorieforsøk.
Merk: Middels gjennomstrømningen Ca2 +-s...

Det medium gjennomstrømming Ca2 + signalering analysen er basert på målinger av fluorescens fra enkelt microwells som inneholder 250 000 sædceller. De fangede signalet er gjennomsnitt fra alle personlige sædceller i brønnen. Analysen dermed gir ingen romlig informasjon om hvor i den sperm celle [Ca2 +]jeg er endret, i hvor stor del av den sædceller trer en endring i [Ca2 +]i stedet, eller hvordan heterogene svaret er mellom de enkelte cellene. For å få infor...

Formålet med de to analyser beskrevet her er å undersøke virkningene på Ca2 +-signalisering og acrosome reaksjon i menneskelig sæd, som har vært vist flere forbindelser i flere publikasjoner bruke disse søk1,2, 3,4,5,6,7. Ca2 +-signalisering og acrosome reaksjonen er både viktig for normal menneskelig sperm celle funksjon og mannlig fertilitet.
Det overordnede målet med en menneskelig sperm celle er å befrukte egget. For å kunne lykkes og naturlig befrukte egget, må funksjonene i sperm cellen være regulert tett under reisen av sperm cellen til den kvinnelige skjede8,9. Mange av funksjonene sperm celle er regulert via en intracellulær Ca2 +-konsentrasjon [Ca2 +]jeg (f.eks sperm motilitet og chemotaxis acrosome reaksjon)10. En modning prosess som kalles capacitation, som gjengir sperm celle kan gjødslende egget, er også delvis regulert av [Ca2 +]jeg10. Ca2 +-ekstrudering Ca2 +-ATPase pumper11 opprettholde en ca 20.000 fold Ca2 +-gradient over menneskelige sperm celle membran, med en hvile [Ca2 +]jeg av 50-100 nM. Hvis Ca2 + tillates å krysse cellemembranen (for eksempel gjennom åpningen av Ca2 +-kanaler), en stor tilstrømning av Ca2 + oppstår, gir opphav til en høyde på [Ca2 +]jeg. Imidlertid sperm celle også bærer intracellulær Ca2 +-butikker, som kan frigi Ca2 + og, derfor også gi stige rettighetsutvidelse [Ca2 +]jeg12. Interessant, alle kanal-mediert Ca2 +-tilstrømning av menneskelig sædceller har så langt blitt funnet for å skje via CatSper (kattenioniske kanal SpeRM), som bare er uttrykt i sædceller11. I menneskelige sperm celler, CatSper utvikling av endogene ligander progesteron og prostaglandiner gjennom forskjellige ligand binding nettsteder13,14,15, fører til en rask Ca2 +-tilstrømningen til sperm cellen. To viktigste kildene i nærheten av egget gir høye nivåer av disse endogene ligander. En er follikulær væske som inneholder høye nivåer av progesteron16. Follicular væsken slippes fra modne follikler med egg på eggløsning og mikser med væsken innenfor de oviducts17. Andre hovedkilden er cumulus cellene som omgir egg og slipp høyt nivå av progesteron og prostaglandiner. Den progesteron-indusert Ca2 +-tilstrømning av sædceller har vist seg å megle chemotaxis mot egg9,18, kontrollere sperm motilitet19,20 og stimulere til acrosome reaksjon21. Følge av disse personlige [Ca2 +]jeg-regulert sperm funksjonene i riktig rekkefølge og på riktig tidspunkt er avgjørende for befruktning av egg8. I tråd med dette, en suboptimal progesteron-indusert Ca2 +-tilstrømningen er funnet å bli assosiert med redusert mannlig fertilitet22,23,24,25,26 ,27,28,29 og funksjonelle CatSper er avgjørende for mannlig fertilitet26,30,31,32, 33,34,35,36.
Som sædceller nå egget, en hendelsessekvens må skje for befruktning oppstår: 1) sædceller må trenge omkringliggende cumulus celle laget, 2) binde til zona pellucida, 3) exocytose acrosomal innhold, den såkalte acrosome-reaksjonen 37, 4) trenge zona pellucida og 5) sikring med egg membranen å fullføre befruktning38. For å kunne gå gjennom disse trinnene og befrukte egget, må sperm cellen først gjennomgå capacitation11, som begynner som sædceller forlate den seminal væsken som inneholder "decapacitating" faktorer39 og svømme i væsker av kvinnelige skjede med høye nivåer av bikarbonat og albumin37. Capacitation gjengir sædceller kunne gjennomgå hyperactivation, en form for motilitet med energisk juling av flagell og acrosome reaksjon37. Hyperactivated motilitet kreves for penetrasjon av zona pellucida40, og acrosome inneholder ulike hydrolytisk enzymer som hjelper denne penetrasjon prosessen41. I tillegg gjengir acrosome reaksjonen sædceller i stand til å smelte sammen med egg ved å utsette bestemt membran proteiner på sperm overflaten nødvendig for sperm-egg blanding42. Følgelig evnen til å gjennomgå hyperactivation og acrosome reaksjon er både nødvendig for vellykket befruktning av egg40,42. I motsetning til hva har blitt sett i musen sædceller43,44,45, kan bare menneskelig sædceller som er acrosome-intakt binde til zona pellucida46. Når den menneskelige sædceller er bundet til zona pellucida måtte de gjennomgå acrosome reaksjon både til å trenge den zona pellucida41 og å utsette bestemt membran proteiner som trengs for fusjon med egg38. Tidspunktet for acrosome reaksjonen i menneskelig sperm er derfor avgjørende for befruktning oppstår.
Som beskrevet ovenfor, Ca2 +-signalisering er viktig for normal sperm celle funksjon8, og det er derfor, av stor interesse å kunne skjermen stort antall forbindelser for effekter på Ca2 +-signalering i menneskelig sædceller. På samme måte som bare menneskelig sædceller som gjennomgå acrosome reaksjon på riktig tid og sted kan trenge zona pellucida og befrukte egget46,47, er det også av stor interesse å kunne teste forbindelser for deres evne til å påvirke acrosome reaksjonen i menneskelig sperm. Dette to medium gjennomstrømming screening analyser er beskrevet: 1) en analysen for effekter på Ca2 +-signalering i menneskelige sperm celler og 2) en analysen for evnen til å indusere acrosome reaksjon i menneskelig sædceller.
Analysen 1 er en medium gjennomstrømming Ca2 +-signalisering analysen. Denne fluorescens plate leser-basert teknikk overvåker endringer i fluorescens som en funksjon av tid samtidig i flere brønner. Ca2 +-sensitive fluorescerende farge, Fluo-4 har en Kd for Ca2 +≈ 335 nM og celle-permeant i skjemaet er (acetoxymethyl) ester. Bruker Fluo-4, er det mulig å måle endringer i [Ca2 +]jeg over tid og etter tilsetning av forbindelser av interesse for sædceller. Analysen ble utviklet ved laboratoriet av Timo Strünker i 201113 og har blitt brukt i flere studier til skjermen forbindelser for effekter på Ca2 +-signalisering i menneskelig sperm1,2,3, 4,5. En lignende metode er også brukt til skjermen flere narkotika kandidater48. I tillegg er denne analysen også nyttig for å vurdere farmakologiske modus handling1,2,3,4,5, dose-respons kurver1, 2,3,4,5, konkurrerende1,2, additivity1,2og synergism3 forbindelser av interesse.
Analysen 2 er en medium gjennomstrømming acrosome reaksjon analysen. Denne cytometer-basert teknikk måler mengden levedyktig acrosome reagerte sædceller i en prøve, bruker tre fluorescerende fargestoffer: propidium iodide (PI), FITC-kombinert Lektiner erter sativum (FITC-PSA) og Hoechst-33342. Analysen ble endret fra en lignende flyt cytometri-basert metode av Zoppino et al.49 og har blitt brukt i flere studier6,7. Som for Ca2 +-signalisering analysen, denne acrosome reaksjon analysen kan også brukes til å vurdere dose-respons kurver, hemming, additivity og synergism av forbindelser av interesse.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 &#181;m pore filter</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>296-4545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L measuring cylinder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>3662-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,4 and 2 mL plastic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>30120086 and 0030120094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-channel pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4861000813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384 multi-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One, Germany</td>
			<td>781096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 and 50 mL platic tubes</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>0030122151 and 30122178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A2-slide</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>942-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic repeater pipette</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>4987000010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean wide-mouthed plastic container for semen sample</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-coupled lectin of Pisum sativum (FITC-PSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L0770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4 AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, USA</td>
			<td>F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar OMEGA fluorescence microplate reader</td>
			<td>BMG Labtech, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose anhydrous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst-33342</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human serum albumin (HSA)</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td>For addition to HTF+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilizing solution containing 0.6 M NaHCO3 and 0.37% (v/v) formaldehyde in distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-Lactate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NC-3000 image cytometer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>970-3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes and piptting tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide (PI)</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-3002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack for placing 50 mL plastic tubes in 45&#176; angle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S100 buffer</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>910-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP1-cassette</td>
			<td>ChemoMetec, Denmark</td>
			<td>941-0006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumetric flasks of appropriate sizes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

medium-throughput screening assays for assessment of effects on ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm

Ca2 +-signalisering er viktig for normal sperm celle funksjon og mannlig fertilitet. Tilsvarende er acrosome reaksjonen avgjørende for evnen til en menneskelig sperm celle å trenge zona pellucida og befrukte egget. Derfor er av stor interesse å teste forbindelser (f.eks miljømessige kjemikalier eller narkotika kandidater) for deres effekt på Ca2 +-signalisering og acrosome reaksjon i menneskelig sæden å undersøke mulige negative effekter på menneskelig sperm celle funksjon eller undersøke en mulig rolle som en pille. Her to middels gjennomstrømming analyser er beskrevet: 1) en fluorescens-baserte analysen for vurdering av virkningene på Ca2 +-signalering i menneskelig sperm, og 2) et bilde cytometric analysen for vurdering av acrosome reaksjonen i menneskelig sperm. Disse analyser kan brukes til skjermen et stort antall forbindelser for effekter på Ca2 +-signalisering og acrosome reaksjon i menneskelig sperm. Videre kan analyser brukes å generere svært spesifikke dose-respons kurver av personlige forbindelser, fastslår potensielle additivity/synergism for to eller flere forbindelser, og å studere farmakologiske virkemåte gjennom konkurrerende Eksperimenter med CatSper hemmere.

Representant resultater fra et eksperiment tester effekten av 4 forbindelser (A, B, C og D) sammen med en positiv (progesteron) og negative (buffer) kontroll på [Ca2 +]jeg i menneskelig sæden med medium gjennomstrømming Ca:2 +-signalisering analysen kan ses i figur 4a. Figur 4bvises en dose respons kurve av progesteron, som var avledet fra toppen ΔF/F0 (%) data av serielt utvannet k...

Watch this Scientific Journal Video about Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm at JoVE.com

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium gjennomstrømming Screening analyser for vurdering av virkningene på Ca2 +-signalisering og Acrosome reaksjon i menneskelig sæden

Her, to medium gjennomstrømming analyser for vurdering av virkningene på Ca2 +-signalisering og acrosome reaksjon i menneskelig sperm er beskrevet. Disse analyser kan brukes til å raskt og enkelt skjermen store mengder forbindelser for effekter på Ca2 +-signalisering og acrosome reaksjon i menneskelig sperm.

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

Våre analyser kan brukes til å teste forbindelser for deres effekter på menneskelig sperm celle funksjon. Spesielt kan disse metodene brukes til raskt og enkelt å screene et stort antall forbindelser for deres effekter på kalsiumsignalering og acrosome reaksjon i menneskelige sædceller. Visuelle demonstrasjoner av denne metoden vil gjøre det enklere for andre å sette opp lignende eksperimenter i sine egne laboratorier.Begynn med å plassere en 50 milliliter tube per en milliliter rå sæd prøve i et rørstativ i en 45 graders vinkel og legge til fire milliliter på 37 grader Celsius Human Tubal Fluid eller HTF positivt medium til hvert rør. Deretter pipette forsiktig en milliliter flytende sædprøve til bunnen av hvert rør og plasser rørene på 37 grader Celsius i en time. På slutten av inkubasjonen, bruk en modifisert pipettespiss holdt i en 45 graders vinkel for å forsiktig overføre så mye av den øvre fraksjonen av motile sædcelle som inneholder HTF positivt medium som mulig til et nytt 15 milliliter plastrør.For å telle de innsamlede sædcellene, fortynne en 20 mikroliter aliquot til en faktor på 10, 20, 30, 50 eller 90 i S100 buffer i en rund bunn to milliliter rør i henhold til forventet konsentrasjon. Vortex de fortynnede sædcellene i 10 sekunder ved 700 rotasjoner per minutt. Deretter dypp en SP1-kassett ned i prøven og trykk helt inn det hvite stempelet for å aspirere en aliquot av prøven i kassetten.Plasser deretter kassetten i bildet cytometer skuffen og kjøre PI farget menneskelig sperm celle analyse i henhold til den påførte fortynning faktor. For å måle endringer i den frie intracellulære kalsiumkonsentrasjonen, pipette forsiktig spermprøven opp og ned en gang og bruk en automatisk repeaterpipett til å aliquot 50 mikroliter av fluoroforfargede sædceller til 24 brønner av en rad med en 384 mikrobrønnplate. Plasser mikrobrønnplaten i fluorescensplateleseren ved 30 grader Celsius og velg riktig protokoll for fluorofor.Velg en brønn i raden av sædceller og juster gevinsten til en målverdi på 20%Start deretter målingen. Etter 10 baseline sykluser, pause eksperimentet og løse ut skuffen med mikro brønnplaten. Ved hjelp av en 12-kanals pipette legger du raskt til 25 mikroliter av de forberedte løsningene av forbindelser og kontroller av interesse i de 12 dupliserte brønnene i raden og umiddelbart returnerer platen til leseren for å fortsette målingen så raskt som mulig.Eventuelle endringer i fluorescens som svar på tilsetning av forbindelsene eller kontrollene vil bli fanget opp av instrumentet. For acrosome reaksjonsanalyse, etter inkubering av kapaserte sædceller med passende fluorescerende fargestoffer, forbindelser eller kontroller, bland prøvene ved å pipettering og tilsett 50 mikroliter av hver testprøve til 100 mikroliter immobiliserende løsning. Bland prøvene igjen og last kamrene på ett A2-lysbilde per prøve med ca. 30 mikroliter prøve per kammer.Plasser deretter det første ladde lysbildet på skuffen på bildet cytometer. Velg FlexiCyte-protokollen, og trykk Kjør. Her er representative resultater fra et eksperiment som tester effekten av fire forbindelser, en positiv progesteronkontroll og en negativ bufferkontroll ved hjelp av kalsiumsignalanalysen med middels gjennomstrømning som vist, kan observeres.I denne grafen er det vist en doseresponskurve av progesteron avledet fra toppprosenter i den intracellulære frie kalsiumkonsentrasjonen indusert av seriefortynnet konsentrasjon av progesteron. Disse dataene illustrerer effekten av en negativ eller en av to positive kontroller på induksjon av en akrosom reaksjon i kapasierte menneskelige sædceller i en middels gjennomstrømning acrosome reaksjonsanalyse. For å unngå å gå glipp av toppene av de induserte signalene, er det viktig å legge kjemikaliene raskt til replikere brønner og umiddelbart fortsette målingen deretter.Ved å endre typen fluoroforer og fargestoffer, kan våre analyser enkelt endres for å svare på forskjellige vitenskapelige spørsmål. Disse analysene har allerede blitt brukt i flere studier for å teste store grupper av forbindelser for deres effekter på menneskelig sperm funksjon.

Research

JoVE Journal

Biology

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Two Types of Assays for Detecting Frog Sperm Chemoattraction

To typer analyser for Oppdage Frog Sperm Chemoattraction

Sperm chemoattraction in invertebrates can be sufficiently robust that one can place a pipette containing the attractive peptide into a sperm suspension ...

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualization of Vascular Ca2+ Signaling Triggered by Paracrine Derived ROS

Visualisering av Vaskulær Ca 2 + Signaling Utløst av parakrine Avledet ROS

Oxidative stress has been implicated in a number of pathologic conditions including ischemia/reperfusion damage and sepsis. The concept of oxidative ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Kartlegging av ettervirkninger av Theta Burst Stimulering på Human auditiv cortex med Funksjonell Imaging

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Toxicological Assays for Testing Effects of an Epigenetic Drug on Development, Fecundity and Survivorship of Malaria Mosquitoes

Toksikologiske Analyser for Testing Virkninger av en epigenetisk Drug på Development, Fruktbarhet og overlevelses av malariamygg

Insecticidal resistance poses a major problem for malaria control programs. Mosquitoes adapt to a wide range of changes in the environment quickly, making ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Metode for vurdering av effektene av en Range av bølgelengder og intensiteter av Red / nær-infrarødt Lysterapi på oksidativt stress<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Kvantifisering av endotelcelle klebrighet<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Gap junctional interkommunikasjons: En funksjonell biomarkør for å vurdere skadevirkninger av giftstoffer og giftstoffer, og helsemessige fordeler av Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...